CN101941967B - 13a-(S)去氧娃儿藤宁的盐、其制法和药物组合物与用途 - Google Patents

13a-(S)去氧娃儿藤宁的盐、其制法和药物组合物与用途 Download PDF

Info

Publication number
CN101941967B
CN101941967B CN200910089238.5A CN200910089238A CN101941967B CN 101941967 B CN101941967 B CN 101941967B CN 200910089238 A CN200910089238 A CN 200910089238A CN 101941967 B CN101941967 B CN 101941967B
Authority
CN
China
Prior art keywords
tylophorinine
salt
deoxidation
acid
cancer
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Active
Application number
CN200910089238.5A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101941967A (zh
Inventor
庾石山
陈晓光
吕海宁
李燕
徐嵩
马双刚
刘振佳
张翼
扈金萍
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Institute of Materia Medica of CAMS
Original Assignee
Institute of Materia Medica of CAMS
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Institute of Materia Medica of CAMS filed Critical Institute of Materia Medica of CAMS
Priority to CN200910089238.5A priority Critical patent/CN101941967B/zh
Priority to PCT/CN2010/075083 priority patent/WO2011003362A1/zh
Priority to US13/382,701 priority patent/US20120190703A1/en
Priority to EP10796739.0A priority patent/EP2452681B1/en
Priority to JP2012518745A priority patent/JP5698741B2/ja
Publication of CN101941967A publication Critical patent/CN101941967A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101941967B publication Critical patent/CN101941967B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/08—Solutions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)

Abstract

本发明涉及通式(I)所示的(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的盐，这类化合物的制备方法，含有它们的药物组合物以及这类化合物在制备预防和/或治疗癌症和/或炎症疾病的药物中的应用。

