CN101883564B - 使用(-)-尼伐地平对映体减少淀粉状蛋白沉积、淀粉状蛋白神经毒性和小神经胶质增生的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了在患有脑致淀粉样变疾病例如阿尔茨海默病(AD)的动物或人中减少Aβ沉积、Aβ神经毒性和小神经胶质增生的方法，通过对所述动物或人施用治疗有效量的二氢吡啶化合物尼伐地平的(R)-对映体、也称作(-)-尼伐地平来进行。还提供了在患有外伤性脑损伤的动物或人中降低Aβ沉积、Aβ神经毒性和小神经胶质增生的风险的方法，通过在外伤性脑损伤后施用(-)-尼伐地平和此后继续治疗达预定时间期限来进行。

Description

使用(-)-尼伐地平对映体减少淀粉状蛋白沉积、淀粉状蛋白神经毒性和小神经胶质增生的方法
本申请要求了2007年10月5日提交的美国临时专利申请60/977,953和2008年4月18日提交的美国临时专利申请61/046,109的优先权，将这两件申请各自的全部内容引入作为参考。 
发明领域
本发明涉及治疗脑致淀粉样变(amyloidogenic)疾病例如阿尔茨海默病的病理生理作用的方法。更具体地说，该方法包括施用尼伐地平的(-)对映体以对抗患有与脑淀粉样变相关的疾病例如阿尔茨海默病的动物或人脑中的病理生理作用，并且与尼伐地平的外消旋混合物相比抗高血压副作用减少。 
发明背景 
相关领域的描述 
阿尔茨海默病(AD)是最常见的衰老性神经变性障碍，累及约1％超过65岁的人口。这种疾病的特征性特点包括胞内神经原纤维缠结、胞外实质老年斑和脑血管沉积物在脑中的进行性蓄积。老年斑和脑血管沉积物的主要成分是39-43个氨基酸的β-淀粉样肽(Aβ)，其通过蛋白水解衍生自淀粉样前体蛋白(APP)—一种跨膜糖蛋白。 
APP是具有590-680个氨基酸胞外氨基末端结构域和约55个氨基酸胞质尾区的单一-跨膜蛋白。来自21号染色体上的APP基因的信使RNA进行可变剪接，产生8种可能的同工型，其中3种同工型(695、751和770个氨基酸的同工型)在脑中占优。APP通过称作α-、β-和γ-分泌酶的3种酶 活性进行蛋白酶解加工。α-分泌酶在Aβ结构域的第17个氨基酸处裂解APP，从而释放用于分泌的可溶性大氨基末端片段α-APP。因为α-分泌酶在Aβ结构域内裂解，所以这种裂解排除了Aβ形成。或者，APP可以被β-分泌酶裂解以确定Aβ的氨基末端和生成可溶性氨基末端片段β-APP。随后γ-分泌酶对APP的胞内羧基末端结构域的裂解导致生成多种肽，最常见的两种是40个氨基酸的Aβ(Aβ40)和42个氨基酸的Aβ(Aβ42)。Aβ40占分泌的Aβ的90-95％，是从脑脊液中回收的占优势种类(Seubert等人，Nature，359：325-7，1992)。相反，小于10％的分泌的Aβ是Aβ42。尽管Aβ42产生较少，但是Aβ42是在斑块中发现的占优势的种类并且在最初沉积，这可能是由于其形成不溶性淀粉状蛋白聚集物比Aβ40更快所导致的(Jarrett等人，Biochemistry，32：4693-7，1993)。认为Aβ在脑中的异常蓄积是由APP超表达或加工改变所导致的。 
由此认为Aβ肽在AD的病理学中起关键作用，因为与AD的家族型相关的所有突变均导致这些来自APP的肽的加工改变。实际上，Aβ的不溶性或聚集的原纤维在脑中的沉积物是AD所有形式的突出的神经病理学特征，与受试者的遗传素质无关。 
