CN102010845A - 动物双歧杆菌及其制备双歧杆菌发酵饮料的应用 - Google Patents
动物双歧杆菌及其制备双歧杆菌发酵饮料的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN102010845A CN102010845A CN 201010294896 CN201010294896A CN102010845A CN 102010845 A CN102010845 A CN 102010845A CN 201010294896 CN201010294896 CN 201010294896 CN 201010294896 A CN201010294896 A CN 201010294896A CN 102010845 A CN102010845 A CN 102010845A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- yacon
- pulp
- bifidobacterium
- preparation
- animal bifidobacteria
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Non-Alcoholic Beverages (AREA)
Abstract
本发明公开了动物双歧杆菌及其在制备双歧杆菌发酵饮料的应用。该动物双歧杆菌为动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01，其保藏编号为CGMCC 1353。动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353可用于制备双歧杆菌发酵饮料。本发明制备的雪莲果双歧杆菌发酵饮料色泽温和(图1)，口感好，风味佳，货架期较长，具有良好的保健效果的保健饮品。
Description
技术领域
本发明涉及一株动物双歧杆菌及其在制备双歧杆菌发酵饮料中的应用，特别涉及一动物双歧杆菌菌株及其发酵雪莲果复合汁制备发酵饮料的工艺。
背景技术
人体肠道内存在数以百万亿个细菌，这些菌大多数与人和平共处有益而无害，称为人体正常菌群。人体肠道菌群的总重量约占人体总重量的1/50～1/60，其中95％以上是活菌，每天在人体肠道内进行着活跃的生长代谢活动。堪称人体第六大器官。人体的营养、消化、生物拮抗、免疫、抗肿瘤、药物效能和抗衰老等与人体肠道微生物密切相关。
双歧杆菌是人体消化道菌群中的优势益生菌之一，自婴儿出生2～3天开始增殖，5～7天达高峰，并占绝对优势。口服抗菌药物、手术、饮食变化，疾病和衰老等均能使肠道双歧杆菌数量发生变化，随着年龄的增长，歧杆菌数量逐渐减少，体弱多病的老人肠道内该菌几乎消失，而健康人双歧杆菌保持着恒定的数量约108～109CFU/ml。这反映出人体肠道内双歧杆菌的数量乃是检验人是否健康的指标之一。
随着微生态学的发展和对双歧杆菌的认识，大量研究证实了双歧杆菌在人体内发挥着多种生理活性功能，包括：拮抗致病菌，调节肠道菌群平衡，调节免疫，抗癌，抗肿瘤，延缓衰老等。
因此双歧杆菌在食品及医学界受到广泛关注。目前国内外已开发了多种双歧杆菌制品。医药产品有1)片剂形式，如金双岐三联活菌片2)胶囊或冲剂，如胶囊形式的丽珠肠乐胶囊，冲剂形式的优菌多颗粒、女士优菌多颗粒、龙宝宝益生菌冲剂等。3)液体制剂如三株口服液、株王常维舒口服液。这些产品在治疗肠道菌群失调引起的腹泻、慢性腹泻、抗生素治疗无效的腹泻及便秘的等方面发挥了很大的作用，同时也是某些临床疾病的良好的辅助药物。双歧杆菌保健品及食品有：昂立一号；双歧杆菌与保加利亚乳杆菌、嗜热链球菌混合发酵的酸奶，酸豆乳；添加双歧杆菌代谢产物的食品如日本的L-乳酸的新型保健糖果等。
近年来兴起了对于以其它食材为原料，生产双歧杆菌及其代谢产物或保健食品的研究。目前还未见以雪莲果为原料的双歧杆菌饮品或制剂上市。
雪莲果，学名Smallanthus sanchifalius，别名：晶薯、菊薯、神果、地参果。属菊科，葵花属植物，故又称为菊薯，原产自南美洲的安第斯山脉，是当地印第安人的一种传统根茎食品，已有500年历史。1985年日本琦玉县引种成功，近年来通过多种途径进入中国，目前已在云南、福建、海南、贵州、湖南、湖北、山东、河南、河北引种栽培成功。生产示范面积逾96公顷。产品多用于出口，部分进入超市。
发明内容
本发明的目的是提供一株动物双歧杆菌及其在制备双歧杆菌发酵饮料中的应用。
动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01已于2005年04月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为：CGMCC №.1353。
动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01，其保藏编号为CGMCC 1353。
