CN101883585A - 包含脂肽和聚i:c作为佐剂的强力疫苗组合物 - Google Patents

包含脂肽和聚i:c作为佐剂的强力疫苗组合物 Download PDF

Info

Publication number
CN101883585A
CN101883585A CN2008801190256A CN200880119025A CN101883585A CN 101883585 A CN101883585 A CN 101883585A CN 2008801190256 A CN2008801190256 A CN 2008801190256A CN 200880119025 A CN200880119025 A CN 200880119025A CN 101883585 A CN101883585 A CN 101883585A
Authority
CN
China
Prior art keywords
antigen
adjuvant
vaccine
skkkk
poly
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN2008801190256A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101883585B (zh
Inventor
文洪模
安秉喆
廉晶善
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
DOBEEL Co Ltd
Original Assignee
DOBEEL Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by DOBEEL Co Ltd filed Critical DOBEEL Co Ltd
Publication of CN101883585A publication Critical patent/CN101883585A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101883585B publication Critical patent/CN101883585B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/145—Orthomyxoviridae, e.g. influenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/29—Hepatitis virus
    • A61K39/292—Serum hepatitis virus, hepatitis B virus, e.g. Australia antigen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P33/00—Antiparasitic agents
    • A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
    • A61P33/06—Antimalarials
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
    • C07K16/081—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from DNA viruses
    • C07K16/082—Hepadnaviridae, e.g. hepatitis B virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55505—Inorganic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55561—CpG containing adjuvants; Oligonucleotide containing adjuvants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
    • C12N2730/00011—Details
    • C12N2730/10011—Hepadnaviridae
    • C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
    • C12N2730/10134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/16011—Orthomyxoviridae
    • C12N2760/16111—Influenzavirus A, i.e. influenza A virus
    • C12N2760/16134—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Abstract

本发明涉及包含脂肽和聚I:C的佐剂。当使用本发明所述包含脂肽和聚I:C的佐剂时，抗原特异性抗体诱导的水平得以协同性地增加，并诱导了Th1型免疫应答。因此，本发明所述的佐剂能够非常有效地在疫苗的制剂中用作佐剂，所述疫苗为用于病毒感染和癌症的预防性和治疗性疫苗。