随Aβ沉积同时出现的是在AD脑中存在炎性途径的显著活化，包括Aβ沉积物中和Aβ沉积物周围的促炎细胞因子和急性期反应物的产生(McGeer等人，J Leukocyte Biol.，65：409-15，1999)。认为脑的驻留先天免疫细胞(即小神经胶质细胞)的活化与该炎性级联密切相关。已经证实，反应性小神经胶质细胞产生促炎细胞因子例如炎性蛋白和急性期反应物例如α1-抗胰凝乳蛋白酶、转化生长因子β、载脂蛋白E和补体因子，已经证明它们均定位于Aβ斑块，促进Aβ斑块“凝聚”或成熟(Nilsson等人，J.Neurosci.21：1444-5，2001)，并且在高水平时促进神经变性。流行病学研究已经显示，使用非甾体抗炎药(NSAIDS)的患者的AD风险下降高达50％(Rogers等人，Neurobiol.Aging 17：681-6，1996)，进行NSAID治疗的AD患者死亡后评价已经证明风险下降与活化的小神经胶质细胞数量减少相关(Mackenzie等人，Neurology 50：986-90，1998)。此外，当对Tg APPsw 小鼠(即阿尔茨海默病小鼠模型)给予NSAID(布洛芬)时，这些动物显示出与小神经胶质细胞活化减少相关的Aβ沉积物、星形细胞增多和营养不良性神经炎减少(Lim等人，J.Neurosci.20：5709-14，2000)。 
因此，在AD脑中炎性过程的产物可以加剧AD病状。此外，有证据表明AD脑中的活化的小神经胶质细胞不清除Aβ，通过促进Aβ原纤维生成和作为结果的老年斑沉积而致病(Wegiel等人，Acta Neuropathol.(Berl.)100：356-64，2000)。 
还已经表明，AD发病机制是由Aβ的神经特性特性所致。Aβ的细胞毒性首先在来自啮齿动物脑的初级细胞培养物中被确认，并且在人细胞培养物中也得到了确认。Mattson等人的工作(J.Neurosci.，12：376-389，1992)显示在兴奋性神经递质谷氨酸存在下Aβ导致胞内钙直接病理性增加，认为它通过其第二信使活性的显著增加而对细胞极具毒性。 
美国专利申请No.2005/0009885(2005年1月13日)(Mullan等人)公开了使用尼伐地平减少Aβ沉积的方法以及使用尼伐地平诊断脑致淀粉样变疾病的方法。然而，美国专利4,338,322描述了尼伐地平的抗高血压作用。在爱尔兰，尼伐地平(NIVADILTM)已经被管理部门批准以8mg/天的剂量或者如果使用8mg/天的剂量无法达到足够的抗高血压作用以16mg/天的剂量治疗高血压。还可参见美国专利5,508,413，其公开了尼伐地平的(+)-对映体的抗高血压作用。外消旋的尼伐地平及其对人类个体的局部脑血流的影响在Hanyu等人(Nuclear Medicine Communications，vol.28，no.4，第281-287页，2007年4月)中有报道。 
尽管存在上述报道，但是对预防脑变性(其是AD的标志)的无情进展存在需求，其中所述预防用治疗上有效的治疗解决Aβ沉积、Aβ神经毒性、小神经胶质活化的炎症和在AD患者中观察到的APP改变或超表达，并且副作用例如不希望的或过度的血压下降很轻微。 
发明概述 
为了满足这一需求，本发明提供了在患有脑致淀粉样变疾病例如阿尔茨海默病(AD)的动物或人中减少Aβ沉积、Aβ神经毒性和小神经胶质增生(microgliosis)的方法，通过对所述动物或人施用治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平来进行。本发明特别是提供了与相同量的外消旋的尼伐地平相比降血压作用减轻的对映体富集的(-)-尼伐地平的施用。此外，对映体富集的(-)-尼伐地平的施用与外消旋的尼伐地平或(+)-尼伐地平的施用相比允许剂量增加，这是由于降血压作用减轻所致。例如，本文给出的数据证明了针对(-)-对映体用FPL64176攻击时的基线主动脉收缩，它与(-)-对映体相比于外消旋混合物或表现出血管活性(即拮抗诱导的血管收缩)的(+)-对映体而言血管活性降低相关。在优选的实施方案中，在所施用的组合物中(-)-对映体以过量存在，且对映体过量优选是90％或更多、95％或更多，更优选是98％或更多，包括100％，至多达纯度的可检测限。 