本发明还提供一种雪莲果双歧杆菌发酵饮料的制备方法，是将动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353活化，扩大培养，接种在含有雪莲果果浆的液体中，36-38℃厌氧培养至pH为3.8-4.8，结束发酵，获得雪莲果双歧杆菌发酵饮料。
1上述方法中，动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353接种前经过种子活化培养，方法如下所述：
1)一代种子的制备
将动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353接种到MRS液体培养基中，在37℃厌氧培养24h-48h得到一代种子。
2)二代种子的制备
将一代种子接种在MRS液体培养基中37℃厌氧培养14-16h得到第二代种子。
3)三代种子的制备
将二代种子接种在MRS培养基中厌氧培养14h得到第三代种子。
4)种子扩大培养
将步骤3)获得的第三代种子发酵液，以体积比为3％接种量接种至复合果汁-MRS液体培养基(制备方法如下所示)进行扩大培养。
复合果汁-MRS改良液体培养基的制备：
复合雪莲果汁(含雪莲果果浆的液体)与MRS液体培养基以体积比1∶2-2∶1混合，pH 7.0，115℃高压灭菌15-20min。复合雪莲果汁与MRS液体培养基体积比优选为1∶1。
2上述方法中，所述含雪莲果果浆的液体按下述方法制备：
1)雪莲果清洗切分，在85-100℃水中烫漂灭酶，然后捞出雪莲果肉，以雪莲果肉和水的质量比1∶1-5的比例加入水混合打浆，得到雪莲果浆；
2)添加是雪莲果浆体积的1-10％的脱脂复原乳和是雪莲果浆体积的1-8％西红柿汁，混合均质后，得到混合果汁；所述脱脂复原乳的制备方法为10～12.5g脱脂乳加入1L饮用水，充分搅拌溶解获得脱脂复原乳；
3)在混合果汁里充氮，使氧还电位降至-0.03ev以下，灭菌得到复合雪莲果汁。
所述含雪莲果果浆的液体制备方法的步骤1)中，所述烫漂灭酶的温度优选为100℃，时间优选为10分钟。
所述含雪莲果果浆的液体制备方法的步骤1)中，所述雪莲果肉和水的质量比优选为1∶2。
所述含雪莲果果浆的液体制备方法的步骤2)中，所述脱脂复原乳的添加量优选为雪莲果浆体积的5％；所述西红柿汁的添加量优选为雪莲果浆体积的3％。
3所述方法中，所述厌氧培养的温度为37℃；所述动物双歧杆菌(Bifidobacteriumanimalis)01CGMCC 1353的接种量为1×105-1×107cfu/ml，优选为1×106cfu/mlcfu/ml。
本发明提供的动物双歧杆菌，保藏编号为1353，可用于制备双歧杆菌发酵饮料。动物双歧杆菌01具有耐受消化道逆环境，抗氧化等保健功效。
本发明还利用上述动物双歧杆菌，选择了富含双歧因子且价格低廉的雪莲果，制备了一种雪莲果双歧杆菌发酵饮料，并优化了该雪莲果双歧杆菌发酵饮料的生产工艺，其中包括雪莲果复合汁的制备工艺，双歧杆菌种子的制备工艺。在雪莲果汁加入辅料充氮灭菌，突破了传统乳原料的束缚，配之以营养丰富的脱脂复原乳，并配以西红柿辅料制成复合果汁，复合果汁经该株双歧杆菌的发酵产生乙酸和乳酸，B族维生素等多种具有重要生理活性的代谢产物，形成了良好的感官和营养品质。实验证明，成品无菌灌装，在4℃条件下贮藏15天内双歧杆菌活菌数保持在106CFU/mL以上，大肠菌群在30天内呈阴性。本发明制备的雪莲果双歧杆菌发酵饮料色泽温和(图1)，口感好，风味佳，货架期较长，具有良好的保健效果的保健饮品。
附图说明
图1为本发明的雪莲果双歧杆菌发酵饮料样品(包装形式之一)。
图2为基于hsp60序列的动物双歧杆菌01系统发育树
具体实施方式
下述实施例中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。
实施例1、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353的获得
一、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353的获得及其鉴定
无菌厌氧取得广西巴马长寿老人新鲜粪便25g，置于无菌预还原225mL生理盐水中。充分混匀，采用亨盖特厌氧稀释技术对样品进行10倍系列稀释，选取稀释倍数为105、106、107以亨盖特厌氧滚管法进行分离，置于37℃恒温箱培养48～72h。挑选菌落特征为光滑、凸圆、边缘整齐、乳白色或微带黄色、质地柔软的中小菌落，接种于MRS液体培养基，厌氧培养24～48h，进行革兰氏染色。挑选具有双歧杆菌形态等特征的菌落，再进行需氧和厌氧培养，选取仅在厌氧培养条件下生长的菌落，再一次显微镜观察，选取形态不规则的疑似双歧杆菌菌株，进行鉴定。最终获得一株菌株命名为01。
