CN101921238A - 取代苯并氮杂环类衍生物的制备及其药理用途 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种化合物或其药学上可接受的盐，其结构通式如式(I)所示：；其中，R₁选自以下基团的任意一种：含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；R₂选自H或-ZR₁取代基；R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；X和Y各自独立的选自N或CH；Z选自N或O；n＝0或1。

Description

取代苯并氮杂环类衍生物的制备及其药理用途

技术领域

本发明药物化学和药物治疗学领域，具体涉及一类作为RhoA的抑制剂的取代苯并氮杂环类化合物及其制备方法和药理用途，该类化合物可作为心血管疾病治疗药物。

背景技术

心脑血管疾病是一种严重威胁人类，特别是50岁以上中老年人健康的常见病，在我国尤为突出。我国心脑血管疾病的总发病率和死亡率已经接近或超过许多发达国家，而且仍呈上升趋势。统计资料表明，我国城市人口心脑血管疾病病死率为200/10万，农村为142/10万，分别占死亡构成的37％和28％，居死亡原因的首位。因此，心脑血管疾病已经是危害人类特别是老年人生命的第一大杀手。

据目前研究，血管痉挛是心脑血管疾病重要的病理生理机制之一。开发针对新靶标和具有新作用机制的解除血管痉挛的治疗药物具有重要的市场前景和科学意义。血管痉挛的主要途径是通过细胞内钙浓度升高导致细胞收缩，临床上通过抑制该途径可达到降血压、抑制血管痉挛等作用，该类药物即为被广泛应用的钙通道阻滞剂。上世纪九十年代初研究发现细胞内尚存在不依赖于细胞内钙浓度变化的Rho(主要是RhoA)/ROCK介导途径，在细胞收缩中也起着重要作用。钙依赖的细胞收缩是通过钙离子内流后，促使钙调素(CaM)途径激活肌球蛋白轻链激酶(MLCK)，导致MLC磷酸化，继而肌球蛋白与肌动蛋白结合，从而调节细胞骨架，引起血管平滑肌细胞收缩。而RhoA/ROCK则一方面通过抑制肌球蛋白轻链磷酸酶(MLCP)活性，降低了对磷酸化的MLC的去磷酸化作用，间接增加磷酸化MLC(MLC-P)的浓度，另一方面利用其自身磷酸激酶活性直接磷酸化MLC，双重上调磷酸化MLC(MLC-P)水平，从而达到调节细胞骨架，引起血管平滑肌细胞收缩的作用。

Rho家族蛋白质是小G蛋白的Ras超家族成员，是一组具有GTP酶活性的鸟苷酸结合蛋白，于1985年作为Ras同源物被首次克隆出来，包含RhoA、RhoB和RhoC三种异构体，其中RhoA被研究的最广泛。RhoA含有所有小GTP结合蛋白中高度保守的GDP/GTP结合区和GTP酶活性区，有两种可相互转换的构像，即与GDP结合的非活化态和与GTP结合的活化态，两种状态之间的转换使其能够发挥一种类似“分子开关”的作用。这种转换主要受到三类细胞内蛋白的调节：(1)鸟核苷酸交换因子(guanosine nucleotide exchange factors，GEFs)，它能促进GDP/GTP交换反应，激活RhoA蛋白，是RhoA蛋白的正调控因子；(2)GTP酶活化蛋白(GTPase-activating proteins，GAPs)，它能通过增加RhoA内在的GTP酶活性而使其失活转为无活性的GDP结合形式，是负调控因子；(3)GDP解离抑制因子(GDP dissociation inhibitors，GDIs)，它能阻抑GDP从GTP酶上分离，则可稳定RhoA与GDP的结合，从而使其保持非活性状态，也是负调控因子。在上述三类蛋白的整体作用下，通过调节RhoA与GTP/GDP结合的比率，共同调节RhoA的功能。

RhoA的主要功能是调节肌动蛋白细胞骨架，肌动蛋白细胞骨架在细胞形状改变、迁移、黏附以及胞质分裂中起重要作用。RhoA分子功能的多样性与其下游效应分子的多样性有关，已经发现的RhoA的下游效应分子包括Rho激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein serine/threonine kinase，ROCK)、p21活化激酶(p21-activated kinase，PAK)、PKN、Citron、PI3K等，这些分子介导了RhoA的作用。其中ROCK是目前功能研究最为清楚的RhoA下游靶效应分子，属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族成员，它以两种同源性极高的异构体形式存在(Rokα/ROCK II和Rokβ/ROCK I)。近年来研究表明RhoA/ROCK通路在心脑血管疾病中起重要作用，特别是参与了高血压的发生与发展过程。

进一步的研究表明，钙依赖收缩是血管平滑肌细胞收缩的主要触发因素，而非钙依赖RhoA/ROCK收缩在血管平滑肌细胞收缩的持久阶段更为重要，这直接导致RhoA/ROCK途径在血管舒缩以及调节血压的过程中起着重要的作用。通过调控RhoA/ROCK途径，可改善许多血管疾病的发生及病程，诸如高血压、肺动脉高压、动脉粥样硬化、脑缺血等。

目前有关RhoA/ROCK调控途径的药物开发主要针对的是RhoA下游信号蛋白ROCK(包括ROCK I和ROCK II)，相关抑制剂已有许多文献报道，当前已有一个此类抑制剂fasudil在包括中国在内的多个国家批准上市，同时还有5个此类抑制剂(INS-117548、K-1152、SNJ-1656、SAR407899和DE-104)正在进行临床I/II研究，这些临床候选药物的适应症集中在心血管疾病治疗、青光眼治疗和神经保护等。最初在日本上市的fasudil被用于治疗脑血管痉挛，其后的研究表明fasudil对包括心绞痛、高血压、冠状动脉痉挛、冠脉再通手术后再狭窄和动脉粥样硬化在内的心血管疾病均有良好的治疗作用。但由于其脑穿透能力较低，因此最近科学家正在研究将其制成脂质体治疗蛛网膜下腔出血引发的脑血管痉挛，希望通过定向给药增加局部药物浓度，减少不良反应，提高治疗效果。

由于已有的RhoA激酶(ROCK)抑制剂有种种不理想之处，寻找其上游蛋白RhoA抑制剂成为另一种方向，目前仅有的RhoA抑制剂是一类叫做外酶C3转移酶(exoenzyme C3 transferase，C3)的大分子或其衍生物，由于它极差的膜通透性和易于体内降解的缺陷，限制了它的治疗用途，Tremblay等人发展的透膜性好的C3融合蛋白BA-210作为神经保护药正在进行II期临床研究，Lee等人发展了透膜性好的重组蛋白TAT-C3，用于神经再生治疗。这些研究从实验上支持了RhoA抑制剂发展成治疗药物的可能。如果我们针对RhoA蛋白的GTP结合域设计一些小分子竞争性抑制剂，可以阻止RhoA活化成RhoA-GTP形式，而只有后者才能与ROCK的RhoA蛋白结合域结合，暴露ROCK的催化活性中心，将ROCK激活，同时发生定向转位与MLC靠近。因此小分子抑制剂可以起到类似于大分子C3相同的RhoA抑制效果，同时小分子抑制剂可以克服大分子成药性差的缺陷。综上所述，针对RhoA/ROCK通路设计治疗心血管疾病药物是可行的，考虑到目前国际国内有关直接针对RhoA蛋白GTP结合域的抑制剂研究报道很少的状况。基于RhoA-GTP结合域设计心血管疾病治疗药物具有重要的现实意义。

发明内容

本发明目的在于提供一种取代苯并氮杂环类化合物，作为基于RhoA-GTP结合域设计的RhoA抑制剂，为现阶段心血管疾病提供新的选择。

为了解决现有技术中的这些问题，本发明提供的技术方案是：

一种化合物或其药学上可接受的盐，其结构通式如式(I)所示：

其中，R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₂选自H或-ZR₁取代基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；