本发明还提供了在患有外伤性脑损伤的动物或人中减少Aβ沉积、Aβ神经毒性和小神经胶质增生的风险的方法，通过在头部损伤后对所述动物或人施用治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平和此后继续进行对映体富集的(-)-尼伐地平治疗达预定的时间期限来进行。本发明特别是提供了与相同量的外消旋的尼伐地平相比降血压作用减轻的对映体富集的(-)-尼伐地平的施用。此外，对映体富集的(-)-尼伐地平的施用与外消旋的尼伐地平的施用相比允许剂量增加，这是由于降血压作用减轻所致。在优选的实施方案中，在所施用的组合物中(-)-对映体以过量存在，且对映体过量优选是90％或更多、95％或更多，更优选是98％或更多，包括100％，至多达纯度的可检测限。 
本发明还提供了在被诊断为具有发生脑致淀粉样变疾病或病症的风险的动物或人中降低发生脑致淀粉样变疾病或病症的风险或减缓脑致淀粉样变疾病或病症的发作或进展或稳定脑致淀粉样变疾病或病症的症状的方法，包括对所述动物或人施用治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平，其中对映体富集的(-)-尼伐地平的施用在发生脑致淀粉样变疾病或病症的风险被诊断后开始。本发明特别是提供了与相同量的外消旋的尼伐地平相比降血压作用减轻的对映体富集的(-)-尼伐地平的施用。此外，对映体富 集的(-)-尼伐地平的施用与外消旋的尼伐地平的施用相比允许剂量增加，这是由于降血压作用减轻所致。在优选的实施方案中，在所施用的组合物中(-)-对映体以过量存在，且对映体过量优选是90％或更多、95％或更多，更优选是98％或更多，包括100％，至多达纯度的可检测限。 
本发明提供了治疗脑致淀粉样变疾病的临床特性(包括一种或一种以上或所有与脑致淀粉样变疾病相关的认知和行为特征)的方法。例如，就AD而言，这类特征可以包括非限制性的症状列表，例如深度记忆丧失、执行熟知的任务有困难、语言有问题、定向障碍、判断力下降、抽象思维受损、个性、心境或行为改变、和/或在一系列认知测试中的特征性评分。这类认知测试包括韦克斯勒记忆量表修订版(Wechsler Memory Scale Revised)(WMS-R)、临床痴呆分级评定(Clinical Dementia Rating)(CDR)、简易精神状态检查(Mini-Mental State Examination)(MMSE)和/或阿尔茨海默病评定量表-认知子量表(Alzheimer’s Disease Assessment Scale-Cognitive Subscale)(ADAS)。 
本发明提供了可以产生特定临床结果的用对映体富集的(-)-尼伐地平进行的治疗。一个治疗终点是受脑致淀粉样变疾病侵害的那些个体的一种或一种以上疾病症状的可测量的改善。所述改善可导致患者无症状，或者可反映出与治疗前的一种或一种以上症状相比在能力上改善。或者，一个治疗终点可以是维持基线症状水平。换言之，该终点表示疾病或者疾病的一种或一种以上症状持续稳定或在一定时间期限中稳定。此外，一个治疗终点可以是与未治疗的对照组相比疾病进展的速度降低。此外，治疗可以包括对被认为具有发生脑致淀粉样变疾病的风险、但尚未临床表现出一种或一种以上症状的个体进行预治疗。所提及的疾病的“治疗”还包括一种或一种以上症状的治疗，其中该治疗是姑息性的，而非治愈性的。 