Description

包含脂肽和聚I:C作为佐剂的强力疫苗组合物
技术领域
本发明涉及包含脂肽和聚I:C(聚肌苷酸:聚胞苷酸)的佐剂，还涉及包含所述佐剂的疫苗。
背景技术
通过加速或放大各种免疫应答诱导过程的一个或多个特异性阶段，佐剂在促进免疫应答方面起到一定作用。因此，当将佐剂与抗原共同给予时，可提高所述抗原的免疫原性和/或改变针对所述抗原的免疫应答种类。这类佐剂的典型实例为油乳剂(弗氏佐剂(Freund′s adjuvant))、单磷酰脂A(MPL)、皂甙Q、氢氧化铝或铝的磷酸盐或钙盐(Alum)、非离子嵌段共聚物表面活性剂、脂多糖、分枝杆菌、破伤风类毒素、CpG等。
单独使用蛋白抗原并不经常诱导足够强的免疫应答以及所需种类的免疫应答，因此所述疫苗组合物通常含有抗原和佐剂。根据免疫应答的双信号模型，通过抗原表位与抗原受体的接合(engagement)进行传输的信号不足以诱导免疫应答，所述抗原表位由MHC分子递呈。需要由共刺激分子产生另外的信号。于是，所述佐剂能够使得由共刺激分子产生的信号强度加强和/或诱导共刺激分子，以及诱导决定免疫应答种类的细胞因子。某些抗原(例如脂蛋白、糖蛋白或全微生物)能够以病原体相关分子模式(PAMP)的形式同时提供表位和佐剂功能。蛋白抗原的一级结构(即抗原的氨基酸序列)不能改变，但可加入适当的佐剂或附属结构来对抗原的PAMP进行修饰和补充以影响免疫原性(Dempsey PW等人，Science 271：348-350，1996；Deres K等人，Nature 342：561-564，1989)。对抗原的分子模式进行修饰可提高免疫原性并影响所诱导的免疫应答的种类。举例来说，在HBV表面抗原的情况下，不含preS1和preS2的S-蛋白在特定的同类系小鼠菌株中没有显示出免疫原性，而含有preS1和preS2的L-蛋白不仅诱导生成针对preS1和preS2的抗体，而且有助于诱导生成针对S抗原的抗体(Milich DR等人，1986，New Approaches toImmunization，pp 377-382，Cold Spring Harbor Laboratories，New York)。在用全病原微生物作为抗原的情况下，预计所述微生物包含各类PAMP，例如脂多糖、核酸、脂蛋白和缀合蛋白(conjugated proteins)。在这种情况下，存在于抗原递呈细胞(APC)表面上的病原体识别受体(PRR)识别出PAMP，从而产生信号以诱导各种共刺激分子和细胞因子，影响免疫应答的种类和量级。举例来说，干扰素γ和IL-12有助于诱导Th1(T辅助细胞1)应答，所述Th1应答在针对病毒感染的免疫应答方面起重要作用。Th1型免疫应答实现IgG2a和IgG2b生成的增加，并诱导强力的细胞介导的免疫应答。于是，各类与抗原有关的PAMP起到佐剂的功能，并且这类佐剂能有助于调节免疫应答。然而，通常情况下，这类天然佐剂与抗原有关的功能不足以强到诱导出所需强度和质量的免疫应答，因而在疫苗制剂方面需要优良的佐剂。
因此，开发良好的佐剂在开发良好的疫苗中是一项非常重要的工作，但佐剂的开发仍然不得不主要依靠经验性的成果。举例来说，Toll样受体(TLR)是参与抗原递呈细胞(APC)的活化和由APC进行抗原递呈的抗原递呈细胞上最重要的PRR。然而，强效抗体应答并非全部取决于TLR信号(Gavin.A.L.等人，Science 314：1936-1938，2006)。进一步地，作为TLR2配体之一的Pam3Cys在独立诱导TLR2免疫应答方面发挥作用(Yoder等人，Infect.Immun.71：3894-3900，2003)。为使得事实更为复杂，良好的保护性免疫应答需要平衡同时包括强的细胞介导的免疫应答以及体液抗体应答在内的免疫应答。因此，对有助于诱导平衡性良好的适应性免疫应答的佐剂进行开发仍然超出了能够合理预测的范围。
在本发明中，关于最众所周知的佐剂氢氧化铝，发明者定义了一种强力的疫苗作为疫苗制剂，所述疫苗能够产生大量高质量的抗原特异性抗体。对于生产优良的预防性疫苗或有效的治疗性疫苗而言，生成适当的、高质量抗体是非常重要的因素。举例来说，IgG同种型在清除肿瘤细胞方面起到不同的作用；相比于IgG1、IgG2b或IgG3，IgG2a是最为有效的一种(Nimmerjahn F & Ravetch JV，Science 310：1510-1512，2005)。已知IgG2a和IgG2b在诱导抗病毒免疫方面最为有效(Coutelier JP等人，J Exp Med 165：64-69，1987；Markine-GorianoffD & Coutelier JP，J of Virol76：432-435，2002)，其通过由Th1细胞产生的细胞因子生成，还可诱导细胞介导的免疫应答。因此，对于生成适当的、高质量抗体而言，Th1细胞应答的诱导是一种良好的指示。作为应用最为广泛的佐剂Alum诱导Th 2型免疫应答，并且所诱导的抗体主要为IgG1。
因此，本发明所述强力的疫苗组合物通过下述内容进行判断：所产生抗原特异性抗体的量；以及与广泛应用的含有Alum佐剂的疫苗相比，高比例的IgG2a/IgG1和IgG2b/IgG1。本发明中所描述的佐剂能诱导强力的抗体应答以及细胞介导的免疫应答，并且能转换免疫球蛋白同种型以生成IgG2a和IgG2b。
本发明者通过证实下述内容完成本发明：包含脂肽和聚I:C(聚肌苷酸:聚胞苷酸)的佐剂组合物要远比常规的佐剂氢氧化铝更为强力，并进一步证实在刺激适应性免疫应答方面，脂肽和聚I:C具有协同作用而非加和作用。尽管已知Pam3Cys和聚I:C在巨噬细胞中诱导TNF-α和IL-6方面具有协同作用(Bagchi，A.等人，J.Immun.178：1164-1171，2007)，但由脂肽和聚I:C组成的类似组合具有平衡性良好的强力佐剂功能是一个意想不到的发现。本发明者进一步证实不需要将脂肽共价连接至抗原。以脂肽、聚I:C和至少一种抗原的混合物的形式制成的简单制剂已经足够。
发明内容
本发明的目的是提供能够有助于抗原诱导强免疫应答的佐剂。
本发明的另一个目的是提供含有上述佐剂和抗原的疫苗组合物。
本发明进一步的目的是提供使用上述佐剂产生适当的、高质量抗体的方法。
本发明的目的还在于提供使用上述佐剂增强Th1免疫应答的方法。
本发明的目的还在于提供用于病毒感染或寄生虫感染的治疗性疫苗，所述治疗性疫苗含有上述佐剂以及至少一种病毒抗原或寄生虫抗原。
本发明的目的还在于提供针对癌症的预防性或治疗性疫苗，所述疫苗含有所述佐剂和至少一种癌特异性抗原。
为实现上述目的，本发明提供了包含脂肽和聚I:C(聚肌苷酸:聚胞苷酸)的佐剂。
本发明还提供了含有上述佐剂和至少一种适当抗原的疫苗组合物。
本发明还提供了用于产生适当的、高质量抗体的方法，所述方法包括将上述疫苗组合物给予对其有需要的受试者的步骤。
本发明还提供了用于增强Th1免疫应答的方法，所述方法包括将上述疫苗组合物给予对其有需要的受试者的步骤。
本发明还提供了针对病毒感染或寄生虫感染的治疗性疫苗，所述治疗性疫苗包含所述佐剂组合物以及至少一种病毒抗原或寄生虫抗原。
本发明还提供了针对癌症的预防性或治疗性疫苗，所述疫苗含有所述佐剂组合物以及至少一种癌特异性抗原。
本发明还提供了所述佐剂以及至少一种病毒抗原或寄生虫抗原在生产用于治疗病毒感染或寄生虫感染的治疗剂方面的用途。
此外，本发明提供了所述佐剂和至少一种癌特异性抗原在生产用于治疗癌症的治疗剂方面的用途。
当本发明所述的佐剂与抗原一起使用时，所述抗原特异性抗体的诱导得到刺激，并且Th1型免疫应答也得到诱导。因此，本发明所述的佐剂作为用于疫苗制剂的佐剂非常有效，所述疫苗制剂用于预防和治疗病毒感染或寄生虫感染、或用于预防和治疗癌症。
附图说明
本发明中优选实施方式的应用参考附图可以得到最好的理解，其中：
图1为显示由各种疫苗制剂所诱发的S-蛋白抗体的滴度的图，所述疫苗制剂含有由L-蛋白(S-蛋白-preS2-preS1)、M-蛋白(S-蛋白-preS2)和S-蛋白组成的L-HBsAg，并以氢氧化铝(Alum)、仅Pam3Cys-SKKKK、仅聚I:C、或者Pam3Cys-SKKKK和聚I:C两者作为佐剂。
图2为显示由各种疫苗制剂诱导的针对preS抗原的抗体滴度的图，所述疫苗制剂含有L-HBsAg，并以Alum、仅Pam3Cys-SKKKK、仅聚I:C、或者Pam3Cys-SKKKK和聚I:C两者作为佐剂。在本实验中，可以发现Pam3Cys-SKKKK和聚I:C之间协同作用的明显效果。
图3为显示由各种不同的疫苗制剂所诱导的抗体同种型的一组图，所述疫苗制剂含有L-HBsAg，并以Alum、仅Pam3Cys-SKKKK；仅聚I:C；或者Pam3Cys-SKKKK和聚I:C两者作为佐剂。
a：每个同种型的抗体滴度；b：IgG2a/IgG1；c：IgG2b/IgG1。
图4为显示针对流感病毒HA抗原的免疫原性的图，所述抗原用下述不同的佐剂进行制剂：Alum、仅Pam3Cys-SKKKK、仅聚I:C、或者Pam3Cys-SKKKK和聚I:C两者。
图5为显示由流感病毒抗原所诱导的抗体同种型的一组图，所述抗原用下述不同类型的佐剂进行制剂：Alum、仅Pam3Cys-SKKKK、仅聚I:C；或者Pam3Cys-SKKKK和聚I:C两者。
a：每个同种型的抗体滴度b：IgG2a/IgG1
图6为显示针对来自多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)的HBsAg抗原(S-蛋白)的免疫原性和针对来自酿酒酵母菌(Saccharomycescereviciae)的preS的免疫原性的图，上述抗原在下述不同的佐剂中进行制剂：Alum、仅Pam3Cys-SKKKK、仅聚I:C、或者Pam3Cys-SKKKK和聚I:C两者。
图7为显示疫苗针对preS抗原的免疫原性的图，所述疫苗用汉逊酵母菌(Hansenula)S-蛋白和来自酵母菌的preS在下述不同的佐剂中进行制剂：Alum、仅Pam3Cys-SKKKK、仅聚I:C、或者Pam3Cys-SKKKK和聚I:C两者。
图8为显示由疫苗诱导的抗体同种型的图，所述疫苗用来自汉逊酵母菌的HBsAg(S-蛋白)和来自酵母菌的preS在下述不同的佐剂中进行制剂：Alum、仅Pam3Cys-SKKKK、仅聚I:C、或者Pam3Cys-SKKKK和聚I:C两者。
a：每个同种型的抗体滴度；b：IgG2a/IgG1；c：IgG2b/IgG1。
图9为显示由各种疫苗制剂所诱发的S-蛋白抗体的滴度的图，所述疫苗制剂含有由L-蛋白(S-蛋白-preS2-preS1)、M-蛋白(S-蛋白-preS2)和S-蛋白组成的L-HBsAg，并以下述物质作为佐剂：氢氧化铝(Alum)、仅Pam3Cys-SKKKK、仅Pam3Cys-SR8、仅FSL-1、仅聚I:C、Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的组合、Pam3Cys-SR8和聚I:C的组合、或者FSL-1和聚I:C的组合。
图10为显示各种疫苗制剂诱导的针对preS抗原的抗体的滴度的图，所述疫苗制剂含有L-HBsAg，并以下述物质作为佐剂：氢氧化铝(Alum)、仅Pam3Cys-SKKKK、仅Pam3Cys-SR8、仅FSL-1、仅聚I:C、Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的组合、Pam3Cys-SR8和聚I:C的组合、或者FSL-1和聚I:C的组合。
在本实验中，可以发现脂肽和聚I:C之间协同作用的明显效果。
图11为显示由各种不同的疫苗制剂所诱导的抗体同种型的一组图，所述疫苗制剂含有L-HBsAg，并以下述物质作为佐剂：氢氧化铝(Alum)、仅Pam3Cys-SKKKK、仅Pam3Cys-SR8、仅FSL-1、仅聚I:C、Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的组合、Pam3Cys-SR8和聚I:C的组合、或者FSL-1和聚I:C的组合。
a：每个同种型的抗体滴度；b：IgG2a/IgG1；c：IgG2b/IgG1。
具体实施方式
在下文中将对本发明进行详细描述。
