CN101983965B - 从山楂中精提熊果酸的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种从山楂中精提熊果酸的方法。它是先将山楂水煮驱除水溶性杂质后，利用乙醇回流提取浓缩，调节再浓缩物的PH值至碱性，得到沉淀物，水洗沉淀物至中性，脱色后重结晶得到熊果酸。该方法适于规模化的工业生产。

Description

从山楂中精提熊果酸的方法
技术领域
本发明属于熊果酸的提取，具体涉及一种从山楂中精提熊果酸的方法。
背景技术
熊果酸(Ursolic acid)又名乌苏酸、乌索酸，为五环三萜酸，体外试验表明，本品对人结肠癌细胞(HCT-8)、人宫颈癌细胞(Hela)、人黑色素瘤细胞(MV3)、人胃癌细胞(BGC-823)、人巨细胞性肺癌细胞(801-D)、人卵巢癌细胞(A2780)、人口腔上皮癌细胞(KB)等有明显的抑制作用；荷瘤小鼠试验结果表明本品对人移植性肝癌(Bel-7402)、人肝癌(SMMC-7721)、小鼠Lewis肺癌(3LL)、S180、H22均有明显抑制作用。熊果酸能直接杀伤肿瘤细胞，其作用是通过激活癌细胞中的RARP及内切酶攻击核及核小体DNA，最终导致细胞溶解；本品能促进人肝癌细胞(HepG12)凋亡，降低HepG12的细胞活力，细胞主要被阻滞在G0期和G1期，并体S期细胞数的下降。体外试验证明本品显著抑制SV40DNA复制在启始，并大大减少拓朴异构酶I的DNA断裂，显著降低复制蛋白A的单链DNA的结合活性。
现有从山楂中提取熊果酸的方法，采用碱性乙醇回流提取后，在PH9～11条件下溶解过滤后，滤液调PH3～4，得沉淀，水洗沉淀，用干燥后再乙醇去杂质，过滤结晶等到熊果酸。这种方法采用碱性溶解，再利用酸性沉淀，并且要求PH3～4，工艺要求高，经本发明人反复试验，上述方法只能适用于实验室的小试，在进行大规模工业化生产时，由于工艺控制难度大，产品质量、纯度，收率均不稳定，不适合药用原料药的生产。
发明内容
本发明的目的在于提供一种能使与大规模工业化生产，质量稳定的从山楂中精提熊果酸的方法，以解决上述问题。
本发明的技术方案为：(1)将山楂在70～100℃的温度下水煮0.5～3小时，抽滤后将滤渣在70℃下烘干；
(2)将烘干后的产物用乙醇回流提取1～3次，每次1～4h，合并提取液，减压回收至干浸膏且无醇味，干浸膏的比重控制在0.85～1.30(单位g/ml)之间；
(3)用70℃的热水分散所述干浸膏，得到干浸膏液，调节干浸膏液的PH值至11.5～13，放置得第一沉淀物，抽滤，用蒸馏水洗第一沉淀物至第一沉淀物的滤液PH等于7，得到第二沉淀物，抽滤第二沉淀物后，将第二沉淀物在70℃下烘干；
(4)取步骤(3)中烘干物，用石油醚30-90或乙酸乙脂脱色过滤，保留滤渣，挥干溶剂，过滤得沉淀；
(5)取步骤(4)中沉淀，再用适量乙醇溶解，硅胶、氧化铝、活性炭、硅藻土、离子交换树脂中的一种脱色，过滤，得到白色沉淀；
(6)熊果酸重结晶：取步骤(4)白色沉淀，用无水乙醇重结晶，即可获得最后的结晶产物；重结晶条件：每次用无水乙醇溶解，在室温下放置结晶12小时。
所述步骤(3)中，利用碱调节所述干浸膏的PH值至12。
所述步骤(2)中所述乙醇回流提取的要求是；第一次2～4小时；第二次1.5～3小时；第三次1～2小时。
所述步骤(1)中，水煮时，水的重量为山楂重量的5～30倍。
所述步骤(2)中，用乙醇回流提取时，第一次乙醇的重量是山楂重量的1～6倍；第二次乙醇的重量是山楂重量的1～5倍；第三次乙醇的重量是山楂重量的1～4倍。
步骤(2)中，所述用乙醇回流提取时，乙醇体积浓度为50～100％。
本发明的工艺中，先采用水煮将山楂中的水溶性杂质驱除，为后续工艺步骤提供“单纯”的非水溶性物质，有利于后续规模生产工艺步骤中的质量控制，避免山楂中水溶性物质对后续工艺步骤的影响。本发明在利用乙醇回流提取浓缩后，进行调节干浸膏液的PH值至11.5～13，放置得第一沉淀物，将第一沉淀物用蒸馏水洗至PH等于7，这样先将乙醇回流提取浓缩后，利用调节碱性，得到碱性沉淀物，该步骤避易于控制，再用水洗碱性沉淀物至中性，更容易实现；它避免现有工艺中在PH9～11条件下溶解过滤后，滤再调PH3～4，得沉淀物的质量不稳定性，由于在规模化生产过程中，采用碱性溶解，再利用酸性得沉淀物时，滤液调PH3～4的中和过程中的滤液均匀度受搅拌装置、温度和时间的影响，所以得到得沉淀物的质量难以控制，这也是现有技术中不适合规模化工业生产的原因之一。本方法提取的熊果酸的含量98％以上，本发明适合药用原料药的大规模化的工业生产。