本发明还提供了处理可移植神经元干细胞的方法，包括在将干细胞移植入患有脑致淀粉样变疾病例如AD的动物或人的中枢神经系统之前对神经干细胞施用一定量的对映体富集的(-)-尼伐地平。所施用的量是实现所需的细胞保护作用的量。在优选的实施方案中，在所施用的组合物中(-)-对映 体以过量存在，且对映体过量优选是90％或更多、95％或更多，更优选是98％或更多，包括100％，至多达纯度的可检测限。 
附图简述 
图1是说明使用4G8免疫染色技术获得的长期施用尼伐地平对TgAPPsw小鼠脑的不同区域中Aβ沉积(Aβ负荷)的影响的棒形图。 
图2是说明使用测定CD45+小神经胶质细胞数量的CD45免疫染色技术获得的长期施用尼伐地平对TgAPPsw小鼠3个脑区域中小神经胶质活化的影响的棒形图。 
图3是说明在用脂多糖(LPS)体外活化24小时的N9鼠小神经胶质细胞中尼伐地平对小神经胶质活化的影响的棒形图。小神经胶质活化是根据用ELISA测定的TNF-α产量(pg/ml)确定的。 
图4是说明使用被30μM预聚集的Aβ1-40(AgAβ)处理3天的HPNC细胞获得的尼伐地平施用对Aβ神经毒性的影响的棒形图。神经毒性是通过测量从细胞中释放的乳酸脱氢酶(LDH)的量来评价的。 
图5A和5B是说明使用被APPSW转染的人成胶质细胞瘤细胞获得的尼伐地平对APP加工的影响的棒形图。将细胞用50nM和250nM尼伐地平处理24小时(图5A)和48小时(图5B)。通过ELISA测量培养基中Aβ1-40的产生。 
图6是显示尼伐地平的纯对映体形式(尼伐地平1和尼伐地平2)以及两种对映体等比例的混合物(N1+N2)在处理24小时后对7W WT APP751中国仓鼠卵巢细胞产生Aβ1-40的影响的剂量响应曲线。两种对映体以类似方式显示出剂量依赖性地抑制Aβ1-40产生。 
图7是显示尼伐地平的纯对映体形式(尼伐地平1和尼伐地平2)以及两种对映体等比例的混合物(N1+N2)在处理24小时后对7W WT APP751中国仓鼠卵巢细胞产生Aβ1-420的影响的剂量响应曲线。注意到纯对映体尼伐地平2和尼伐地平的外消旋混合物(N1+N2)在低剂量下轻度刺激Aβ1-42，而对映体尼伐地平1无这种作用。 
图8是显示尼伐地平对映体分离的手性色谱图。Nilva_Peak_1对应于(-)-尼伐地平(尼伐地平1)；Nilva_Peak_2对应于(+)-尼伐地平(尼伐地平2)。Nilva_10表示尼伐地平原始外消旋混合物，将其包括在图中是出于说明目的。 
图9显示了(-)-尼伐地平(尼伐地平1)和(+)-尼伐地平(尼伐地平2)对FPL64176诱导的大鼠主动脉血管收缩的影响。数据显示(+)-尼伐地平完全拮抗FPL64176诱导的血管收缩，而(-)-尼伐地平不影响L-型钙通道激动剂的血管作用，这表明(+)-尼伐地平是L-型钙通道阻滞剂，而(-)-尼伐地平无这种作用。 
图10是说明(-)-尼伐地平对93-周龄Tg APPsw小鼠脑A01-40和Aβ1-42水平的影响的棒形图。将动物每天用(-)-尼伐地平(10mg/kg体重)腹膜内处理，处理4天。 
图11是说明(-)-尼伐地平的缓慢释放对70-周龄Tg APPsw小鼠脑Aβ1-42水平的影响的棒形图。将动物用皮下植入的生物可降解的丸剂处理26天。 
图12说明了使用含有一层人脑微血管内皮细胞(HBMEC)的24-孔半透明0.4μm膜插入物的血脑屏障体外模型。在不同的时间点评估荧光素-β淀粉状蛋白1-42向顶部隔室的迁移。 
图13是显示(-)-尼伐地平对脑Aβ跨血脑屏障清除的体外影响的棒形图。A＝顶部，B＝底外侧。 
图14是显示(-)-尼伐地平和尼伐地平外消旋混合物对脑Aβ跨血脑屏障清除的体外影响的比较的棒形图。A＝顶部，B＝底外侧。 