X和Y各自独立的选自N或CH；Z选自N或O；n＝0或1。

优选的，所述化合物的结构通式如式(I_A)所示：

其中，R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基。

优选的，所述化合物的结构通式如式(I_B)所示：

其中，R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；

Z选自N或O；n＝0或1。

优选的，所述化合物的结构通式如式(I_C)所示：

其中，R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基。

优选的，所述化合物的结构通式如式(I_D)所示：

其中，R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基。

优选的，所述化合物的结构通式如式(I_E)所示：

其中，R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基。

优选的，所述化合物选自2，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(乙氧羰基)乙烯基)苯基氨基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(乙氧羰基)乙烯基)苯基氨基)-6-甲氧基喹喔啉、2，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(乙氧羰基)乙烯基)苯基氨基)-6-三氟甲基喹喔啉、2，3-双(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-乙撑二氧基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-甲氧羰基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(3，3’-乙氧羰基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(羧基)乙烯基)苯基氨基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(3，3’-((E)-2，2’-(羧基)乙烯基)苯基氨基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(吗啉-4-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-甲基苄氨基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-甲氧基苄氨基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双((3，4-二甲氧基)苯乙基氨基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(吡啶-4-甲基氨基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双((2，2’-二乙氨基)乙基氨基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-(2-氟苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-(4-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4-甲基哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-(2，4-二氟苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-乙氧羰基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉、2，3-双(4，4’-乙氧羰基哌啶-1-基)-6-氨基喹喔啉、(E)-3-(3-(喹喔啉-3-氧基)苯基)丙烯酸、(E)-3-(3-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸乙酯、(E)-3-(3-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸、(E)-3-(3-(6-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸、7-硝基-2-(3，4-乙撑二氧基苯氨基)喹喔啉、6-硝基-2-(3，4-乙撑二氧基苯氨基)喹喔啉、(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸、2-氯-5-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯甲酸、7-硝基-2-(3-乙氧基苯胺)喹喔啉、7-硝基-2-苯胺基喹喔啉、3-(3-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙酸、(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸乙酯、2-(3，4-乙撑二氧基苯氨基)喹喔啉、3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙酸、(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)-2-甲基-丙烯酸、(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙-2-烯-1-醇、(E)-3-(3-(喹唑啉-2-氨基)苯基)丙烯酸、(E)-3-(3-(喹啉-2-氨基)苯基)丙烯酸、(E)-3-(3-(苯并咪唑-2-氨基)苯基)丙烯酸。

本发明的另一目的在于提供了一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含治疗有效量的一种或多种权利要求1～7中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

优选的，所述的化合物或其药学上可接受的盐占该药物组合物总重量的0.001％～99.9％。

本发明的又一目的在于提供了一种制备所述的化合物的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)使式(II)的化合物

或式(II’)的化合物

在催化剂存在的条件下发生卤代反应，生成式(III)的化合物

(2)使式(III)的化合物发生N-烷基化反应生成式(I)的化合物；

上述各式中R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₂选自H或-ZR₁取代基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；

X和Y各自独立的选自N或CH；Z选自N或O；n＝0或1；W选自F、Cl、Br。

优选的，所述方法中所述方法中通过使式(V)的化合物

与氰乙酸发生环化反应获得式(II’)的化合物；

式中R₂选自H或-ZR₁取代基；

R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；X和Y各自独立的选自N或CH；n＝0或1。

本发明的又一目的在于提供了一种制备所述的化合物的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)使式(II”)的化合物

在催化剂存在的条件下发生卤代反应，生成式(III’)的化合物

(2)使式(III’)的化合物发生N-烷基化反应生成式(I)的化合物；

上述各式中R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₂选自H或-ZR₁取代基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；

X和Y各自独立的选自N或CH；Z选自N或O；n＝0或1；W选自F、Cl、Br。

优选的，所述方法中通过使式(IV)的化合物

与草酸二乙酯在酸性条件下发生环化反应获得式(II”)的化合物；

式中R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；X和Y各自独立的选自N或CH；n＝0或1。

本发明的又一目的在于提供了任意一种所述的化合物或其药学上可接受的盐作为RhoA抑制剂的应用。

本发明的又一目的在于提供了一种制备所述的化合物的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)使式(VI)的化合物

在催化剂存在的条件下发生卤代反应，生成式(III_A)的化合物

(2)将式(III_A)的化合物还原成式(III_B)的化合物

(3)使式(III_B)的化合物进行N-烷基化反应生成式(I)的化合物；

上述各式中R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₂选自H或-ZR₁取代基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；

X和Y各自独立的选自N或CH；Z选自N或O；n＝0或1；W选自F、Cl、Br。

本发明的又一目的在于提供了任意一种所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗RhoA介导的疾病的药物中的应用。

优选的，所述RhoA介导的疾病包括心血管疾病和肿瘤疾病。

术语的说明

本发明中的各基团一般具有如下意义：

术语“烷基”指直链或支链饱和的、含有1-8个碳原子(较佳地1-6个碳原子)的脂族烃类基团；C1-Cn烷基则表示1-n个碳原子的饱和的脂烃基，包括直链和支链基团(例如“C1-C20烷基”，是指该基团为烷基，且烷基的碳链碳原子数量在1～20之间，即含1个碳原子、2个碳原子、3个碳原子等，直至包括20个碳原子的烷基。而该1-20的限制并不包括烷基上的取代的碳原子数，如取代烷氨基中的“烷基”，当没有特别限制其碳原子数时，仅指其中指明的烷基部分的碳原子数为1-20，而并不包括烷基上的取代基的碳原子数以及氨基上的其他取代基的碳原子数。而采用“C1-C8的烷基”的表述则表示该烷基中含有1～8个碳原子的烷基。)取代烷基，表示烷基上氢原子被取代基团取代后的烷基，该取代包括单取代和多取代。如卤代烷基指烷基上H原子被卤素原子取代的基团；如全氟烷基是指烷基上的H全部被F取代的基团。烃基为烃(碳氢化合物)分子中少掉一个或几个氢原子而成的基团。从脂肪烃分子中少一个或几个氢原子而成的烃基称为脂烃基(aliphatic group；aliphatic radical)。脂烃基还可以再分成烷基(alkyl)、烯基(alkenyl)、炔基(alkynyl)。例如：甲基(烷基)、乙烯基(烯基)、乙炔基(炔基)。卤素指F、Cl、Br、或I。

酰基为无机或有机含氧酸除去羟基后所余下的原子团。例如：乙酰基、苯磺酰胺，酰基可与卤素、醚、氨基、亚氨基等结合生成羧酸衍生物：酰卤，酸酐，酯，酰胺，N-取代酰胺，N-二取代酰胺。

应清楚的是，某些式(I)化合物可呈现互变异构现象。式(I)化合物可以以未溶剂化的形式存在，也可以以溶剂化的形式存在。甚至，本发明某些式(I)化合物可以存在多晶现象。

式(I)化合物的适合的药学上可接受的盐可以是式(I)化合物的酸加成盐，可以包括(但不限于)与如下无机酸形成的盐：如盐酸、硫酸、硝酸、磷酸、以及与有机酸形成的盐，而有机酸则指乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸和马来酸；可以是具有足够酸性的式(I)化合物的盐，如碱金属盐或碱土金属盐(钙盐、镁盐或铵盐等)。式(I)化合物的另一种适合的药学上可接受的盐可以是在给予式(I)化合物后在人或动物体内形成的盐。该化合物也可以以酯、氨基甲酸酯或其他常规的“前体药物”的形式(当以这种形式给药时，在体内可转化成活性部分)。

化合物的合成路线

本发明的化合物可以根据其结构的不同采用不同的制备方法，其制备方法中一般都包括卤代反应和N-烷基化过程。更为具体的，具有通式(I_A)结构的取代苯并氮杂环类化合物可以按照如下合成路线制备：

1)将R₃取代的邻苯二胺和草酸二乙酯投入到盐酸溶液中回流2-5小时，冷却后，抽滤，水洗，干燥，得到2，3-二羟基-R₃取代-喹喔啉(II”)；

2)将2，3-二羟基-R₃取代-喹喔啉(II”)和催化量的N，N-二甲基甲酰胺投入到三氯氧磷中，回流2-5小时后，冷却，减压抽去大部分三氯氧磷后，把剩余反应液转移到冰水中，生成大量固体，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，干燥后，得2，3-二氯-R₃取代-喹喔啉(III’)。

3)将2，3-二氯-R₃取代-喹喔啉(III’)、R₁取代的胺和碳酸铯投入到二氧六环中，微波160℃，反应30分钟。减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得2，3-二R₁氨基取代-R₃取代-喹喔啉类化合物(I_A)，目标化合物之一。

4)当R₃为硝基取代时，把2，3-二R₁氨基取代-硝基取代-喹喔啉类化合物(I_A)溶于无水甲醇中，加入10％Pb/C，通入氢气后反应2-5小时。抽滤，减压蒸除溶剂，即得到2，3-二R₁氨基取代-氨基取代-喹喔啉类化合物(I_A)。