本发明提供了用于疫苗的佐剂，所述佐剂包含聚I:C(聚肌苷酸:聚胞苷酸)和一种或多种脂肽。
在本发明优选的实施方式中，将脂肽Pam3Cys-SKKKK和聚I:C混合，并用该混合物作为佐剂来制备疫苗，所述疫苗含有L-HBsAg、流感抗原、或是以HBsAg S-蛋白和PreS的混合物作为抗原。经证实，相比于最常用的常规佐剂氢氧化铝，含有Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的混合物的疫苗显著增强了抗原特异性抗体的生成(参见图1、2、4、6和7以及表1、2和3)。
当使用Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的混合物时，在刺激免疫应答方面具有协同作用；也就是说，由所述混合物诱导的pre S抗体的滴度比由所述混合物的各个组分所诱导的抗体滴度的加和值高出数倍。这在图2中得到了最佳的例证，其中对于所述混合物或各个组分进行pre S抗体的抗体滴度的评价。对于S-蛋白抗体诱导的情况，这一协同效应的显著性差一些(图1)。这是因为在所有实验中所使用的抗原的量为饱和量，而不会显示佐剂依赖性的需要量。L-蛋白中的Pre S含量低于总量(5mg)的10％。
当使用已知诱导Th2免疫应答的氢氧化铝对疫苗进行制剂时，IgG1抗体为占主导地位的IgG同种型。而当使用包含Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的混合物进行疫苗制剂时，主要生成IgG2a和IgG2b。因此，相比于由常规佐剂氢氧化铝得到的比值，在使用Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的混合物的情况下，IgG2a/IgG1和IgG2b/IgG1的比值更高(参见图3、5和8以及表1、2和3)。已知IgG2a和IgG2b的增加在防范病毒感染和癌症方面非常有效，这表明新佐剂的使用提高了免疫应答的质量。这一发现表明，本发明所述包含脂肽和聚I:C的佐剂能够有效地用于开发强力的治疗性和预防性的疫苗制剂。
由Metzger等人首次合成了脂肽，作为来源于细菌和支原体的脂肽的合成类似物(Metzger J等人，Int J Peptide Protein Res 37：46-57，1991)。从那以后，已经合成了许多类似物(EMC microcollections GmbHSindelfinger Str.372070 Tubingen，德国)。据报道，通过将一种与流感病毒T细胞表位结合的脂肽Pam3Cys-Ser-Ser给予小鼠，得以诱导病毒特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)(Schild H等人，Eur J Immunol 21：2649-2654，1991)。通常，已知脂肽作为TLR2配体(Trinchieri G & SherA，Nat Rev Immunol 7：179-190，2007)。
在本发明中，所述脂肽由连接至甘油和氨基酸的脂肪酸组成。在每个分子中，脂肽含有一个或多个脂肪酸。所述脂肽可为由部分分子或整个分子组成的脂蛋白，所述分子来源于革兰氏阳性或革兰氏阴性的细菌或支原体。并且，本文所述脂肪酸和氨基酸可通过化学修饰进行合成。本文所述的脂肽例如：Pam3Cys-SKKKK(式1；分子结构：N-棕榈酰基-S-[2，3-双(棕榈酰氧基)-(2RS)-丙基]-[R]-半胱氨酸-SKKKK)、PHC-SKKKK、Ole2PamCys-SKKKK、Pam2Cys-SKKKK、PamCys(Pam)-SKKKK、Ole2Cys-SKKKK、Myr2Cys-SKKKK、PamDhc-SKKKK、PamCSKKKK以及Dhc-SKKKK，但不总限于此。
式1
Figure GPA00001146506300081
聚I:C已经在体外和体内试验中用作I型干扰素的强力诱导物(Magee ME & Griffith MJ，life Science II，11：1081-1086，1972；ManettiYR等人，Eur J Immunol 25：2656-2660，1995)，并且已知诱导树突状细胞(DC)的成熟，所述树突状细胞是哺乳动物体内最为通用的抗原递呈细胞(APC)。成熟的DC能够有效地诱导免疫应答(Rous R等人，International Immunol 16：767-773，2004)。还已知聚I:C作为IL-12诱导物，所述IL-12作为重要细胞因子，其通过促进Th1发育的增强来诱导细胞介导的免疫应答和IgG2a抗体生成。此前还显示了聚I:C的佐剂活性(Cui Z & Qui F，Cancer Immunol Immunotherapy 16：1-13，2005)。
所述聚I:C(聚肌苷酸:聚胞苷酸)是一种合成双链RNA，其长度优选50-2000bp，更优选100-500bp。
本发明提供了含有所述佐剂的疫苗组合物，所述佐剂包含脂肽和聚I:C以及至少一种抗原。更具体地说，本发明提供了包含聚I:C和一种或多种脂肽的佐剂，所述佐剂可协同刺激免疫应答，而并非产生每种佐剂组分的加和效果。
在本发明优选的实施方式中，经证实，通过使用本发明所述佐剂制备的疫苗协同增加了抗原特异性抗体生成以及免疫应答质量的变化，主要诱导出IgG2a以及IgG2b(参见图1-8和表1-3)。因此，含有本发明所述佐剂组分的佐剂组合物能有效地用以增加抗原的免疫原性，并因而提高疫苗的功效。
本文所述的抗原表示能诱导动物或人的免疫系统产生免疫应答的任何物质。其可为全长或片段。所述抗原可作为合成物质、纯化的亚基、全微生物或混合物提供，但优选纯化的抗原。
本文所述的抗原例如重组蛋白、或来自肝炎病毒的肽或来自流感病毒的病毒蛋白，但所述抗原可为多糖、糖蛋白、脂多糖、DNA分子、癌细胞、活病毒或半抗原分子等。所述病原体蛋白例如流感病毒抗原(HA：血凝素或神经氨酸酶抗原)，但其可为百日咳杆菌抗原、百日咳毒素、丝状血凝素、人乳头状瘤病毒(HPV)抗原、幽门螺杆菌抗原(血清群A、B、C、Y和W-135的荚膜多糖)、破伤风类毒素、白喉抗原(白喉类毒素)、肺炎球菌抗原(3型肺炎链球菌荚膜多糖)、结核抗原、人免疫缺陷病毒(HIV)抗原(GP-120、GP-160)、霍乱抗原(霍乱毒素B亚基)、葡萄球菌抗原(葡萄球菌肠毒素B)、志贺氏菌抗原(志贺氏菌多糖)、水疱性口炎病毒抗原(水疱性口炎病毒糖蛋白)、巨细胞病毒(CMV)抗原、肝炎抗原(甲型肝炎(HAV)、乙型肝炎(HBV)、丙型肝炎(HCV)、丁型肝炎(HDV)和庚型肝炎(HGV)：L-HBsAg、S-HBsAg、M-HBsAg、pre S)、呼吸道合胞体病毒(RSV)抗原、单纯疱疹抗原、以及它们的组合(例如：白喉、百日咳和破伤风；DPT)，但不总限于此。
除所述佐剂和抗原外，本发明所述的疫苗组合物可另外包含一种或多种与其具有相同或相似效果的有效成分。除上述有效成分外，为进行给药，所述疫苗组合物也可包含一种或多种药学上可接受的载体。所述药学上可接受的载体可选自于由下列物质所组成的组或通过将其中多于一种成分进行混合而制备：盐水、无菌水、林格氏溶液、缓冲盐水、右旋糖溶液、麦芽右旋糖(maltodextrose)溶液、甘油和乙醇。可加入其他通用的添加剂，例如抗氧化剂、缓冲溶液、抑菌剂等。为制备可注射的溶液例如水溶液、悬浮液和乳液，可另外加入稀释剂、分散剂、表面活性剂、粘合剂和润滑剂。通过Remington′s Pharmaceutical Science(最新版，Mack Publishing Company，Easton，PA)中提供的方法，本发明所述的疫苗组合物可进一步针对每种疾病或根据其成分制备为适当的形式。
本发明所述的疫苗组合物可通过各种途径进行胃肠外给药，所述胃肠外给药包括皮下注射、静脉注射、肌内注射和胸腔内注射。为将所述疫苗组合物制备为用于胃肠外给药的制剂，将所述疫苗组合物与稳定剂或缓冲剂混合，以生成溶液或悬浮液，然后以单剂量或多剂量制剂为安瓿、注射器或小瓶的内容物。
本发明所述的疫苗组合物可根据给药途径制剂为各种形式。举例来说，所述疫苗组合物可制备为用于注射的灭菌水溶液或悬浮液，或制备为冻干形式。所述冻干疫苗组合物通常贮藏于4℃，并可用含有或不含有添加剂(例如盐水和/或HEPES)的稳定剂复水。
本发明所述疫苗组合物的剂量可通过考虑下述因素进行确定：给药方法和频率、或正在治疗的疾病、疾病的严重程度、病史、是否与另一种治疗剂共同治疗、以及年龄、身高、体重、健康状况、或身体条件，但不总限于此。通常，该疫苗组合物的剂量优选随着接受治疗的患者体重的增加而增加。
本发明还提供了用于产生适当的、高质量抗体的方法，所述方法包括将上述疫苗组合物给予受试者的步骤。
在本发明优选的实施方式中，通过使用本发明所述佐剂制备的疫苗组合物增加了抗原特异性抗体的生成以及IgG2a和IgG2b的生成(参见图1-10以及表1-4)。因此，本发明所述的疫苗组合物可有效地用于适当的、高质量抗体的大量生产，所述抗体需要有抗原免疫原性的刺激。
在本发明优选的实施方式中，可通过腹膜内注射、皮下注射、静脉注射或肌内注射，将所述疫苗组合物进行胃肠外给药。所述疫苗组合物以能足以在受试者体内刺激免疫应答的剂量进行给予。举例来说，所述疫苗可分一次或若干次给予人，每次剂量1-250μg，更优选10-100μg。
本发明还提供了用于增强Th1免疫应答的方法，所述方法包括将上述疫苗组合物给予对其有需要的受试者的步骤。
在本发明优选的实施方式中，通过使用本发明所述佐剂制备的疫苗组合物增加了IgG2a和IgG2b的生成(参见图3、5、8和10以及表1、2、3以及4)。因此，本发明所述的疫苗组合物可有效地用于增强Th1免疫应答以提高免疫原性。
本发明还提供了用于病毒感染或寄生虫感染的免疫治疗剂，所述免疫治疗剂含有所述佐剂以及至少一种病毒抗原或寄生虫抗原的组合物作为活性成分。
本发明还提供了所述佐剂以及至少一种病毒抗原或寄生虫抗原在生产用于治疗病毒感染或寄生虫感染的治疗剂方面的用途。
在本发明优选的实施方式中，通过使用本发明所述佐剂制备的治疗剂组合物增加了抗原特异性抗体的生成以及IgG2a和IgG2b的生成(参见图1-10以及表1-4)。已知IgG2a和IgG2b在防范病毒感染和寄生虫的细胞性感染方面是有效的。因此，在包含本发明所述用于疫苗的佐剂以及至少一种病毒抗原或寄生虫抗原的情况下，所述疫苗组合物可有效地用作病毒感染或寄生虫感染的治疗剂。
在本发明优选的实施方式中，所述病毒抗原为：流感病毒抗原(HA：血凝素或神经氨酸酶抗原)、人乳头状瘤病毒(HPV)抗原、人免疫缺陷病毒(HIV)抗原(GP-120、GP-160)、水疱性口炎病毒抗原(水疱性口炎病毒糖蛋白)、巨细胞病毒(CMV)抗原、肝炎抗原(甲型肝炎(HAV)、乙型肝炎(HBV)、丙型肝炎(HCV)、丁型肝炎(HDV)和庚型肝炎(HGV)：L-HBsAg、S-HBsAg、M-HBsAg、Pre S)、呼吸道合胞体病毒(RSV)抗原或单纯疱疹病毒抗原。
在本发明优选的实施方式中，所述寄生虫为原生动物、线虫、吸虫或绦虫，但不限于此。
所述原生动物优选根足虫、鞭毛虫、纤毛虫或孢子虫，但不限于此。
所述根足虫包括溶组织内阿米巴(Entamoeba histoytica)和结肠内阿米巴(Entamoeba coli)。
所述鞭毛虫包括兰伯氏贾第虫(Giardia lamblia)、阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis)、肠毛滴虫(Trichomonas hominis)和血鞭毛虫(Haemoflagellates)。
所述纤毛虫包括结肠小袋虫(Balantidium coli)。
所述孢子虫优选：疟原虫属(Plasmodium sp.)，包括间日疟原虫(P.vivax)和恶性疟原虫(P.falciparum)；刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)；卡氏肺囊虫(Pneumocystis carinii)人等孢子球虫(Isospora hominis)；隐孢子虫属(Cryptosporidium sp.)，包括微小隐孢子虫(C.parvum)和小鼠隐孢子虫(C.muris)。
