CN108623654B - 一种玉米活性肽及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及生物技术领域，公开了一种玉米活性肽及其制备方法和应用。本发明所述制备方法先离心去除玉米浆中的不溶性物质，然后将玉米浆pH值调节至2.0‑4.2，温度调节至20‑55℃，而后通过强酸型阳离子交换树脂柱，先用2‑3倍柱体积的洗脱液I洗脱后弃去，再用2‑5倍柱体积含有氯化钠的洗脱液II洗脱，收集电导20‑50mS/cm区域的洗脱部分，调节酸度后，经脱盐、灭菌、干燥，获得所述玉米活性肽。本发明以离子交换吸附为基础，通过调控其中的pH值和洗脱程序，使得获得的玉米活性肽中含有较高比例的小分子量多肽，并且Ala、Leu、Pro、Val、Phe和Ile丰度较高，具有较佳的ACE抑制活性。

Description

一种玉米活性肽及其制备方法和应用
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体的说是涉及一种玉米活性肽及其制备方法和应用。
背景技术
玉米是我国传统的农作物，2015年产量超过2.2亿吨，已跃居三大粮食作物(玉米、稻谷、小麦)产量之首，在国民经济的发展中具有举足轻重的地位。玉米80％以上成分为淀粉类物质，因此大量用于生产淀粉，然而在淀粉生产过程中，会产生大量的副产物如湿磨法生产玉米淀粉时，首先要将玉米粒放在水中浸泡，一般吨玉米会产生0.8m3的浸泡水，玉米浸泡水又称为玉米稀浆，一般进行浓缩处理产生玉米浓浆，两种统称为玉米浆。在浸泡过程中，玉米种皮通透性增加，玉米种粒中的一些可溶性蛋白质、无机盐和糖进入到浸泡水中。其中，干物质的成分主要为(以各成分的干重计)：粗蛋白47wt％，总糖11wt％，灰分19wt％，总酸19wt％，以及维生素2wt％等。
目前玉米浆的利用途径主要有生产植酸钙、肌醇，以及用作微生物生长的有机氮源，常作为高效的菌种发酵培养基原料促进如青霉素等抗生素的生物合成，对玉米浆中蛋白资源的利用仍然较少。针对玉米浆中蛋白的分离利用，CN104938763A公开了一种从玉米原浆中分离蛋白的方法，利用常规的玉米浆蒸发温度对玉米浆中的蛋白性质的影响，通过物理手段分离得到具有很高营养价值的蛋白产品，同时大大改善了玉米浆的流动性和可操作性。 CN104630316A公开了一种从玉米浆液中提取蛋白和菲汀的综合工艺，包括向玉米浆液中加入蛋白酶并控制水解程度，将除去杂质的玉米浆酶解液进行膜过滤，分别得到菲汀和蛋白产品。该工艺在不影响膜通量的情况下，最大限度的提取了玉米浆液中的大分子蛋白，在不影响菲汀产品质量的条件下，将其它的大分子有机成分最大程度地提取出来并转化成相应的产品。
生物活性肽是蛋白质中二肽到复杂的线性、环形结构的不同肽类的总称，是源于蛋白质的多功能化合物。但是，上述现有工艺中所获得蛋白多为大分子量的蛋白，应用到食品中存在利用率较低的问题。而由2-6个氨基酸组成，分子量集中在1000Da以下的活性肽可以不经肠胃消化而被直接吸收，从而使其在食品中的应用成为可能。
此外，不同分子量的活性肽其活性也不同，例如促进免疫、激素调节、抗菌、抗病毒、降血压、降血脂等作用。在过去的50多年里，于1958～1959、 1979～1980、1991和2002年共进行过4次全国范围内的高血压抽样调查，中国 15岁以上人群高血压患病率分别为5.1％、7.7％、13.6％和17.6％，呈逐年上升趋势。根据国务院新闻办发布《中国居民营养与慢性病状况报告(2015年)》，中国18岁及以上居民高血压患病率为25.2％，根据2010年第六次全国人口普查数据，测算中国高血压患病人数为2.7亿。