CN101948757A

CN101948757A - 一种水产品复合微生物添加剂及其制备方法与应用

Info

Publication number: CN101948757A
Application number: CN2010102968201A
Authority: CN
Inventors: 崔国臣; 刘美娜
Original assignee: DALIAN SANKE BIO-ENGINEERING Co Ltd
Current assignee: DALIAN SANKE BIO-ENGINEERING Co Ltd
Priority date: 2010-09-30
Filing date: 2010-09-30
Publication date: 2011-01-19
Anticipated expiration: 2030-09-30
Also published as: CN101948757B

Abstract

一种水产品复合微生物添加剂的制备方法与应用，属于微生物调节剂在水产养殖业应用的生物材料技术领域。采用产朊假丝酵母10~40%，沼泽红假单胞菌15~50%，嗜酸乳杆菌5~25%，乳酸链球菌5~30%，枯草芽孢杆菌10~35%。以上菌种分别经过一级菌种培养，二、三级发酵，使发酵液中菌数达到5～10×10⁸个/mL，即得水产品复合微生物添加剂。本产品经长期实地验证，配方合理，功效稳定，能够提高幼体成活率，促进水产动物生长，提高饲料转化率，防病抗病，提高产品产量，改善产品品质。

Description

一种水产品复合微生物添加剂及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种水产品复合微生物添加剂909及其制备方法与应用，属于微生物调节剂在水产养殖业中应用的生物材料技术领域。

背景技术

随着健康无公害养殖的普及和推广，微生物制剂以其无毒害、无残留等优点，越来越受到人们的关注和青睐。利用某些微生物的代谢作用，降低养殖水体的氨氮、硫化氢含量，从而有效预防水产动物中毒，净化了水质，给水产动物创造良好的生存环境。同样，一些微生物能够促进饵料的转化，进而营养成分被养殖动物吸收利用，间接促进养殖动物的生长。

水产品复合微生物添加剂909的研发，采用适合水产养殖环境的微生物菌种，充分发挥了微生物物质代谢的功能，通过多菌种间协同作用起到对水产养殖增产增效增收的目的。

发明内容

本发明所要解决的问题是采用多种菌种制备复合微生物菌剂，利用该复合微生物菌剂制成水产品复合微生物添加剂909应用在水产养殖业。菌剂进入水产动物体内，形成优势种群，参与肠道微生物的平衡，提高饵料利用率和动物生长速度，提高动物机体非特异性免疫功能，防病抗病。

本发明的技术解决方案如下：一种水产品复合微生物添加剂909采用产朊假丝酵母（Candida utilis）ATCC No.22023，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus) ATCC No.11073，乳酸链球菌(Streptococcus lactis) ATCC No.19435，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ATCC No.6633制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：产朊假丝酵母10~40%，沼泽红假单胞菌15~50%，嗜酸乳杆菌5~25%，乳酸链球菌5~30%，枯草芽孢杆菌10~35%。

所述的一种水产品复合微生物添加剂的制备步骤如下：

1.接种：将所述各菌种接于斜面培养基上。产朊假丝酵母培养温度25～30℃，培养时间为6～48h；沼泽红假单胞菌培养温度为25～30℃，培养时间为6～48h；嗜酸乳杆菌培养温度为27～35℃，培养时间为6～48h；乳酸链球菌培养温度为27～35℃，培养时间为6～48h；枯草芽孢杆菌培养温度为27～37℃，培养时间为6～48h；

2.一级菌种培养：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基用无菌海水配制，pH为6.0～8.0。锥形瓶放入摇床振荡，温度为30℃，振荡24～48h；采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到10⁸个/mL；

3.二级发酵：将所述菌种分别接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基用无菌海水配制，pH6.0～8.0，放入摇床振荡，温度为30℃，振荡48～72h；使菌种数量分别达到10⁸个/mL以上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；

4.三级发酵：将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养基pH6.0～8.0，接种量为1～5%，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到5～10×10⁸个/mL，即得到所述微生物复合菌剂。

所述液体培养基配方为：

1.产阮假丝酵母采用的液体培养基配方为：稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为12Brix，琼脂15 g，高压灭菌30分钟；