Description

13a-(S)去氧娃儿藤宁的盐、其制法和药物组合物与用途
技术领域
本发明涉及一种13a-(S)去氧娃儿藤宁的盐，这类化合物的制备方法，含有它们的药物组合物以及这类化合物在制备预防和/或治疗癌症和/或炎症疾病的药物中的应用。
背景技术
菲并吲哚里西啶生物碱主要分布于萝摩科娃儿藤属植物中，具有多种药理活性，其中的抗肿瘤作用和抗炎作用令人关注。在美国国家癌症研究院(NCI)抗肿瘤筛选中发现，这类生物碱对于60种肿瘤细胞株具有显著的作用，半数生长抑制剂量(GI50)在10-8M水平，并且对于恶性肿瘤，比如黑色素瘤和肺癌细胞有良好的选择性，对于耐药癌细胞系有效，并且与其它抗癌药没有交叉耐药性。
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁(已申请化合物专利，申请号200610076298.X)是分离于萝摩科娃儿藤属植物三分丹中一个菲并吲哚里西啶生物碱，具有很强的抗肿瘤活性，体外实验表明这个化合物对Ketr3、HCT-8、A549、BGC-803、Bel-7402、B16BL6、KB、CaSE-17、HL-60肿瘤细胞株的IC50在0.1～0.3μM之间，说明(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁具有体外抗肿瘤作用。体内试验表明(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁对于小鼠肝癌H22和小鼠Lewis肺癌的生长具有明显的抑制作用，表明其在体内仍然具有较好的抗肿瘤活性。初步的毒性实验表明本化合物毒性较低，未表现出肝、肾毒性。
对这类化合物抗肿瘤活性的作用机理的研究表明，其对于细胞的DNA和RNA以及蛋白质的合成皆有影响(Bioorg Med Chem Lett.2006，16：4300-4304.)，进一步分子药理学的研究表明，其作用机理与临床应用的各种抗肿瘤药的作用机理截然不同，这类化合物对于影响RNA转录过程的NF-κB信号通路具有选择性的强效抑制作用，并且这种作用强度与其细胞毒活性的强度相互对应[MolCancer Ther.2006，5(10)：2484-2493.]，但具体的作用靶点还在研究之中。
这类化合物的抗炎作用也与其抑制NF-κB信号通路有关，而此作用又与其阻断NF-κB信号通路上游的MEKK1的作用密切相关[Mol Pharm.2006，69(3)：749-758.]，但具体的作用靶点还是未知的。
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的脂溶性较高，不溶于水，但将其成盐后发现水溶性大幅提高，通过体外抗肿瘤活性筛选和药效学实验发现其抗肿瘤活性得到保持，通过测定(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的盐的药代动力学性质发现，所测试的四种盐在小鼠体内平均滞留时间(MRT)明显延长，生物利用度(AUC)与(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁相比相当或略高，其中马来酸盐的生物利用度明显高于原型药。
发明内容
本发明的要解决的技术问题在于提供通式(I)化合物、及其药效学上可接受的水合物或前体药物。
本发明要解决的又一技术问题在于提供制备通式(I)化合物、及其药效学上可接受的水合物或前体药物的方法。
本发明要解决的又一技术问题在于提供一种药物组合物，其包括至少一个通式(I)化合物、及其药效学上可接受的水合物或前体药物及其药用载体和/或赋形剂。
本发明要解决的再一技术问题在于提供通式(I)化合物、及其药效学上可接受的水合物或前体药物在制备用于预防和/或治疗癌症和/或炎症药物中的应用。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：
本发明系关于如式(I)之化合物：
其中，HX代表有机酸或者无机酸；
当HX代表无机酸时，其可以包括，但并不限于盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸；
当HX代表有机酸时，其可以包括，但并不限于酒石酸、枸橼酸、马来酸、乳酸、水杨酸、苹果酸、苯甲酸、己二酸、富马酸、琥珀酸。
根据本发明，优选的通式(I)所示的化合物包括，但不限定于通式(IA)所示的化合物：
其中，HX优选自酒石酸、枸橼酸、马来酸、乳酸。
根据本发明，优选的化合物包括，但不仅限于以下化合物：
为了完成本发明之目的，本发明采取如下技术方案：
具体操作包括如下步骤：
将等当量的(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁(CAT-1)和相应的酸HX悬浮于无水乙醇中，在50℃下搅拌反应30分钟，反应液变澄明，将反应液放冷至室温，蒸干后得到相应的盐固体。
得到的固体用乙醇重结晶纯化。
本发明中(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的制备参照专利《右旋去氧娃儿藤宁，其制法和其药物组合物与用途》(申请号200610076298.X)和专利《13a-(S)去氧娃儿藤宁衍生物，其制法和药物组合物与用途》(申请号200910079163.2)。通过与相应的酸成盐，其活性得到保持，药代动力学性质得到优化。
本发明还涉及一种含有药物有效剂量的如通式I所述的化合物和药学上可接受的载体的药物组合物。
本发明还涉及含有作为活性成份的本发明化合物和常规药物赋形剂或辅剂的药物组合物。通常本发明药物组合物含有0.1～95重量％的本发明化合物。在单元剂型中本发明化合物一般含量为0.1～100mg，优选的单元剂型含有4～50mg。
本发明化合物的药物组合物可根据本领域公知的方法制备。用于此目的时，如果需要，可将本发明化合物与一种或多种固体或液体药物赋形剂和/或辅剂结合，制成可作为人药或兽药使用的适当的施用形式或剂量形式。
本发明化合物或含有它的药物组合物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、肌肉、皮下、鼻腔、口腔粘膜、皮肤、腹膜或直肠等。
本发明化合物或含有它的药物组合物的给药途径可为注射给药。注射包括静脉注射、肌肉注射、皮下注射、皮内注射和穴位注射等。
给药剂型可以是液体剂型、固体剂型。如液体剂型可以是真溶液类、胶体类、微粒剂型、乳剂剂型、混悬剂型。其他剂型例如片剂、胶囊、滴丸、气雾剂、丸剂、粉剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、颗粒剂、栓剂、冻干粉针剂等。
本发明化合物可以制成普通制剂、也可以是缓释制剂、控释制剂、靶向制剂及各种微粒给药系统。