血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme，ACE，EC 3.4.15.1)在血压调节中发挥着重要作用，首先可作用于肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin-angiotensin system)，将十肽的血管紧张素Ⅰ裂解成具有收缩血管作用的血管紧张素Ⅱ，同时能够促进醛固酮分泌，导致水钠滞留，血压升高。其次，作用于激肽释放酶-激肽系统(kallikrein kinin system)系统，使具有血管舒张作用的舒缓激肽转变为没有活力的缓释肽，导致血压进一步升高。利用ACE抑制剂抑制 ACE活性，从而阻碍血管紧张素I转化为血管紧张素II，已成为高血压防治中的主要手段。ACE抑制肽主要通过人工合成或蛋白生物酶解制备的方式获得。近年来从天然动、植物资源中提取安全有效、无毒副作用的ACE抑制肽，已成为高血压防治研究中的一个热点。如通过体外酶解从果蔬、乳类、肉类、豆类等食材或工业加工副产品以及中草药中制备分离ACE抑制肽。如 CN201180034661公开了一种从玉米胚芽蛋白中采用复合酶对玉米胚芽蛋白连续酶解，然后通过离心、超滤、浓缩和喷雾干燥等工序，制得玉米降压活性肽。但是目前鲜有针对玉米浆中原有的肽类物质进行开发利用。
根据报道当C端氨基酸侧链具有大体积基团或疏水基团的二肽具有较高的ACE抑制活性，如出现在C端的Phe、Trp、Tyr的二肽呈现极高的正相关性，此外Ile和Leu也呈现出较弱的正相关；而Gly则呈现出最强的负相关性。对于三肽而言C端为芳香族氨基酸，N端为疏水氨基酸的三肽具有较高的ACE抑制活性，当三肽N端为Ile、Leu和Val，N2位为Trp、Arg、Lys、His，C端为Phe、 Trp、Tyr、Pro时与ACE抑制率间呈现较强的正相关性，如Leu-Arg-Pro、Leu-Ser-Pro、Leu-Gln-Pro；当三肽N端为Asp、Glu和His，C端为时Gly、Ser 和Thr时呈现较强的负相关性。因此，如果玉米活性肽分子量小于1000Da的小肽占比较大，并且其中Ala、Leu、Pro、Val、Phe和Ile丰度较高，则无疑是活性较佳的ACE抑制剂，但是目前尚未有相关的工艺技术能够从玉米浆中提取获得高质量的活性肽。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种玉米活性肽的制备方法，使得该制备方法能够从玉米浆中分离获得的分子量小于1000的活性肽具有较高的比例，并且其中Ala、Leu、Pro、Val、Phe和Ile丰度较高，能够应用到ACE 抑制剂制备中。
本发明的另外一个目的在于提供一种玉米活性肽的制备方法，使得该制备方法能够显著降低总肽穿透率，至50％以下。
为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种玉米活性肽的制备方法，包括：
步骤1、离心去除玉米浆中的不溶性物质；
步骤2、将去除不溶性物质的玉米浆pH值调节至2.0-4.2，温度调节至 20-55℃，而后通过强酸型阳离子交换树脂柱，先用2-3倍柱体积的洗脱液I 洗脱后弃去，再用2-5倍柱体积含有氯化钠的洗脱液II洗脱，收集电导20-50 mS/cm区域的洗脱部分；所述洗脱液I为含有盐酸、乳酸、乙酸、柠檬酸、酒石酸中的一种或几种的水溶液，其与通过强酸型阳离子交换树脂柱的玉米浆的pH相同；
步骤3、所述电导20-50mS/cm区域的洗脱部分调节酸度后，经脱盐、灭菌、干燥，获得所述玉米活性肽。
针对现有活性肽提取工艺中缺少利用玉米浆原料制备小分量和具有高 ACE抑制活性的活性肽的方法，本发明以离子交换技术为基础提供一整套分离提取工艺，所制备的玉米活性肽具备较高品质，解决了现有工艺的问题。
作为优选，步骤2中所述pH值调节至2.5-3.5，所述温度调节至25-35℃；在本发明的具体实施方式中，所述pH值可以调节为2.0、2.5、3.0或3.5，所述温度可以调节至20℃、25℃、30℃、35℃或55℃。
