CN101972283A

CN101972283A - 一种大叶金花草总黄酮的制备方法

Info

Publication number: CN101972283A
Application number: CN 201010519104
Authority: CN
Inventors: 李超; 王卫东; 陈安徽; 王乃馨; 商学兵; 周卫东; 陈尚龙
Original assignee: Xuzhou University of Technology
Current assignee: Xuzhou University of Technology
Priority date: 2010-10-19
Filing date: 2010-10-19
Publication date: 2011-02-16
Anticipated expiration: 2030-10-19
Also published as: CN101972283B

Abstract

本发明公开了一种大叶金花草总黄酮的制备方法，属总黄酮的提取技术。是将干燥的大叶金花草粉碎过筛，以水为提取剂，采用纤维素酶提取，提取液过滤后调整pH和总黄酮质量浓度得上样液，然后采用AB-8型大孔吸附树脂吸附，乙醇洗脱，减压浓缩和冷冻干燥，得大叶金花草总黄酮产品。本发明的有益效果是操作简便、快捷、廉价、无毒，是一种绿色生产方法。

Description

一种大叶金花草总黄酮的制备方法

技术领域

本发明涉及一种从大叶金花草中提取、纯化总黄酮的方法，具体是一种利用纤维素酶提取串联AB-8型大孔吸附树脂分离纯化制备大叶金花草总黄酮的方法，属于药材加工领域。

背景技术

大叶金花草是鳞始蕨科植物乌蕨(Stenoloma chusana(L.)Ching)的全草和根茎，又名野鸡尾、金花草、土黄连、中华金粉蕨，具有清热、解毒、利尿、退黄止血的功效，主产于长江以南和陕西、四川各地。其单方和复方均具有清热解毒，利湿，止血的功效。临床用于治疗肠炎、肝炎、咽喉炎等症，民间用于治疗胃癌、肠癌、食物中毒和农药中毒，有“万能解毒药”之称。现代药理证明大叶金花草有着明显的抗菌活性、解毒作用和保肝、抗炎、止血的作用，其主要有效成分是黄酮类化合物。近年来，随着天然药物化学、药理研究的不断深入及其分析手段突飞猛进，黄酮类化合物在医学上被用于预防血液类疾病及治疗冠状动脉硬化等疾病，它可清除体内自由基，延缓衰老和抑制肿瘤，防护紫外线损伤等。大叶金花草中含有大量的天然黄酮类化合物，如何高效地进行提取与分离纯化，也越来越受到国内外学者的重视。

常用的总黄酮提取方法有水煎煮法，热回流提取，超声波辅助提取，微波辅助提取等。但是水煎煮法提取时间很长，一般4～6小时；热回流提取，超声波辅助提取和微波辅助提取总黄酮则需要使用有机溶剂；而酶法提取作为一种优良的提取方法，具有操作简便快捷、提取时间短、转移率高以及无溶剂污染等特点，目前己广泛应用在生物活性物质的提取方面，如山楂叶总黄酮，银杏叶总黄酮，芹菜黄酮等，而应用于大叶金花草总黄酮提取方面至今未见报道。

大孔吸附树脂是一类不溶于酸、碱及各种有机溶剂且有较好吸附性能的有机高聚物吸附剂，近年来广泛被应用于医药、环保和食品等领域，在中草药研究方面也较广泛，尤其在黄酮类成分中，如红树莓总黄酮，银杏叶总黄酮和杭白菊总黄酮等及其他各类成分均有采用大孔吸附树脂法进行分离纯化的研究，而应用于大叶金花草总黄酮分离纯化方面至今未见报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种大叶金花草总黄酮的制备方法，即一种利用纤维素酶提取串联AB-8型大孔吸附树脂分离纯化大叶金花草总黄酮的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：将干燥的大叶金花草粉碎过40目筛，水为提取剂，纤维素酶用量是大叶金花草原料质量的0.4％～0.8％，提取剂水的体积与大叶金花草原料质量之比10ml/g～12ml/g，pH值4～5，酶解温度40℃～50℃，酶解时间2h～3h，得提取液，经检验总黄酮转移率大于90％；将提取液过滤后调整得到pH 4～5和总黄酮质量浓度0.9mg/ml～1.2mg/ml的上样液，然后以2BV/h～4BV/h的流速，采用AB-8型大孔吸附树脂吸附，随后以体积份数65％～85％的乙醇为洗脱液进行洗脱，洗脱液流速1BV/h～2BV/h，洗脱液用量1.5BV～2.5BV，得洗脱液；将洗脱液在真空度0.08MPa～0.10MPa、温度50℃～60℃条件下浓缩至初始体积的30％为止，得浓缩液；将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20Pa、冷阱温度-45℃～-60℃条件下干燥殆尽，得大叶金花草总黄酮产品，经检验纯度大于35％。

由于采用了以上技术方案，本发明具有以下优点：

1、本发明利用纤维素酶提取串联AB-8型大孔吸附树脂分离纯化大叶金花草总黄酮，其主要优点是以水为提取剂，采用纤维素酶提取。与乙醇回流提取、超声波辅助乙醇提取或微波辅助乙醇提取相比，提取时不使用乙醇等有机溶剂，故无需浓缩除去乙醇，过滤后直接调整pH和质量浓度便可直接进行大孔吸附树脂分离纯化，因此本发明操作简便、快捷、廉价、无毒；