所述线虫优选鞭虫、钩虫、蛲虫、蛔虫或丝虫，但不限于此。
所述鞭虫优选毛首鞭虫(Trichuris trichiura)或鞭形鞭虫(Trichocephalus trichiuris)，但不限于此。然而，可包括对动物(例如犬、猫和猪)造成感染的任何其他鞭虫。
所述钩虫优选十二指肠钩虫(Ancylostoma duodenale)或美洲钩虫(Necator americanus)，但不限于此。
所述蛲虫优选蠕形住肠线虫(Enterobius vermicularis)或格里高利蛲虫(Enterobius gregorii)。
所述蛔虫优选通常对猪造成感染的猪蛔虫(A.suum)或对人造成感染的人蛔虫(A.lumbricoides)。
所述丝虫优选班氏丝虫(Wuchereria bancrofti)、盘尾丝虫(Onchocerca volvulus)、罗阿丝虫(Loa loa)或犬恶丝虫(Dirofilariaimmitis)。
所述吸虫优选复殖吸虫(Digenea)，但不限于此。所述复殖吸虫包括血吸虫或非血吸虫。
所述血吸虫包括曼氏血吸虫(Schistosoma mansoni)、埃及血吸虫(Schistosoma haematobium)、日本血吸虫(Schistosoma japonicun)和间插血吸虫(Schistosoma intercalatum)，但不限于此。
所述非血吸虫包括布氏姜片吸虫(Fasciolopsis buski)、异形异形吸虫(Heterophyes heterophyes)、横川后殖吸虫(Metagonimus yokogawaii)、人似腹盘吸虫(Gastrodiscoides hominis)、华枝睾吸虫(Clonorchissinensis)、肝片吸虫(Fasciola hepatica)和卫氏并殖吸虫(Paragonimuswestermani)，但不限于此。
所述绦虫优选带绦虫(Taeniidae)或裂头绦虫(Diphyllobothriidae)，但不限于此。
所述带绦虫包括猪带绦虫(Taenia solium)和牛带绦虫(Taeniasaginata)。所述裂头绦虫包括裂头属绦虫(Diphyllobothrium sp.)，例如阔节裂头绦虫(Diphyllobothrium latum)、树状裂头绦虫(Diphyllobothriumdendriticum)、日本海裂头绦虫(D.nihonkaiense)、太平洋裂头绦虫(D.pacificum)、心形裂头绦虫(D.cordatum)、厄氏裂头绦虫(D.ursi)、矛形裂头绦虫(D.lanceolatum)、达林裂头绦虫(D.dalliae)以及米子裂头绦虫(D.yonagoensis)。
“寄生虫抗原”是指从能够在宿主体内诱导体液应答的寄生虫获得的分子。所述寄生虫抗原可为表面糖蛋白或其碳水化合物分子，或为脂质分子。
对于特定的寄生虫抗原，本领域公开了各种寄生虫抗原。
特别地，WO9526402A1公开了蠕虫寄生虫抗原，其特征在于：(i)为膜内在蛋白(integral membrane protein)的天然形式；(ii)天然定位于寄生虫内脏(gut)；(iii)能够结合至硫醇亲和培养基(thiol affinitymedium)以及(iv)被来自经免疫的动物宿主的血清识别。WO9512671A1公开了具有氨基肽酶样活性的蠕虫寄生虫抗原。US6399077公开了刚地弓形虫感染的细胞培养裂解物的非感染性可溶组分。US6413521公开了针对非专性吸血蠕虫(non-obligate blood feeding helminth)来赋予保护性免疫的经分离和纯化的抗原，其特征在于具有氨基肽酶M样活性。US20070087012A1公开了新型的成束蛋白相关粘附蛋白(FRAP)，所述粘附蛋白来自疟原虫和相关的寄生虫。WO9402169A1公开了能够与胃酶抑素结合的保护性后生动物寄生虫抗原。US4656251公开了犬恶丝虫的寄生虫抗原。US4839275公开了犬恶丝虫的循环寄生虫抗原。
针对病毒感染或寄生虫感染的所述治疗剂可通过皮下注射、静脉注射或肌内注射进行胃肠外给药。为将所述疫苗组合物制备为用于胃肠外给药的制剂，将本发明所述的疫苗组合物制备为油乳剂，然后制剂到安瓿、注射器或小瓶。可根据吸收速率、失活速率、患者的年龄、性别、健康状况以及疾病的严重程度等来确定有效剂量。
本发明还提供了用于癌症的预防剂或治疗剂，所述药剂含有所述佐剂以及至少一种癌特异性抗原组合物作为活性成分。
所述癌症优选肾细胞癌、黑素瘤、慢性淋巴细胞性白血病、肺癌、宫颈癌、胃癌、甲状腺癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胆管瘤、肝癌、结肠癌或直肠癌，但不限于此。
“癌特异性抗原”是在癌性组织和正常组织中区别表达的蛋白或其免疫学活性片段。各种癌特异性抗原在本领域中是已知的。举例来说，gp100、MART-1和MAGE-1是公知对于黑素瘤具有特异性的抗原。其他癌特异性抗原包括酪氨酸酶、CEA(癌胚抗原)、PSA(前列腺特异性抗原)、HER2/neu、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、NY-ESO-1、MUC-1、SART-1或SART-3、TERT(端粒酶逆转录酶)或源自TERT的部分肽(partial peptide)、WT1或源自WT1的部分肽、Survivin-2B或源自Survivin-2B的部分肽、gp75、MDM2、端粒酶、α-1甲胎蛋白、CA125、CA15-3、CA19-9、G250和NY-ESO-1，但不限于此(参见WO 2006/078059和WO 2007/065957)。
另外的癌相关抗原(CAA)以及用于鉴别CAA的方法公开于Miller(Drug Discovery Today，8：31-38，2003)以及Kawakami和Rosenberg(Immunol.Res.16：313，2003)以及Slingluff等人(Curr.Opin.Immunol.，6：733，1994)，将所述文件引入作为参考。
此外，本发明提供了所述佐剂作为疫苗组分在制造用于治疗癌症的免疫学治疗剂方面的应用，其中所述治疗需要强的细胞免疫应答。
在本发明优选的实施方式中，通过使用本发明所述佐剂制备的免疫学治疗剂组合物增加了抗原特异性抗体的生成以及IgG2a和IgG2b的生成(参见图1-10以及表1-4)。已知IgG2a和IgG2b在抗癌免疫应答方面非常有效。因此，含有本发明所述用于疫苗的佐剂以及适当的癌特异性抗原的所述免疫学治疗剂组合物能有效地用作预防或治疗癌症的预防剂或治疗剂。
所述预防或治疗癌症的免疫学药剂可通过皮下注射、静脉注射或肌内注射进行胃肠外给药。为将所述疫苗组合物制备成用于胃肠外给药的制剂，将本发明所述的疫苗组合物制备为油乳剂，然后以安瓿、注射器或小瓶的形式贮存。可根据吸收速率、失活速率、患者的年龄、性别、健康状况以及疾病的严重程度等来确定有效剂量。
实施例
在下面的实施例中，对本发明实用的和现有的优选实施方式进行说明。
但是，可以理解的是，在考虑本发明所公开的内容后，本领域技术人员可以在本发明的精神和范围内进行修改和改进。
实施例1：乙型肝炎病毒(HBV)抗原免疫原性的刺激
用乙型肝炎病毒抗原和各种佐剂制备疫苗，并比较每种疫苗制剂所诱导的抗体滴度，所述佐剂包含：氢氧化铝(Alum；Brenntag Biosector，德国)；仅Pam3Cys-SKKKK(脂肽)(EMC microcollections GmbH，德国)；仅聚I:C(Sigma，美国)；或Pam3Cys-SKKKK和聚I:C两者的混合物。
<1-1>疫苗的制备及给予
通过将乙型肝炎病毒全表面抗原(whole surface antigen)(L-HBsAg；韩国专利号10-0836745)以及所述佐剂混合制备疫苗，将该疫苗给予小鼠。其中，L-HBsAg由S-蛋白(无pre S1和pre S2的小蛋白)、M-蛋白(只有pre S2的中蛋白)和L-蛋白(同时有preS1和preS2的大蛋白)组成。
特别地，如表1所示，将20μg的Pam3Cys-SKKKK、或聚I:C、或Pam3Cys-SKKKK和聚I:C两者与0.5μg的L-HBsAg混合以产生油乳剂形式的疫苗，然后比较不同制剂所诱导的抗体滴度。作为阳性对照组，将等量抗原用氢氧化铝进行制剂。将疫苗通过肌内注射给予6周龄的C57BL/6雌性小鼠，注射三次，每次间隔两星期。阴性对照组注射不含抗原和佐剂的PBS。
表1
  阴性对照组   阳性对照组   实验组1   实验组2   实验组3
佐剂 - 氢氧化铝   Pam3Cys-SKKKK 聚I:C   Pam3Cys-SKKKK+聚I:C
  HBsAg抗体滴度   -   5.7×105   1.4×106   1.2×106   3.4×106
  PreS抗体滴度   -   7.1×104   6.2×105   6.5×105   5.1×106
  IgG2a/IgG1(％)   -   3.6   8.9   9.1   39.4
  IgG2b/IgG1(％)   -   9.5   153.9   66.4   374.8
<1-2>免疫应答的分析
<1-2-1>针对HBsAg(S-蛋白)的抗体滴度
在给予疫苗前、以及第三次给予疫苗后2个星期采集血清，并通过ELISA对抗原特异性抗体的生成进行分析以测定抗体滴度。
具体而言，将96孔微板用重组S-蛋白(Dobeel Corp.，韩国)以100ng/孔的浓度覆盖，然后通过加入1％BSA进行阻断1h。洗涤所述微板，向每个孔中加入经适当稀释的血清，并在37℃培养2h。然后，将抗小鼠山羊IgG-HRP(辣根过氧化物酶；Sigma，美国)作为二抗加入每个孔，并在37℃培养1h。培养结束后，将板用PBST(含有Tween 20的PBS)彻底洗涤，再加入TMB(3，3′，5，5′-四甲基联苯胺)过氧化物酶底物溶液(KPL，美国)，然后在室温下培养20分钟。然后，用ELISA读取器测定OD450。抗体滴度由抗体最终稀释度的倒数(inverse value)确定，所产生的OD读数为阴性对照组OD的三倍。
如表1和图1所示，在诱导针对HBV包膜蛋白的S-蛋白更高的抗体滴度方面，使用Pam3Cys-SKKKK或聚I:C要比氢氧化铝更为有效。具体而言，当使用Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的混合物时，所诱导的抗体滴度略高于其各自单独诱导的抗体滴度的加和值，这表明了两种组分的协同效应。组合使用Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的协同效应在诱导Pre S抗体方面更为明显。这可归因于所使用抗原的量，原因是L-HBsAg制剂中的pre S的量低于总量的10％。并且，0.5μg抗原对于小鼠体内的免疫应答而言接近饱和量(数据未显示)。
<1-2-2>针对pre S的抗体滴度
除用pre S抗原(Dobeel Corp.，韩国)作为捕捉抗体的抗原外，通过与实施例<1-2-1>中所描述的相同的方法测定抗体滴度。
如表1和图2所示，同时含有Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的佐剂混合物在诱导针对pre S更高的抗体滴度方面更为有效。通过所述佐剂混合物诱导pre S抗体具有协同作用，与单独由Pam3Cys-SKKKK和聚I:C所诱导的pre S抗体滴度的相加值相比，其诱导出高于4倍的pre S抗体。
<1-2-3>所诱导HBsAg特异性抗体的同种型
除使用IgG1、IgG2a和IgG2b(小鼠单克隆抗体同种型试剂；Sigma，美国)作为二抗外，通过与实施例<1-2-1>中所描述的相同的方式测定抗体滴度。并且用所得到的抗体滴度计算IgG2a/IgG1和IgG2b/IgG1的比值。