对菌株01进行生理生化与hsp60序列鉴定。GroEL(Hsp60)是分子伴侣家族中一类，Hsp60广泛存在于原核生物，真核动植物中。其基因序列具有高度保守性。被用于各物种间亲缘关系的分析。有研究表明双歧杆菌的16S序列非常接近，而hsp60的序列在双歧杆菌各种之间差异较大，能够更好的区分双歧杆菌所属种。01菌株生理生化检测结果见表2，动物双歧杆菌01的hsp60基因序列鉴定方法如下：
1、基因组的提取：
1)双歧杆菌总DNA的提取
基因组提取试剂盒(北京三博志远生物技术有限责任公司)提取双歧杆菌总DNA。
2、目的片段的扩增
1)简并引物：
H60F：5′-GG(ATGC)GA(CT)GG(ATGC)AC(ATGC)AC(ATGC)AC(ATGC)GC(ATGC)AC(ATGC)GT-3′
H60R：5′-TC(ATGC)CC(AG)AA(ATGC)CC(ATGC)GG(ATGC)GC(CT)TT(ATGC)AC(ATGC)GC-3′
引物的合成由上海英俊生物技术有限公司完成。
2)PCR反应体系20u l：双蒸水14.25ul；DNTP 2.5ul；上游引物1.0ul；下游引物1.0ul；Teq酶0.25ul；模板1.0ul；
PCR反应程序：初始变性95℃，5min。退火46℃，30s；延伸72℃，1min；30个循环；终延伸72℃，10min。
3、目的片段序列测定与系统发育树构建
将PCR反映体系混合物送至测序公司测序，动物双歧杆菌01的hsp60基因序列如序列表中序列1所示，将测序得到的hsp60序列与基因bank中序列进行比对，用得到被测菌株与模式菌株保守序列的相似度。以seqnconverter软件转换序列格式，MEGA
3.0软件构建系统发育树。图2显示了动物双歧杆菌01基于hsp60基因序列的系统发育树。双歧杆菌现有报道的菌种有32种。我们的01菌株在系统发育树中与如双歧杆菌及动物双歧杆菌在同一个分支上，有人认为乳双歧杆菌为动物双歧杆菌的一个亚种。另有试验结果证明01菌株的16SrDNA序列更接近动物双歧杆菌。结合生理生化鉴定结果，将01菌株鉴定为动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)。
动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01已于2005年04月13日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所)，保藏登记号为：CGMCC №.1353。
表2动物双歧杆菌01的生理生化特性
二、动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353的功效鉴定
动物双歧杆菌01具有耐受消化道逆环境，抗氧化等保健功效。通过下属方法予以证明：
1、耐受消化道逆环境试验方法：
1)耐酸性试验
以pH7.0的PBS缓冲液为基础，用37％的盐酸将pH调至3.0，121℃，15min灭菌后按10％的接种量接入已活化3代的动物双歧杆菌01液体培养物，37℃±1℃厌氧培养2h，取样以亨盖特厌氧滚管法测定活菌数。分别于0和2h取样测定活菌数。存活率＝接种时刻活菌数/处理2h后活菌数×100％。
2)胆汁酸盐耐受性试验
含牛胆汁酸钠为2％的MRS液体培养基中，充氮灭菌。接入2％活化3代的动物双歧杆菌01液体培养物。37℃±1℃厌氧培养24h。分别于0和24h取样测定活菌数。存活率＝接种时刻活菌数/处理24h后活菌数×100％。
3)耐胃蛋白酶试验
以pH7.0的PBS缓冲液为基础，再用37％的盐酸将其调至pH3.0，再按0.5％的量加入胃蛋白酶作为模拟胃液。接入2.5％活化3代的动物双歧杆菌01液体培养物。37℃±1℃厌氧培养2h。分别于0和2h取样测定活菌数。存活率＝接种时刻活菌数/处理2h后活菌数×100％。
4)耐胰蛋白酶试验
以1/15mol/L，pH6.98磷酸缓冲液为基础，再按1.0％的量加入胰蛋白酶作为模拟肠液，接入2.5％活化3代的动物双歧杆菌01液体培养物，37℃厌氧条件下作用24h，分别于0和24h取样测定活菌数。存活率＝接种时刻活菌数/处理24h后活菌数×100％。
动物双歧杆菌01的消化道逆环境耐受性见表3，动物双歧杆菌01对胃酸耐受力强，对胆汁酸有相当的抵抗力，对胃蛋白酶耐受力强。综合判断动物双歧杆菌01对消化道逆环境耐受能力很强。
表3动物双歧杆菌01的消化道逆环境耐受性
2、抗氧化试验方法
1)菌体获得
将动物双歧杆菌01菌株接种至MRS液体培养基中，37℃厌氧培养48h。将菌液离心分离得到菌体沉淀，用磷酸缓冲液(pH7.4)迅速洗涤两次，再用磷酸缓冲液(pH7.4)重悬双歧杆菌沉淀，调整菌悬液浓度为1×109cfu/mL。
2)动物双歧杆菌01对亚油酸不饱和脂肪酸过氧化体系中抗氧化活性的测定
菌株的抗氧化活性通过硫代巴比妥酸(TBA)的方法来检测，用抑制亚油酸的氧化的程度来表示其活性的大小。所用材料为不饱和脂肪酸，氧化催化剂是Fe-Vc体系。