例如为了将单位给药剂型制成片剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如淀粉、糊精、硫酸钙、乳糖、甘露醇、蔗糖、氯化钠、葡萄糖、尿素、碳酸钙、白陶土、微晶纤维素、硅酸铝等；湿润剂与粘合剂，如水、甘油、聚乙二醇、乙醇、丙醇、淀粉浆、糊精、糖浆、蜂蜜、葡萄糖溶液、阿拉伯胶浆、明胶浆、羧甲基纤维素钠、紫胶、甲基纤维素、磷酸钾、聚乙烯吡咯烷酮等；崩解剂，例如干燥淀粉、海藻酸盐、琼脂粉、褐藻淀粉、碳酸氢钠与枸橼酸、碳酸钙、聚氧乙烯山梨糖醇脂肪酸酯、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等；崩解抑制剂，例如蔗糖、三硬脂酸甘油酯、可可脂、氢化油等；吸收促进剂，例如季铵盐、十二烷基硫酸钠等；润滑剂，例如滑石粉、二氧化硅、玉米淀粉、硬脂酸盐、硼酸、液体石蜡、聚乙二醇等。还可以将片剂进一步制成包衣片，例如糖包衣片、薄膜包衣片、肠溶包衣片，或双层片和多层片。
例如为了将给药单元制成丸剂，可以广泛使用本领域公知的各种载体。关于载体的例子是，例如稀释剂与吸收剂，如葡萄糖、乳糖、淀粉、可可脂、氢化植物油、聚乙烯吡咯烷酮、单硬脂酸甘油脂、高岭土、滑石粉等；粘合剂，如阿拉伯胶、黄蓍胶、明胶、乙醇、蜂蜜、液糖、米糊或面糊等；崩解剂，如琼脂粉、干燥淀粉、海藻酸盐、十二烷基磺酸钠、甲基纤维素、乙基纤维素等。
例如为了将给药单元制成胶囊，将有效成分本发明化合物与上述的各种载体混合，并将由此得到的混合物置于硬的明胶胶囊或软胶囊中。也可将有效成分本发明化合物制成微囊剂，混悬于水性介质中形成混悬剂，亦可装入硬胶囊中或制成注射剂应用。
例如，将本发明化合物制成注射用制剂，如溶液剂、混悬剂溶液剂、乳剂、冻干粉针剂，这种制剂可以是含水或非水的，可含一种和/或多种药效学上可接受的载体、稀释剂、粘合剂、润滑剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂。如稀释剂可选自水、乙醇、聚乙二醇、1，3-丙二醇、乙氧基化的异硬脂醇、多氧化的异硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇脂、肪酸酯等。另外，为了制备等渗注射液，可以向注射用制剂中添加适量的氯化钠、葡萄糖或甘油，此外，还可以添加常规的助溶剂、缓冲剂、pH调节剂等。这些辅料是本领域常用的。
此外，如需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、防腐剂、香料、矫味剂、甜味剂或其它材料。
为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给药方法给药。
本发明化合物药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾病的性质和严重程度，患者或动物的性别、年龄、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分的使用剂量是本领域技术人员公知的。可以根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治疗目的。本发明化合物的每天的合适剂量范围：本发明的化合物的用量为0.001～100mg/Kg体重，优选为0.1～60mg/Kg体重，更优选为1～30mg/Kg体重，最优选为2～15mg/Kg体重。成人患者服用的本发明化合物每日为10～500mg，优选为20～100mg，可一次服用或分2～3次服用；儿童服用的剂量按照每kg体重5～30mg，优选为10～20mg/kg体重。上述剂量可以单一剂量形式或分成几个，例如二、三或四个剂量形式给药，这受限于给药医生的临床经验以及治疗手段的给药方案。本发明的化合物或组合物可单独服用，或与其他治疗药物或对症药物合并使用。
本发明还涉及本发明的化合物在制备治疗癌症和/或炎症疾病的药物中的应用，特别是在人结肠癌、人胃癌、人卵巢癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、淋巴癌和神经交质瘤等癌症中的应用。
本发明的有益技术效果：
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的脂溶性较高，不溶于水，在光照或者空气下容易发生芳构化产生杂质，通过将其成盐以后发现，水溶性大幅度提高，并且稳定性增加。
通过对(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的盐进行体外活性筛选和药效学实验，发现其抗肿瘤活性与原型化合物(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的活性相当，说明(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁成盐后期抗肿瘤活性得到保持。
通过对(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的酒石酸盐、马来酸盐及枸橼酸盐进行后血浆药代动力学研究，发现实验小鼠对这些盐的吸收较快，达峰时间短，并且这些盐在小鼠体内平均滞留时间(MRT)与(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁相比明显延长；并且这些盐的生物利用度(AUC)与(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁相当或者提高，比如马来酸盐的生物利用度要明显高于原型药；小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁酒石酸盐、马来酸盐及枸橼酸盐后，通过测定原型药在动物脑组织中的含量发现酒石酸盐、马来酸盐3个时间点的药物含量均高于原型药。这说明(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁成盐之后，其药代动力学性质得到了优化。
附图说明
图1(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁及其盐对H22移植瘤生长的影响
图2(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁及其盐对荷瘤KM小鼠体重的影响
图3(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁及其盐对H22移植瘤生长的影响
图4(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁小鼠血浆标准曲线
图5小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁三种盐及原型药(6mg/kg)血浆药时曲线
图6小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁酒石酸盐(6mg/kg)后脑组织药物含量