具体实施方式
实施例1
(1)采用水煮对样本除掉大部分水溶性；取10公斤山楂加5倍山楂重量的水；水煮沸后保持在70℃下0.5小时，抽滤后将滤渣在70℃下烘干备用。
(2)取步骤(1)烘干的产物用该产物6倍重量份的体积浓度为95％乙醇回流提取1次，时间4h，减压回收至干浸膏且无醇味，干浸膏比重控制在0.85～1.30g/ml之间。
(3)用5倍于干浸膏重量份的70℃水分散干浸膏，
用氢氧化钠调节PH值至11.5，放置得第一沉淀物，抽滤，用蒸馏水洗沉淀物，至沉淀物滤液PH等于7，得到第二沉淀物，抽滤后将第二沉淀物在70℃下烘干备用。
(4)取步骤(3)中干燥第二沉淀物，用1倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚30倍脱色三次，每次0.5h，过滤，保留过滤物，挥干溶剂。
(5)熊果酸脱色：取步骤(4)中去溶剂得过滤物抽，用乙醇溶解，利用离子交换树脂脱色，过滤。得到白色沉淀。
(6)熊果酸重结晶：用无水乙醇重结晶步骤(5)中的白色沉淀，三次，即可获得最后的结晶产物。重结晶条件：每次用无水乙醇溶解，在室温下放置结晶2小时。得到最终结晶物熊果酸。
检测熊果酸的质量为分子式C30H48O3分子量：456.36；收率为：42％ 纯度为≥98％。
实施例2
(1)取50公斤山楂加10倍山楂重量的水；水煮沸后保持在80℃下1.5小时，抽滤后将滤渣在70℃下烘干备用。
(2)取步骤(1)烘干的产物用该产物3倍重量份的体积浓度为95％乙醇回流提取2次，第一次回流提取乙醇的重量是产物用重量的6倍；时间3小时；第二次回流提取乙醇的重量是产物用重量的5倍；时间1h，合并提取液；减压回收至干浸膏且无醇味，干浸膏比重控制在0.85～1.30g/ml之间。
(3)用10倍于干浸膏重量份的70℃水分散干浸膏，
用氢氧化钠调节PH值至12，放置得第一沉淀物，抽滤，用蒸馏水洗沉淀物，至沉淀物滤液PH等于7，得到第二沉淀物，抽滤后将第二沉淀物在70℃下烘干备用。
(4)取步骤(3)中干燥第二沉淀物，用3倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚60脱色三次，每次0.5h，过滤，保留过滤物，挥干溶剂。
(5)熊果酸脱色：取步骤(4)中去溶剂得过滤物抽，用乙醇溶解，利用离子交换树脂脱色，过滤。得到白色沉淀。
(6)熊果酸重结晶：用无水乙醇重结晶步骤(5)中的白色沉淀，三次，即可获得最后的结晶产物。重结晶条件：每次用无水乙醇溶解，在室温下放置结晶2小时。得到最终结晶物熊果酸。
检测熊果酸的质量为分子式C30H48O3分子量：456.36；收率为：50％纯度为≥98％。
实施例3
(1)取100公斤山楂加30倍山楂重量的水；水煮沸后保持在70℃下3小时，抽滤后将滤渣在70℃下烘干备用。
(2)取步骤(1)烘干的产物用该产物8倍重量份的体积浓度为50～100％乙醇回流提取3次，第一次回流提取乙醇的重量是产物用重量的6倍；时间1.5小时；第二次回流提取乙醇的重量是产物用重量的5倍；时间1.5h，第三次回流提取乙醇的重量是产物用重量的4倍；时间1h，合并提取液；减压回收至干浸膏且无醇味，干浸膏比重控制在0.85～1.30g/ml之间。
(3)用40倍于干浸膏重量份的70℃水分散干浸膏，
用氢氧化钠调节PH值至13，放置得第一沉淀物，抽滤，用蒸馏水洗沉淀物，至沉淀物滤液PH等于7，得到第二沉淀物，抽滤后将第二沉淀物在70℃下烘干备用。
(4)取步骤(3)中干燥第二沉淀物，用3倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚90脱色三次，每次0.5h，过滤，保留过滤物，挥干溶剂。