图15是显示通过小鼠血浆Aβ水平测量的(-)-尼伐地平对脑Aβ跨血脑屏障清除的体内影响的棒形图。 
图16是显示生物可降解的(-)-尼伐地平丸剂对脑Aβ跨血脑屏障清除的体内影响的棒形图。 
图17A和17B显示了(+)-尼伐地平和(-)-尼伐地平在药物剂量范围内的血管作用特性的比较。 
优选实施方案的描述 
本发明提供了用于在动物或人中解决脑变性(其是某些脑致淀粉样变疾病例如阿尔茨海默病(AD)的标志)的无情进展的预防方法和治疗方法，通过施用对映体富集的(-)-尼伐地平(异丙基3-甲基2-氰基-1，4-二氢-6-甲基-4-(间-硝基苯基)-3，5-吡啶-二甲酸酯；MW385.4)来进行。本发明的方法包括治疗、预防和改善症状。 
除非另有具体规定，否则本文所用的术语尼伐地平是指外消旋混合物。本文所用的术语“对映体富集的”是指一种化合物，其是其中(-)-对映体以过量存在且优选以90％或更多、95％或更多、更优选98％或更多、包括100％、至多达纯度的可检测限的程度存在的对映体混合物。例如，可通过使用手性HPLC方法进行的检测来测定纯度。在一个实施方案中，通过用主要组分减去次要组分来计算对映体过量。例如，具有98％(-)-对映体和2％(+)-对映体的对映体混合物将被计算为(-)-对映体96％对映体过量。 
特定地，本发明的一个实施方案提供了在患有脑致淀粉样变疾病或病症的动物或人中减少Aβ沉积、Aβ神经毒性和小神经胶质增生的方法，通过对所述动物或人施用治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平来进行。因为大部分脑致淀粉样变疾病例如AD是慢性的进行性的顽固性脑痴呆，所以考虑到对映体富集的(-)-尼伐地平治疗的期限将持续长达动物或人的终生。脑致淀粉样变疾病或病症包括但不限于阿尔茨海默病、外伤性脑损伤和脑淀粉样血管病。 
在另一个实施方案中，本发明提供了治疗传染性海绵状脑病、瘙痒病或Gerstmann-Straussler-Scheinker综合征的方法。 
在本发明的另一个实施方案中，提供了在患有外伤性脑损伤(TBI)的动物或人中降低Aβ沉积、Aβ神经毒性和小神经胶质增生的风险的方法，通过在TBI后对所述动物或人施用治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平和此后继续对映体富集的(-)-尼伐地平治疗达预定时间期限来进行。考虑用于这些患有TBI的动物或人的对映体富集的(-)-尼伐地平的治疗期限能持续约1小时-5年，优选约2周-3年，最优选约6个月-12个月。 
在另一个实施方案中，提供了治疗脑致淀粉样变疾病的临床特性(包括一种或一种以上或所有与脑致淀粉样变疾病相关的认知和行为特征)的方法。例如，就AD而言，这类特征可以包括非限制性的症状列表，例如深度记忆丧失、执行熟知的任务有困难、语言有问题、定向障碍、判断力下降、抽象思维受损、个性、心境或行为改变、和/或在一系列认知测试中的特征性评分。这类认知测试包括韦克斯勒记忆量表修订版(WMS-R)、临床痴呆分级评定(CDR)、简易精神状态检查(MMSE)和/或阿尔茨海默病评定量表-认知子量表(ADAS)。 
在一个或一个以上实施方案中，使用对映体富集的(-)-尼伐地平进行的治疗可以产生特定的临床结果。一个治疗终点是受脑致淀粉样变疾病侵害的那些个体的一种或一种以上疾病症状的可测量的改善。这种改善可导致患者无症状，或者可反映出与治疗前的一种或一种以上症状相比在能力上改善。或者，一个治疗终点可以是维持基线症状水平。换言之，该终点表示疾病或者疾病的一种或一种以上症状持续稳定或在一定时间期限中稳定。此外，一个治疗终点可以是与未治疗的对照组相比疾病进展的速度降低。此外，治疗可以包括对被认为具有发生脑致淀粉样变疾病的风险、但尚未临床表现出一种或一种以上症状的个体进行预治疗。所提及的疾病的“治疗”还包括一种或一种以上症状的治疗，其中该治疗是姑息性的，而非治愈性的。 