如图3a所示，用所述佐剂混合物得到的同种型IgG2a和IgG2b比由氢氧化铝得到的值高出许多。具体而言，对IgG2b的诱导，用所述佐剂混合物得到的值高于用氢氧化铝得到的值的20倍。当使用包含Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的佐剂混合物时，IgG2a/IgG1比值约为使用氢氧化铝情况下的10倍。具体而言，IgG2b的生成显著较高，并且IgG2b/IgG1的比值远高于IgG2a/IgG1(图3b和图3c)。
实施例2：流感病毒抗原免疫原性的刺激
用氢氧化铝、仅Pam3Cys-SKKKK、仅聚I:C、或Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的混合物作为佐剂对流感病毒抗原进行制剂，并且对于HBsAg抗体分析，使用流感病毒抗原作为捕捉抗原测定所诱导抗体的滴度。
<2-1>流感病毒抗原的制剂及给予
通过将重组裂解疫苗抗原(Korea Vaccine Co.，Ltd，韩国)和所述佐剂混合来制备不同的制剂，将该疫苗给予小鼠。所述抗原通过下述步骤进行制备：用流感病毒菌株A/新喀里多尼亚/20/99(H1N1)、A/威斯康星/67/2005(H3N2)以及B/马来西亚/2506/2004感染发育中的卵的尿囊；对其进行培养、纯化和失活。
特别地，如表2所示，将20μg的Pam3Cys-SKKKK、聚I:C、Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的混合物、或氢氧化铝与1.8μg的所述裂解疫苗抗原混合，得到油乳剂的形式的各种不同的疫苗制剂。将这些不同的制剂通过肌内注射给予5周龄的C57BL/6雌性小鼠，注射两次，每次间隔三星期。阴性对照组只接受PBS，而阳性对照组仅接受所述抗原而不含任何佐剂。所有组均含有6只小鼠。
表2
  阴性对照组   阳性对照组1   阳性对照组2   实验组1   实验组2   实验组3
  佐剂   -   -   氢氧化铝 Pam3Cys-SKKKK   聚I:C   +聚I:CPam3Cys-SKKKK
  HA抗体滴度   -   2.1×105   9.3×105   6.8×105   8.6×105   3.0×106
  IgG2a/IgG1(％)   -   8.85   6.09   7.59   6.17   31.67
<2-2>免疫应答的分析
在给予疫苗前、以及第二次给予疫苗后2个星期，从每只小鼠体内采集血清，并通过ELISA对抗原特异性抗体的生成进行分析以测定抗体滴度。
<2-2-1>HA抗体滴度的测定
除用HA抗原(Korea Vaccine Co.，Ltd，韩国)作为捕捉抗体的抗原外，通过与实施例<1-2-1>中所描述的相同的方式测定抗体滴度。
如表2和图4所示，在诱导针对HA更高的抗体滴度方面，Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的混合物比单一组分或氢氧化铝更为有效(协同效应)。
<2-2-2>所诱导的HA特异性抗体的同种型
除用IgG1和IgG2a作为二抗用于同种型测定外，通过与实施例<2-2-1>中所描述的相同的方法测定抗体滴度。用所得到的抗体滴度计算IgG2a/IgG1和IgG2b/IgG1的比值。
图5a显示同种型IgG1和IgG2a的抗体滴度。并且，用所述抗体滴度计算同种型的比值。与由单一组分或氢氧化铝得到的值相比，用所述佐剂混合物得到的IgG2a/IgG1值特别高(图5b)。
实施例3：使用重组HBsAg(来自多形汉逊酵母的S-蛋白)和重组preS 蛋白(来自酿酒酵母菌)的强力疫苗制剂
通过使用氢氧化铝、或Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的混合物作为佐剂，用重组HBsAg和重组preS蛋白制备各种疫苗制剂，并对免疫应答进行比较。
<3-1>疫苗的制备及其给予
通过将重组HBsAg(Dobeel Corp.，韩国)、重组preS蛋白(DobeelCorp.，韩国)和所述佐剂混合制备疫苗，并将所得疫苗通过肌内注射给予小鼠。使用重组HBsAg和重组preS蛋白作为抗原，所述重组HBsAg只含有S-蛋白而不含preS抗原，所述重组preS蛋白通过与胶体金结合而制备为颗粒型。
特别地，用含有Pam3Cys-SKKKK和聚I:C每种各20μg的混合物作为佐剂，与0.5μg重组S-蛋白和5μg的preS蛋白产生油乳剂形式的疫苗。每种测试疫苗的每剂含有0.5μg所述重组S-蛋白和5μg所述preS，然后将其通过肌内注射给予5周龄的C57BL/6雌性小鼠，注射三次，每次间隔两星期。
阴性对照组只接受PBS。阳性对照组接受包含氢氧化铝、S-蛋白和与胶体金结合的重组preS抗原的混合物。实验组1接受通过将乳化的S-蛋白、Pam3Cys-SKKKK和聚I:C与胶体金结合的重组preS抗原进行混合而制备的疫苗。实验组2接受通过将所有组分共同乳化而制备的疫苗，所述组分包括S-蛋白、与胶体金结合的重组preS抗原以及Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的混合物。
<3-2>免疫应答的分析
在给予疫苗前、以及第三次给予疫苗后2个星期采集血清样品，并通过ELISA对抗原特异性抗体的生成进行分析，并将其表达为抗体滴度。
<3-2-1>针对S-蛋白的抗体滴度
通过与实施例<1-2-1>中所描述的相同的方法测定针对S-蛋白的抗体滴度。
如表3和图6所示，Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的佐剂混合物所诱导的针对S-蛋白的抗体滴度高于使用氢氧化铝情况下的10倍。特别地，相比于通过首先将所述佐剂与S-蛋白先乳化、再加入结合的pre S而制备的疫苗，通过将所有组分共同乳化而制备的疫苗诱导出更高的抗体滴度。
表3
  阴性对照组   阳性对照组1   实验组1   实验组2
  HBsAg抗体滴度   -   1.3×105   1.9×106   3.6×106
  PreS抗体滴度   -   4.6×105   1.2×106   2.0×106
  IgG2a/IgG1(％)   -   35   83   162
  IgG2b/IgG1(％)   -   6   110   324
<3-2-2>Pre S抗体滴度
通过与实施例<1-2-2>中所描述的相同的方式测定Pre S抗体滴度。
如表3和图7所示，相比于使用氢氧化铝，使用Pam3Cys-SKKKK和聚I:C作为佐剂混合物，诱导出更高的针对pre S的抗体滴度。特别地，通过将所有组分(包括HBsAg和preS抗原)与所述佐剂共同乳化而制备的疫苗最有效地诱导了pre S抗体，其高于使用氢氧化铝情况下所诱导的抗体的3倍。
<3-2-3>所诱导HBsAg特异性抗体的同种型
通过与实施例<1-2-3>中所描述的相同的方式测定同种型的抗体滴度。并由所得到的抗体滴度计算IgG2a/IgG1和IgG2b/IgG1的比值。
如图8a所示，得到同种型IgG1、IgG2a和IgG2b的抗体滴度。并且，用所述抗体滴度计算同种型的比值。当使用Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的佐剂混合物时，IgG2a/IgG1和IgG2b/IgG1的比值高于使用氢氧化铝的情况。特别地，经证实，相比于通过将preS抗原与乳化的HBsAg和所述佐剂混合而制备的疫苗，通过将HBsAg和preS抗原与所述佐剂混合并共同乳化而制备的疫苗更为有效(图8b和图8c)。
实施例4：使用各种脂肽的佐剂组合物
为测试各种脂肽与聚I:C的协同佐剂效应，将Pam3Cys-SKKKK、Pam3Cys-SR8或FSL-1(成纤维细胞刺激脂肽)与乙型肝炎病毒抗原进行制剂。
<4-1>疫苗的制备及给予
通过将预吸附在氢氧化铝上的乙型肝炎病毒全表面抗原与所述佐剂组分混合来制备疫苗，并将所得疫苗给予小鼠。在实验过程中发现，被氢氧化铝吸附的抗原更为稳定，并且所述氢氧化铝对于脂肽和聚I:C混合物的佐剂效果没有显著影响(数据未显示)。
特别地，如表4所示，将0.5μg吸附于氢氧化铝的L-HBsAg用20μg的各种脂肽或聚I:C(实验组1-4)进行制剂。并且，将等量抗原用脂肽和聚I:C的混合物(实验组5-7)进行制剂。
将疫苗通过肌内注射给予6周龄的C57BL/6雌性小鼠，注射三次，每次间隔两星期。阴性对照组只给予PBS而不给予所述疫苗和所述抗原，阳性对照组给予用氢氧化铝制剂的所述抗原。
表4
佐剂   HBsAg抗体滴度   preS抗体滴度   IgG2a/IgG 1(％)   IgG2b/IgG1(％)
  阴性对照组   -   -   -   -   -
  阳性对照组   氢氧化铝   5.9×105   1.6×105   3.6   21.6
  实验组1   Pam3Cys-SKKKK   6.5×105   1.3×105   17.4   159.4
  实验组2   Pam3Cys-SR8   4.8×105   1.8×102   34.3   550.03
  实验组3   FSL-1   4.4×105   1.4×105   9.3   122.5
  实验组4   聚I:C   6.3×105   2.3×105   8.04   89.05
实验组5   Pam3Cys-SKKKK+聚I:C   3.0×106   1.4×106   63.7   805.6
佐剂   HBsAg抗体滴度   preS抗体滴度   IgG2a/IgG 1(％)   IgG2b/IgG1(％)
实验组6   Pam3Cys-SR8+聚I:C   1.7×106   1.5×106   50.4   306.2
  实验组7   FSL-1+聚I:C   9.8×105   6.4×105   23.9   510.5
<4-2>免疫应答的分析
在给予疫苗前、以及最后一次给予疫苗2个星期后，从每只小鼠体内采集血清，并通过ELISA对抗原特异性抗体的生成进行分析以测定抗体滴度。
<4-2-1>针对HBsAg的(S-蛋白)的抗体滴度
通过与实施例<1-2-1>中所描述的相同的方式测定抗体滴度。
如表4和图9所示，当使用所述脂肽(例如Pam3Cys-SKKKK和Pam3Cys-SR8)和聚I:C的混合物时，所诱导的抗体滴度略高于各自单独诱导的抗体滴度的加和值，这表明了这两种组分的协同效应。
<4-2-2>针对preS的抗体滴度
除用preS抗原(Dobeel Corp.，韩国)作为捕捉抗体的抗原外，通过与实施例<1-2-1>中所描述的相同的方法测定抗体滴度。
如表4和图10所示，含有所述脂肽之一和聚I:C的佐剂混合物在诱导针对preS更高的抗体滴度方面更为有效。对于pre S抗体的生成而言，如前述在实施例<1-2-2>中使用Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的情况那样，Pam3Cys-SKKKK以外的脂肽与聚I:C组合使用的协同效应也更为显著。
<4-2-3>所诱导HBsAg特异性抗体的同种型
除使用IgG1、IgG2a和IgG2b作为二抗外，通过与实施例<1-2-1>中所描述的相同的方式测定抗体滴度。通过使用所得到的抗体滴度，计算IgG2a/IgG1和IgG2b/IgG1的比值。
如图11a所示，与用氢氧化铝作为佐剂所诱导的值相比，当用所述脂肽和聚I:C的组合作为佐剂时，同种型IgG2a和IgG2b的抗体滴度要高出许多。因而，当使用所述佐剂混合物时，IgG2a/IgG1和IgG2b/IgG1的比值也更高(图11b、图11c)。当使用Pam3Cys-SKKKK、Pam3Cys-SR8或FLS-1作为所述脂肽组分时，具有类似的协同效应。特别是Pam3Cys-SKKKK和聚I:C的组合最为有效。
本领域技术人员将会明了的是，可容易地利用在上述说明书中所公开的概念和具体实施方式，作为改进或设计其他实现与本发明用途相同的实施方式的基础。本领域技术人员还将明了的是，这类等同的实施方式没有脱离如所附权利要求书中阐明的本发明的精神和范围。