图7小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁马来酸盐(6mg/kg)后脑组织药物含量
图8小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁枸橼酸盐(6mg/kg)后脑组织药物含量
具体实施方式
本发明实施例中所用的起始化合物，可根据本领域的常规方法和/或本领域技术人员熟知的方法制备的，并可按如下举例制备例制备。
下面的实施例用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。
英文缩写说明：
CTX：环磷酰胺
LC/MS/MS：液相质谱联用
DMSO：二甲基亚砜
MRT(0-∞)：平均滞留时间
AUC(0-∞)：生物利用度
t1/2z：半衰期
Tmax：达峰时间
Cmax：峰浓度
制备例：(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的制备
参照专利《右旋去氧娃儿藤宁，其制法和其药物组合物与用途》(申请号200610076298.X)和专利《13a-(S)去氧娃儿藤宁衍生物、其制法和药物组合物与用途》(申请号200910079163.2)，产物比旋光为ee＝99.1％[手性AD-H柱；流动相：异丙醇∶正己烷(15∶85)，0.1％三乙胺；λ＝254nm；t(major)＝18.79min，t(minor)＝26.09min]，ESI-MS：364.2[M+H]+，1H-NMR(400MHz，CDCl3)：7.92(1H，d，J＝9.2Hz，H-1)，7.21(1H，dd，J＝9.2Hz，2Hz，H-2)，7.88(1H，d，J＝2Hz，H-4)，7.90(1H，s，H-5)，7.12(1H，s，H-8)，4.00(3H，s，MeO)，4.04(3H，s，MeO)，4.09(3H，s，MeO)，4.62(1H，d，J＝14.8Hz，H-9)，3.71(1H，d，J＝14.8Hz，H-9)，3.45(1H，m，H-10)，3.39(1H，m，H-10)，2.98(1H，m，H-14)，2.57(1H，m，H-13a)，2.53(1H，m，H-10)，2.24(1H，m，H-12)，2.04(1H，m，H-11)，1.93(1H，m，H-11)，1.78(1H，m，H-12)。13C-NMR(100MHz，CDCl3)：125.11(C-1)，114.83(C-2)，157.61(C-3)，104.55(C-4)，103.92(C-5)，149.42(C-6)，148.30(C-7)，103.02(C-8)，53.46(C-9)，54.91(C-10)，21.53(C-11)，31.03(C-12)，60.15(C13a)，33.03(C-14)，55.48(C3-OMe)，55.96(C6-OMe)，55.90(C7-OMe)以及环B碳：123.34，125.41，125.42，126.78，130.39(重叠一个碳信号)。HRMS(ESI)calcd for[M]+ C23H26NO3363.1834，found 363.1852。
实施例1：(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁L-酒石酸盐(CAT-1 Tartrate)的合成
将反应物(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁20mg和L-酒石酸8.26mg加至5mL乙醇中，将反应液加热至回流，搅拌10分钟，放冷至室温，将反应液浓缩至2mL，放置，可见有类白色的沉淀析出，滤出得到固体22mg，mp：216～218℃，产物溶于水。
实施例2：(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁马来酸盐(CAT-1 Maleate)的合成
将反应物(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁50mg和马来酸16mg加至10mL乙醇中，将反应液加热至回流，搅拌10分钟，可见溶液变澄明，放冷至室温，将反应液浓缩至5mL，放置，可见有浅黄色的沉淀析出，滤出得到固体45mg，mp：126～128℃，产物溶于水。
实施例3：(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁枸橼酸盐(CAT-1 citrate)的合成
将反应物(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁50mg和枸橼酸29mg加至10mL乙醇中，将反应液加热至回流，搅拌10分钟，可见溶液变澄明，放冷至室温，将反应液浓缩至5mL，放置，可见有浅黄色的沉淀析出，滤出得到固体60mg，mp：142～144℃，产物溶于水。
实施例4：(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁乳酸盐(CAT-1 lactate)的合成
将反应物(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁50mg和乳酸14mg加至10mL乙醇中，将反应液加热至回流，搅拌10分钟，可见溶液变澄明，放冷至室温，将反应液浓缩至5mL，放置，可见有浅黄色的沉淀析出，滤出得到固体45mg，mp：115～117℃，产物溶于水。
实施例5：(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁盐酸盐(CAT-1 hydrochloride)的合成
将(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁20mg溶于二氯甲烷5mL中，在搅拌下向溶液中通入干燥的HCl气体，可见溶液变成淡黄色，继续通HCl气体，反应30分钟后，反应液蒸干，得到白色固体20mg，mp：225～227℃。
药理试验
实验例1：体外抗肿瘤活性的测定(MTT法)
为了测定本发明化合物的体外抗肿瘤活性，对本发明实施例中制备的化合物进行了测定，其实验步骤为：
1.培养正常生长的肿瘤细胞，以1×104cell/mL接种到96孔板中(每孔100μL)，在37℃，5％CO2培养箱中培养24小时。
2.分别添加被试化合物，在5％CO2、完全湿度培养箱中培养5天。
3.弃除培养液，每孔加入0.04％MTT 100μL，同样条件下培养4个小时。
4.弃除培养液，加入DMSO(每孔150μL)，混合后于测定波长570nm，参比波长450nm，比色记录光吸收度，计算化合物对肿瘤细胞生长的抑制率。
实验的结果如表1所示：
表1(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁有机酸盐的MTT筛选结果：