根据本发明的方法任选以单位剂型施用于患有脑致淀粉样变疾病或患有外伤性脑损伤的动物或人以及以确定动物或人发生脑致淀粉样变疾病的风险和/或诊断动物或人的脑致淀粉样变疾病为目的所施用的对映体富集的(-)-尼伐地平的治疗有效量可以为约0.05mg-20mg/天，优选约2mg-15mg/天，更优选约4mg-12mg/天，最优选约8mg/天。日剂量可以每天以单一单位剂量的形式或分成2、3或4个单位剂量施用。在另一个实施方案中，对映体富集的(-)-尼伐地平的治疗有效量为大于16mg/天，直至最大耐受剂量限。例如，对映体富集的(-)-尼伐地平的治疗有效量可以为 16mg/天-约20mg/天。或者，对映体富集的(-)-尼伐地平的治疗有效量可以为约20mg/天、约30mg/天、约40mg/天、约50mg/天、约75mg/天、约100mg/天、约125mg/天、约150mg/天、约175mg/天、约200mg/天、约225mg/天、约250mg/天、约275mg/天、约300mg/天、约325mg/天、约350mg/天、约375mg/天、约400mg/天、约425mg/天、约450mg/天、约475mg/天、约500mg/天、或者高达最大耐受剂量/天，以及位于上述用量之间的任意整数量或其它量。范围可以改变。例如，非限制性范围包括20、40、60、80或100mg/天的下限端点和50、100、150、200、250、300和500mg/天的上限端点，也可以用上述用量内的任意整数量或其它量作为端点。 
不希望受理论约束，认为抗高血压作用可限制外消旋尼伐地平的最大耐受量。在本发明的一个实施方案中，在施用对映体富集的(-)-尼伐地平后，对映体富集的(-)-尼伐地平的治疗有效量以选自小于约30％、小于约20％、小于约10％、小于约5％和小于约1％的治疗前血压的量降低血压。可以以各种方式测量血压。例如，可以以毫米汞柱将血压测量为收缩压或舒张压。 
或者，可以根据公式2/3舒张压+1/3收缩压读数计算血压。在一个实施方案中，连续监测血压并且相对于时间进行积分，得到曲线下面积(AUC)的单一值。可以将血压的变化与正常群体进行比较，或可以将血压的变化与治疗个体治疗前的血压进行比较。在一个实施方案中，在治疗期后测量治疗后的血压，此时已经建立了血压的稳态变化。例如，可以在治疗约1周、治疗约4周、治疗约12周、治疗约6个月等之后测量治疗后的血压。在一个实施方案中，对具有正常血压或低血压的人或动物施用对映体富集的(-)-尼伐地平。在一个实施方案中，对高血压的人或动物施用对映体富集的(-)-尼伐地平。在人中，正常血压视为约90/50mm Hg-约135/90mm Hg。低于正常范围的人血压被视为低血压。 
在另一个实施方案中，将本发明的治疗剂施用于高血压患者，或者施用于患者，无论其血压水平如何。高血压患者可以同时用抗高血压药治疗。 高于正常范围的人血压被视为高血压。 
可以在标准兽医手册中找到各种动物的正常范围。在一个实施方案中，血压位于正常范围中，该正常范围是天然的或因药物干预例如施用另外的抗高血压药所致。 