2.沼泽红假单胞菌采用的液体培养基配方为：氯化铵1.5g，磷酸二氢钾1.5g，七水硫酸镁0.8g，氯化钠4.0g，碳酸氢钠1.8g，氯化钙0.01g，VB0.1g，酵母粉1.0 g，乙酸钠4.0g，微量元素1.0mL/L包括（六水氯化铁5.0g，七水硫酸锌1.0g，五水硫酸铜0.05g，六水氯化

钴0.5g，硼酸1.0g，四水氯化锰0.5g），添加乙酸调节pH，水适量；

3.嗜酸乳杆菌、乳酸链球菌采用的液体培养基配方为：乳酪蛋白胨 10g、蛋白胨10g、

酵母膏 5g、葡萄糖5g 、吐温80 1g、K₂HPO₄2g、醋酸钠5g、柠檬酸二胺2g、MgSO₄·7H₂O0.2g、MnSO₄·H₂O 0.05g、水1000ml；

4.枯草芽孢杆菌采用的液体培养基配方为：牛肉膏 5g、蛋白胨10g、Nacl 3g、pH 7.0。

所述复合菌剂培养基配方为：蜂蜜1～8g/100mL、蔗糖5～10g/100mL、蛋白胨0.1～0.8g/100mL、KH₂PO₄ 0.2～0.5g/100mL、K₂HPO₄ 0.5～3g/100mL、MgSO₄·7H₂O 0.5～3g/100mL、Nacl 0.5～10g/100mL其余为蒸馏水。

所述水产品复合微生物添加剂909在水产品养殖中作为饲料添加剂。

本发明的有益效果是：一种复合微生物添加剂采用产朊假丝酵母、沼泽红假单胞菌、嗜酸乳杆菌、乳酸链球菌、枯草芽孢杆菌制备菌种。以上菌种分别经过一级菌种培养，二、三级发酵，使发酵液中菌数达到5～10×10⁸个/mL，即得水产品复合微生物添加剂909。本产品经长期实地验证，配方合理，功效稳定，能提高幼体成活率，促进水产动物生长，提高饲料转化率，防病抗病，提高产品产量，改善产品品质。

具体实施方式

本发明采用产朊假丝酵母（Candida utilis）ATCC No.22023，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus) ATCC No.11073，乳酸链球菌(Streptococcus lactis) ATCC No.19435，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ATCC No.6633制备菌种，生产水产品复合微生物菌剂909。

菌种的质量百分比为：产朊假丝酵母10~40%，沼泽红假单胞菌15~50%，嗜酸乳杆菌5~25%，乳酸链球菌5~30%，枯草芽孢杆菌10~35%。

常用配方表

按照上述配方表和制备方法得到的水产品复合微生物添加剂909，菌数含量达到9×10⁸个/mL，可根据不同的使用需要进行配方选择。

实施例1：

采用本发明制备的水产品复合微生物添加剂909（以下简称909）在刺参养殖中应用效果试验：

1.供试材料：水产品复合微生物添加剂909。

2.试验对象：庄河洪鑫海珍品养殖场培育的幼参，规格5000-100000个/500g。

3.试验分组：选择两个水泥池，用高锰酸钾消毒后用洁净的海水冲洗，1号为试验池，2号为对比池，加沙滤海水至1.4米。每池放100串消毒后的附着基。每池投放稚幼参6千克，均匀泼洒池中，使其大多数附着在附着基上。

4.试验方法：

试验池：每天换完水后投放5ppm水产品复合微生物添加剂909。

对照组：换水后，使用2ppm抗生素。

5.试验管理：

试验时间为16天。

①每天早6：00换水一次，循环1小时，每7-8天倒一次池。

②每天投饵3次。

③每天测1次水温、盐度、pH值。

5.试验结果与分析

试验池和对照池测得的水温和盐度一致。pH值试验池平均7.6，对照池平均8.3。

将试验池和对照池参苗全部称重，试验池为16kg，对照池为13.5kg。试验池比对照池提高18.5%。

实施例2：

采用本发明制备的水产品复合微生物添加剂909（以下简称909）在刺参育苗中应用效果试验：

1.供试材料：水产品复合微生物添加剂909。

2.试验对象：庄河洪鑫海珍品养殖场孵化的初耳状幼体。

3.试验分组：选择两个水泥池用高锰酸钾消毒后，用沙滤水冲洗，1号为试验池，2号为对比池，加沙滤海水100cm，投EDTA2ppm，微量充气。每池各投放1千万初耳状幼体，培养密度为3.3个/mL海水。