(5)熊果酸脱色：取步骤(4)中去溶剂得过滤物抽，用乙醇溶解，利用离子交换树脂脱色，过滤。得到白色沉淀。
(6)熊果酸重结晶：用无水乙醇重结晶步骤(5)中的白色沉淀，三次，即可获得最后的结晶产物。重结晶条件：每次用无水乙醇溶解，在室温下放置结晶2小时。得到最终结晶物熊果酸。
检测熊果酸的质量为分子式C30H48O3分子量：456.36；收率为：49％纯度为≥98％。
实施例4
(1)取80公斤山楂加20倍山楂重量的水；水煮沸后保持在80℃下2.5小时，抽滤后将滤渣在70℃下烘干备用。
(2)取步骤(1)烘干的产物用该产物10倍重量份的体积浓度为50～100％的乙醇回流提取3次，第一次回流提取乙醇的重量是产物用重量的8倍；时间2小时；第二次回流提取乙醇的重量是产物用重量的8倍；时间1.5h，第三次回流提取乙醇的重量是产物用重量的8倍；时间0.5h，合并提取液；减压回收至干浸膏且无醇味，干浸膏比重控制在0.85～1.30g/ml之间。
(3)用25倍于干浸膏重量份的70℃水分散干浸膏，
用氢氧化钠调节PH值至12，放置得第一沉淀物，抽滤，用蒸馏水洗沉淀物，至沉淀物滤液PH等于7，得到第二沉淀物，抽滤后将第二沉淀物在70℃下烘干备用。
(4)取步骤(3)中干燥第二沉淀物，用5倍于干燥第二沉淀物重量份石油醚90脱色三次，每次0.5h，过滤，保留过滤物，挥干溶剂。
(5)熊果酸脱色：取步骤(4)中去溶剂得过滤物抽，用乙醇溶解，利用离子交换树脂脱色，过滤。得到白色沉淀。
(6)熊果酸重结晶：用无水乙醇重结晶步骤(5)中的白色沉淀，三次，即可获得最后的结晶产物。重结晶条件：每次用无水乙醇溶解，在室温下放置结晶2小时。得到最终结晶物熊果酸。
检测熊果酸的质量为分子式C30H48O3分子量：456.36；收率为：51％ 纯度为≥98％。

Claims (6)

1.一种从山楂中精提熊果酸的方法，其步骤是：
(1)将山楂在70～100℃的温度下水煮1～5小时，抽滤后将滤渣在70℃下烘干；
(2)将烘干后的滤渣用乙醇回流提取1～3次，每次1～4h，合并提取液，减压回收至干浸膏状且无醇味，比重控制在0.85～1.30g/ml之间；
(3)用70℃的热水分散所述干浸膏，得到干浸膏液，调节干浸膏液的pH值至11.5～13，放置得第一沉淀物，抽滤，用蒸馏水洗第一沉淀物至第一沉淀物的滤液pH等于7，得到第二沉淀物，抽滤第二沉淀物后将第二沉淀物在70℃下烘干；
(4)取步骤(3)中烘干物，用石油醚30-90或乙酸乙脂脱色过滤，保留滤渣，挥干溶剂，过滤得沉淀；
(5)取步骤(4)中沉淀，再用适量乙醇溶解，硅胶、氧化铝、活性炭、硅藻土、离子交换树脂中的一种脱色，过滤，得到白色沉淀；
(6)熊果酸重结晶：取步骤(5)白色沉淀，用无水乙醇重结晶，即可获得最后的结晶产物；重结晶条件：每次用无水乙醇溶解，在室温下放置结晶12小时。
2.如权利要求1所述从山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步骤(3)中，利用碱调节所述干浸膏液的pH值至12。
3.如权利要求1所述从山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步骤(2)中所述乙醇回流提取的要求是；第一次2～4小时；第二次1.5～3小时；第三次1～2小时。
4.如权利要求1所述从山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步骤(1)中，水煮时，水的重量为山楂重量的5～50倍。
5.如权利要求1或3所述从山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步骤(2)中，用乙醇回流提取时，第一次乙醇的重量是山楂重量的1～6倍；第二次乙醇的重量是山楂重量的1～5倍；第三次乙醇的重量是山楂重量的1～4倍。
6.如权利要求1或3所述从山楂中精提熊果酸的方法，其特征在于步骤(2)中，所述用乙醇回流提取时，乙醇体积浓度为50～100％。
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