亚油酸乳状液(20mL亚油酸乳状液由0.1mL亚油酸、0.2mL吐温20和1.97mL去离子水组成)1mL；FeSO4(0.01％)0.2mL；VC(0.01％)0.2mL；PBS(0.02M，PH7.4)0.2mL；样品0.4mL；去离子水0.2mL；总体积2mL。对照组不加VC，样品组不加去离子水。按上述顺序加入各试剂，在37℃反应12h后，向2mL反应液中分别加入.02mLTcA(4％)、2mLTBA(0.8％)和0.2mL BHT(0.4％)，充分混合后在100℃反应30min，冷却。离心取上清液，用分光光度计测定其532nm的吸光值。
3)菌株清除DPPH自由基试验
0.8mL双歧杆菌菌体(空白对照位等量的双蒸水)和.22mL0.1mMDPPH溶液(95％乙醇)混合，用力摇匀，于室温反应30min，离心取上清液测定517nm处吸光值，用2.2mL乙醇与0.8mL试样一重蒸水混合液调仪器零点。
清除率＝[1-A517(样品)/A517(空白)]×100％；
另外，还测定了动物双歧杆菌01羟自由基，超氧阴离子的清除能力，抗氧化活性结果见如表4所示，结果表明，动物双歧杆菌01抗脂质过氧化能力强，DPPH自由基，羟自由基，超氧阴离子清除能力突出，综合而言，具有很好的抗氧化能力。
表4动物双歧杆菌01的抗氧化活性
| 项目 | 脂质过氧化 | DPPH自由基 | 羟自由基 | 超氧阴离子 |
| 清除率(％) | 34±2 | 9.5±0.7 | 28±2 | 10±1 |
上述实验表明，动物双歧杆菌01既能耐受消化道逆环境，又有一定的抗氧化能力，有作为益生菌菌株应用以及开发系列产品的潜力。
实施例2、利用动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353制备雪莲果发酵饮料
本发明利用实施例1分离的动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC1353制备雪莲果双歧杆菌发酵饮料，制备方法如下所述：
1、制备双歧杆菌种子
1)一代种子的制备
将动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353接种到MRS液体培养基中，在37℃厌氧培养24h-48h，得到一代种子。
2)二代种子的制备
将一代种子接种在MRS液体培养基中37℃厌氧培养14-16h(至对数末期)(对数末期是对数期即将结束而进入成熟期的一个转折时间段。通过测定实际生产情况的生长曲线，判定对数末期的时间范围)，得到第二代种子。
3)三代种子的制备
将二代种子接种在MRS培养基中厌氧培养14h(至对数末期)得到第三代种子。
第三代种子可以作为扩大培养的种子使用。
4)种子扩大培养
将步骤3)获得的第三代种子发酵液，以体积比为3％接种量接种至复合果汁-MRS液体培养基(制备方法如下所示)，37℃厌氧培养15～17h，至对数末期(对数末期是对数期即将结束而进入成熟期的一个转折时间段。通过测定实际生产情况的生长曲线，判定对数末期的时间范围)，将发酵液以3％接种量接种至复合果汁，37℃厌氧培养16h，如此扩大培养至所需量。扩大培养级数不能超过4级(第一次扩大培养为一级培养获得的种子为一级种子，每次转接级数加一级)。
复合雪莲果汁的制备方法：
原料雪莲果清洗切分，在100℃水中烫漂10分钟灭酶，然后捞出雪莲果肉，以雪莲果肉和水得质量比1∶2的比例加入水混合打浆，得到雪莲果浆，添加是雪莲果浆体积的5％的脱脂复原乳(脱脂复原乳的制备方法10～12.5g脱脂乳加入1L饮用水，充分搅拌溶解)和是雪莲果浆体积的3％西红柿汁，然后用均质机(廊坊汇通食品机械公司，汇通25Mpa、40Mpa均质机)在8Mpa条件下进行第一次均质，12Mpa条件下进行第二次均质，得到混合果汁，在混合果汁里充氮，使氧还电位降至-0.03ev以下，115℃灭菌15分钟得到复合雪莲果汁。
复合果汁-MRS改良液体培养基的制备：
复合雪莲果汁与MRS液体培养基以体积比1∶1混合，pH 7.0，115℃高压灭菌15-20min。
每升MRS液体培养基由下述组分组成：蛋白胨10.0g，牛肉膏10.0g，酵母粉5.0g，葡萄糖20.0g，磷酸氢二钾2.0g，无水乙酸钠5.0g，柠檬酸二铵2.0g，吐温801.0ml，七水合硫酸镁0.58g，无水硫酸锰0.25g，蒸馏水1.0L，pH调至7.0。
2、制备雪莲果双歧杆菌发酵饮料
将步骤1获得的扩大培养三级获得的种子以3％接种量(1×106cfu/ml)接种至复合果汁-MRS改良液体培养基中，37℃厌氧培养约20h，至pH为4.2-4.5.发酵结束得到雪莲果双歧杆菌发酵饮料。将雪莲果双歧杆菌发酵饮料分装，无菌灌装如图1所示，于4℃储存。