4.试验方法：

试验池：投放5ppm水产品复合微生物添加剂909，换水后立即补充。

对照组：使用1.5ppm抗生素，换水后立即使用。

5.试验管理：

试验分为两个阶段，第一阶段为浮游阶段6天，第二阶段为保苗阶段时间是30天。

①浮游阶段前两天，每天添水20cm，添水后试验池补充5ppm水产品复合微生物添加剂909，对照池使用抗生素1.5ppm；第三天开始换水，换水量为1/3,换水后试验池补充5ppm水产品复合微生物添加剂909，对照池使用抗生素1.5ppm；下片后采用循环水，循环1h后试验池补充5ppm水产品复合微生物添加剂909，对照池使用抗生素1.5ppm。

②每天测1次水温、盐度、pH值。

6.试验结果与分析

①试验池在浮游阶段的第6天上午就出现了樽形幼体，对照池在下午才出现，时间相差6个多小时。

②保苗阶段结束后，开始剥离。试验池剥离稚参2.45kg，规格为42万头/500g的稚参206万；对照池剥离稚参2.00kg，规格为45万头/500g的稚参170万。试验池出苗率比对照池高21%，规格要大。

③两池的温度和盐度基本一致。试验池的pH值在7.2~7.4，对照池为7.7~8.0。

Claims

1.一种水产品复合微生物添加剂，其特征在于：采用产朊假丝酵母（Candida utilis）ATCC No.22023，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus) ATCC No.11073，乳酸链球菌(Streptococcus lactis) ATCC No.19435，枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）ATCC No.6633制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：产朊假丝酵母10~40%，沼泽红假单胞菌15~50%，嗜酸乳杆菌5~25%，乳酸链球菌5~30%，枯草芽孢杆菌10-35%。

2.根据权利要求1所述的一种水产品复合微生物添加剂的制备方法，其特征在于：所述水产品复合微生物添加剂909的制备步骤如下：

3.根据权利要求2所述的水产品复合微生物添加剂的制备方法，其特征在于：所述液体培养基配方为：

2.沼泽红假单胞菌采用的液体培养基配方为：氯化铵1.5g，磷酸二氢钾1.5g，七水硫酸镁0.8g，氯化钠4.0g，碳酸氢钠1.8g，氯化钙0.01g，VB0.1g，酵母粉1.0 g，乙酸钠4.0g，微量元素1.0mL/L包括（六水氯化铁5.0g，七水硫酸锌1.0g，五水硫酸铜0.05g，六水氯化钴0.5g，硼酸1.0g，四水氯化锰0.5g），添加乙酸调节pH，水适量；

3.嗜酸乳杆菌、乳酸链球菌采用的液体培养基配方为：乳酪蛋白胨 10g、蛋白胨10g、酵母膏 5g、葡萄糖5g 、吐温80 1g、K₂HPO₄2g、醋酸钠 5g、柠檬酸二胺 2g、MgSO₄·7H₂O 0.2g、MnSO₄·H₂O 0.05g、水1000ml；

4.根据权利要求2所述的一种水产品复合微生物添加剂的制备方法，其特征在于：所述复合菌剂培养基配方为：蜂蜜1～8g/100mL、蔗糖5～10g/100mL、蛋白胨0.1～0.8g/100mL、KH₂PO₄ 0.2～0.5g/100mL、K₂HPO₄ 0.5～3g/100mL、MgSO₄·7H₂O 0.5～3g/100mL、Nacl 0.5～10g/100mL其余为蒸馏水。

5.根据权利要求1所述的一种水产品复合微生物添加剂的应用，其特征在于：所述水产品复合微生物添加剂在水产品养殖中作为饲料添加剂。