CN101948757B - 一种水产品复合微生物添加剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
一种水产品复合微生物添加剂的制备方法与应用，属于微生物调节剂在水产养殖业应用的生物材料技术领域。采用产朊假丝酵母10~40%，沼泽红假单胞菌15~50%，嗜酸乳杆菌5~25%，乳酸链球菌5~30%，枯草芽孢杆菌10~35%。以上菌种分别经过一级菌种培养，二、三级发酵，使发酵液中菌数达到5～10×108个/mL，即得水产品复合微生物添加剂。本产品经长期实地验证，配方合理，功效稳定，能够提高幼体成活率，促进水产动物生长，提高饲料转化率，防病抗病，提高产品产量，改善产品品质。
Description
技术领域
本发明涉及一种水产品复合微生物添加剂及其制备方法与应用，属于微生物调节剂在水产养殖业中应用的生物材料技术领域。
背景技术
随着健康无公害养殖的普及和推广，微生物制剂以其无毒害、无残留等优点，越来越受到人们的关注和青睐。利用某些微生物的代谢作用，降低养殖水体的氨氮、硫化氢含量，从而有效预防水产动物中毒，净化了水质，给水产动物创造良好的生存环境。同样，一些微生物能够促进饵料的转化，进而营养成分被养殖动物吸收利用，间接促进养殖动物的生长。
水产品复合微生物添加剂的研发，采用适合水产养殖环境的微生物菌种，充分发挥了微生物物质代谢的功能，通过多菌种间协同作用起到对水产养殖增产增效增收的目的。
发明内容
本发明所要解决的问题是采用多种菌种制备复合微生物菌剂，利用该复合微生物菌剂制成水产品复合微生物添加剂应用在水产养殖业。菌剂进入水产动物体内，形成优势种群，参与肠道微生物的平衡，提高饵料利用率和动物生长速度，提高动物机体非特异性免疫功能，防病抗病。
本发明的技术解决方案如下：一种水产品复合微生物添加剂采用产朊假丝酵母(Candidautilis)ATCC No.22023，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus)ATCC No.11073，乳酸链球菌(Streptococcus lactis)ATCCNo.19435，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC No.6633制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：产朊假丝酵母10～40％，沼泽红假单胞菌15～50％，嗜酸乳杆菌5～25％，乳酸链球菌5～30％，枯草芽孢杆菌10～35％。
所述的一种水产品复合微生物添加剂的制备步骤如下：
1.接种：将所述各菌种接于斜面培养基上。产朊假丝酵母培养温度25～30℃，培养时间为6～48h；沼泽红假单胞菌培养温度为25～30℃，培养时间为6～48h；嗜酸乳杆菌培养温度为27～35℃，培养时间为6～48h；乳酸链球菌培养温度为27～35℃，培养时间为6～48h；枯草芽孢杆菌培养温度为27～37℃，培养时间为6～48h；
2.一级菌种培养：将步骤1培养的所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基用无菌海水配制，pH为6.0～8.0。锥形瓶放入摇床振荡，温度为30℃，振荡24～48h；采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到108个/mL；
3.二级发酵：将步骤2培养的所述菌种分别接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基用无菌海水配制，pH6.0～8.0，放入摇床振荡，温度为30℃，振荡48～72h；使菌种数量分别达到108个/mL以上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；
4.三级发酵：将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养基pH6.0～8.0，接种量为1～5％，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到5～10×108个/mL，即得到所述微生物复合菌剂。