作为优选，所述强酸型阳离子交换树脂柱为SP Sephadex C-50柱、SP SepharoseFast Flow柱或001×7型阳离子交换树脂柱。其中，所述强酸型阳离子交换树脂柱柱体积CV：玉米浆体积＝1：(1-5)，具体可选自1:1、1:2 或1:5。
作为优选，所述含有氯化钠的洗脱液II为pH为2-13的含有氯化钠的酸溶液、碱溶液或水溶液。其中，所述酸为盐酸或乙酸，对应于pH值＜7，所述碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氨水，对应于pH值大于7，当pH值＝7时即为含有氯化钠的水溶液，所述氯化钠的浓度介于0.5-2M，可具体选自0.5M、 0.8M、1.0M、1.2M或2.0M。
作为优选，洗脱液II洗脱时流速为0.1～1.5m/h，更优选为0.2～1.1m/h。
作为优选，步骤3为：
所述电导20-50mS/cm区域的洗脱部分调节pH值至5.5～6.5，然后使用离子交换膜组脱盐，或经过浓缩，浓缩液使用离子交换膜组脱盐，获得含肽物料；含肽物料经过瞬时高温灭菌后进行喷雾干燥，获得玉米活性肽。更具体地，所述电导20-50mS/cm区域的洗脱部分调节pH值至5.5～6.5，然后使用EDA2型均相阴离子交换膜和EDC2型均相阳离子交换膜脱盐，或经过浓缩器蒸发浓缩，真空度-0.04～-0.1MPa，蒸发温度65～85℃，获得干物质含量为20％～45％的浓缩液，然后使用EDA2型均相阴离子交换膜和EDC2型均相阳离子交换膜脱盐，获得含肽物料；含肽物料经过140℃，15s-20s的瞬时高温灭菌后进行喷雾干燥：进出风温度分别为140℃～180℃和50℃～80℃，最终得到含水量为3％～8％的玉米活性肽。
作为优选，所述收集电导20-50mS/cm区域的洗脱部分可以选择为收集电导25-45mS/cm、20-35mS/cm、31-40mS/cm、35-42mS/cm、33-50mS/cm 或28-42mS/cm区域的洗脱部分。
采用本发明所述制备方法可将总肽穿透率降低至50％以下，即提高了玉米浆中肽类物质的提取效率，可以从玉米浆中获得更多肽组分，同时也可以大大增加筛选出更多功能性肽的概率。
因此，本发明还提供了由本发明任意一项制备方法制备的玉米活性肽，本发明制备方法制备的玉米活性肽，分子量小于1000Da的活性肽占75％以上，游离氨基酸含量低于8％，二肽以上组分的缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸占比依次为8.3％～10.2％、9.9％～12.1％、4.9％～6.1％、19％～24％、 8.8％～10.9％。同时，ACE抑制IC50介于0.5-2.0mg/mL，具备较佳的ACE抑制活性。基于以上的技术效果，本发明提供了所述玉米活性肽在制备ACE抑制剂中的应用。
由以上技术方案可知，本发明以离子交换吸附为基础，通过调控其中的 pH值和洗脱程序，使得获得的玉米活性肽中含有较高比例的小分子量多肽，并且Ala、Leu、Pro、Val、Phe和Ile丰度较高，具有较佳的ACE抑制活性。
附图说明
图1所示为实施例1中玉米活性肽离子交换色谱图及分离过程各组分 BCA测定值；
图2所示为实施例2的玉米活性肽的离子交换色谱图；
图3所示为对比例1的玉米活性肽的离子交换色谱图；
图4所示为对比例2的玉米活性肽的离子交换色谱图；
图5所示为本发明实施例2和实施例3中玉米活性肽浓度与ACE抑制率的影响效应图。
具体实施方式