注：A549：人肺腺癌细胞；Bel-7402：人肝癌细胞；U251：人脑胶质母细胞瘤细胞；BT325：人脑胶质母细胞瘤细胞；A2780：人卵巢癌细胞；BGC-823：人胃癌细胞；HCT-8：人结肠癌细胞。
从以上结果可以看出：
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的有机酸盐与(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁一样具有显著的体外抗肿瘤活性。
实验例2：(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁及其有机酸盐的体内药效学实验
为了测定(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁及其有机酸盐的药效学特征，观察了(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁及其3种有机酸盐对H22荷瘤小鼠肿瘤生长的影响。
1、实验动物
KM种清洁级小鼠，雄性，体重18～22g，购自中国人民解放军军事医学科学院实验动物中心，动物合格证号：SCXK-(军)2007-004。每实验组设动物6只，共计10组，60只动物。
2、药物及剂量
(1)，受试样品
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁(+CAT)、(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的酒石酸盐(Tartrate)、(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的马来酸盐(Malate)和(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的枸橼酸盐(Citrate)，均由中国医学科学院药物研究所植化室庾石山研究员课题组提供；阳性对照药环磷酰胺(CTX)购自北京友谊医院。
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁(+CAT)MW：363.45
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的酒石酸盐(Tartrate)MW：513.54
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的马来酸盐(Malate)MW：479.52
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的枸橼酸盐(Citrate)MW：573.59
(2)，给药剂量
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁按高剂量5mg/kg和低剂量2.5mg/kg给予，3种(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的盐按与5mg/kg和2.5mg/kg的(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁同摩尔数折算后的量给予(酒石酸盐Tartrate为：7.05mg/kg和3.53mg/kg；马来酸盐Malate为6.60mg/kg和3.30mg/kg；枸橼酸盐Citrate为7.90mg/kg和3.95mg/kg)，于H22接种24小时候口服给药，每日一次，共7次。CTX腹腔注射100mg/kg，于H22接种24小时给予一次。
3、方法
实验动物进入SPF级环境中饲养观察24小时后，无异常方可进入实验。将预先在KM种小鼠腹腔复苏的H22瘤液，以无菌的生理盐水按1∶3比例稀释。将稀释液接种于实验小鼠左前肢皮下，每只注射稀释后瘤液0.2mL。所有动物注射完毕后，按实验要求随机分为12组，每组6只。
于接种24小时后开始给药，4种受试药每日一次，灌胃。阳性对照药CTX腹腔注射，一次。每日记录动物体重。
4、结果
表2(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁及其盐对H22移植瘤生长的影响
*p＜0.05，**p＜0.01与对照组比较
5、结论
从以上结果可以看出：
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁的有机酸盐在高剂量用药时对实验动物肿瘤生长的抑制率与原型药相比相当或者略高，在低剂量用药时对实验动物肿瘤生长的抑制率与原型药相比略低，但均大于对照药环磷酰胺(CTX)，这说明(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁与相应的有机酸成盐后，其抗肿瘤活性得到保持。
实验例3：(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁及其有机酸盐的后血浆药代动力学及脑组织药物分布研究实验
为了观察(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁及其有机酸盐的药代动力学学特征，研究了(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁及其3种有机酸盐后血浆药代动力学及脑组织药物分布特性。
1、试验动物
雄性ICR小鼠，体重为20～22g，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供。动物许可证编号：SCXK(京)2007-0001。
2、试验药品
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁酒石酸盐，(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁马来酸盐，(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁枸橼酸盐由中国医学科学院药物研究所庾石山课题组提供，实验时用双蒸水配制成浓度0.6mg/ml溶液。
3、试验方法
小鼠72只，分3组，每组24只。实验前禁食16h，自由饮水。小鼠口服不同娃儿藤宁盐(6mg/kg)后分别于5、15、30min、1、2、3、4、6h取血，离心分离血浆。另于小鼠口服娃儿藤宁盐后5、15min、2h取脑组织，加入生理盐水制成25％组织匀浆。组织匀浆液和血浆样品200μ1以等体积乙腈沉淀蛋白，取上清液5μl进行LC/MS/MS分析。
4、试验结果
(1).血浆标准曲线