Claims (19)

1.一种用于疫苗的佐剂，所述佐剂包含聚I∶C(聚肌苷酸∶聚胞苷酸)和一种或多种脂肽，其中各种组分在刺激诱导适应性免疫应答方面具有协同作用。
2.如权利要求1所述的佐剂，其中，所述脂肽选自于由下列物质所组成的组：Pam3Cys-SKKKK、Pam3Cys-SR8、FLS-1、PHC-SKKKK、Ole2PamCys-SKKKK、Pam2Cys-SKKKK、PamCys(Pam)-SKKKK、Ole2Cys-SKKKK、Myr2Cys-SKKKK、PamDhc-SKKKK、PamCSKKKK以及Dhc-SKKKK。
3.如权利要求1所述的佐剂，其中，所述聚I∶C的长度为50-2,000bp。
4.一种疫苗组合物，所述组合物包含权利要求1所述的佐剂以及至少一种抗原。
5.如权利要求4所述的疫苗组合物，其中，所述抗原为选自于由下述物质所组成的组中的一种或多种组分：病原体蛋白、重组蛋白、肽、半抗原、多糖、糖蛋白、脂多糖、DNA分子(多聚核苷酸)、癌细胞以及微生物。
6.如权利要求4所述的疫苗组合物，其中，所述抗原选自于由L-HBsAg、流感HA、S-蛋白和preS所组成的组。
7.如权利要求4所述的疫苗组合物，所述组合物能够有效地诱导细胞介导的免疫，产生适当的、抗原特异性的高质量抗体，所述抗体包括IgG1、IgG2a和IgG2b。
8.如权利要求7所述的疫苗组合物，其中，所述适当的、高质量抗体为IgG1、IgG2a和IgG2b型。
9.一种用于生成适当的、高质量抗体的方法，所述方法包括将权利要求4所述的疫苗组合物给予对其有需要的受试者的步骤。
10.如权利要求9所述的方法，其中，所述方法有助于适当的、高质量抗体的大量生产。
11.一种用于增强Th1免疫应答的方法，所述方法包括将权利要求4所述的疫苗组合物给予对其有需要的受试者。
12.一种用于病毒感染或寄生虫感染的治疗剂，所述治疗剂包括权利要求1所述的佐剂以及至少一种病毒抗原或寄生虫抗原。
13.如权利要求12所述的治疗剂，其中，所述病毒抗原为：流感病毒抗原(血凝素(HA)或神经氨酸酶抗原)、人乳头状瘤病毒(HPV)抗原、人免疫缺陷病毒(HIV)抗原(GP-120、GP-160)、水疱性口炎病毒抗原(水疱性口炎病毒糖蛋白)、巨细胞病毒(CMV)抗原、肝炎抗原(甲型肝炎(HAV)、乙型肝炎(HBV)、丙型肝炎(HCV)、丁型肝炎(HDV)和庚型肝炎(HGV)：L-HBsAg、S-HBsAg、M-HBsAg、pre S)、呼吸道合胞体病毒(RSV)抗原或单纯疱疹病毒抗原。
14.如权利要求12所述的治疗剂，其中，所述寄生虫为原生动物、线虫、吸虫或绦虫。
15.一种用于癌症的预防性或治疗性疫苗，所述疫苗包含权利要求1所述的佐剂以及至少一种癌特异性抗原。
16.如权利要求15所述的预防性或治疗性疫苗，其中，所述癌症为：肾细胞癌、黑素瘤、慢性淋巴细胞性白血病、肺癌、宫颈癌、胃癌、甲状腺癌、胰腺癌、乳腺癌、前列腺癌、卵巢癌、胆管瘤、肝癌、结肠癌或直肠癌。
17.如权利要求15所述的用于癌症的预防性或治疗性疫苗，其中，所述癌特异性抗原为：gp100、MART-1和MAGE-1、酪氨酸酶、CEA(癌胚抗原)、PSA(前列腺特异性抗原)、HER2/neu、MAGE-1、MAGE-2、MAGE-3、NY-ESO-1、MUC-1、SART-1或SART-3、TERT(端粒酶逆转录酶)或源自TERT的部分肽、WT1或源自WT1的部分肽、Survivin-2B或源自Survivin-2B的部分肽、gp75、MDM2、端粒酶、α-1甲胎蛋白、CA125、CA15-3、CA19-9、G250或NY-ESO-1。
18.权利要求1所述的佐剂以及至少一种病毒抗原或寄生虫抗原在生产用于治疗病毒感染或寄生虫感染的治疗剂方面的用途。
19.权利要求1所述的佐剂以及至少一种癌特异性抗原在生产用于预防或治疗癌症的免疫学药剂方面的用途。
CN2008801190256A 2007-12-07 2008-11-20 包含脂肽和聚i:c作为佐剂的强力疫苗组合物 Active CN101883585B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020070126775A KR100900837B1 (ko) 2007-12-07 2007-12-07 리포펩타이드와 폴리(ｉ:ｃ)를 아쥬반트로 포함하는 강력한백신 조성물
KR10-2007-0126775 2007-12-07
PCT/KR2008/006842 WO2009072767A2 (en) 2007-12-07 2008-11-20 A powerful vaccine composition comprising a lipopeptide and poly i:c as an adjuvant