本发明实施例公开了一种玉米活性肽及其制备方法和应用。本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的玉米活性肽及其制备方法和应用已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品、制备方法和应用进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。
在具体实施方式中玉米原料来源相同，涉及的检测参照以下相关标准：
分子量测定根据国标方法《GB/T 22492-2008》；
肽穿透率定义为流穿离子交换柱的玉米浆中所含大于180kDa至 5000kDa的肽含量与进样前玉米浆中该范围内的肽含量的比值百分数；
BCA蛋白测定根据PierceTM BCA Protein Assay Kit使用说明；
总氨基酸测定根据国标方法《GB/T 5009.124-2003》；
游离氨基酸测定根据国标方法《GB/T 30987-2014》；
ACE抑制活性测定：先将5μL的ACE加入10μL样品在37C下恒温 5min，然后加入50μL的6.5mmol/L Hip-His-Leu(用100mmol/L的硼酸盐缓冲液配制，含300mmol/L的NaCl，pH8.3)，在37℃下恒温反应30min 后加入85μL的1mol/L HCl溶液终止反应。用HPLC进行分析，分析条件为：ZORBAX-C18柱(4.6×150mm，5μm)；柱温25℃，检测波长228nm，进样量5μL，洗脱液为超纯水-乙腈(85：15，超纯水含0.1％冰醋酸和0.05％三乙胺)，洗脱液流速前8分钟0.5mL/min，而后增加为1.0mL/min。同时用10μL 100mmol/L、pH8.3的硼酸盐缓冲液做空白实验。降血压肽对ACE 的抑制率：R＝(A－B)÷A×100％，式中：R—降压肽对ACE的抑制率； A—空白对照组Hip的峰面积；B—降压肽组Hip的峰面积。
ACE的抑制能力一般用IC50衡量，即抑制50％ACE活性所需ACE抑制肽的浓度。计算时以log[ACEI]对log(R/(1-R))作图，得到方程Y＝aX+b，Y为 log(R/(1-R))(2)计算Y＝0时X的值，X取反对数即得IC50。可参见附图5 针对实施例2和3玉米活性肽的计算。
为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种玉米活性肽及其制备方法和应用进行详细说明。
实施例1：本发明所述制备方法
选取固形物9％，浸泡时间40小时的玉米浆300g，使用离心机在4000g 下去除不溶性物质后盐酸调节清液的pH至2.0，温度调节至20℃，而后通过SP Sephadex C-50装填的离子交换柱(柱体积CV：玉米浆＝1:1)，先用3倍柱体积的盐酸洗脱液I(pH与通过交换柱的玉米浆相同)洗脱后弃去洗脱液，再用5倍柱体积含有2M氯化钠的洗脱液II(pH2.0，盐酸)洗脱，流速为0.1 m/h，收集电导25～45mS/cm区域的洗脱部分；该步骤肽穿透率为34％；调节所收集的洗脱部分pH至6.0后，使用自制电渗析器，采用EDA2型均相阴离子交换膜和EDC2型均相阳离子交换膜(山东天维膜技术有限公司)，向反应器样品室加入洗脱部分，两边渗析室加入蒸馏水作为渗析液，待电导率基本不再变化后停止。脱盐后的含肽物料经过旋转蒸发仪(上海亚荣RE-3000A) 浓缩，真空度-0.09MPa，蒸发温度65℃，获得干物质含量为20％的浓缩液；浓缩液经过140℃，15s-20s的瞬时高温灭菌后进行喷雾干燥：进出风温度分别为140℃和50℃，最终得到含水量为8％的玉米活性肽粉。
该实施例玉米活性肽ACE抑制IC50为1.09mg/mL，分子量小于1000Da的活性肽占79％，游离氨基酸含量5.10％，二肽以上组分的缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸占比依次为9.30％、9.90％、5.10％、19％、9.20％。玉米活性肽离子交换色谱图及分离过程各组分BCA测定值见图1。