(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁以DMSO溶解后再用甲醇稀释，浓度分别为10、50、100、500、1000、2500ng/ml。在空白血浆200μl中依次加入不同浓度(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁标准溶液10μl，使(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁终浓度分别为0.5、2.5、5、25、50、125ng/ml，加入190μl乙腈沉淀蛋白，取上清液5μl进行LC/MS/MS分析。根据各样品图谱，以(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁峰面积为纵坐标，其浓度(ng/ml)为横坐标，进行线性回归，结果见表3，图4。在0.5-125ng/ml浓度范围内，血浆样品中娃儿藤宁浓度与谱图峰面积线性关系良好，相关系数为0.999。
表3(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁小鼠血浆标准曲线
(2).小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁三种盐(6mg/kg)后血浆药代动力学研究
小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁酒石酸盐、马来酸盐及枸橼酸盐(6mg/kg)后血浆药物浓度-时间数据见表4～6，图5。小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁三种盐后，吸收较快，给药后5min血中即可测到原形药，酒石酸盐15min达峰，达峰浓度为34.2±3.1ng/ml，马来酸盐为5min达峰，达峰浓度为35.4±3.5ng/ml，枸橼酸盐15min达峰，达峰浓度为20.1±12.2ng/ml。药物在小鼠体内消除较快，给药后6h血药浓度均接近最低检测限。根据小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁盐的药时曲线，应用DAS程序采用非房室模型进行拟合，药代动力学参数见表7，(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁三种盐在小鼠体内MRT(0-∞)为1.63～2.29h，明显长于原型药(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁(0.8h)。酒石酸盐、马来酸盐、枸橼酸盐的AUC(0-∞)分别为37.85，49.91，24.56和33.08ug/L*h，而原型药(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁AUC(0-∞)为33.67ug/L*h。马来酸盐的AUC(0-∞)明显高于其它三种盐及原型药(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁，酒石酸盐和枸橼酸盐的AUC(0-∞)和原型药接近。
表4小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁酒石酸盐(6mg/kg，11.7uM)血浆药物浓度
表5小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁马来酸盐(6mg/kg，12.5uM)血浆药物浓度
表6小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁枸橼酸盐(6mg/kg，10.5uM)血浆药物浓度
表7小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁盐(6mg/kg)血浆药动学参数
(3).小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁三种盐(6mg/kg)后药物的脑组织分布研究
小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁酒石酸盐、马来酸盐及枸橼酸盐(6mg/kg)后脑组织药物浓度-时间数据见表8～10，图6～8。结果表明，小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁盐后，药物较易进入脑组织。给药后5min，脑组织中即可测到原形药。给药后15min，脑组织出现分布高峰。给药2h后，脑组织中仍能维持一定药物水平。娃儿藤宁酒石酸盐、马来酸盐3个时间点的药物含量均高于原型药，枸橼酸盐的含量则低于原型药。
表8小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁酒石酸盐(6mg/kg)脑组织药物含量
表9小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁马来酸盐(6mg/kg)脑组织药物含量
表10小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁枸橼酸盐(6mg/kg)脑组织药物含量
5、结论
小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁酒石酸盐、马来酸盐及枸橼酸盐(6mg/kg)后，吸收较快，达峰时间为5～30min，达峰浓度为18.0～35.4ng/ml，(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁三种盐在小鼠体内MRT(0-∞)为1.63～2.29h，明显长于原型药(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁(0.8h)。酒石酸盐、马来酸盐、枸橼酸盐的AUC(0-∞)分别为37.85，49.91和33.08ug/L*h，而原型药(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁AUC(0-∞)为33.67ug/L*h，其中马来酸盐的AUC(0-∞)明显高于其它两种盐及原型(+)-13a-(S)-去氧药娃儿藤宁，酒石酸盐和枸橼酸盐的AUC(0-∞)和原型药接近。
小鼠口服(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁酒石酸盐、马来酸盐及枸橼酸盐(6mg/kg)后5min，脑组织中即可测到原形药。给药后15min，脑组织出现分布高峰。给药2h后，脑组织中仍能维持一定药物水平。(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁酒石酸盐、马来酸盐3个时间点的药物含量均高于原型药，枸橼酸盐的含量低于原型药。