反应各式中R₁和R₃的定义同上述定义。

优选的，具有通式(I_B)结构的取代苯并氮杂环类化合物可以按照如下合成路线制备：

1)将R₃取代的邻硝基苯胺和氰乙酸投入到甲苯溶液中，分批加入PCl₅，回流24-48小时。减压蒸除溶剂，用有机溶剂萃取，得到的有机层经干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，得到的固体投入到吡啶中，滴加1N NaOH溶液，室温反应12小时后，倒入水中，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，滤液用浓盐酸调节至pH＝6，冷却，析出固体。再将此固体溶于混合溶剂(乙醇/水＝1/2)中，加入适量次硫酸钠，回流2-3小时，冷却至室温，减压蒸除溶剂，用浓盐酸调节至pH＝6，有机溶剂萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得2-羟基-R₃取代-喹喔啉(II’)。

2)将2-羟基-R₃取代-喹喔啉(II’)和催化量的N，N-二甲基甲酰胺投入到三氯氧磷中，回流2-5小时后，冷却，减压抽去大部分三氯氧磷后，把剩余反应液转移到冰水中，生成大量固体，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，干燥后，得2-氯-R₃取代-喹喔啉(III)。

3)将2-氯-R₃取代-喹喔啉(III)、R₁取代的醇和无水碳酸钾投入到四氯化碳中(或者将2-氯-R₃取代-喹喔啉(III)、R₁取代的胺投入到N，N-二甲基甲酰胺中)，回流4-10小时。有机溶剂萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得2-R₁O取代-R₃取代-喹喔啉类化合物I_B(或者2-R₁N取代-R₃取代-喹喔啉类化合物I_B)。

反应各式中R₁和R₃的定义同上述定义。

优选的，具有通式(I_C)结构的取代苯并氮杂环类化合物可以按照如下合成路线制备：

1)将R₃取代-亚苯甲酰基脲(VI)和催化量的N，N-二甲基苯胺投入到三氯氧磷中，回流5-7小时后，冷却，减压抽去大部分三氯氧磷后，把剩余反应液转移到冰水中，生成大量固体，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，干燥后，得2，4-二氯-R₃取代-喹唑啉(III_A)。

2)将2，4-二氯-R₃取代-喹唑啉(III_A)、含9％NH₄OH的饱和盐水和活化锌粉投入到二氯甲烷中，回流4小时。冷却，抽滤，滤液减压蒸除溶剂，有机溶剂萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得2-氯-R₃取代-喹唑啉(III_B)。

3)将2-氯-R₃取代-喹唑啉(III_B)、R₁取代的胺投入到N，N-二甲基甲酰胺中，反应5-10小时。有机溶剂萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得目标化合物2-R₁N取代-R₃取代-喹唑啉类化合物I_C。

反应各式中R₁和R₃的定义同上述定义。

优选的，具有通式(I_D)结构的取代苯并氮杂环类化合物可以按照如下合成路线制备：

1)将R₃取代的2-羟基喹啉(II)和五氯化磷投入到三氯氧磷中，回流2-5小时后，冷却，减压抽去大部分三氯氧磷后，把剩余反应液转移到冰水中，生成大量固体，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，干燥后，得2-氯-R₃取代-喹啉(III)。

2)将2-氯-R₃取代-喹啉(III)、R₁取代的胺投入到N，N-二甲基甲酰胺中，反应5-10小时。有机溶剂萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得目标化合物2-R₁N取代-R₃取代-喹啉类化合物I_D。

反应各式中R₁和R₃的定义同上述定义。

优选的，具有通式(I_E)结构的取代苯并氮杂环类化合物可以按照如下合成路线制备：

1)将R₃取代的2-羟基苯并咪唑(II)投入到三氯氧磷中，回流15分钟后，滴加三氯化磷，回流1小时，冷却，加入乙腈，搅拌，缓慢滴加冰水，生成大量固体，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，干燥后，得2-氯-R₃取代-苯并咪唑(III)。

2)将2-氯-R₃取代-苯并咪唑(III)、R₁取代的胺投入到N，N-二甲基甲酰胺中，反应5-10小时。有机溶剂萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得目标化合物2-R₁N取代-R₃取代-苯并咪唑类化合物I_E。

反应各式中R₁和R₃的定义同上述定义。

适应症及给药方法

本发明还包括药物组合物以及治疗方法，它包括给哺乳动物施用有效量的式I化合物。本发明的化合物可用于治疗：心血管疾病。优选的，所述哺乳动物是人。

当化合物用于上述用途时，它们可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合，如溶剂、稀释剂等，而且可以用如下形式口服给药：片剂、胶囊、可分散的粉末、颗粒或悬浮液(含有如约0.05-5％悬浮剂)、糖浆(含有如约10-50％糖)、和酏剂(含有约20-50％乙醇)，或者以无菌可注射溶液或悬浮液形式(在等渗介质中含有约0.05-5％悬浮剂)进行非肠胃给药。例如，这些药物制剂可含有与载体混合的约25-90％，通常约为5％-60％(重量)的活性成分。

所用的活性成分的有效剂量可随所用的化合物、给药的模式和待治疗的疾病的严重程度而变化。然而，通常当本发明的化合物每天以约0.5-500mg/kg动物体重的剂量给予时，能得到令人满意的效果，较佳地每天以2-4次分开的剂量给予，或以缓释形式给药。对大部分大型哺乳动物而言，每天的总剂量约为1-100mg，较佳地约为2-80mg。适用于内服的剂量形式，包含与固态或液态药学上可接受的载体密切混合的约0.5-500mg的活性化合物。可调节此剂量方案以提供最佳治疗应答。例如，由治疗状况的迫切要求，可每天给予若干次分开的剂量，或将剂量按比例地减少。

这些活性化合物可通过口服以及静脉内、肌内或皮下等途径给药。固态载体包括：淀粉、乳糖、磷酸二钙、微晶纤维素、蔗糖和白陶土，而液态载体包括：无菌水、聚乙二醇、非离子型表面活性剂和食用油(如玉米油、花生油和芝麻油)，只要适合活性成分的特性和所需的特定给药方式。在制备药物组合物中通常使用的佐剂也可有利地被包括，例如调味剂、色素、防腐剂和抗氧化剂如维生素E、维生素C、BHT和BHA。

从易于制备和给药的立场看，优选的药物组合物是固态组合物，尤其是片剂和固体填充或液体填充的胶囊。化合物的口服给药是优选的。

这些活性化合物也可肠胃外或腹腔内给药。也可在适当混合有表面活性剂(如羟丙基纤维素)的水中制备这些活性化合物(作为游离碱或药学上可接受的盐)的溶液或悬浮液。还可在甘油、液体、聚乙二醇及其在油中的混合物中制备分散液。在常规储存和使用条件下，这些制剂中含有防腐剂以防止微生物生长。

适应于注射的药物形式包括：无菌水溶液或分散液和无菌粉(用于临时制备无菌注射溶液或分散液)。在所有情况中，这些形式必须是无菌的且必须是流体以易于注射器排出流体。在制造和储存条件下必须是稳定的，且必须能防止微生物(如细菌和真菌)的污染影响。载体可以是溶剂或分散介质，其中含有如水、醇(如甘油、丙二醇和液态聚乙二醇)、们的适当混合物和植物油。

本发明得到的取代苯并氮杂环类化合物，可作为RhoA/ROCK调控途径上游蛋白RhoA的GTP结合域竞争性抑制剂，可以阻止RhoA活化成RhoA-GTP形式，而只有后者才能与ROCK的RhoA蛋白结合域结合，暴露ROCK的催化活性中心，将ROCK激活，同时发生定向转位与MLC靠近。因此，本发明化合物可以发挥抑制血管痉挛的作用，所以本发明的化合物可以用于制备用于治疗心血管疾病的新型药物，当然，药物中可以包含药学上可接受的载体。

相对于现有技术中的方案，本发明的优点是：

本发明的取代苯并氮杂环类化合物的制备方法具有反应条件温和、原料丰富易得、操作及后处理简单等优点。本发明的取代苯并氮杂环类化合物在RhoA抑制试验中显示了阳性结果，印证了其药理作用机制。因此，本发明的化合物可用于制备RhoA抑制剂并发展为心血管疾病治疗药物。经试验证实，该类化合物作为RhoA/ROCK调控途径上游蛋白RhoA的GTP结合域竞争性抑制剂，可以阻止RhoA活化成RhoA-GTP形式，而只有后者才能与ROCK的RhoA蛋白结合域结合，暴露ROCK的催化活性中心，将ROCK激活，同时发生定向转位与MLC靠近。因此，本发明化合物可以发挥抑制血管痉挛的作用。