所述液体培养基配方为：
1.产阮假丝酵母采用的液体培养基配方为：稀释去除啤酒花的麦芽汁至浓度为12Brix，高压灭菌30分钟；
2.沼泽红假单胞菌采用的液体培养基配方为：氯化铵1.5g，磷酸二氢钾1.5g，七水硫酸镁0.8g，氯化钠4.0g，碳酸氢钠1.8g，氯化钙0.01g，VB0.1g，酵母粉1.0g，乙酸钠4.0g，微量元素1.0mL/L包括(六水氯化铁5.0g，七水硫酸锌1.0g，五水硫酸铜0.05g，六水氯化钴0.5g，硼酸1.0g，四水氯化锰0.5g)，添加乙酸调节pH，水适量；
3.嗜酸乳杆菌、乳酸链球菌采用的液体培养基配方为：乳酪蛋白胨10g、蛋白胨10g、酵母膏5g、葡萄糖5g、吐温80 1g、K2HPO4 2g、醋酸钠5g、柠檬酸二胺2g、MgSO4·7H2O0.2g、MnSO4·H2O 0.05g、水1000ml；
4.枯草芽孢杆菌采用的液体培养基配方为：牛肉膏5g、蛋白胨10g、Nacl 3g、pH 7.0、水1000ml。
所述复合菌剂培养基配方为：蜂蜜1～8g/100mL、蔗糖5～10g/100mL、蛋白胨0.1～0.8g/100mL、KH2PO4 0.2～0.5g/100mL、K2HPO4 0.5～3g/100mL、MgSO4·7H2O 0.5～3g/100mL、Nacl 0.5～10g/100mL其余为蒸馏水。
所述水产品复合微生物添加剂在水产品养殖中作为饲料添加剂。
本发明的有益效果是：一种复合微生物添加剂采用产朊假丝酵母、沼泽红假单胞菌、嗜酸乳杆菌、乳酸链球菌、枯草芽孢杆菌制备菌种。以上菌种分别经过一级菌种培养，二、三级发酵，使发酵液中菌数达到5～10×108个/mL，即得水产品复合微生物添加剂。本产品经长期实地验证，配方合理，功效稳定，能提高幼体成活率，促进水产动物生长，提高饲料转化率，防病抗病，提高产品产量，改善产品品质。
具体实施方式
本发明采用产朊假丝酵母(Candida utilis)ATCC No.22023，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus)ATCCNo.11073，乳酸链球菌(Streptococcus lactis)ATCC No.19435，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC No.6633制备菌种，生产水产品复合微生物菌剂。
菌种的质量百分比为：产朊假丝酵母10～40％，沼泽红假单胞菌15～50％，嗜酸乳杆菌5～25％，乳酸链球菌5～30％，枯草芽孢杆菌10～35％。
常用配方表
按照上述配方表和制备方法得到的水产品复合微生物添加剂，菌数含量达到9×108个/mL，可根据不同的使用需要进行配方选择。
实施例1：
采用本发明制备的水产品复合微生物添加剂在刺参养殖中应用效果试验：
1.供试材料：水产品复合微生物添加剂。
2.试验对象：庄河洪鑫海珍品养殖场培育的幼参，规格5000-100000个/500g。
3.试验分组：选择两个水泥池，用高锰酸钾消毒后用洁净的海水冲洗，1号为试验池，2号为对比池，加沙滤海水至1.4米。每池放100串消毒后的附着基。每池投放稚幼参6千克，均匀泼洒池中，使其大多数附着在附着基上。
4.试验方法：
试验池：每天换完水后投放5ppm水产品复合微生物添加剂。
对照组：换水后，使用2ppm抗生素。
5.试验管理：
试验时间为16天。
①每天早6:00换水一次，循环1小时，每7-8天倒一次池。
②每天投饵3次。
③每天测1次水温、盐度、pH值。
5.试验结果与分析
试验池和对照池测得的水温和盐度一致。pH值试验池平均7.6，对照池平均8.3。
将试验池和对照池参苗全部称重，试验池为16kg，对照池为13.5kg。试验池比对照池提高18.5％。
实施例2：
采用本发明制备的水产品复合微生物添加剂在刺参育苗中应用效果试验：
1.供试材料：水产品复合微生物添加剂。
2.试验对象：庄河洪鑫海珍品养殖场孵化的初耳状幼体。