Claims (5)

1.由通式（I）所示的(+)-13a-(S)-去氧娃儿藤宁与不同的酸所形成的盐：
其中，HX选自酒石酸、枸橼酸、马来酸、苹果酸、己二酸、富马酸或琥珀酸。
2.一种药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的如权利要求1中所述的盐和药学上可接受的载体。
3.根据权利要求2的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物选自片剂、胶囊、丸剂、注射剂、缓释制剂、控释制剂或各种微粒给药系统。
4.权利要求1所述的盐在制备预防和/或治疗癌症的药物中的应用。
5.根据权利要求4的应用，其特征在于，所述的癌症选自人结肠癌、人胃癌、人卵巢癌、宫颈癌、肝癌、肺癌、胰腺癌、淋巴癌和神经胶质瘤。
CN200910089238.5A 2009-07-09 2009-07-09 13a-(S)去氧娃儿藤宁的盐、其制法和药物组合物与用途 Active CN101941967B (zh)

Priority Applications (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910089238.5A CN101941967B (zh) 2009-07-09 2009-07-09 13a-(S)去氧娃儿藤宁的盐、其制法和药物组合物与用途
PCT/CN2010/075083 WO2011003362A1 (zh) 2009-07-09 2010-07-09 13a-(S)去氧娃儿藤宁的盐、其制法和药物组合物与用途
US13/382,701 US20120190703A1 (en) 2009-07-09 2010-07-09 Salts of 13a-(s)desoxytylophorinine, preparation methods and pharmaceutical compositions and uses thereof
EP10796739.0A EP2452681B1 (en) 2009-07-09 2010-07-09 SALTS OF 13a-(S)-DEOXYTYLOPHORININE, PREPARATION METHODS AND PHARMACEUTICAL COMPOSITIONS AND USES THEREOF
JP2012518745A JP5698741B2 (ja) 2009-07-09 2010-07-09 １３ａ−（Ｓ）脱酸チロホリニンの塩、医薬組成物と用途

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN200910089238.5A CN101941967B (zh) 2009-07-09 2009-07-09 13a-(S)去氧娃儿藤宁的盐、其制法和药物组合物与用途

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101941967A CN101941967A (zh) 2011-01-12
CN101941967B true CN101941967B (zh) 2014-08-20

Family

ID=43428796

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN200910089238.5A Active CN101941967B (zh) 2009-07-09 2009-07-09 13a-(S)去氧娃儿藤宁的盐、其制法和药物组合物与用途

Country Status (5)