成品无菌灌装，亨盖特厌氧滚管计数，活菌数达1.2×109CFU/mL。在4℃条件下贮藏，(每隔24h进行抽样检查，用亨盖特厌氧滚管技术检测样品中的双歧杆菌数量，依照国标GB4789.3-2010《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》第二法大肠菌群平板计数检测大肠菌群数量，结果表明，)15天内双歧杆菌活菌数保持在106CFU/mL以上，大肠菌群在30天内呈阴性。
实施例3双歧杆菌雪莲果汁的制备
1、雪莲果汁的制备
1)雪莲果清洗切分，在85-100℃水中烫漂灭酶，然后捞出雪莲果肉，以雪莲果肉和水的质量比1∶1的比例加入水混合打浆，得到雪莲果浆；
2)添加是雪莲果浆体积的5％的脱脂复原乳(脱脂复原乳的制备方法10～12.5g脱脂乳加入1L饮用水，充分搅拌溶解)和是雪莲果浆体积的8％西红柿汁，然后用均质机(廊坊汇通食品机械公司，汇通25Mpa、40Mpa均质机)在8Mpa条件下进行第一次均质，12Mpa条件下进行第二次均质，得到混合果汁；
3)在混合果汁里充氮，使氧还电位降至-0.03ev以下，115℃灭菌15分钟得到复合雪莲果汁。
2、制备雪莲果双歧杆菌发酵饮料
按照实施例2中步骤1获得的扩大培养三级获得的种子以接种量1×106cfu/ml接种至复合果汁-MRS改良液体培养基(上述复合雪莲果汁与MRS液体培养基以体积比1∶1混合，pH 7.0，115℃高压灭菌15-20min)中，37℃厌氧培养约20h，至pH为4.5-4.8.发酵结束得到雪莲果双歧杆菌发酵饮料。将雪莲果双歧杆菌发酵饮料分装，无菌灌装如图1所示，于4℃储存。
成品无菌灌装，亨盖特厌氧滚管计数活菌数可达107CFU/mL以上，在4℃条件下贮藏，每隔24h进行抽样检查，用亨盖特厌氧滚管技术检测样品中的双歧杆菌数量，依照国标GB4789.3-2010《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》第二法大肠菌群平板计数检测大肠菌群数量，结果表明，5天内双歧杆菌活菌数保持在106CFU/mL以上，大肠菌群在30天内呈阴性。
实施例4双歧杆菌雪莲果汁的制备
1、雪莲果汁的制备
1)雪莲果清洗切分，在85-100℃水中烫漂灭酶，然后捞出雪莲果肉，以雪莲果肉和水的质量比1∶5的比例加入水混合打浆，得到雪莲果浆；
2)添加是雪莲果浆体积的10％的脱脂复原乳(脱脂复原乳的制备方法10～12.5g脱脂乳加入1L饮用水，充分搅拌溶解)和是雪莲果浆体积的3％西红柿汁，然后用均质机(廊坊汇通食品机械公司，汇通25Mpa、40Mpa均质机)在8Mpa条件下进行第一次均质，12Mpa条件下进行第二次均质，得到混合果汁；
3)在混合果汁里充氮，使氧还电位降至-0.03ev以下，115℃灭菌15分钟得到复合雪莲果汁。
2、制备雪莲果双歧杆菌发酵饮料
将步骤1获得的扩大培养三级获得的种子以1×106cfu/ml的接种量接种至复合果汁-MRS改良液体培养基(上述复合雪莲果汁与MRS液体培养基以体积比1∶1混合，pH 7.0，115℃高压灭菌15-20min)中，37℃厌氧培养约20h，至pH为4.5-4.8发酵结束得到雪莲果双歧杆菌发酵饮料。将雪莲果双歧杆菌发酵饮料分装，无菌灌装如图1所示，于4℃储存。
成品无菌灌装，亨盖特厌氧滚管计数，活菌数达107CFU/mL以上。在4℃条件下贮藏，每隔24h进行抽样检查，用亨盖特厌氧滚管技术检测样品中的双歧杆菌数量，依照国标GB4789.3-2010《食品卫生微生物学检验大肠菌群计数》第二法大肠菌群平板计数检测大肠菌群数量，结果表明，5天内双歧杆菌活菌数保持在106CFU/mL以上，大肠菌群在30天内呈阴性。
实施例5、双歧杆菌雪莲果发酵饮料的感官分析
对实施例2、3和4制备的双歧杆菌雪莲果发酵饮料进行感官分析，采用模糊数学七度标度法，由经过培训的10人组成评分小组。评语论域为V＝(1，2，3，4，5，6，7)，1：最难接受；2：较难接受；3：稍难接受；4：勉强接受；5：较易接受；6：容易接受；7：最易接受。发酵果汁的评定领域U＝(色泽，香气，酸度，甜度，苦涩味，组织状态)，其对应的权重值为X＝(0.15，0.20，0.20，0.15，0.20，0.10)。参照实例2制备双歧杆菌雪莲果发酵饮料，成品感官评价得分情况见表1。
表1实例1的双歧杆菌雪莲果发酵饮料感官评价得分表
| 指标 | 色泽 | 组织状态 | 香气 | 酸度 | 甜度 | 苦涩味 | 总分 |
| 权重系数 | 0.15 | 0.20 | 0.10 | 0.20 | 0.15 | 0.20 | 1.00 |
| 感官得分 | 6.60 | 6.50 | 6.35 | 6.09 | 6.19 | 5.75 | 6.22 |
表2实例2的双歧杆菌雪莲果发酵饮料感官评价得分表
| 指标 | 色泽 | 组织状态 | 香气 | 酸度 | 甜度 | 苦涩味 | 总分 |
| 权重系数 | 0.15 | 0.20 | 0.10 | 0.20 | 0.15 | 0.20 | 1.00 |