实施例2：本发明所述制备方法
选取固形物9％，浸泡时间48小时的玉米浆300g，使用离心机在4000g 下去除不溶性物质后盐酸调节清液的pH至2.0，温度调节至25℃，而后通过 SP Sephadex C-50装填的离子交换柱(柱体积CV：玉米浆＝1:1)，先用2倍柱体积的盐酸和柠檬酸洗脱液I(pH与通过交换柱的玉米浆相同)洗脱后弃去洗脱液，再用3倍柱体积含有1.2M氯化钠的洗脱液II(pH12.0，氨水)洗脱，流速为0.2m/h，收集电导20～35mS/cm区域的洗脱部分；该步骤肽穿透率为36％；调节所收集的洗脱部分pH至6.5后，使用实施例1中方法脱盐。脱盐后的含肽物料经过旋转蒸发仪浓缩，真空度-0.08MPa，蒸发温度70℃，获得干物质含量为32％的浓缩液；浓缩液经过140℃，15s-20s的瞬时高温灭菌后进行喷雾干燥：进出风温度分别为180℃和80℃，最终得到含水量为3％的玉米活性肽粉。
该实施例玉米活性肽ACE抑制IC50为1.74mg/mL，分子量小于1000Da的活性肽占85％，游离氨基酸含量5.60％，二肽以上组分的缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸占比依次为9.10％、12.10％、6.10％、22％、10.10％。玉米活性肽离子交换色谱图见图2。
实施例3：本发明所述制备方法
选取固形物15％，浸泡时间35小时的玉米浆300g，使用离心机在4000 g下去除不溶性物质后盐酸调节清液的pH至2.5，温度调节至30℃，而后通过SP Sepharose Fast Flow装填的离子交换柱(柱体积CV：玉米浆＝1:2)，先用2倍柱体积的盐酸洗脱液I(pH与通过交换柱的玉米浆相同)洗脱后弃去洗脱液，再用2倍柱体积含有1M氯化钠的洗脱液II(pH13.0，氢氧化钠) 洗脱，流速为0.16m/h，收集电导31～40mS/cm区域的洗脱部分；该步骤肽穿透率为37％；调节所收集的洗脱部分pH至5.5后，使用旋转蒸发仪浓缩，真空度-0.08MPa，蒸发温度70℃，干物质含量为25％；浓缩液使用实施例1 中方法脱盐。脱盐液经过140℃，15s-20s的瞬时高温灭菌后进行喷雾干燥：进出风温度分别为150℃和60℃，最终得到含水量为5％的玉米活性肽粉。
该实施例玉米活性肽ACE抑制IC50为0.86mg/mL，分子量小于1000Da的活性肽占75％，游离氨基酸含量7.90％，二肽以上组分的缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸占比依次为8.30％、10.70％、4.90％、21％、8.80％。
实施例4：本发明所述制备方法
选取固形物14％，浸泡时间40小时的玉米浆300g，使用离心机在4000 g下去除不溶性物质后盐酸调节清液的pH至3.5，温度调节至25℃，而后通过SP Sepharose Fast Flow装填的离子交换柱(柱体积CV：玉米浆＝1:2)，先用3倍柱体积的乙酸洗脱液I(pH与通过交换柱的玉米浆相同)洗脱后弃去洗脱液，再用5倍柱体积含有0.5M氯化钠的洗脱液II(pH12.0，氢氧化钾) 洗脱，流速为0.6m/h，收集电导35～42mS/cm区域的洗脱部分；该步骤肽穿透率为42％；调节所收集的洗脱部分pH至6.0后，使用旋转蒸发仪浓缩，真空度-0.08MPa，蒸发温度70℃，干物质含量为24％；使用实施例3相同操作和参数进行脱盐、灭菌、干燥，即得。
该实施例玉米活性肽ACE抑制IC50为1.21mg/mL，分子量小于1000Da的活性肽占78％，游离氨基酸含量7.33％，二肽以上组分的缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸占比依次为10.20％、118％、5.10％、22％、9.10％。
