CN101904329A - 黄颡鱼精子超低温冷冻及复苏技术 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及黄颡鱼精子超低温冷冻保存以及复苏方法，选择形态正常、生长良好、无疾病、达到性成熟的亲鱼，对其用30μg/kg LHRH-A2腹腔注射进行诱导增精，36h后，解剖取精巢于4℃冰箱中预冷的干净研钵中剪碎，将其与任氏液按1∶6稀释后，经4℃平衡30min，加入10％甲醇混匀，分装，在液氮面上方6cm处平衡10min，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。37℃水浴，激活液SM激活，将黄颡鱼卵挤入容器中，按105∶1的精卵数量比例滴加冻精拌匀，再滴加适量激活溶液SM，拌匀，使卵受精。该发明保存的精子质量高，具备授精能力，其在黄颡鱼的种质保存、遗传育种、可持续养殖及病害防治等方面有着重要的理论意义和应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及黄颡鱼精子超低温冷冻保存以及复苏方法
背景技术
黄颡鱼(Pelteobagrus fulvidraco)，俗称昂刺鱼、黄姑、黄腊丁等，是长江流域一种重要的经济鱼类。因其肉质细嫩，味道鲜美，营养丰富，经济价值高而深授人们的喜爱，成为国内最近几年的新兴淡水养殖品种之一。近年来，长江水域滥捕现象严重，授农药污染程度加刷，使其品质授到了一定程度的破坏。因此，对其进行精子冷冻保存技术的研究对于黄颡鱼种质资源的保护具有重要意义。
发明内容
本发明需要解决的技术问题是提供一种能够便宜、高效、长期保存黄颡鱼精子的超低温冷冻及复苏方法。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案为：
选择雄性成熟黄颡鱼，对其进行诱导增精，采精，添加抗冻液，液氮冷冻保存后，解冻，进行人工授精。
所述雄性成熟黄颡鱼是形态正常、生长良好、无疾病、达到性成熟的原种或良种，对其进行激素诱导增加精量。按30μg/kg LHRH-A2腹腔注射进行诱导增精，36h后，解剖取精巢于4℃冰箱中预冷的干净研钵中剪碎。所用抗冻液是以任氏液为基础液，其中含有抗冻剂10％甲醇。冷冻方法是将精液与任氏液按1∶6稀释后，经4℃平衡30min，加入10％甲醇混匀，分装，在液氮面上方6cm处平衡10min，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。解冻方法是将冻存管在液氮蒸气中平衡5分钟，迅速置于37℃水浴锅中快速晃动至融化。人工授精方法是将卵挤入容器中，按105∶1的精卵数量比例滴加解冻后的精液，拌匀，再滴加适量激活溶液SM，拌匀，使卵受精。
本发明具有操作时间短、诱导效果好、毒性作用少、损伤程度小、成活率高等优点。其在黄颡鱼的种质保存、遗传育种、可持续养殖及病害防治等方面有着重要的理论意义和应用价值。
具体实施方式
黄颡鱼精子超低温冷冻保存以及复苏方法及工艺：
亲鱼的选择：形态正常、生长良好、无疾病、达到性成熟的原种或良种。
配子的采集：在黄颡鱼繁殖期按30μg/kg LHRH-A2腹腔注射进行诱导增精，36h后，解剖取精巢于4℃冰箱中预冷的干净研钵中剪碎。
鲜精活力检测：先用细口吸管吸一滴水于载玻片上，对准视野，然后用针尖挑取上述精液立即于显微镜下边搅匀边观察其活力。
冷冻方法：将精液与任氏液按1∶6稀释后，经4℃平衡30min，加入10％甲醇混匀，分装，在液氮面上方6cm处平衡10min，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。
解冻方法：将冻存管在液氮蒸气中平衡5分钟，迅速置于37℃水浴锅中快速晃动至融化。
冻精活力检测：先用细口吸管吸一滴SM于载玻片上，对准视野，然后用针尖挑取上述精液立即于显微镜下边搅匀边观察其活力。
Claims (2)
1.黄颡鱼精子超低温冷冻保存以及复苏方法，其特征在于：选择形态正常、生长良好、无疾病、达到性成熟的原种或良种，对其进行激素诱导，促进精子成熟，采精，添加抗冻液，液氮冷冻保存后，解冻，进行人工授精。
2.按照权利要求1所述黄颡鱼精子超低温冷冻保存及复苏方法，其特征在于：
(1)在黄颡鱼繁殖期按30μg/kg LHRH-A2腹腔注射进行诱导促熟，36h后，解剖取精巢于4℃冰箱中预冷的干净研钵中剪碎。
(2)所用抗冻液是以任氏液为基础液，其中含有抗冻剂10％甲醇。
(3)冷冻方法是将精液与任氏液按1∶6稀释后，经4℃平衡30min，加入10％甲醇混匀，分装，在液氮面上方6cm处平衡10min，在液氮面上平衡5min后投入液氮中保存。
(4)解冻方法是将冻存管在液氮蒸气中平衡5分钟，迅速置于37℃水浴锅中快速晃动至融化。
(5)，将黄颡鱼卵挤入容器中，按105∶1的精卵数量比例滴加入解冻后的精液，拌匀，再滴加适量激活溶液SM，拌匀，使卵受精。
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