2、用本发明方法制备大叶金花草总黄酮，其总黄酮转移率大于90％，纯化物中总黄酮的含量大于35％，且重现性好，树脂可重复使用。

附图说明

图1是实施例1的AB-8大孔吸附树脂动态洗脱曲线。

图2是实施例2的AB-8大孔吸附树脂动态洗脱曲线。

图3是实施例3的AB-8大孔吸附树脂动态洗脱曲线。

具体实施方式

实施例1

纤维素酶提取条件：干燥的大叶金花草粉碎过40目筛，纤维素酶用量是大叶金花草原料质量的0.4％，提取剂水的体积与大叶金花草原料质量之比10.8ml/g，pH值4.6，酶解温度45℃和酶解时间2h，此时总黄酮转移率为97.48％。

AB-8型大孔吸附树脂分离纯化条件：上样液pH 4.5、上样液质量浓度1.00mg/ml、上样液流速2.5BV/h、洗脱液为体积份数75％的乙醇、洗脱液流速1.25BV/h和洗脱剂用量为1.87BV，在真空度0.095MPa、温度55℃条件下浓缩至初始体积的30％为止，得浓缩液，将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20Pa、冷阱温度-50℃条件下干燥殆尽，得大叶金花草总黄酮产品，此产品纯度为43.16％。动态洗脱曲线见图1。

实施例2

纤维素酶提取条件：干燥的大叶金花草粉碎过40目筛，纤维素酶用量是大叶金花草原料质量的0.4％，提取剂水的体积与大叶金花草原料质量之比12ml/g，pH值4，酶解温度45℃和酶解时间2h，此时总黄酮转移率为92.33％。

AB-8型大孔吸附树脂分离纯化条件：上样液pH 4.5、上样液质量浓度0.95mg/ml、上样液流速2.5BV/h、洗脱液为体积份数80％的乙醇、洗脱液流速1.25BV/h和洗脱剂用量为1.80BV，在真空度0.095MPa、温度55℃条件下浓缩至初始体积的30％为止，得浓缩液，将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20Pa、冷阱温度-50℃条件下干燥殆尽，得大叶金花草总黄酮产品，此产品纯度为39.88％。动态洗脱曲线见图2。

实施例3

纤维素酶提取条件：干燥的大叶金花草粉碎过40目筛，纤维素酶用量是大叶金花草原料质量的0.5％，提取剂水的体积与大叶金花草原料质量之比10ml/g，pH值4.5，酶解温度45℃和酶解时间2.5h，此时总黄酮转移率为96.40％。

AB-8型大孔吸附树脂分离纯化条件：上样液pH 4.5、上样液质量浓度1.02mg/ml、上样液流速2.5BV/h、洗脱液为体积份数70％的乙醇、洗脱液流速1.25BV/h和洗脱剂用量为1.90BV，在真空度0.095MPa、温度55℃条件下浓缩至初始体积的30％为止，得浓缩液，将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20Pa、冷阱温度-50℃条件下干燥殆尽，得大叶金花草总黄酮产品，此产品纯度为40.70％。动态洗脱曲线见图3。

Claims

1.一种大叶金花草总黄酮的制备方法，其特征是将干燥的大叶金花草粉碎过筛，以水为提取剂，采用纤维素酶提取，提取液过滤后调整pH和总黄酮质量浓度得上样液，然后采用AB-8型大孔吸附树脂吸附，乙醇洗脱得洗脱液，减压浓缩和冷冻干燥，得大叶金花草总黄酮产品。

2.如权利要求1所述的一种大叶金花草总黄酮的制备方法，其特征是：所述的纤维素酶提取大叶金花草总黄酮，其干燥的大叶金花草粉碎过40目筛，纤维素酶用量是大叶金花草原料质量的0.4％～0.8％，提取剂水的体积与大叶金花草原料质量之比10ml/g～12ml/g，pH值4～5，酶解温度40℃～50℃，酶解时间2h～3h，得提取液。

3.如权利要求1或2所述的一种大叶金花草总黄酮的制备方法，其特征是：所述总黄酮转移率大于90％。

4.如权利要求1所述的一种大叶金花草总黄酮的制备方法，其特征是：所述AB-8型大孔吸附树脂分离纯化大叶金花草总黄酮，其上样液pH 4～5，上样液中总黄酮质量浓度0.9mg/ml～1.2mg/ml，上样液流速2BV/h～4BV/h，洗脱液为体积份数65％～85％的乙醇，洗脱液流速1BV/h～2BV/h，洗脱液用量为1.5BV～2.5BV，得洗脱液。

5.如权利要求1所述的一种大叶金花草总黄酮的制备方法，其特征是：所述的减压浓缩是将洗脱液在真空度0.08MPa～0.10MPa、温度50℃～60℃条件下浓缩至初始体积的30％为止，得浓缩液。

6.如权利要求1所述的一种大叶金花草总黄酮的制备方法，其特征是：所述的冷冻干燥是将浓缩液在冷冻干燥机真空度小于20Pa、冷阱温度-45℃～-60℃条件下干燥殆尽，得大叶金花草总黄酮产品。

7.如权利要求1所述的一种大叶金花草总黄酮的制备方法，其特征是：大叶金花草总黄酮产品纯度大于35％。