实施例5：本发明所述制备方法
选取固形物33％，浸泡时间35小时pH 4.2的玉米浆300g，使用离心机在4000g下去除不溶性物质后盐酸调节清液的pH至4.2，温度调节至35℃，而后通过001×7型阳离子交换树脂装填的离子交换柱(柱体积CV：玉米浆＝1:5)，先用2.5倍柱体积的乳酸洗脱液I(pH与通过交换柱的玉米浆相同) 洗脱后弃去洗脱液，再用3倍柱体积含有0.8M氯化钠的洗脱液II(pH12.0，氢氧化钠)洗脱，流速为1.1m/h，收集电导33～50mS/cm区域的洗脱部分；该步骤肽穿透率为49％；调节所收集的洗脱部分pH至6.5后，使用实施例1 中方法脱盐。脱盐后的含肽物料经过旋转蒸发仪浓缩，先在-0.04MPa，85℃浓缩至20％，再在-0.06MPa，75℃浓缩至33％，然后在-0.08MPa，65℃浓缩至45％；浓缩液经过140℃，15s-20s的瞬时高温灭菌后进行喷雾干燥：进出风温度分别为150℃和60℃，最终得到含水量为5％的玉米活性肽粉。
该实施例玉米活性肽ACE抑制IC50为1.69mg/mL，分子量小于1000Da的活性肽占82％，游离氨基酸含量4.50％，二肽以上组分的缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸占比依次为9.30％、11.60％、5.80％、24％、10.90％。
实施例6：本发明所述制备方法
选取固形物18％，浸泡时间42小时的玉米浆300g，使用离心机在4000 g下去除不溶性物质后盐酸调节清液的pH至3.0，温度为55℃，而后通过001 ×7型阳离子交换树脂装填的离子交换柱(柱体积CV：玉米浆＝1:2)，先用 3倍柱体积的盐酸洗脱液I(pH与通过交换柱的玉米浆相同)洗脱后弃去洗脱液，再用3倍柱体积含有1M氯化钠的洗脱液II(pH7.0)洗脱，流速为1.5m/h，收集电导28～42mS/cm区域的洗脱部分；该步骤肽穿透率为39％；调节所收集的洗脱部分pH至6.5后，使用实施例1中方法脱盐。脱盐后的含肽物料经过旋转蒸发仪浓缩，真空度-0.08MPa，蒸发温度70℃，干物质含量为24％；浓缩液经过140℃，15s-20s的瞬时高温灭菌后进行喷雾干燥：进出风温度分别为150℃和60℃，最终得到含水量为5％的玉米活性肽粉。
该实施例玉米活性肽ACE抑制IC50为1.33mg/mL，分子量小于1000Da的活性肽占78％，游离氨基酸含量6.29％，二肽以上组分的缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸占比依次为9.70％、11.30％、6％、20％、8.90％。
对比例1：对照制备方法
选取固形物9％，浸泡时间48小时的玉米浆300g，使用离心机在4000g 下去除不溶性物质后氢氧化钠调节清液的pH至5.0，温度25℃，而后通过SP Sepharose Fast Flow装填的离子交换柱(柱体积CV：玉米浆＝1:1)，先用3 倍柱体积的磷酸洗脱液I(pH与通过交换柱的玉米浆相同)洗脱后弃去洗脱液，再用10倍柱体积含有1M氯化钠的洗脱液II(pH7.0)洗脱，流速为0.2 m/h，肽穿透率为66％。本对比例中肽的高穿透率造成其洗脱收率很低，故将洗脱液II全部收集。调节所收集的洗脱部分pH至6.5后，使用实施例1中方法脱盐。脱盐后的含肽物料经过冷冻干燥：48小时，-40℃至22℃，最终得到得到含水量为5.4％的粉末样品。
该对比例粉末样品的ACE抑制IC50为3.57mg/mL，分子量小于1000Da的活性肽占64％，游离氨基酸含量19％，二肽以上组分的缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸占比依次为4.70％、5.10％、3.20％、14％、8.90％。