3.试验分组：选择两个水泥池用高锰酸钾消毒后，用沙滤水冲洗，1号为试验池，2号为对比池，加沙滤海水100cm，投EDTA2ppm，微量充气。每池各投放1千万初耳状幼体，培养密度为3.3个/mL海水。
4.试验方法：
试验池：投放5ppm水产品复合微生物添加剂，换水后立即补充。
对照组：使用1.5ppm抗生素，换水后立即使用。
5.试验管理：
试验分为两个阶段，第一阶段为浮游阶段6天，第二阶段为保苗阶段时间是30天。
①浮游阶段前两天，每天添水20cm，添水后试验池补充5ppm水产品复合微生物添加剂，对照池使用抗生素1.5ppm；第三天开始换水，换水量为1/3，换水后试验池补充5ppm水产品复合微生物添加剂，对照池使用抗生素1.5ppm；下片后采用循环水，循环1h后试验池补充5ppm水产品复合微生物添加剂，对照池使用抗生素1.5ppm。
②每天测1次水温、盐度、pH值。
6.试验结果与分析
①试验池在浮游阶段的第6天上午就出现了樽形幼体，对照池在下午才出现，时间相差6个多小时。
②保苗阶段结束后，开始剥离。试验池剥离稚参2.45kg，规格为42万头/500g的稚参206万；对照池剥离稚参2.00kg，规格为45万头/500g的稚参170万。试验池出苗率比对照池高21％，规格要大。
③两池的温度和盐度基本一致。试验池的pH值在7.2～7.4，对照池为7.7～8.0。
Claims (4)
1.一种水产品复合微生物添加剂，其特征在于：采用产朊假丝酵母(Candida utilis)ATCCNo.22023，沼泽红假单胞菌(Rhodopseudom onas Palustris)ATCCNo.33872，嗜酸乳杆菌(Leatobacillus acidophilus)ATCC No.11073，乳酸链球菌(Streptococcus lactis)ATCCNo.19435，枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)ATCC No.6633制备菌种；所述菌种的质量百分比如下：产朊假丝酵母10～40％，沼泽红假单胞菌15～50％，嗜酸乳杆菌5～25％，乳酸链球菌5～30％，枯草芽孢杆菌10-35％。
2.根据权利要求1所述的一种水产品复合微生物添加剂的制备方法，其特征在于：所述水产品复合微生物添加剂的制备步骤如下：
1.接种：将所述各菌种接种于斜面培养基上，产朊假丝酵母培养温度25～30℃，培养时间为6～48h；沼泽红假单胞菌培养温度为25～30℃，培养时间为6～48h；嗜酸乳杆菌培养温度为27～35℃，培养时间为6～48h；乳酸链球菌培养温度为27～35℃，培养时间为6～48h；枯草芽孢杆菌培养温度为27～37℃，培养时间为6～48h；
2.一级菌种培养：将步骤1培养的所述菌种分别接种于盛有液体培养基的50mL锥形瓶中，培养基用无菌海水配制，pH为6.0～8.0，锥形瓶放入摇床振荡，温度为30℃，振荡24～48h；采用血球计数板计数，菌液中菌种数量分别达到108个/mL；
3.二级发酵：将步骤2培养的所述菌种分别接种于盛有液体培养基的1000mL锥形瓶中，培养基用无菌海水配制，pH6.0～8.0，放入摇床振荡，温度为30℃，振荡48～72h；使菌种数量分别达到108个/mL以上，将各菌种按所述菌种的质量百分比混合；
4.三级发酵：将混合后的菌液接种于盛有复合菌剂培养基的发酵罐中，复合菌剂培养基pH6.0～8.0，接种量为1～5％，30℃下培养4～7天，使发酵液中菌数达到5～10×108个/mL，即得到所述微生物复合菌剂。
3.根据权利要求2所述的一种水产品复合微生物添加剂的制备方法，其特征在于：所述复合菌剂培养基配方为：蜂蜜1～8g/100mL、蔗糖5～10g/100mL、蛋白胨0.1～0.8g/100mL、KH2PO4 0.2～0.5g/100mL、K2HPO4 0.5～3g/100mL、MgSO4·7H2O 0.5～3g/100mL、Nacl0.5～10g/100mL其余为蒸馏水。
4.根据权利要求1所述的一种水产品复合微生物添加剂的应用，其特征在于：所述水产品复合微生物添加剂在水产品养殖中作为饲料添加剂。
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