附图说明

下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：

图1为本发明实施例获得的化合物I_B-7对RhoA抑制的量效曲线图；

图2为本发明实施例获得的化合物I_B-13对RhoA抑制的量效曲线图；

图3为本发明实施例获得的化合物I_B-14对RhoA抑制的量效曲线图；

图4为本发明实施例获得的化合物I_B-16对RhoA抑制的量效曲线图；

图5为本发明实施例获得的化合物I_D-1对RhoA抑制的量效曲线图。

具体实施方式

以下结合具体实施例对上述方案做进一步说明。应理解，这些实施例是用于说明本发明而不限于限制本发明的范围。实施例中采用的实施条件可以根据具体厂家的条件做进一步调整，未注明的实施条件通常为常规实验中的条件，所说的室温是指20℃-30℃。

实施例12，3-二羟基-6-硝基喹喔啉(II”-1)的制备

将4-硝基邻苯二胺(15.3g，0.1mol)和草酸二乙酯(21.9g，0.15mol)投入到4N盐酸中(40mL)，加热回流2小时，冷却后，析出类白色针状晶体，抽滤，水洗，得到灰白色固体2，3-二羟基-6-硝基喹喔啉，收率85％。

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：7.21(d，J＝8.8Hz，1H)，7.90-7.95(m，2H)，12.16(s，1H)，12.35(s，1H)；MS(ESI)m/z 208[M+H]⁺。

实施例22，3-二氯-6-硝基喹喔啉(III’-1)

将2，3-二羟基-6-硝基-喹喔啉(II”-1，20.8g，0.1mol)和催化量的N，N-二甲基甲酰胺(1mL)投入到三氯氧磷中(50mL)，回流2小时后，冷却，减压抽去大部分三氯氧磷后，把剩余反应液转移到冰水中(100mL)，生成大量土灰色粉状固体，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，干燥后，得白色固体2，3-二氯-6-硝基-喹喔啉，收率90％。

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：8.19(dd，J＝8.8Hz and 16Hz，1H)，8.29(d，J＝8.8Hz，1H)，8.52(s，1H)；MS(ESI)m/z 244[M+H]⁺。

实施例32，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(乙氧羰基)乙烯基)苯基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-1)

将2，3-二氯-6-硝基-喹喔啉(III-1，1.22g，0.005mol)、(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯(2.86g，0.015mol)和碳酸铯(9.75g，0.03mol)投入到二氧六环中(5mL)，微波160℃，反应30分钟。减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得2，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(乙氧羰基)乙烯基)苯基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-1)。

¹H-NMR(300Hz，DMSO-d₆)，δ：1.27(t，J＝7.5Hz，6H)，4.20(q，J＝7.5Hz，4H)，6.52-6.60(m，2H)，7.62-7.79(m，7H)，8.80-8.14(m，4H)，8.13(d，J＝9.0Hz，1H)，8.34(s，1H)，9.63(br，1H)，9.77(br，1H)；MS(EI)m/z 553(M⁺)。

实施例42，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(乙氧羰基)乙烯基)苯基氨基)-6-甲氧基喹喔啉(I_A-2)

将4-硝基邻苯二胺替换成4-甲氧基邻苯二胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例1-3，得2，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(乙氧羰基)乙烯基)苯基氨基)-6-甲氧基喹喔啉(I_A-2)。

¹H-NMR(300Hz，DMSO-d₆)，δ：1.26(t，J＝6.6Hz，6H)，4.19(t，J＝6.9Hz and 1.2Hz，4H)，6.54(dd，J＝15.6Hz and 6.9Hz，2H)，7.08(s，2H)，7.54(d，J＝8.7Hz，1H)，7.52-7.62(m，1H)，7.66-7.77(m，4H)，7.89-7.99(m，4H)，9.17(br，1H)，9.27(br，1H)；MS(EI)m/z 538(M⁺)。

实施例52，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(乙氧羰基)乙烯基)苯基氨基)-6-三氟甲基喹喔啉(I_A-3)

将4-硝基邻苯二胺替换成4-三氟甲基邻苯二胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例1-3，得2，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(乙氧羰基)乙烯基)苯基氨基)-6-三氟甲基喹喔啉(I_A-3)。

¹H-NMR(300Hz，DMSO-d₆)，δ：1.27(t，J＝6.9Hz，6H)，4.19(q，J＝7.2Hz，4H)，6.52-6.59(m，2H)，7.61-7.68(m，4H)，7.73-79(m，4H)，7.97-8.00(m，4H)，9.50(d，J＝15.6Hz，2H)；MS(EI)m/z 576(M⁺)。

实施例62，3-双(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-4)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成1-甲基哌嗪，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4-甲基-哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-4)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：2.36(s，6H)，2.58(br，8H)，3.60-3.73(m，J＝8.0Hz，8H)，7.69(d，J＝9.0Hz，1H)，8.17(dd，J＝9.0Hz and 2.7Hz，1H)，8.56(d，J＝2.7Hz，1H)；MS(ESI)m/z 372[M+H]⁺。

实施例72，3-双(4，4’-乙撑二氧基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-5))

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成4-乙撑二氧基哌啶，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-乙撑二氧基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-5)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：1.86(br，8H)，3.70(br，4H)，3.83(br，4H)，4.01(s，8H)，7.68(d，J＝9.0Hz，1H)，8.16(dd，J＝9.0Hz and 2.7Hz，1H)，8.54(d，J＝2.7Hz，1H)；MS(EI)m/z 457(M⁺)。

实施例82，3-双(4，4’-甲氧羰基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-6))

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成哌啶-4-甲酸甲酯，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-甲氧羰基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-6)。

¹H-NMR (300Hz，CDCl₃)，δ：1.82-1.93(m，4H)，2.10(m，4H)，2.57-2.60(m，2H)，2.89-3.07(m，4H)，3.73(s，6H)，4.24(d，J＝13.5Hz，2H)，4.42(d，J＝13.5Hz，2H)，7.73(d，J＝9.3Hz，1H)，8.18(d，J＝9.3Hz，1H)，8.56(s，1H)；MS(EI)m/z 457(M⁺)。

实施例92，3-双(3，3’-乙氧羰基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-7)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成哌啶-3-甲酸乙酯，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(3，3’-乙氧羰基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-7)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：1.24-1.31(m，6H)，1.61-2.11(m，8H)，2.66-3.22(m，6H)，3.96-4.29(m，6H)，4.33-4.53(m，2H)，7.70(dd，J＝9.0Hz and 1.5Hz，1H)，8.17(dd，J＝9.0Hz and 2.4Hz，1H)，8.55-8.57(m，1H)；MS(EI)m/z485(M⁺)。

实施例102，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(羧基)乙烯基)苯基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-8))

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成(E)-4-氨基-苯基丙烯酸，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-((E)-2，2’-(羧基)乙烯基)苯基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-8)。

¹H-NMR(300Hz，DMSO-d₆)，δ：6.46(dd，J＝15.3Hz and 3.6Hz，2H)，7.53-7.72(m，7H)，8.10-8.18(m，5H)，8.33(d，J＝2.4Hz，1H)；MS(EI)m/z 497(M⁺)。

实施例112，3-双(3，3’-((E)-2，2’-(羧基)乙烯基)苯基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-9))

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成(E)-3-氨基-苯基丙烯酸，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(3，3’-((E)-2，2’-(羧基)乙烯基)苯基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-9)。

Mp＞300℃；¹H-NMR(500Hz，DMSO-d₆)，δ：6.51(d，J＝16.0Hz，2H)，7.49-7.51(m，4H)，7.60-7.70(m，3H)，7.95-8.04(m，2H)，8.12-8.23(m，3H)，8.43(s，1H)，9.50(s，1H)，9.65(s，1H)；MS(ESI)m/z498[M+H]⁺。

实施例122，3-双(吗啉-4-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-10))

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成吗啉，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(吗啉-4-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-10)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：3.60-3.63(m，4H)，3.70-3.74(m，4H)，3.85-3.89(m，8H)，7.74(d，J＝9.3Hz，1H)，8.22(dd，J＝9.3Hz and 2.4Hz，1H)，8.60(d，J＝2.7Hz，1H)；MS(EI)m/z 345(M⁺)。

实施例132，3-双(4，4’-甲基苄氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-11))

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成4-甲基苄胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-甲基苄氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-11)。

¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：2.26(s，6H)，4.66(dd，J＝12.4Hz and 4.8Hz，4H)，7.14(d，J＝7.6Hz，4H)，7.27-7.30(m，4H)，7.49(d，J＝9.2Hz，1H)，7.96(dd，J＝8.8Hzand 2.4Hz，1H)，8.14(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(EI)m/z413(M⁺)。