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101883585A true CN101883585A (zh) 2010-11-10
CN101883585B CN101883585B (zh) 2013-04-17

Family

ID=40718329

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2008801190256A Active CN101883585B (zh) 2007-12-07 2008-11-20 包含脂肽和聚i:c作为佐剂的强力疫苗组合物

Country Status (9)

Country Link
US (1) US8216595B2 (zh)
EP (1) EP2214705B1 (zh)
JP (1) JP5485165B2 (zh)
KR (1) KR100900837B1 (zh)
CN (1) CN101883585B (zh)
AU (1) AU2008332196B2 (zh)
CA (1) CA2706101C (zh)
HK (1) HK1149710A1 (zh)
WO (1) WO2009072767A2 (zh)

Cited By (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102949717A (zh) * 2012-07-06 2013-03-06 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 一种含poly I:C佐剂的新型乙肝疫苗制剂
CN107530432A (zh) * 2015-04-07 2018-01-02 Cytlimic公司 药物
CN109200056A (zh) * 2018-11-20 2019-01-15 苏州系统医学研究所 聚肌胞在防治胰腺炎及其相关病症中的用途
CN113144188A (zh) * 2012-09-21 2021-07-23 Pds生物科技公司 改进的疫苗组合物和使用方法
CN116568309A (zh) * 2020-11-18 2023-08-08 株式会社车疫苗研究所 用于预防或治疗慢性乙型肝炎的、包含作为活性成分的口服抗病毒药物和含脂肽和聚(i：c)佐剂的治疗性疫苗的药物组合物、药物组合制剂和组合制剂试剂盒

Families Citing this family (45)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20080299140A1 (en) * 2002-05-24 2008-12-04 The Regents Of The University Of California, Immunogenic Composition and Peptide Sequences for Prevention and Treatment of an Hsv Condition
US8765687B2 (en) 2005-10-17 2014-07-01 Sloan Kettering Institute For Cancer Research WT1 HLA class II-binding peptides and compositions and methods comprising same
PT2347775T (pt) 2005-12-13 2020-07-14 The President And Fellows Of Harvard College Estruturas em andaime para transplante celular
CA2645766A1 (en) 2006-04-10 2007-10-25 Sloan Kettering Institute For Cancer Research Immunogenic wt-1 peptides and methods of use thereof
US9770535B2 (en) 2007-06-21 2017-09-26 President And Fellows Of Harvard College Scaffolds for cell collection or elimination
US8466259B2 (en) 2007-12-07 2013-06-18 National Health Research Institutes Adjuvants
JP5690143B2 (ja) 2008-02-13 2015-03-25 プレジデント・アンド・フェロウズ・オブ・ハーバード・カレッジ 持続的細胞プログラミング装置
US9370558B2 (en) 2008-02-13 2016-06-21 President And Fellows Of Harvard College Controlled delivery of TLR agonists in structural polymeric devices
US8287880B2 (en) 2009-06-02 2012-10-16 National Health Research Institutes Lipidated vaccine against dengue virus infection
CN102482327B (zh) 2009-06-22 2014-10-29 财团法人卫生研究院 脂质化肿瘤相关抗原及其免疫治疗的组成物及方法
CA2768552A1 (en) * 2009-07-31 2011-02-03 President And Fellows Of Harvard College Programming of cells for tolerogenic therapies
WO2012048165A2 (en) 2010-10-06 2012-04-12 President And Fellows Of Harvard College Injectable, pore-forming hydrogels for materials-based cell therapies
TWI507413B (zh) 2010-11-15 2015-11-11 Nat Health Research Institutes 脂質化多抗原表位疫苗
TW201221642A (en) 2010-11-15 2012-06-01 Nat Health Research Institutes Method of producing lipidated polypeptides
WO2012139094A2 (en) 2011-04-08 2012-10-11 H. Lee Moffitt Cancer Center And Research Institute, Inc. Method of developing a vaccine using peptide-poly ic complexes
US9675561B2 (en) 2011-04-28 2017-06-13 President And Fellows Of Harvard College Injectable cryogel vaccine devices and methods of use thereof
EP2701745B1 (en) 2011-04-28 2018-07-11 President and Fellows of Harvard College Injectable preformed macroscopic 3-dimensional scaffolds for minimally invasive administration
EP2714073B1 (en) 2011-06-03 2021-03-10 President and Fellows of Harvard College In situ antigen-generating cancer vaccine
NL2007536C2 (en) 2011-10-05 2013-04-08 Academisch Ziekenhuis Leiden Lumc Adjuvant compound.
AU2012321022B2 (en) * 2011-10-06 2017-03-23 Immunovaccine Technologies Inc. Liposome compositions comprising an adjuvant that activates or increases the activity of TLR2 and uses thereof
EP3520810A3 (en) 2012-01-13 2019-11-06 Memorial Sloan-Kettering Cancer Center Immunogenic wt1 peptides and use thereof
CA2870309C (en) 2012-04-16 2024-02-20 President And Fellows Of Harvard College Mesoporous silica compositions for modulating immune responses
KR101669142B1 (ko) 2012-10-10 2016-10-25 연세대학교 산학협력단 안약형 백신의 신규 아쥬반트
US10815273B2 (en) 2013-01-15 2020-10-27 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof
US9919037B2 (en) 2013-01-15 2018-03-20 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Immunogenic WT-1 peptides and methods of use thereof
KR101501583B1 (ko) * 2013-03-29 2015-03-12 주식회사 차백신연구소 리포펩티드 및 폴리(ｉ:ｃ)를 포함하는 아쥬반트 및 이를 이용한 개선된 제형의 백신 조성물
US10682400B2 (en) 2014-04-30 2020-06-16 President And Fellows Of Harvard College Combination vaccine devices and methods of killing cancer cells
CN104208670B (zh) * 2014-09-09 2017-07-28 韩自勤 一种治疗乙肝的药物组合物
US10537626B2 (en) 2014-10-07 2020-01-21 Cytlimic Inc. HSP70-derived peptide, pharmaceutical composition for treating or preventing cancer using same, immunity inducer, and method for producing antigen presenting cell
WO2016109880A1 (en) 2015-01-06 2016-07-14 Immunovaccine Technologies Inc. Lipid a mimics, methods of preparation, and uses thereof
WO2016123573A1 (en) 2015-01-30 2016-08-04 President And Fellows Of Harvard College Peritumoral and intratumoral materials for cancer therapy
BR112017018703A2 (pt) 2015-03-09 2018-04-17 Cytlimic Inc. peptídeo derivado de gpc3, composição farmacêutica para tratamento ou prevenção de câncer usando o mesmo, indutor de imunidade, e método para produzir células de apresentação de antígeno
US11150242B2 (en) 2015-04-10 2021-10-19 President And Fellows Of Harvard College Immune cell trapping devices and methods for making and using the same
WO2017083963A1 (en) 2015-11-18 2017-05-26 Immunovaccine Technologies Inc. Adjuvanting systems and water-free vaccine compositions comprising a polyi:c polynucleotide adjuvant and a lipid-based adjuvant
CN115531609A (zh) 2016-02-06 2022-12-30 哈佛学院校长同事会 重塑造血巢以重建免疫
CN115305229A (zh) 2016-07-13 2022-11-08 哈佛学院院长等 抗原呈递细胞模拟支架及其制备和使用方法
TW201813664A (zh) 2016-10-11 2018-04-16 賽多利克公司 醫藥
CN107261136B (zh) * 2017-07-31 2020-07-28 中国医学科学院医学生物学研究所 多聚磷酸钠的应用及含有多聚磷酸钠的疫苗剂
KR102098097B1 (ko) 2017-08-16 2020-05-26 주식회사 차백신연구소 리포펩티드가 삽입된 리포좀을 유효성분으로 포함하는 백신 아쥬반트 및 이의 용도
CA3075526A1 (en) * 2017-09-12 2019-03-21 Garvan Institute Of Medical Research Methods for reducing or shutting down lactation in non-human mammals and reagents therefor
CN109793891A (zh) * 2017-11-17 2019-05-24 韩震 多肽化合物在制备提高治疗性抗体疗效的佐剂中的应用与组合物及其制备方法
EP4149525A1 (en) * 2020-05-15 2023-03-22 Rxcell Inc. Hypoimmunogenic cells and uses thereof in immune responses
KR20220063101A (ko) * 2020-11-09 2022-05-17 주식회사 차백신연구소 리포펩타이드와 폴리(i:c) 아쥬반트를 포함하는 재조합 코로나-19 백신 조성물
BR112023024392A2 (pt) 2021-05-24 2024-02-15 Cha Vaccine Res Institute Co Ltd Uso de uma formulação de combinação farmacêutica, uso de lipopeptídeos e poli(i:c), e pelo menos um ingrediente ativo adicional
KR102375057B1 (ko) * 2021-09-29 2022-03-17 주식회사 애스톤사이언스 Hsp90 항원성 펩타이드를 포함하는 항암용 백신 조성물

Family Cites Families (19)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4839275A (en) 1983-12-01 1989-06-13 The Jewish Hospital Circulating antigens of dirofilaria immitis, monoclonal antibodies specific therefor and methods of preparing such antibodies and detecting such antigens
US4656251A (en) 1985-01-28 1987-04-07 Mallinckrodt, Inc. Rapid separation of Dirofilaria immitis immune complexes
ZW8893A1 (en) 1992-07-21 1994-06-01 Pitman Moore Inc Vaccines
GB9322702D0 (en) 1993-11-03 1993-12-22 Agricultural & Food Res Vaccines
MX9604182A (es) 1994-03-25 1997-12-31 Mallinckrodt Veterinary Inc Vacunas contra parasitos helminticos.
US6399077B1 (en) 1996-08-09 2002-06-04 Trustees Of Dartmouth College Method of augmenting T cell-mediated immunity against Toxoplasma gondii
CA2453880A1 (en) * 2001-07-25 2003-02-06 New York University Use of glycosylceramides as adjuvants for vaccines against infections and cancer
EP1578419A4 (en) * 2002-12-30 2008-11-12 3M Innovative Properties Co IMMUNOSTIMULATING COMBINATIONS
GB0321615D0 (en) * 2003-09-15 2003-10-15 Glaxo Group Ltd Improvements in vaccination
AU2003290460A1 (en) * 2003-12-24 2005-07-14 Leiden University Medical Center Synthetic protein as tumor-specific vaccine
DE102004049223A1 (de) * 2004-10-08 2006-04-20 Johannes-Gutenberg-Universität Mainz Zubereitung zum Impfen, Impfverfahren und Verwendung einer Impf-Zubereitung
US8178102B2 (en) 2005-01-19 2012-05-15 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. Emulsified composition for dilution and cancer vaccine composition
EP1868640A1 (en) * 2005-03-31 2007-12-26 Leiden University Medical Center Methods and means for diagnostics, prevention and treatment of mycobacterium infections and tuberculosis disease
PL1898948T3 (pl) * 2005-06-08 2012-06-29 Yisheng Biopharma Singapore Pte Ltd Adiuwant na bazie kwasu poliinozynowego i policytydylowego
JP4828189B2 (ja) * 2005-09-14 2011-11-30 雅美 森山 分泌型ＩｇＡ及びＩｇＧ抗体誘導剤
US7438916B2 (en) 2005-10-14 2008-10-21 Virginia Tech Intellectual Properties, Inc. Therapeutic target for protozoal diseases
NZ569086A (en) * 2005-12-01 2011-07-29 Trinity College Dublin Compositions comprising a Toll-like receptor (TLR) agonist and an immune modulator for treating Th1-mediated conditions, such as cancer and infectious diseases
EP1795599A1 (en) 2005-12-09 2007-06-13 Schuler, Gerold, Prof. Dr. Methods for generating antigen-specific effector T cells
KR100836745B1 (ko) 2007-01-31 2008-06-10 (주)두비엘 Ｈｂｖ 백신 및 그의 제조 방법

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102949717A (zh) * 2012-07-06 2013-03-06 中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所 一种含poly I:C佐剂的新型乙肝疫苗制剂
CN113144188A (zh) * 2012-09-21 2021-07-23 Pds生物科技公司 改进的疫苗组合物和使用方法
CN107530432A (zh) * 2015-04-07 2018-01-02 Cytlimic公司 药物
CN107530432B (zh) * 2015-04-07 2021-04-27 Cytlimic公司 药物
CN109200056A (zh) * 2018-11-20 2019-01-15 苏州系统医学研究所 聚肌胞在防治胰腺炎及其相关病症中的用途
CN116568309A (zh) * 2020-11-18 2023-08-08 株式会社车疫苗研究所 用于预防或治疗慢性乙型肝炎的、包含作为活性成分的口服抗病毒药物和含脂肽和聚(i：c)佐剂的治疗性疫苗的药物组合物、药物组合制剂和组合制剂试剂盒

Also Published As

Publication number Publication date
JP2011506309A (ja) 2011-03-03
HK1149710A1 (en) 2011-10-14
US20090155308A1 (en) 2009-06-18
WO2009072767A2 (en) 2009-06-11
KR100900837B1 (ko) 2009-06-04
CA2706101A1 (en) 2009-06-11
WO2009072767A3 (en) 2009-07-23
AU2008332196A1 (en) 2009-06-11
CA2706101C (en) 2014-06-03
AU2008332196B2 (en) 2011-09-15
JP5485165B2 (ja) 2014-05-07
CN101883585B (zh) 2013-04-17
EP2214705B1 (en) 2014-08-20
EP2214705A2 (en) 2010-08-11
US8216595B2 (en) 2012-07-10
EP2214705A4 (en) 2011-11-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN101883585B (zh) 包含脂肽和聚i:c作为佐剂的强力疫苗组合物
ES2331952T3 (es) Fraccion de quil a con baja toxicidad y su uso.
Halperin et al. Comparison of safety and immunogenicity of two doses of investigational hepatitis B virus surface antigen co-administered with an immunostimulatory phosphorothioate oligodeoxyribonucleotide and three doses of a licensed hepatitis B vaccine in healthy adults 18–55 years of age
CN1072963C (zh) 疫苗组合物
CN101163500B (zh) 含有聚-γ-谷氨酸的用作佐剂的合成物
CN1091978A (zh) 粒细胞-巨噬细胞-集落刺激因子作为疫苗佐剂的用途
KR101501583B1 (ko) 리포펩티드 및 폴리(ｉ:ｃ)를 포함하는 아쥬반트 및 이를 이용한 개선된 제형의 백신 조성물
JP5766894B2 (ja) ワクチン増強剤としてのαチモシンペプチド
CN1224422C (zh) 含有白细胞介素il－12和单纯疱疹病毒抗原的疫苗
CN107184973A (zh) 一种复合疫苗佐剂及其应用
CN109701010A (zh) 疫苗复合佐剂系统及其在抗原中的应用
CN101426514A (zh) Hcv疫苗
Lin et al. A new immunostimulatory complex (PICKCa) in experimental rabies: antiviral and adjuvant effects
CN100509056C (zh) 包含作为佐剂的i型ifn的疫苗和涉及它们的方法
CN108567977B (zh) 一种免疫增强剂、免疫治疗药物组合物及其制备与用途
CN117897487A (zh) 人工合成的含CpG单链脱氧寡核苷酸在疫苗中的应用
US3885011A (en) Vaccine adjuvants
CN114401739A (zh) 能够在鼻腔诱导病毒特异性抗体的季节性流感疫苗
Park et al. Immune responses of mice to influenza subunit vaccine in combination with CIA07 as an adjuvant
CN1305527C (zh) 乙型肝炎治疗疫苗及其制备方法
Albanesi et al. Vaccination strategies and immunotherapy against influenza
CN118001386A (zh) 狂犬疫苗组合物及其制备方法和应用
Torresi et al. Vaccine‐preventable diseases
Madaan Heplisav V

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: DE

Ref document number: 1149710

Country of ref document: HK

C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
REG Reference to a national code

Ref country code: HK

Ref legal event code: GR

Ref document number: 1149710

Country of ref document: HK