CN101906133A

CN101906133A - 一种玉米血管紧张素转移酶抑制肽的制备方法及其应用

Info

Publication number: CN101906133A
Application number: CN2009100851741A
Authority: CN
Inventors: 李勇; 林峰; 王军波
Original assignee: Peking University
Current assignee: Peking University
Priority date: 2009-06-03
Filing date: 2009-06-03
Publication date: 2010-12-08

Abstract

本发明公开了玉米血管紧张素转移酶抑制肽的制备方法及其作为制备降血压药物、保健食品或食品的用途。通过对玉米寡肽混合物一步的分离筛选，就纯化出抑制血管紧张素转移酶酶的高活性组分，通过质谱鉴定玉米血管紧张素转移酶抑制肽含有两种二肽，分别为Ala-Leu和Ala-Tyr。以上玉米血管紧张素转移酶抑制肽由于其均从天然食用蛋白中提取，无副作用，较传统降血压药物有更好的安全性，适合高血压患者使用。

Description

一种玉米血管紧张素转移酶抑制肽的制备方法及其应用

技术领域

本发明涉及两种玉米血管紧张素转移酶抑制肽的制备方法及其应用，具体来说是从玉米寡肽混合物中通过一步分离，制备出含有两种二肽的玉米血管紧张素转移酶抑制肽。该玉米血管紧张素转移酶抑制肽作为制备降血压药物、保健食品或食品的用途，属医药和食品保健领域。

背景技术

我国是高血压病高发的国家。近年来，随着国家经济发展、人均寿命的延长、人民生活水平的提高，生活节奏的加快和生活方式的改变，高血压及其引发的冠心病、脑卒中等高致残、致命性疾病发病率日益攀升。研究表明，年龄在40～70岁之间，收缩压每增加20mmHg或舒张压每增加10mmHg，心血管突发事件的危险性就增加一倍。根据2004年10月国家卫生部等联合发布的“中国居民营养与健康现状”调查报告显示，我国18岁及以上居民高血压患病率为18.8％，估计全国患病人数为1.6亿多。与1991年相比，患病率上升了31％，患病人数增加了7000多万。最新的调查结果显示，我国人群高血压的知晓率为30.2％，治疗率为24.7％，控制率仅为6.1％，仍处于较差水平。高血压不仅是一种常见的心血管疾病，而且也是其他心血管病的主要危险因素，目前已成为全球范围内的重要公共卫生问题。因此提高对高血压病的认识，针对病因进行早期预防、及时治疗具有极其重要的意义。

血管紧张素转换酶抑制剂(Angiotensin Converting Enzyme Inhibitor，ACEI)是国内外最常用的一线抗高血压药物之一。ACEI通过抑制血管紧张素转移酶的活性，阻止血管紧张素的生成，从而实现降低血压的目标。不过，常规的ACEI药物具有非常明显的副作用，主要分为两类。第一类副作用有：(1)咳嗽。咳嗽是ACEI常见的副作用，其发病率在白人中约为10％，但在亚洲人中可高达44％，女性高于男性。其原因可能与ACEI造成缓激肽堆积有关。(2)血管水肿。其发病机率为0.1％～0.2％，并且可能有生命危险。(3)低血压、高血钾。在低钠饮食和利尿剂应用等肾素依赖状态，ACEI引起低血压的机会较高；ACEI由于能减少醛固酮，可引起高血钾；肾功能受损的病人应用ACEI，容易发生高血钾。(4)孕妇使用ACEI可致胎儿畸形。另一类副作用与疏基有关，包括中性白细胞减少症(0.05％)、肾病综合和皮症(1％)。

随着科学技术的发展和人们物质生活水平的提高，人们对ACEI药物的疗效、安全性及耐受性提出了更高要求。近年来，为了寻找更理想的ACEI，研究者们开始把目标转向了天然产物，尤其是那些安全性高、副作用少的食物及天然药物资源。

血管紧张素转移酶抑制肽(Angiotensin Converting Enzyme Inhibitory Peptide，ACEIP)是一类能降低血压的生物活性肽。它通过抑制血管紧张素转化酶的活性，使收缩血管物质血管紧张素II浓度降低和舒张血管物质缓激肽浓度升高，从而达到降低血压的效果。Ferreira首次在南美茅头蝮蛇(Bothropsjararaca)毒液中发现了血管紧张素转移酶抑制肽，随后多种ACE抑制肽应运而生。近年来研究发现，一些食源性蛋白包括乳清蛋白、玉米蛋白、鱼类蛋白等，经过酶解后，其水解物表现出降血压活性，并从中分离出明确结构和功能的肽段。天然来源的血管紧张素转移酶抑制肽具有安全性高，毒副作用小，易吸收等特点，有着合成化学药物不可比拟的优越性，成为降血压药物、保健食品或食品的开发热点之一。