| 感官得分 | 5.50 | 5.10 | 6.20 | 5.00 | 6.25 | 5.60 | 5.52 |
表3实例3的双歧杆菌雪莲果发酵饮料感官评价得分表
| 指标 | 色泽 | 组织状态 | 香气 | 酸度 | 甜度 | 苦涩味 | 总分 |
| 权重系数 | 0.15 | 0.20 | 0.10 | 0.20 | 0.15 | 0.20 | 1.00 |
| 感官得分 | 6.00 | 5.80 | 5.50 | 5.35 | 6.00 | 5.90 | 5.76 |
实例1的动物双歧杆菌发酵雪莲果汁的其色泽、组织状态、香气得分均在6.0以上，可谓色泽好，口感好，风味佳。其综合感官得分为6.22，是一种容易被大众接受的饮品。实例2和实例3的动物双歧杆菌发酵雪莲果汁的其综合感官得分与各项感官得分均较实例1低，但综合感官评分分别为5.52和5.76，较易被大众接受。优选实例1为最佳的动物双歧杆菌发酵雪莲果汁制备工艺配方。
Claims (10)
1.动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01，其保藏编号为CGMCC 1353。
2.动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353在制备双歧杆菌发酵饮料中的应用。
3.一种雪莲果双歧杆菌发酵饮料的制备方法，是将动物双歧杆菌(Bifidobacteriumanimalis)01CGMCC 1353接种在含有雪莲果果浆的培养基中，36-38℃厌氧培养至pH为4.2-4.5，结束发酵，获得雪莲果双歧杆菌发酵饮料。
4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于：所述含有雪莲果果浆的培养基是含雪莲果果浆的液体与MRS液体培养基混合得到的。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述含雪莲果果浆的液体按下述方法制备：
1)雪莲果清洗切分，在85-100℃水中烫漂灭酶，然后捞出雪莲果肉，以雪莲果肉和水的质量比1∶1-5的比例加入水混合打浆，得到雪莲果浆；
2)添加是雪莲果浆体积的1-10％的脱脂复原乳和是雪莲果浆体积的1-8％西红柿汁，混合均质后，得到混合果汁；
3)在混合果汁里充氮，使氧还电位降至-0.03ev以下，灭菌得到含雪莲果果浆的液体。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于：所述含雪莲果果浆的液体制备方法的步骤1)中，所述烫漂灭酶的温度为100℃，时间为10分钟。
7.根据权利要求5或6所述的方法，其特征在于：所述含雪莲果果浆的液体制备方法的步骤1)中，所述雪莲果肉和水的质量比为1∶2。
8.根据权利要求4或5或6或7所述的方法，其特征在于：所述含雪莲果果浆的液体制备方法的步骤2)中，所述脱脂复原乳的添加量是雪莲果浆体积的5％；所述西红柿汁的添加量是雪莲果浆体积的3％；所述含雪莲果果浆的液体与MRS液体培养基混合的体积比例是2∶1-1∶2，优选为1∶1。
9.根据权利要求4-8中任意一项所述的方法，其特征在于：所述厌氧培养的温度为37℃；所述动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)01CGMCC 1353的接种量为1×105-1×107cfu/ml，优选为1×106cfu/ml；所述脱脂复原乳的制备方法为10～12.5g脱脂乳加入1L饮用水，充分搅拌溶解获得脱脂复原乳。
10.权利要求3-9中任意一项所述的方法制备的雪莲果双歧杆菌发酵饮料。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010294896 CN102010845B (zh) | 2010-09-28 | 2010-09-28 | 动物双歧杆菌及其制备双歧杆菌发酵饮料的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 201010294896 CN102010845B (zh) | 2010-09-28 | 2010-09-28 | 动物双歧杆菌及其制备双歧杆菌发酵饮料的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN102010845A true CN102010845A (zh) | 2011-04-13 |
| CN102010845B CN102010845B (zh) | 2013-02-13 |
Family
ID=43841177
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 201010294896 Active CN102010845B (zh) | 2010-09-28 | 2010-09-28 | 动物双歧杆菌及其制备双歧杆菌发酵饮料的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN102010845B (zh) |