对比例2：对照制备方法
选取固形物9％，浸泡时间48小时，pH4.0的玉米浆300g，使用离心机在4000g下去除不溶性物质后，温度25℃，而后通过CM Sepharose Fast Flow 装填的离子交换柱(柱体积CV：玉米浆＝1:1)，先用3倍柱体积的磷酸洗脱液I洗脱后弃去洗脱液，再用8倍柱体积含有1M氯化钠的洗脱液II(pH7.0) 洗脱，流速为0.2m/h，肽穿透率为82％。本对比例中肽的高穿透率造成其洗脱收率很低，故将洗脱液II全部收集。调节所收集的洗脱部分pH至6.5后，使用实施例1中方法脱盐。脱盐后的含肽物料经过冷冻干燥：48小时，-40℃至22℃，最终得到得到含水量为4％的粉末样品。
该对比例粉末样品的ACE抑制IC50为3.44mg/mL，分子量小于1000Da的活性肽占49％，游离氨基酸含量26％，二肽以上组分的缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸占比依次为6.40％、6.10％、4.70％、15％、8.10％。
以上实施例的说明只是用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也落入本发明权利要求的保护范围内。

Claims (8)

1.一种玉米活性肽的制备方法，其特征在于，包括：
步骤1、离心去除玉米浆中的不溶性物质；
步骤2、将去除不溶性物质的玉米浆pH值调节至2.0-4.2，温度调节至20-55℃，而后通过阳离子交换树脂柱，所述阳离子交换树脂柱 为SP Sephadex C-50柱、SP SepharoseFastFlow柱或001×7型阳离子交换树脂柱中的任一种；先用2-3倍柱体积的洗脱液I洗脱后弃去，再用2-5倍柱体积含有氯化钠的洗脱液II洗脱，收集电导20-50mS/cm区域的洗脱部分；所述洗脱液I为含有盐酸、乳酸、乙酸、柠檬酸中的一种或几种的水溶液，其与通过阳离子交换树脂柱的玉米浆的pH相同；
步骤3、所述电导20-50mS/cm区域的洗脱部分调节pH值至5.5～6.5后，经脱盐、灭菌、干燥，获得所述玉米活性肽。
2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述pH值调节至2.5-3.5。
3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，所述温度调节至25-35℃。
4.根据权利要求1所述制备方法，其特征是于，所述含有氯化钠的洗脱液II为pH为2-13的含有氯化钠的酸溶液、碱溶液或水溶液。
5.根据权利要求4所述制备方法，其特征在于，所述酸为盐酸或乙酸，所述碱为氢氧化钠、氢氧化钾或氨水。
6.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤3为：
所述电导20-50mS/cm区域的洗脱部分调节pH值至5.5～6.5，然后使用离子交换膜组脱盐，再经过浓缩，获得含肽物料；或，先经过浓缩，浓缩液使用离子交换膜组脱盐，获得含肽物料；
含肽物料经过瞬时高温灭菌后进行喷雾干燥，获得玉米活性肽。
7.权利要求1-6任意一项所述制备方法制备的玉米活性肽，其特征在于，分子量小于1000Da的活性肽占75％以上，游离氨基酸含量低于8％，二肽以上组分的缬氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、脯氨酸占比依次为8.3％～10.2％、9.9％～12.1％、4.9％～6.1％、19％～24％、8.8％～10.9％。
8.权利要求7所述玉米活性肽在制备ACE抑制剂中的应用。
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