玉米寡肽是以玉米蛋白为主要原料，经蛋白酶水解技术生产的一组分子量小于1000的多肽混合物，具有容易吸收、吸收快、低粘度、水溶性好等特点。李素芬等人在《Protamex～酶解玉米蛋白质制备生物活性玉米肽的研究》(农产品加工，2007.6)的研究中，黄家音等人在《玉米蛋白制备降血压肽的研究》(食品科学，2007.6)的研究中，李世敏等人在《玉米降血压肽的分离纯化研究》(食品科学，2006.7)的研究中，都提出玉米蛋白通过蛋白酶水解制备玉米肽混合物，并做了初步的分离发现对血管紧张素转化酶有抑制作用，但是都没有明确提出其中玉米肽中起降血压作用的具体血管紧张素转移酶抑制肽序列。在专利(CN1799395A)中鉴定出一种降血压九肽，为Leu-Leu-Pro-Pro-Tyr-Leu-Ser-Pro-Ala。而本发明提出了两种新的血管紧张素转移酶抑制肽，分别为Ala-Leu和Ala-Tyr。

发明内容

为了解决目前的降血压生物活性肽大多是混合物，且不能阐述发挥降压作用的血管紧张素转移酶抑制肽成分的问题，本发明提供从玉米寡肽混合物中通过一步分离制备玉米血管紧张素转移酶抑制肽的方法，明确提出两种血管紧张素转移酶抑制肽的成分。分离制备出的含有两种二肽的玉米血管紧张素转移酶抑制肽作为制备降血压药物、保健食品或食品的用途。

血管紧张素转移酶抑制肽是一类能降低血压的生物活性肽，它通过抑制血管紧张素转化酶的活性，使收缩血管物质血管紧张素II浓度降低和舒张血管物质缓激肽浓度升高，从而达到降低血压的效果。通过对玉米寡肽混合物的一步分离纯化，筛选出血管紧张素转移酶抑制高活性组分，其血管紧张素转移酶抑制活性IC₅₀为14.8μmol/L(IC₅₀是在一定条件下抑制血管紧张素转移酶活性一半所需要的抑制剂浓度，IC₅₀越小说明其血管紧张素转移酶抑制活性越高)。通过质谱鉴定出该组分中含有两种二肽，分别为Ala-Leu和Ala-Tyr。该种玉米降血压肽由于其从天然食用蛋白中提取，无副作用，较传统降血压药物有更好的安全性，适合高血压患者使用。

所述降血压药物、保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或口服液。所述降血压食品为淀粉制品、乳或乳制品、豆制品或烘焙食品。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式对本发明作进一步的说明。

实施例：

本发明给出玉米血管紧张素转移酶抑制肽的一步分离制备方法及其应用。

玉米寡肽有北京中食海氏生物技术有限公司提供，粉末状，呈淡黄色。将玉米配制成10mg/mL，进行高效液相色谱分离。色谱柱为XBridge BEH130 C18反相柱(4.6mm×250mm，美国Waters公司)，液相条件为：流动相A为水，流动相B为80％乙腈，流速为0.6mL/min，柱温为30℃。洗脱程序见表1.

表1液相洗脱程序

通过液相分离出各组分进行血管紧张素转移酶抑制率的评价，筛选出血管紧张素转移酶抑制率活性最高的组分，其血管紧张素转移酶抑制活性IC₅₀为14.8μmol/L(IC₅₀是在一定条件下抑制血管紧张素转移酶活性一半所需要的抑制剂浓度，IC₅₀越小说明其血管紧张素转移酶抑制活性越高)。将该组分通过Q-TOF质谱鉴定，分别为Ala-Leu和Ala-Tyr。

以下给出降血压活性评价原理及方法。

1.测定原理

测定血管紧张素转移酶抑制肽活性的方法普遍采用的是修改自Cushman和Cheun(1971)的试验方法。血管紧张素转移酶可以把血管紧张素I C端的两个氨基酸(His-Leu)切下，释放出血管紧张素II。测定活性就是利用该特性，以Hip-His-Leu(HHL)为血管紧张素转移酶的底物，经血管紧张素转移酶作用后，HHL末端的His-Leu被切下，释放出马尿酸(Hippuric acid)，血管紧张素转移酶活力越强，所释放的马尿酸越多。马尿酸在228nm有最大吸收峰。根据这个原理，在血管紧张素转移酶与底物的反应体系中加入抑制物，通过计算马尿酸的生成量来进行抑制活性的比较。

Claims

1.玉米血管紧张素转移酶抑制肽，其特征在于：该玉米血管紧张素转移酶抑制肽包括Ala-Leu(中文名称为丙氨酸-亮氨酸，简写名称为AL)和Ala-Tyr(中文名称为丙氨酸-酪氨酸，简写名称为AY)两种二肽。

2.玉米血管紧张素转移酶抑制肽的制备方法，其特征在于：通过对玉米寡肽混合物的一步的高效液相色谱分离筛选，就纯化出抑制ACE酶的高活性组分，并通过质谱鉴定玉米血管紧张素转移酶抑制肽。

3.根据权利要求1、2所述的玉米血管紧张素转移酶抑制肽，其特征在于：以上两种二肽与降血压功能相关，作为制备降血压药物、保健食品或食品的用途。

4.根据权利要求1、2、3所述的玉米血管紧张素转移酶抑制肽，其特征在于：所述降血压药物、保健食品为粉剂、颗粒剂、胶囊、片剂、丸剂或口服液。

5.根据权利要求1、2、3、4所述的玉米血管紧张素转移酶抑制肽，其特征在于：所述降血压食品为淀粉制品、乳或乳制品、豆制品或烘焙食品。