实施例142，3-双(4，4’-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-12))

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成1-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)哌嗪，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-(苯并[1，3]二氧五环-5-基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-12)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：2.57(br，8H)，3.58(s，4H)，3.69(s，4H)，5.96(s，4H)，6.77(s，4H)，6.89(s，2H)，7.67(d，J＝6.3Hz，1H)，8.16(dd，J＝9.0Hz and 2.7Hz，1H)，8.54(d，J＝2.7Hz，1H)；MS(ESI)m/z 584[M+H]⁺。

实施例152，3-双(4，4’-甲氧基苄氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-13)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成4-甲氧基苄胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-甲氧基苄氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-13)。

¹H-NMR(300Hz，DMSO-d₆)，δ：3.72(s，6H)，4.62-4.66(q，4H)，6.91(d，J＝8.4Hz，4H)，7.34(dd，J＝8.4Hz and 3.0Hz，4H)，7.51(d，J＝8.7Hz，1H)，7.97(dd，J＝9.0Hz and2.4Hz，1H)，8.17(d，J＝2.7Hz))；MS(ESI)m/z 446[M+H]⁺。

实施例162，3-双((3，4-二甲氧基)苯乙基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-14)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成3，4-二甲氧基苯乙胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双((3，4-二甲氧基)苯乙基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-14)。

¹H-NMR(300Hz，DMSO-d₆)，δ：2.93(t，J＝6.9Hz，4H)，3.78-3.86(m，16H)，6.72-6.81(m，6H)，7.61(d，J＝9.0Hz，1H)，8.10(dd，J＝9.0Hz and 2.4Hz，1H)，8.49(d，J＝2.7Hz，1H)；MS(ESI)m/z 534[M+H]⁺。

实施例172，3-双(吡啶-4-甲基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-15)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成吡啶-4-甲胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(吡啶-4-甲基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-15)。

¹H-NMR(300Hz，DMSO-d₆)，δ：4.79(dd，J＝8.4Hz and 2.1Hz，4H)，7.42-7.48(m，5H)，7.95(dd，J＝8.4Hz and 2.4Hz，1H)，8.11(d，J＝2.7Hz，1H)，8.52-8.56(m，5H)；MS(ESI)m/z 388[M+H]⁺。

实施例182，3-双((2，2’-二乙氨基)乙基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-16)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成N，N-二乙基乙二胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双((2，2’-二乙氨基)乙基氨基)-6-硝基喹喔啉(I_A-16)。

¹H-NMR(300Hz，DMSO-d₆)，δ：1.05-1.12(m，12H)，2.80-2.94(br，12H)，3.66(br，4H)，7.48(d，J＝9.0Hz，1H)，7.98(dd，J＝9.0Hz and 2.7Hz，1H)，8.15(d，J＝2.7Hz，1H)；MS(ESI)m/z 404[M+H]⁺。

实施例192，3-双(4，4’-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-17)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成1-(4-氟苯基)哌嗪，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-(4-氟苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-17)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：3.30(br，8H)，3.79(br，4H)，3.89(br，4H)，6.93-7.04(m，8H)，7.76(d，J＝9.3Hz，1H)，8.22(dd，J＝9.0Hz and 2.1Hz，1H)，8.62(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(EI)m/z529(M⁺)。

实施例202，3-双(4，4’-(2-氟苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-18)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成1-(2-氟苯基)哌嗪，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-(2-氟苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-18)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：3.28(br，8H)，3.82(br，4H)，3.93(br，4H)，6.98-7.04(m，8H)，7.76(d，J＝9.0Hz，1H)，8.22(dd，J＝9.3Hz and 2.4Hz，1H)，8.62(d，J＝2.4Hz，1H)；MS(EI)m/z 529(M⁺)。

实施例212，3-双(4，4’-(4-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-19)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成1-(4-甲氧基苯基)哌嗪，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-(4-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-19)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：3.26(br，8H)，3.78(br，4H)，3.79(s，6H)，3.89(br，4H)，6.88(d，J＝9.6Hz，4H)，6.97(d，J＝9.6Hz，4H)，7.75(d，J＝9.0Hz，1H)，8.22(dd，J＝9.0Hz and 2.7Hz，1H)，8.61(d，J＝2.7Hz，1H)；MS(EI)m/z 555(M⁺)。

实施例222，3-双(4，4’-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-20)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成1-(3-甲氧基苯基)哌嗪，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-(3-甲氧基苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-20)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：3.37(br，8H)，3.77(br，4H)，3.82(s，6H)，3.87(br，4H)，6.49(d，J＝8.4Hz，2H)，6.54(s，2H)，6.62(d，J＝8.7Hz，2H)，7.23(t，J＝8.7Hz and 8.4Hz，2H)，7.76(d，J＝9.0Hz，1H)，8.22(dd，J＝9.0Hz and 2.1Hz，1H)，8.62(d，J＝2.1Hz，1H)；MS(EI)m/z 555(M⁺)。

实施例232，3-双(4-甲基哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-21)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成4-甲基哌嗪，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4-甲基哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-21)。

¹H-NMR (300Hz，CDCl₃)，δ：0.99(S，3H)，1.01(s，3H)，1.25-1.39(m，5H)，1.68-1.86(m，3H)，1.80(d，J＝12.3Hz，2H)，2.78(dd，J＝27.0Hz and 13.2Hz，4H)，4.27(d，J＝12.6Hz，2H)，4.49(d，J＝12.6Hz，2H)，7.62(d，J＝8.7Hz，1H)，8.12(dd，J＝8.7Hz and 3.0Hz，1H)，8.51(d，J＝2.7Hz，1H)；MS(EI)m/z 369(M⁺)。

实施例242，3-双(4，4’-(2，4-二氟苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-22)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成1-(2，4-二氟苯基)哌嗪，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-(2，4-二氟苯基)哌嗪-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-22)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：3.22(br，8H)，3.81(br，4H)，3.91(br，4H)，6.80-6.97(m，6H)，7.75(d，J＝8.7Hz，1H)，8.21(dd，J＝9.0Hz and 3.0Hz，1H)，8.60(d，J＝2.4Hz，1H)；MS(EI)m/z 587(M⁺)。

实施例252，3-双(4，4’-乙氧羰基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-23)

将(E)-4-氨基-苯基丙烯酸乙酯替换成哌啶-4-甲酸乙酯，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例3，得2，3-双(4，4’-乙氧羰基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉(I_A-23)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：1.24-1.31(m，6H)，1.82-1.93(m，4H)，2.10(m，4H)，2.57-2.60(m，2H)，2.89-3.07(m，4H)，3.73-3.96(m，4H)，4.24(d，J＝13.5Hz，2H)，4.42(d，J＝13.5Hz，2H)，7.73(d，J＝9.3Hz，1H)，8.18(d，J＝9.3Hz，1H)，8.56(s，1H)；MS(EI)m/z485(M⁺)。

实施例262，3-双(4，4’-乙氧羰基哌啶-1-基)-6-氨基喹喔啉(I_A-24)

将2，3-双(4，4’-乙氧羰基哌啶-1-基)-6-硝基喹喔啉(IA-23，2.45g，0.005mol)溶于无水甲醇中(10mL)，加入10％Pb/C(0.001mol)，通入氢气后反应5小时。抽滤，减压蒸除溶剂，即得2，3-双(4，4’-乙氧羰基哌啶-1-基)-6-氨基喹喔啉(I_A-24)。

¹H-NMR(300Hz，CDCl₃)，δ：1.27(t，J＝13.5Hz，6H)，1.83-1.91(m，4H)，2.09(d，J＝7.2Hz，4H)，2.44-2.64(m，2H)，2.74-2.87(m，4H)，4.10(d，J＝12.0Hz，2H)，4.17(q，J＝13.5Hz，4H)，4.32(d，J＝12.0Hz，2H)，6.84(dd，J＝9.0Hz and 2.7Hz，1H)，6.92(d，J＝2.7Hz，1H)，7.51(d，J＝9.0Hz，1H)；¹³C-NMR(100Hz，CDCl₃)，δ：14.2，28.3，41.4，46.7，47.0，60.5，108.3，117.1，127.3，131.9，139.2，145.2，147.0，149.4，175.0，175.1；MS(ESI)m/z456[M+H]⁺。

实施例27 2-羟基喹喔啉(II’)

将3克邻硝基苯胺和3克氰乙酸投入到装有50mL甲苯的茄型烧瓶中，分批加入10克PCl5，回流48小时。冷却至室温，减压蒸馏除去体系中的甲苯溶剂，随后以乙酸乙酯萃取(50mL×3)，合并得到的有机层，再以蒸馏水洗涤(30mL×3)。用无水硫酸镁干燥有机层，抽滤，减压蒸除溶剂，得到固体2.8克。将以上固体投入到10mL吡啶中，滴加1N NaOH溶液10mL，室温反应12小时后，倒入水中，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，滤液用浓盐酸调节至pH＝6，冷却，析出固体2.8克。再将此固体溶于混合溶剂(乙醇：15mL，水：30mL)中，加入次硫酸钠5克，回流3小时，冷却至室温，减压蒸除溶剂乙醇，用浓盐酸调节至pH＝6，乙酸乙酯20mL萃取，得到的有机层经无水硫酸镁干燥，抽滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得2.3克白色固体(II’)，产率72％。

Mp 271-272℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：7.28-7.32(m，2H)，7.55(t，J＝7.6Hz，1H)，7.77(d，J＝7.6Hz，1H)，8.17(s，1H)，12.41(s，1H).