Country Link
US (1) US20120190703A1 (zh)
EP (1) EP2452681B1 (zh)
JP (1) JP5698741B2 (zh)
CN (1) CN101941967B (zh)
WO (1) WO2011003362A1 (zh)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101493461B1 (ko) 2014-05-15 2015-02-16 순천향대학교 산학협력단 백미 추출물의 디옥시퍼굴라리닌을 유효성분으로 하는 결핵치료용 약학조성물
WO2016161538A1 (zh) * 2015-04-09 2016-10-13 中国医学科学院药物研究所 3-酰氧基取代右旋去氧娃儿藤宁衍生物、其制法和药物组合物与用途
CN113292574B (zh) * 2020-02-21 2022-05-03 四川大学 一类手性多环的托品烷化合物及其制备方法和用途

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101189968A (zh) * 2006-11-23 2008-06-04 南开大学 菲并吲哚里西啶和菲并喹喏里西啶衍生物及其盐在农药上的应用

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101058578A (zh) * 2006-04-21 2007-10-24 中国医学科学院药物研究所 右旋去氧娃儿藤宁、其制法和其药物组合物与用途

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101189968A (zh) * 2006-11-23 2008-06-04 南开大学 菲并吲哚里西啶和菲并喹喏里西啶衍生物及其盐在农药上的应用

Also Published As

Publication number Publication date
US20120190703A1 (en) 2012-07-26
JP5698741B2 (ja) 2015-04-08
EP2452681A4 (en) 2012-12-19
CN101941967A (zh) 2011-01-12
EP2452681B1 (en) 2017-03-15
WO2011003362A1 (zh) 2011-01-13
JP2012532150A (ja) 2012-12-13
EP2452681A1 (en) 2012-05-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106580987B (zh) 二氢巴马汀抗溃疡性结肠炎的用途
CN109575025A (zh) 取代的吡唑并[1,5-a]嘧啶类的大环化合物
WO2019196957A1 (zh) 亲水性小檗碱型衍生物及其制备药物的应用
CN101918405B (zh) 13a-(S)去氧娃儿藤宁衍生物、其制法和药物组合物与用途
CN101941967B (zh) 13a-(S)去氧娃儿藤宁的盐、其制法和药物组合物与用途
CN104557909A (zh) 3-酰氧基取代右旋去氧娃儿藤宁衍生物、其制法和药物组合物与用途
CN107141284B (zh) 黄连碱类衍生物、其制备方法、药物组合物及抗肿瘤用途
CN107216283A (zh) 一种含有二氢吡啶结构的β－榄香烯衍生物及其制备方法和用途
CN101265275A (zh) 4-{6-[5-(2-氯-6-甲基苯胺甲酰基)-噻唑-2-氨基]-2-甲基嘧啶-4}-哌嗪-1-磷酸二乙酯
CN104530081B (zh) 雷帕霉素的氮杂环衍生物和用途
CN102731516B (zh) 一类具有抗肿瘤活性的喜树碱衍生物
CN114929682B (zh) 苯并硫代吡喃酮类化合物的盐及其制备方法和用途
CN101463029B (zh) 紫杉烷衍生物及其制法和用途
CN1329376C (zh) 一种n（1）－烃基－3′－肟基靛玉红衍生物（i）的制备方法及其医学应用
CN103058976B (zh) 槲皮素α晶型物质、其制法和其药物组合物与用途
CN113214208A (zh) 橙皮素与异烟酰胺共晶物及制备方法和其组合物与用途
CN106146557A (zh) 一种具有抗肿瘤活性的磷酸酯衍生物的合成及应用
CN105646461B (zh) S构型4-(取代苯胺基)喹唑啉衍生物及其制备方法和用途
CN100443486C (zh) 7-酯化和7,20-双酯化的喜树碱衍生物及其制法和其药物组合物与用途
CN114031561B (zh) 含4-苯氧基喹唑啉类化合物及其应用
CN1676521B (zh) 苦参酮及其衍生物、类似物在制备抗肿瘤药物中的用途
CN111995629B (zh) 大根香叶衍生物及其药物组合物和其在医药中的用途
CN111247148B (zh) Wnt通路调节剂
CN101993388B (zh) 二聚咖萨因生物碱、其制法和其药物组合物与用途
CN100393724C (zh) 20-位酯化的喜树碱衍生物及其制法和其药物组合物与用途

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant