CN118001386A - 狂犬疫苗组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种狂犬疫苗组合物，其包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含狂犬病毒抗原，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂包含角鲨烯、α‑生育酚和吐温80。本发明的疫苗组合物在制备时不需要将两种组分配制为成品制剂，两种组分可以独立包装，从而可以避免抗原与乳剂佐剂之间的相互影响，达到更加高效、更加安全、同时更加稳定的技术效果，并且可以有效改善免疫应答，快速刺激抗体的产生，减少疫苗接种剂次。

Description

狂犬疫苗组合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于生物医药工程领域，特别涉及一种狂犬疫苗组合物及其制备方法和其在免疫治疗及预防领域的应用。
背景技术
狂犬病(rabies)又名恐水症(hydrophobia)，在多个国家均有发生，发病患者的死亡率几乎达100％。人狂犬病通常是由携带狂犬病毒的动物如犬以咬伤人的方式传染给人。临床表现为特有的恐水、怕风、恐惧不安、咽肌痉挛、进行性瘫痪等。
狂犬病毒(Rabies virus,RV)是引起狂犬病的病原体，属于弹状病毒科(Rhabdoviridae)狂犬病毒属(Lyssavirus)，其外形呈弹状，核衣壳呈螺旋对称，表面具有包膜，内含有单链RNA。
目前对狂犬病尚无特殊有效的治疗方法，接种狂犬病毒疫苗(以下简称狂犬疫苗)和使用抗狂犬病血清至今仍是预防感染狂犬病的主要方法。在我国使用的狂犬疫苗之一是地鼠肾细胞疫苗，其免疫程序为全程注射5针，即在0、3、7、14和30天各肌注1针。由于免疫次数较多，对免疫对象造成诸多不便。因此，近年来研究人员试图通过添加佐剂来提高免疫效果并降低免疫次数。最常见的佐剂是铝盐佐剂，其通过抗原储库效应和诱发炎症等免疫刺激效应发挥增强免疫应答的作用。然而，铝盐佐剂也存在着一系列局限性，例如无法诱导细胞免疫应答，抗原提呈效果不理想、免疫应答产生时间滞后，易引发副反应等。
乳剂型佐剂(包括水包油乳剂、油包水乳剂等)是新型佐剂的一个重要分支，乳剂可联合多种弱抗原(重组蛋白、多肽等)使用，并诱发高滴度的抗原特异性抗体。乳剂型佐剂通常包含油相成分、水相成分和乳化剂。其中，水包油乳剂以水相成分为主，人体耐受性较高，且与多数疫苗抗原的相容性较好。
尽管乳剂型佐剂和铝佐剂都已经被广泛使用，但迄今为止，仍然需要有新的免疫制剂和免疫方法，以提供更加安全有效的，方便配制的，成本低廉的，能够快速诱导高效免疫应答的疫苗制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种安全性和免疫刺激活性好，方便配制的，成本低廉的，能够快速诱导高效免疫应答的狂犬疫苗组合物。同时本发明提供简便的制备方法和具有广阔前景的应用。
为了达到上述目的，本发明一方面提供一种狂犬疫苗组合物，包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含狂犬病毒抗原，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
在一些实施方式中，所述狂犬病毒抗原为减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、亚单位疫苗、载体疫苗、基因工程疫苗或核酸疫苗成品制剂。在本发明优选的实施方式中，所述第一组分为灭活狂犬疫苗成品制剂，效价不低于2.5IU。
在一些实施方式中，所述第一组分还可以包含铝佐剂。
在一些实施方式中，所述铝佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾中的至少一种。
疫苗用铝佐剂主要有氢氧化铝、磷酸铝和明矾三种，而通常使用的铝佐剂是指氢氧化铝佐剂。疫苗用氢氧化铝佐剂通常是通过向铝盐溶液中加入碱液，生成不带电荷的中性Al(H2O)3(OH)3相互聚集而形成沉淀。聚集物还会通过羟桥键发生双分子和多分子缩聚，形成大分子。铝盐加碱得到蓬松的絮状氢氧化铝沉淀，由于含有较多的配位水，氢氧化铝沉淀松散的聚集在一起呈纤维状结晶形态，有时也被称之为晶态偏氢氧化铝AlO(OH)。其作用机制主要是“储存库效应”和“免疫刺激效应”。氢氧化铝是两性化合物，等电点(isoelectric point,pI)为11.4，在与人机体pH＝7.4的间质液pH相近的缓冲液中其带正电荷，能很好的吸附酸性蛋白抗原。进入机体后，首先是吸附在表面的疫苗抗原激发免疫应答，随后其内部崩解出来的抗原释放，延长了作用时间，从而延长疫苗抗原在体内的滞留时间，起到“储存库”作用。一般氢氧化铝粒径大小1-10μm，不同批次的氢氧化铝佐剂在粒径上存在一定的差别。
铝佐剂吸附抗原的主要机制包括静电力、疏水作用以及配体交换。由疏水作用产生的吸附，会受到因蛋白质折叠而减少暴露在水环境中疏水区域的限制。铝佐剂的羟基与抗原的磷酸基团发生配体互换产生了吸附作用。磷酸基团对铝原子的连接比羟基更强，从而替代了羟基。其中，以配体交换占主导作用。
在一些实施方式中，所述第一组分中铝佐剂的含量为10-1000μg，优选为50-800μg，更优选100-600μg，例如200μg、300μg、400μg或500μg。
在一些实施方式中，所述第一组分是冻干制剂、溶液或混悬液。
在一些实施方式中，所述第一组分的溶液或混悬液的体积为0.2-1ml，优选为0.5ml。
在一些实施方式中，所述水包油佐剂包含5-15mg角鲨烯、5-15mgα-生育酚和2-10mg吐温80，优选地，所述水包油佐剂包含10.69mg角鲨烯、11.86mgα-生育酚和4.86mg吐温80。
在一些实施方式中，所述水包油佐剂的体积为0.2-1ml，优选为0.5ml。
在一些实施方式中，所述水包油佐剂进一步包含3D-MPL、皂苷、poly I:C和CpG中的一种或多种。所述皂苷选自QS-7、QS-17、QS-18、QS-21中的一种或多种，优选为QS-21。在一些实施方式中，所述水包油佐剂优选进一步包含3D-MPL。
3D-MPL在化学上是具有3、4、5或6条酰化链的3-脱酰单磷酰脂质A的混合物，由Corixa公司销售，主要促进具有IFNγ(Th1)表型的CD4+T细胞应答。4’-单磷酰脂质A(4’-monophosphoryl lipid A，MPL)可以通过将从革兰氏阴性细菌的深粗糙突变株提取的LPS(Lipopolysaccharide，LPS)经过酸水解获得，其保留LPS的佐剂特性，同时证明毒性减少超过1000的因数(由鸡胚卵中的致死剂量测量)(Johnson等，1987Rev.Infect.Dis.9Suppl：S512-S516)。适宜剂量的MPL能够在人中增强针对抗原的免疫应答。
本发明同时提供所述狂犬疫苗组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(i)制备包含狂犬病毒抗原第一组分；
(ii)制备作为第二组分的包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80的水包油佐剂；
(iii)将所述第一组分与第二组分分别独立包装，制得狂犬疫苗组合物，
其中步骤(i)和(ii)可以以任意顺序进行，包括先后进行、同时进行或分场地进行。
在一些实施方式中，制备第一组分的方法可以包括将狂犬病毒抗原吸附至铝佐剂上，以保持狂犬病毒抗原的稳定性和增强其免疫原性。
根据本发明的实施方式，制备第二组分的方法包括：首先将角鲨烯和α-生育酚混合，然后加入含有吐温80的磷酸盐缓冲液，通过搅拌进行乳化，最后进行均质得到水包油佐剂。
本发明还提供了所述的疫苗组合物在制备用于治疗或预防疾病的药物中的用途。
根据本发明的实施方式，在28天内施用所述狂犬疫苗组合物2-3次。
根据本发明的实施方式，在28天内施用所述狂犬疫苗组合物3次，每次间隔14天；或者，在28天内施用所述狂犬疫苗组合物2次，每次间隔28天。
另一方面，本发明提供一种包含所述狂犬疫苗组合物的试剂盒，其包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含狂犬病毒抗原，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
另一方面，本发明提供一种包含所述狂犬疫苗组合物的多室注射器，其包含第一隔室和第二隔室，所述第一隔室装有第一组分，所述第一组分包含狂犬病毒抗原；第二隔室装有第二组分，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
另一方面，本发明提供一种使用所述狂犬疫苗组合物诱导免疫应答的方法，其将第一组分和第二组分分开施用于应用对象。所述方法包括以下步骤：
(i)向所述应用对象施用所述第一组分；
(ii)向所述应用对象施用所述第二组分，
其中步骤可以以任意顺序同时或间隔特定时间进行。
在一些实施方式中，所述第一组分和第二组分施用于应用对象的同一部位。在另一些实施方式中，所述第一组分和第二组分分别施用于应用对象的不同部位。
本发明还提供另一种使用所述狂犬疫苗组合物诱导免疫应答的方法，其将第一组分和第二组分同时施用于应用对象。所述方法包括以下步骤：
(i)将所述第一组分和所述第二组分混合；
(ii)向所述应用对象施用步骤(i)获得的混合物。
另一方面，本发明提供一种利用所述狂犬疫苗组合物改善CD4 T-细胞免疫应答和/或改善B-记忆细胞应答的方法，向应用对象分别同时施用或不同时施用所述第一组分和所述第二组分，或者将所述第一组分和所述第二组分混合后施用于应用对象。
相比现有技术，本发明具有如下有益效果：
本发明在包含狂犬病毒抗原的免疫成分的基础上进一步增加了乳剂佐剂，两种组分可以分开施用或共同施用并能基本上达到与传统制剂形式一致甚至更优的协同佐剂效果，可以有效改善免疫应答，快速刺激抗体的产生，并减少疫苗接种剂次。
另一方面，本发明的疫苗组合物在制备时不需要将包含狂犬病毒抗原的免疫成分与乳剂佐剂配制为成品制剂，乳剂佐剂和包含狂犬病毒抗原的免疫成分可以独立包装，从而可以避免抗原性物质与乳剂佐剂之间的相互影响，在包含铝佐剂的情况下，铝佐剂可以吸附抗原性物质，起到保护抗原的作用，同时，铝佐剂与抗原性物质形成整体，与乳剂混合时，抗原性物质无论是被铝佐剂吸附或被乳剂携带，均能同时发挥铝佐剂和乳剂的双重佐剂效果，因此，本发明的疫苗组合物可以达到更加高效、更加安全、同时更加稳定的技术效果。
附图说明
以下附图仅旨在于对本发明做示意性说明和解释，并不限定本发明的范围。其中：
图1为本发明实施例中采用不同免疫方案时中和抗体滴度随时间变化情况；
图2为本发明实施例中采用不同免疫方案时末次免疫14天后的中和抗体滴度。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，并参照附图，对本发明作进一步的详细说明。
本发明的狂犬疫苗组合物包含独立包装的第一组分和第二组分，第一组分包含狂犬病毒抗原，第二组分包含水包油佐剂。
在一些实施方式中，所述第一组分是狂犬病疫苗成品制剂，例如市售的冻干形式或液体形式的人用狂犬病疫苗。经过长期的技术改进，目前应用最广泛的包括地鼠肾细胞疫苗、Vero细胞疫苗、人二倍体疫苗三种灭活疫苗。
本发明中的狂犬病毒抗原可以利用任何的现有技术来制备。除非另有说明，任意可获得的狂犬病抗原可以被用于制备本实施方式中所述的第一组分。WHO批准了数个用于疫苗生产的狂犬病病毒株，包括但不限于：毕特曼-摩尔株(PM)、巴斯德病毒株(PV)、攻毒标准病毒株(CVS)、来自Flury鸡胚胎适应(chick embryo-adapted)株的少代鸡胚传代(LEP)或者多代鸡胚传代(HEP)株、Street-Alabama-Dufferin(SAD)病毒的Evelyn RokitnikiAbelseth(ERA)株和不同的SAD变体。这些经批准的病毒株适应于脑组织培养、鸡胚或鸭胚、原代细胞系(例如地鼠肾细胞系)、人二倍体细胞、或者连续细胞系(例如Vero细胞系)中。以上病毒株在灭活和纯化后能够用于制造疫苗。在一些实施方案中，灭活纯化的狂犬病病毒(IPRV)选自：CTN株、aG株、毕特曼-摩尔(PM)株以及巴斯德病毒(PV)株。例如，在一些实施方案中，IPRV在Vero细胞或者原代仓鼠肾(PHK)细胞中制备。IPRV通过繁殖混合至Vero细胞或PHK细胞中的病毒株而产生。在收集培养介质的上清液后，作为抗原收集、浓缩、灭活、纯化并存储病毒。
可选地，市售的狂犬病疫苗成品制剂例如：长春生物制品研究所有限责任公司、辽宁成大生物股份有限公司、宁波荣安生物药业有限公司、辽宁依生生物制药有限公司的冻干人用狂犬病疫苗(Vero细胞)；武汉生物制品研究所有限责任公司、辽宁成大生物股份有限公司、大连雅立峰生物制药有限公司的人用狂犬病疫苗(Vero细胞)；艾美诚信生物制药有限公司、河南远大生物制药有限公司的人用狂犬病疫苗(地鼠肾细胞)等。
在优选的实施方式中，制备的狂犬病毒抗原可以进一步与铝佐剂混合，制得本发明中的第一组分。其中，铝佐剂可选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾。铝佐剂可以利用任何的现有技术来制备，也可以采用市售的铝佐剂，例如CRODA的氢氧化铝佐剂ALHYDROGEL。
在本发明中，作为第二组分的水包油佐剂包含水相、油相和表面活性剂。其中，水相可以为选自磷酸盐缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、醋酸盐缓冲液或柠檬酸-磷酸缓冲液的缓冲溶液。油相包含可代谢油，优选为角鲨烯，并优选进一步包含α-生育酚。表面活性剂包含聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯(吐温)、失水山梨糖醇脂肪酸酯(司盘)、辛苯聚醇-9(曲拉通X-100或聚乙二醇辛基苯基醚以及卵磷脂中的一种或多种。例如，水包油佐剂可以包含角鲨烯、司盘85和吐温80，更优选地，水包油佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
实施例1制备包含乳剂佐剂和狂犬病毒抗原的双组分疫苗组合物
第一组分的制备：在生物反应器中培养Vero细胞至1-1.5×107cells/ml，对培养的Vero细胞按照1/500-1/100MOI进行狂犬病病毒接种，进行连续灌流培养，培养条件：温度32-36℃，pH7.2-7.6，溶氧40％-80％，搅拌速度80-120转/分钟；病毒接种后2-3天开始收获病毒液，连续收获5-20天，病毒液经0.65μm滤芯粗滤后通过300-500kD膜包进行15-30倍浓缩。在浓缩后的病毒收获液中按1:4000的体积比加入β-丙内酯，置于4℃至少24小时灭活狂犬病病毒；然后在37℃下放置2-3小时，以水解β-丙内酯。将灭活后的病毒液采用柱色谱法进行纯化，色谱介质为琼脂糖凝胶Sepharose 4FF，采用0.01mol/L磷酸盐缓冲液洗脱，上样量为层析柱体积的5～10％；检测器为紫外检测器，检测波长为280nm，收集第一个色谱峰得到狂犬病疫苗原液，稀释后得到人用狂犬疫苗，人用剂量为0.5mL，效价为5IU。
第二组分的制备：将2.14g角鲨烯和2.37gα-生育酚混合，然后加入45ml含有5wt.％吐温80的磷酸盐缓冲液混合后，在20℃搅拌温度条件下，以12000rpm搅拌20min，然后进行均质。均质温度20℃、均质压力80～120MPa下进行2-4个循环，制备获得粒径小于160nm的水包油佐剂。制剂：人用剂量的佐剂瓶为0.5ml，成分包括10.69mg的角鲨烯，11.86mg的α-生育酚，4.86mg的吐温80，3.53mg的NaCl，0.09mg的KCl，0.51mg的Na2HPO4，0.09mg的KH2PO4和灭菌注射用水。
实施例2制备包含乳剂佐剂和吸附于铝佐剂的狂犬病毒抗原的双组分疫苗组合物
第一组分的制备：按照实施例1的方法制备狂犬病毒疫苗原液，将狂犬病毒疫苗原液与氢氧化铝佐剂(ALHYDROGEL，CRODA，下同)或磷酸铝佐剂混合，在15℃，100rpm下震荡10h，使狂犬病毒吸附到氢氧化铝或磷酸铝佐剂上，得到吸附于铝佐剂的狂犬病毒疫苗。
第二组分的制备：按照实施例1的方法制备第二组分。
实施例3制备包含乳剂佐剂和抗原的疫苗组合物
按照实施例1的方法分别制备第一组分和第二组分，将第一组分和第二组分混合得到疫苗组合物。
实施例4小鼠免疫实验
分别利用不含佐剂的狂犬疫苗和实施例1中的疫苗组合物免疫BALB/c小鼠，每组10只，腹腔免疫，狂犬病毒疫苗剂量和佐剂剂量为人用剂量的1/25(即狂犬病毒疫苗20μL，乳剂佐剂20μL)，各组的佐剂、免疫途径和免疫程序如表1所示。分别在第3、7、14、28和42天采集血清，进行血清中和抗体检测。
表1
在第3天各组均未检测到中和抗体，第1、4和6组在第7、14、28和42天的中和抗体滴度GMT如表2和图1所示。
表2
可见，在采用传统的5针免疫程序时，单独接种狂犬疫苗时产生的中和抗体滴度GMT虽连续提高，但提高速度比较平缓，在联合接种狂犬疫苗和乳剂佐剂时，中和抗体滴度GMT明显提高，但提高速度与单独接种狂犬疫苗时比较相似，即在第14天，中和抗体滴度GMT提高至第7天时的近8倍，在第28天和第42天，中和抗体滴度GMT提高至前次检测值的2-3倍和1.5倍。
而在采用2针免疫程序时，联合接种狂犬疫苗和乳剂佐剂产生的中和抗体滴度GMT在前期比较平缓，但在接种第二针进行加强免疫(第28天)的2周后(第42天)的中和抗体滴度GMT迅速增长至加强免疫(第28天)时中和抗体滴度GMT的37倍。可见，传统接种程序虽可诱导持续提高的中和抗体滴度，但由于接种时间间隔较短，无法发挥加强免疫的效果，从而导致第42天的中和抗体滴度GMT尚不及采用2针免疫程序的接种方案。
末次免疫14天后(即第42天)，各组小鼠的中和抗体滴度GMT如图2所示。可以发现，在单独接种狂犬疫苗的情况下，按照传统接种程序接种5针的中和抗体滴度GMT为933223，而按照设定程序接种三针和两针的中和抗体滴度GMT为492458和696440，均低于传统接种程序时的中和抗体滴度GMT。
在联合接种狂犬疫苗和乳剂佐剂的情况下，按照传统接种程序接种5针的中和抗体滴度GMT显著提高到2111213，而按照设定程序接种三针和两针的中和抗体滴度GMT为800000和2962799。
因此，联合接种狂犬疫苗和乳剂佐剂可以显著提高狂犬疫苗的免疫应答，在接种三针或两针的情况下可以达到与传统接种程序接种5针相当甚至更佳的效果，尤其是联合接种狂犬疫苗和乳剂佐剂且间隔28天接种2针的免疫方案，中和抗体滴度GMT显著高于单独接种狂犬疫苗的三种免疫方案以及联合接种狂犬疫苗和乳剂佐剂且接种3针的免疫方案。因此，本发明的实验结果表明联合接种狂犬疫苗和乳剂佐剂可以将免疫次数降低至2次。
本发明的狂犬疫苗组合物包含独立包装的水包油佐剂(包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80)以及独立包装的狂犬疫苗成品，能够更加快速、长效、安全地刺激机体产生高水平的免疫应答，并且还可以减少疫苗接种剂次。
以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (16)