Cited By (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103190664A (zh) * | 2013-04-18 | 2013-07-10 | 李伴兴 | 一种防治慢性胃病的雪莲果乳酸菌保健饮料 |
| CN103289942A (zh) * | 2013-07-02 | 2013-09-11 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种抗氧化的动物双歧杆菌及其应用 |
| CN103589658A (zh) * | 2013-07-05 | 2014-02-19 | 中国农业大学 | 一株产细菌素双歧杆菌及其在抑制酸奶后酸化中的应用 |
| CN104757641A (zh) * | 2015-03-18 | 2015-07-08 | 湖州品创孵化器有限公司 | 一种美白抗皱的美容保健饮品 |
| CN104983022A (zh) * | 2015-06-10 | 2015-10-21 | 中国农业大学 | 一种动物双歧杆菌发酵果蔬粉及其制备方法与应用 |
| CN105851958A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-08-17 | 辽宁晟启昊天生物医药科技有限公司 | 一种果寡糖酵素及其制备方法 |
| CN106616171A (zh) * | 2016-09-18 | 2017-05-10 | 大连普瑞康生物技术有限公司 | 一种含雪莲培养物的益生菌饮料及其制备方法 |
| CN110623271A (zh) * | 2019-10-19 | 2019-12-31 | 上海英库商务咨询有限公司 | 动物双歧杆菌饮液及其制备方法 |
| CN111296701A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-06-19 | 吉林农业大学 | 一种雪莲果发酵饮品的制备方法 |
-
2010
- 2010-09-28 CN CN 201010294896 patent/CN102010845B/zh active Active
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| 《中国博士学位论文全文数据库工程科技I辑》 20040915 李平兰 长寿老人源双歧杆菌优良菌株的筛选及生理功能研究 , 第3期 2 * |
| 《食品科学》 20090801 靳志强等 动物双歧杆菌01耐硒性能及富硒条件的研究 第30卷, 第15期 * |
| 《食品科学》 20090801 靳志强等 动物双歧杆菌01耐硒性能及富硒条件的研究 第30卷, 第15期 2 * |
| 《食品科学》 20100615 吕明生等 雪莲薯原汁加工工艺及其对双歧杆菌生长的影响 第31卷, 第12期 * |
| 《食品科学》 20100915 王洋等 长寿老人源双歧杆菌发酵雪莲果饮料的研制 第31卷, 第18期 2 * |
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103190664A (zh) * | 2013-04-18 | 2013-07-10 | 李伴兴 | 一种防治慢性胃病的雪莲果乳酸菌保健饮料 |
| CN103289942A (zh) * | 2013-07-02 | 2013-09-11 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种抗氧化的动物双歧杆菌及其应用 |
| CN103589658A (zh) * | 2013-07-05 | 2014-02-19 | 中国农业大学 | 一株产细菌素双歧杆菌及其在抑制酸奶后酸化中的应用 |
| CN103589658B (zh) * | 2013-07-05 | 2016-01-13 | 中国农业大学 | 一株产细菌素双歧杆菌及其在抑制酸奶后酸化中的应用 |
| CN104757641A (zh) * | 2015-03-18 | 2015-07-08 | 湖州品创孵化器有限公司 | 一种美白抗皱的美容保健饮品 |
| CN104983022A (zh) * | 2015-06-10 | 2015-10-21 | 中国农业大学 | 一种动物双歧杆菌发酵果蔬粉及其制备方法与应用 |
| CN105851958A (zh) * | 2016-04-29 | 2016-08-17 | 辽宁晟启昊天生物医药科技有限公司 | 一种果寡糖酵素及其制备方法 |