实施例282-氯喹喔啉(III)

将5克2-羟基喹喔啉溶于20mL三氯氧磷中，加入N，N-二甲基甲酰胺0.075mL，回流5小时，冷却，减压抽去大部分三氯氧磷后，把剩余反应液倾倒入冰水中，生成大量黄色固体，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，干燥后，得2.8克2-氯喹喔啉(III)，产率73％。

Mp 46-48℃；¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：7.78-7.85(m，2H)，8.04(d，J＝7.2Hz，1H)，8.14(d，J＝7.2Hz，1H)，8.80(s，1H).

实施例29(E)-3-(3-(喹喔啉-3-氧基)苯基)丙烯酸(I_B-1)

将0.1克的2-氯喹喔啉(III)、0.12克的(E)-3-羟基苯丙烯酸和0.17克无水碳酸钾投入到装有5mL四氯化碳的茄型烧瓶中，回流4小时。二氯甲烷萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得到0.12克黄色固体(I_B-1)，产率68％。

Mp 165-170℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：6.58(d，J＝16.0Hz，1H)，7.40(d，J＝8.4Hz，1H)，7.54(t，J＝8.0Hz，1H)，7.61(d，J＝9.6Hz，1H)，7.64(s，1H)，7.72-7.75(m，4H)，8.09(d，J＝8.0Hz，1H)，8.89(s，1H)，12.41(s，1H)；MS(EI)m/z 292(M⁺)。

实施例30(E)-3-(3-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸乙酯(I_B-2)

将2-羟基喹喔啉和(E)-3-羟基苯丙烯酸分别替换成2-羟基-7-硝基喹喔啉和(E)-3-氨基苯丙烯酸乙酯，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例28-29，得(E)-3-(3-(6-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸乙酯(IB-2)。为黄色固体，产率57％。

Mp 183-193℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：1.29(t，J＝7.2Hz，3H)，4.23(q，2H)，6.60(d，J＝16.0Hz，1H)，7.46-7.47(m，2H)，7.71(d，J＝16.0Hz，1H)，8.02-8.03(m，1H)，8.06(d，J＝8.8Hz，1H)，8.18(dd，J＝2.4Hz and 8.8Hz，1H)，8.25(s，1H)，8.52(d，J＝2.8Hz，1H)，8.70(s，1H)，10.37(s，1H)；MS(EI)m/z364(M⁺)。

实施例31(E)-3-(3-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(I_B-3)

将2-羟基喹喔啉和(E)-3-羟基苯丙烯酸分别替换成2-羟基-7-硝基喹喔啉和(E)-3-氨基苯丙烯酸，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例28-29，得(E)-3-(3-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(IB-3)。为白色固体，产率80％。

Mp＞300℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：6.52(d，J＝16.0Hz，1H)，7.41-7.48(m，2H)，7.64(d，J＝16.0Hz，1H)，8.02-8.06(m，2H)，8.17(dd，J＝2.4Hz and 9.2Hz，1H)，8.23(s，1H)，8.51(d，J＝2.0Hz，1H)，8.70(s，1H)，10.38(s，1H)；MS(EI)m/z 336(M⁺)。

实施例32(E)-3-(3-(6-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(I_B-4)

将2-羟基喹喔啉和(E)-3-羟基苯丙烯酸分别替换成2-羟基-6-硝基喹喔啉和(E)-3-氨基苯丙烯酸，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例28-29，得(E)-3-(3-(6-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(IB-4)。为黄白色固体。

Mp＞300℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：6.51(d，J＝16.0Hz，1H)，7.43-7.49(m，2H)，7.65(d，J＝16.0Hz，1H)，8.03-8.07(m，2H)，8.18(dd，J＝2.4Hz and 9.2Hz，1H)，8.24(s，1H)，8.53(d，J＝2.0Hz，1H)，8.72(s，1H)，10.42(s，1H)；MS(EI)m/z 336(M⁺)。

实施例337-硝基-2-(3，4-乙撑二氧基苯氨基)喹喔啉(I_B-5)

将2-羟基喹喔啉和(E)-3-羟基苯丙烯酸分别替换成2-羟基-7-硝基喹喔啉和3，4-乙撑二氧基苯胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例28-29，得7-硝基-2-(3，4-乙撑二氧基苯氨基)喹喔啉(I_B-5)。为黄色固体。

Mp 205-210℃；¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：4.25-4.33(m，4H)，6.93(d，J＝8.4Hz，1H)，7.06(dd，J＝2.0Hz and 8.4Hz，1H)，7.42(d，J＝1.2Hz，1H)，8.03(d，J＝9.2Hz，1H)，8.22(dd，J＝2.0Hz and 9.2Hz，1H)，8.53(s，1H)，8.65(d，J＝2.0Hz，1H)；MS(EI)m/z 324(M⁺)。

实施例346-硝基-2-(3，4-乙撑二氧基苯氨基)喹喔啉(I_B-6)

将2-羟基喹喔啉和(E)-3-羟基苯丙烯酸分别替换成2-羟基-6-硝基喹喔啉和3，4-乙撑二氧基苯胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例28-29，得6-硝基-2-(3，4-乙撑二氧基苯氨基)喹喔啉(I_B-6)。为黄色固体。

Mp 233-235℃；¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：4.30-4.33(m，4H)，6.92(d，J＝8.8Hz，1H)，7.10(dd，J＝2.8Hz and 8.8Hz，1H)，7.47(d，J＝2.4Hz，1H)，7.81(d，J＝9.2Hz，1H)，8.05(s，1H)，8.40(dd，J＝2.4Hz and 9.2Hz，1H)，8.51(s，1H)，8.80(d，J＝2.4Hz，1H)；MS(EI)m/z 324(M⁺)。

实施例35(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(I_B-7)

将(E)-3-羟基苯丙烯酸替换成(E)-3-氨基苯丙烯酸，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(I_B-7)。为黄色固体。

Mp 273-275℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：6.50(d，J＝16.0Hz，1H)，7.38(d，J＝7.6Hz，1H)，7.44(t，J＝8.0Hz，1H)，7.50(t，J＝8.0Hz，1H)，7.62(d，J＝16.0Hz，1H)，7.68(t，J＝8.0Hz，1H)，7.77(t，J＝8.4Hz，1H)，7.88(d，J＝8.0Hz，1H)，8.01(d，J＝8.0Hz，1H)，8.30(s，1H)，8.59(s，1H)，10.08(s，1H)，12.44(s，1H)；MS(EI)m/z 291(M⁺)。

实施例362-氯-5-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯甲酸(I_B-8)

将2-羟基喹喔啉和(E)-3-羟基苯丙烯酸分别替换成2-羟基-7-硝基喹喔啉和2-氯-5-氨基苯甲酸，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例28-29，得2-氯-5-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯甲酸(IB-8)。为黄色固体。

Mp 161-165℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：7.57(d，J＝8.8Hz，1H)，8.10(d，J＝8.8Hz，1H)，8.22(dd，J＝2.4Hz and 8.8Hz，1H)，8.31(dd，J＝2.8Hz and 8.8Hz，1H)，8.41(d，J＝6.8Hz，1H)，8.48(d，J＝2.4Hz，1H)，8.71(s，1H)；MS(EI)m/z 344(M⁺)。

实施例377-硝基-2-(3-乙氧基苯胺)喹喔啉(I_B-9)

将2-羟基喹喔啉和(E)-3-羟基苯丙烯酸分别替换成2-羟基-7-硝基喹喔啉和3-乙氧基苯胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例28-29，得7-硝基-2-(3-乙氧基苯胺)喹喔啉(I_B-9)。为黄色固体。