1.一种狂犬疫苗组合物，其特征在于，包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含狂犬病毒抗原，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
2.根据权利要求1所述的狂犬疫苗组合物，其特征在于，所述狂犬病毒抗原为减毒活疫苗、灭活疫苗、类毒素疫苗、亚单位疫苗、载体疫苗、基因工程疫苗或核酸疫苗成品制剂。
3.根据权利要求2所述的狂犬疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分包含铝佐剂。
4.根据权利要求1所述的狂犬疫苗组合物，其特征在于，所述铝佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的狂犬疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分中铝佐剂的含量为10-1000μg，优选50-800μg。
6.根据权利要求1所述的狂犬疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分是冻干制剂、溶液或混悬液。
7.根据权利要求6所述的狂犬疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分的溶液或混悬液的体积为0.2-1ml，优选为0.5ml。
8.根据权利要求1-7任一项所述的狂犬疫苗组合物，其特征在于，所述第一组分为灭活狂犬疫苗成品制剂，效价不低于2.5IU。
9.根据权利要求1所述的狂犬疫苗组合物，其特征在于，所述水包油佐剂包含5-15mg角鲨烯、5-15mgα-生育酚和2-10mg吐温80，优选地，所述水包油佐剂包含10.69mg角鲨烯、11.86mgα-生育酚和4.86mg吐温80。
10.根据权利要求1或9所述的狂犬疫苗组合物，其特征在于，所述水包油佐剂的体积为0.2-1ml，优选为0.5ml。
11.根据权利要求1所述的狂犬疫苗组合物，其特征在于，所述水包油佐剂进一步包含3D-MPL、皂苷、poly I：C和CpG中的一种或多种。
12.一种权利要求1-11任一项所述狂犬疫苗组合物的制备方法，所述方法包括以下步骤：
(i)制备包含狂犬病毒抗原和铝佐剂的第一组分；
(ii)制备作为第二组分的包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80的水包油佐剂；
(iii)将所述第一组分与第二组分分别独立包装，制得狂犬疫苗组合物，
其中步骤(i)和(ii)可以以任一顺序进行，包括先后进行、同时进行或分场地进行。
13.权利要求1-11任一项所述狂犬疫苗组合物在制备用于治疗或预防狂犬病的药物中的用途。
14.根据权利要求13所述的用途，其中，在28天内施用所述狂犬疫苗组合物2-3次优选地，在28天内施用所述狂犬疫苗组合物3次，每次间隔14天；或者，在28天内施用所述狂犬疫苗组合物2次，每次间隔28天。
15.一种包含所述狂犬疫苗组合物的多室注射器，其特征在于包含第一隔室和第二隔室，所述第一隔室装有第一组分，所述第一组分包含狂犬病毒抗原；第二隔室装有第二组分，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
16.一种包含权利要求1-11任一项所述狂犬疫苗组合物的试剂盒，其特征在于，包含独立包装的第一组分和第二组分，所述第一组分包含狂犬病毒抗原，所述第二组分包含水包油佐剂，所述水包油佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
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