| WO2017186143A1 (zh) * | 2016-04-29 | 2017-11-02 | 辽宁晟启昊天生物医药科技有限公司 | 一种果寡糖酵素及其制备方法 |
| CN106616171A (zh) * | 2016-09-18 | 2017-05-10 | 大连普瑞康生物技术有限公司 | 一种含雪莲培养物的益生菌饮料及其制备方法 |
| CN110623271A (zh) * | 2019-10-19 | 2019-12-31 | 上海英库商务咨询有限公司 | 动物双歧杆菌饮液及其制备方法 |
| CN111296701A (zh) * | 2020-03-09 | 2020-06-19 | 吉林农业大学 | 一种雪莲果发酵饮品的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN102010845B (zh) | 2013-02-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102010845B (zh) | 动物双歧杆菌及其制备双歧杆菌发酵饮料的应用 | |
| Bahmani et al. | Anti-colon cancer activity of Bifidobacterium metabolites on colon cancer cell line SW742 | |
| CN102618456B (zh) | 一种能够缓解慢性酒精性肝损伤的鼠李糖乳杆菌及其用途 | |
| CN112175864B (zh) | 动物双歧杆菌及其选育方法和应用 | |
| CN102206599B (zh) | 一种耐氧耐酸性长双歧杆菌 | |
| CN110106119B (zh) | 一株分离自母乳的鼠李糖乳杆菌m9及其应用 | |
| CN103893214B (zh) | 一种全燕麦固态混菌发酵生产益生菌活菌粉剂及制备方法 | |
| CN104542977B (zh) | 一种含山药提取物和两歧双歧杆菌的保健饮品及制备方法 | |
| CN112458016B (zh) | 两歧双歧杆菌i771、其分离纯化方法及应用 | |
| CN106578064B (zh) | 一种阿胶乳酸菌饮品及其制备方法 | |
| CN104489092A (zh) | 一种含罗汉果提取物和活性长双歧杆菌的保健饮品及其制备方法 | |
| CN105420150A (zh) | 一种嗜酸乳杆菌及其应用 | |
| CN104630099A (zh) | 一株长双歧杆菌及其在制备活性双歧杆菌发酵饮料中的应用 | |
| CN110157650A (zh) | 一株分离自母乳的乳双歧杆菌m8及其应用 | |
| CN100482104C (zh) | 一种乳酸菌口服液的制备方法 | |
| CN110129220A (zh) | 一种保加利亚乳杆菌bsts6-4及其应用 | |
| CN106819106A (zh) | 具有免疫调节功能的灭活型发酵乳饮料及其制备方法 | |
| CN103446552A (zh) | 用于预防和治疗消化系统疾病的发酵组合物 | |
| CN111543640A (zh) | 一种具有改善小儿腹泻和消化不良的动物双歧杆菌乳亚种i797的应用 | |
| CN104365858B (zh) | 一种发酵型银杏花生乳饮料的制备方法 | |
| CN101361506A (zh) | 一种降胆固醇的发酵酸乳及其制备方法 | |
| CN116746683A (zh) | 防消化不良胀气、促吸收的动物双歧杆菌乳亚种bal-28及发酵产物、菌群cw和应用 | |
| CN105624071A (zh) | 一株唾液乳杆菌xjp2及其应用 | |
| Sarkar | Probiotics as functional foods: gut colonization and safety concerns | |
| JP7330854B2 (ja) | ビフィズス菌増殖用組成物 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20221028 Address after: 150040 22km Airport Road, Daoli District, Harbin, Heilongjiang Patentee after: HARBIN MEIHUA BIOTECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 100193 No. 2 Old Summer Palace West Road, Beijing, Haidian District Patentee before: CHINA AGRICULTURAL University |
|
| TR01 | Transfer of patent right |