Mp 166-170℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：1.40(t，J＝7.2Hz，3H)，4.08(q，2H)，6.70(d，J＝7.6Hz，1H)，7.08-7.11(m，2H)，7.51(s，1H)，7.80(t，J＝8.0Hz，1H)，8.20(s，1H)，8.52(s，1H)，8.63(t，J＝8.0Hz，1H)；MS(EI)m/z 310(M⁺)。

实施例387-硝基-2-苯胺基喹喔啉(I_B-10)

将2-羟基喹喔啉和(E)-3-羟基苯丙烯酸分别替换成2-羟基-7-硝基喹喔啉和苯胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例28-29，得7-硝基-2-苯胺基喹喔啉(IB-10)。为黄色固体。

Mp 230-233℃；¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：7.22(t，J＝7.2Hz，1H)，7.46(t，J＝7.6Hz，1H)，7.76(d，J＝7.6Hz，2H)，8.05(d，J＝9.2Hz，1H)，8.24(dd，J＝2.8Hz and 9.2Hz，1H)，8.56(s，1H)，8.67(d，J＝2.4Hz，1H)；MS(EI)m/z 265(M⁺)。

实施例393-(3-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙酸(I_B-11)

将2-羟基喹喔啉和(E)-3-羟基苯丙烯酸分别替换成2-羟基-7-硝基喹喔啉和3-(3-氨基苯基)丙酸，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例28-29，得3-(3-(7-硝基-喹喔啉-2-氨基)苯基)丙酸(I_B-11)。为到黄色固体。

Mp 239-245℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：2.59(t，J＝7.6Hz，2H)，2.89(d，J＝7.6Hz，2H)，6.97(d，J＝7.6Hz，1H)，7.32(t，J＝8.0Hz，1H)，7.81(s，1H)，7.88(d，J＝8.0Hz，1H)，8.05(d，J＝9.2Hz，1H)，8.17(dd，J＝2.4Hz and 8.8Hz，1H)，8.50(d，J＝2.4Hz，1H)，8.70(s，1H)，10.26(s，1H)；MS(EI)m/z 338(M⁺)。

实施例40(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸乙酯(I_B-12)

将(E)-3-羟基苯丙烯酸替换成(E)-3-氨基苯丙烯酸乙酯，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙烯酸乙酯(IB-12)。为黄色固体。

Mp 110-120℃；¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：1.36(t，J＝7.2Hz，3H)，4.30(q，2H)，6.48(d，J＝16.0Hz，1H)，7.25(d，J＝7.6Hz，1H)，7.39(t，J＝8.0Hz，1H)，7.49(t，J＝8.0Hz，1H)，7.65(t，J＝7.6Hz，1H)，7.71(d，J＝16.0Hz，1H)，7.80-7.84(m，2H)，7.94(d，J＝8.0Hz，1H)，8.02(s，1H)，8.45(s，1H)；MS(EI)m/z319(M⁺)。

实施例412-(3，4-乙撑二氧基苯氨基)喹喔啉(I_B-13)

将(E)-3-羟基苯丙烯酸替换成3，4-乙撑二氧基苯胺，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得2-(3，4-乙撑二氧基苯氨基)喹喔啉(IB-13)。为黄色固体。

Mp 133-138℃；¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：4.29-4.30(m，4H)，6.89(d，J＝8.4Hz，1H)，7.03(dd，J＝1.6Hz and 8.4Hz，1H)，7.27(s，1H)，7.39(s，1H)，7.46(t，J＝8.0Hz，1H)，7.63(t，J＝8.0Hz，1H)，7.78(d，J＝8.4Hz，1H)，7.92(d，J＝8.0Hz，1H)，8.42(s，1H)；MS(EI)m/z 279(M⁺)。

实施例423-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙酸(I_B-14)

将(E)-3-羟基苯丙烯酸替换成3-(3-氨基苯基)丙酸，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙酸(I_B-14)。为黄色固体。

Mp 198-201℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：2.59(t，J＝7.2Hz，2H)，2.86(d，J＝7.2Hz，2H)，6.91(d，J＝6.8Hz，1H)，7.28(t，J＝8.0Hz，1H)，7.46(t，J＝7.6Hz，1H)，7.64(t，J＝7.2Hz，1H)，7.74(d，J＝8.4Hz，1H)，7.78(s，1H)，7.84-7.89(m，2H)，8.55(s，1H)，9.89(s，1H)；MS(EI)m/z 293(M⁺)。

实施例43(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)-2-甲基-丙烯酸(I_B-15)

将(E)-3-羟基苯丙烯酸替换成2-甲基-3-(3-氨基苯基)丙烯酸，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)-2-甲基-丙烯酸(I_B-15)。为黄色固体。

Mp 235-245℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：2.19(s，3H)，7.12(d，J＝8.0Hz，1H)，7.42-7.50(m，2H)，7.62-7.73(m，3H)，7.81(d，J＝8.0Hz，1H)，7.87(d，J＝8.0Hz，1H)，8.37(s，1H)，8.57(s，1H)，10.04(s，1H)，12.51(s，1H)；MS(EI)m/z 305(M⁺)。

实施例44(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙-2-烯-1-醇(IB-16)

将(E)-3-羟基苯丙烯酸替换成3-(3-氨基苯基)丙-2-烯-1-醇，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例29，得(E)-3-(3-(喹喔啉-2-氨基)苯基)丙-2-烯-1-醇(IB-16)。为黄色固体。

Mp 90-98℃；¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：5.18(d，J＝5.6Hz，2H)，6.48-6.55(m，1H)，6.77(d，J＝16.0Hz，1H)，6.84-6.87(m，1H)，6.95-7.05(m，2H)，7.19-7.24(m，1H)，7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，7.70(t，J＝8.0Hz，1H)，7.87(d，J＝8.8Hz，1H)，8.04(d，J＝8.0Hz，1H)，8.53(s，1H)；MS(EI)m/z277(M⁺)。

实施例452，4-二氯喹唑啉(III_A)

将2.0克的亚苯甲酰基脲和0.6mL的N，N-二甲基苯胺投入到6mL的三氯氧磷中，回流7小时后，冷却至室温，减压抽去大部分三氯氧磷后，把剩余反应液转移到冰水中，搅拌，生成大量土黄色固体，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，干燥后，得黄绿色固体(III_A)1.6克，产率65％。

Mp 118-119℃；¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：7.75-7.79(m，1H)，8.02-8.03(m，2H)，8.29(d，J＝8.4Hz，1H).

实施例462-氯喹唑啉(III_B)

将0.5克的2，4-二氯喹唑啉(III_A)、含9％NH4OH的饱和盐水10mL和0.5克的活化锌粉投入到装有10mL二氯甲烷的茄型烧瓶中，回流4小时。冷却，抽滤除去锌粉，滤液减压蒸除溶剂，用乙酸乙酯萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得0.2克的2-氯喹唑啉(III_B)，产率40％。

Mp 101-109℃；¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：7.70-7.73(m，1H)，7.97-8.04(m，3H)，9.33(s，1H).

实施例47(E)-3-(3-(喹唑啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(I_C-1)

将2-氯喹唑啉(III_B，0.33g，0.002mol)、3-(3-氨基苯基)丙烯酸(0.49g，0.003mol)投入到N，N-二甲基甲酰胺中(5mL)，反应10小时。有机溶剂萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得(E)-3-(3-(喹唑啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(I_C-1)。为黄色固体。

Mp 225-230℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：6.47(d，J＝16.0Hz，1H)，7.30(d，J＝7.6Hz，1H)，7.36-7.43(m，2H)，7.56(d，J＝16Hz，1H)，7.70(d，J＝8.4Hz，1H)，8.34(t，J＝7.2Hz，1H)，7.94(d，J＝8.0Hz，1H)，8.03(d，J＝7.6Hz，1H)，8.29(s，1H)，9.34(s，1H)，9.96(s，1H)；MS(EI)m/z 291(M⁺)。

实施例482-氯喹啉(III)

将2-羟基喹啉(1.45g，0.01mol)和五氯化磷(2g)投入到三氯氧磷中(5mL)，回流5小时后，冷却，减压抽去大部分三氯氧磷后，把剩余反应液转移到冰水中，二氯甲烷萃取，干燥，抽滤，浓缩淡黄色油状物(III)。

¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：7.42(d，J＝8.8Hz，1H)，7.59(t，J＝7.6Hz，1H)，7.77(t，J＝7.6Hz，1H)，7.85(d，J＝8.0Hz，1H)，8.07(d，J＝8.4Hz，1H)，8.14(d，J＝8.4Hz，1H)。

实施例49(E)-3-(3-(喹啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(I_D-1)

将2-氯喹啉(III，0.33g，0.002mol)、3-(3-氨基苯基)丙烯酸(0.49g，0.003mol)投入到N，N-二甲基甲酰胺中(5mL)，反应10小时。有机溶剂萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得(E)-3-(3-(喹啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(I_D-1)。为黄色固体。

Mp＞300℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：6.60(d，J＝16.0Hz，1H)，7.34(d，J＝8.8Hz，1H)，7.48-7.53(m，2H)，7.56(d，J＝8.0Hz，1H)，7.62-7.66(m，3H)，7.76(t，J＝7.6Hz，1H)，7.88(d，J＝7.6Hz，1H)，7.94(d，J＝7.6Hz，1H)，8.04(s，1H)，8.42(d，J＝8.8Hz，1H)，11.29(s，1H)；MS(EI)m/z 289(M⁺)。

实施例502-氯苯并咪唑(III)

将1克的2-羟基苯并咪唑投入到装有10mL三氯氧磷的三口烧瓶中，加热至110℃，回流15分钟后，滴加15mL的三氯化磷(速率为16d/min)，回流1小时，冷却，加入25mL的乙腈，搅拌，缓慢滴加冰水，至没有氯化氢气体生成，生成大量灰白色固体，抽滤，滤饼用蒸馏水洗涤，干燥后，得0.8克的2-氯苯并咪唑(III)，产率71％。

¹H-NMR(400Hz，CDCl₃)，δ：7.68-7.71(m，2H)，7.24-7.27(m，2H).

实施例51(E)-3-(3-(苯并咪唑-2-氨基)苯基)丙烯酸(I_E-1)

将2-氯苯并咪唑(III，0.30g，0.002mol)、3-(3-氨基苯基)丙烯酸(0.49g，0.003mol)投入到N，N-二甲基甲酰胺中(5mL)，反应10小时。有机溶剂萃取，得到的有机层经干燥，过滤，减压蒸除溶剂，残余物柱层析分离得(E)-3-(3-(喹啉-2-氨基)苯基)丙烯酸(I_E-1)，为黄色固体。

Mp 271-278℃；¹H-NMR(400Hz，DMSO-d₆)，δ：6.46(d，J＝8.0Hz，1H)，6.99-7.01(m，2H)，7.26(d，J＝7.6Hz，1H)，7.33-7.39(m，3H)，7.57(d，J＝16.0Hz，1H)，7.84(d，J＝8.0Hz，1H)，7.97(s，1H)，9.54(s，1H)，11.05(s，1H)，12.38(s，1H)；MS(EI)m/z 279(M⁺)。

实施例52本发明化合物对RhoA-GTP结合域抑制活性的测定

采用人脑微血管平滑肌细胞，以含10％胎牛血清的DMEM为培养基，37℃，5％CO₂的条件下进行传代培养。试验取3-5代的血管平滑肌细胞，待其生长至70％融合时，换用无血清DMEM培养24小时，然后加入2.5μM化合物进行干预，1小时后，用5μg/mL RhoA激动剂溶血磷脂酸(LPA)刺激细胞3分钟，最后按照Cytoskeleton公司的试剂盒(G-LISA RhoA Activation Assay Biochem Kit)操作方法，提取细胞中的总蛋白，随之把其加入到预先包被好RBD(Rho Binding Domain)的96孔板中，根据活化状态下的RhoA能与RBD结合，而非活化状态下的RhoA无法与之结合的原理，测定其中活化状态RhoA的含量(以OD₄₉₀表示)，从而得出不同化合物对RhoA的抑制活性。整个试验分为三组：1空白组，即细胞换用无血清DMEM培养24小时后，不用药物干预和溶血磷脂酸的刺激；2对照组，即细胞换用无血清DMEM培养24小时后，不加药物干预，但给予溶血磷脂酸的刺激；3加药组，即细胞换用无血清DMEM培养24小时后，加入药物干预，同时给予溶血磷脂酸的刺激。以下列公式得出待测化合物在2.5μM下百分抑制率，计算公式为：(加药组OD₄₉₀值-空白组OD₄₉₀值)/(对照组OD₄₉₀值-空白组OD₄₉₀值)×100％，化合物活性测试结果如表1。

表1取代苯并氮杂环类衍生物类化合物对RhoA抑制率数据

由表1可以看出，本发明的具有结构通式(I)的取代苯并氮杂环类化合物大部分具有较强的RhoA-GTP抑制活性，说明本发明的化合物为RhoA抑制剂。

实施例53本发明部分化合物对RhoA-GTP结合域半数有效抑制浓度(IC₅₀)的测定

选取2.5M抑制率在70％以上的化合物测IC₅₀，选择合适的化合物浓度梯度，实验方法和体系如实施例52。根据化合物在不同浓度下抑制溶血磷脂酸的刺激，降低活化状态RhoA的含量(以OD₄₉₀表示)，计算化合物在不同浓度下对RhoA的抑制率，使用Sigmoidal公式用origin软件进行拟合得到化合物的IC₅₀值，结果见表2(为)和图1～5。

表2取代苯并氮杂环类衍生物类化合物对RhoA抑制IC₅₀

由表2可以看出，本发明的具有结构通式(I)的部分取代苯并氮杂环类化合物具有微摩级(μM)的RhoA-GTP抑制活性，说明本发明的化合物为RhoA抑制剂。

化合物I_B-7、I_B-13、I_B-14、I_B-16和I_D-1对RhoA抑制的量效曲线图见图1～5。由量效曲线图可以看出，这5个抑制剂对RhoA的抑制活性具有较好的浓度依赖性。

上述实例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人是能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所做的等效变换或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种化合物或其药学上可接受的盐，其结构通式如式(I)所示：

其中，

R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C 1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₂选自H或-ZR₁取代基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；

X和Y各自独立的选自N或CH；Z选自N或O；n＝0或1。

2.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物的结构通式如式(I_A)所示：

其中，R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基。

3.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物的结构通式如式(I_B)所示：

其中，R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；

Z选自N或O；n＝0或1。

4.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物的结构通式如式(I_C)所示：

其中，R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基。

5.根据权利要求1所述的化合物或其药学上可接受的盐，其特征在于所述化合物的结构通式如式(I_D)所示：

其中，R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基。

6.一种药物组合物，其特征在于，该药物组合物包含治疗有效量的一种或多种权利要求1～5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。

7.一种制备权利要求1所述的化合物的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)使式(II)的化合物

或式(II’)的化合物

在催化剂存在的条件下发生卤代反应，生成式(III)的化合物

(2)使式(III)的化合物发生N-烷基化反应生成式(I)的化合物；

上述各式中R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₂选自H或-ZR₁取代基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；

X和Y各自独立的选自N或CH；Z选自N或O；n＝0或1；W选自F、Cl、Br。

8.一种制备权利要求1所述的化合物的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)使式(II”)的化合物

在催化剂存在的条件下发生卤代反应，生成式(III’)的化合物

(2)使式(III’)的化合物发生N-烷基化反应生成式(I)的化合物；

上述各式中R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₂选自H或-ZR₁取代基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；

X和Y各自独立的选自N或CH；Z选自N或O；n＝0或1；W选自F、Cl、Br。

9.一种制备权利要求1所述的化合物的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：

(1)使式(VI)的化合物

在催化剂存在的条件下发生卤代反应，生成式(III_A)的化合物

(2)将式(III_A)的化合物还原成式(III_B)的化合物

(3)使式(III_B)的化合物进行N-烷基化反应生成式(I)的化合物；

上述各式中R₁选自以下基团的任意一种：

含有1～3碳原子的烷基或取代烷基；

苯基，所述苯基可任选被一个或多个相同或不同的选自以下的基团取代：H、卤素、C1-C6直链或支链烃基、羟基、C1-C4烷氧基、C1-C4不饱和烃氧基、羧基、羧基取代的C1-C6饱和或不饱和烃基、氰基、硝基、氨基、三氟甲基、三氟甲氧基、巯基和C1-C4酰基；

R₂选自H或-ZR₁取代基；

R₃选自H、硝基、三氟甲基、氨基或甲氧基；

X和Y各自独立的选自N或CH；Z选自N或O；n＝0或1；W选自F、Cl、Br。

10.一种权利要求1～5中任一项所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备预防或治疗RhoA介导的疾病的药物中的应用。

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