在本发明的另一个实施方案中是预处理可植入的人或异种神经元干细胞的方法，通过在将细胞移植入可患有脑致淀粉样变疾病例如AD的动物或人的中枢神经系统之前对所述神经元干细胞施用治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平来进行。据推测，神经元干细胞自身将不具有明显的Aβ沉积。然而，如果神经元植入旨在针对Aβ-负荷环境，则神经元干细胞的预处理应通过降低Aβ浓度和由此降低其中的Aβ-毒性而增强植入的神经元在其新环境中存活的能力。被施用用于预处理神经元干细胞的对映体富集的(-)-尼伐地平的治疗有效量可以为约1nM-3μM，优选约10nM-2μM，最优选约100nM-1μM。已知当涉及分化成特定细胞类型如神经元细胞时，干细胞提供了可更新来源的替代细胞和组织的能力以治疗疾病和病症，例如阿尔茨海默病、帕金森病或脊髓损伤。当将这类细胞移植/植入患者时，适当的是不仅用对映体富集的(-)-尼伐地平预处理细胞，而且还在植入后开始用对映体富集的(-)-尼伐地平对患者进行治疗性治疗。 
认为本发明的方法可以用已知的AD转基因动物模型例如PDAPP和TgAPPsw小鼠模型进行测试，然后再测试其在治疗、预防和/或抑制与人中枢神经系统中淀粉状蛋白沉积、Aβ神经毒性和小神经胶质增生相关的病症方面的功效。这类AD转基因动物模型使用本领域已知的标准方法构建，例如，如美国专利5,487,992；5,464,764；5,387,742；5,360,735；5,347,075；5,298,422；5,288,846；5,221,778；5,175,385；5,175,384；5,175,383；和4,736,866中所述的那样构建。 
对映体富集的(-)-尼伐地平可以通过各种途径施用于患者，包括胃肠外、口服或腹膜内途径。胃肠外施用包括下列途径：静脉内施用；肌内施用；间质(interstitial)施用；动脉内施用；皮下施用；眼内施用；颅内施用；鞘内施用；心室内施用；滑膜内施用；经上皮施用，包括透皮施用、经由 吸入肺施用、眼科施用、舌下施用和口含施用；局部施用，包括眼科施用、皮肤施用、眼施用、直肠施用或经由吹入或雾化鼻吸入施用。 
口服施用的对映体富集的(-)-尼伐地平可以包封在硬或软壳明胶胶囊中或压制成片剂。还可以将对映体富集的(-)-尼伐地平与赋形剂掺和并且以可摄入的片剂、含片、药片(troche)、胶囊、小药囊、锭剂、酏剂、混悬剂、糖浆剂、糯米纸囊剂等形式使用。此外，对映体富集的(-)-尼伐地平可以是粉末或颗粒的形式、在水性液体或非水性液体中的溶液或混悬液的形式、或者水包油型或油包水型乳剂的形式。 
片剂、药片、丸剂、胶囊等还可以含有：例如，粘合剂，例如西黄蓍胶、阿拉伯胶、玉米淀粉；凝胶化赋形剂，例如磷酸二钙；崩解剂，例如玉米淀粉、马铃薯淀粉、海藻酸等；润滑剂，例如硬脂酸镁；甜味剂，例如蔗糖、乳糖或糖精；或者矫味剂。可以将活性成分配制成单位剂型或非单位剂型或者以单位剂型或非单位剂型的形式施用。当单位剂型是胶囊时，它除了含有上述物质外还可以含有液体载体。各种其它物质可以作为包衣存在，后者用以调整剂量单位的物理形式。例如，可以将片剂、丸剂或胶囊用虫胶、糖或这二者包衣。糖浆剂或酏剂可以含有尼伐地平、作为甜味剂的蔗糖、作为防腐剂的对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯、染料和矫味剂。另外，可以将对映体富集的(-)-尼伐地平掺入持续释放制剂和配制物中。 
可以将对映体富集的(-)-尼伐地平通过胃肠外或腹膜内途径施用于CNS。可以制备游离碱或药学上可接受的盐形式的尼伐地平在水与合适的表面活性剂例如羟丙基纤维素的混合物中的溶液。还可以制备其在甘油、液体聚乙二醇及其混合物中以及在油中的分散液。在普通贮存和使用条件下，这些制剂可以含有防腐剂和/或抗氧化剂，以防止微生物的生长或化学降解。 
所需要的(-)-尼伐地平对映体在其手性中心上具有(R)构型。本文提供的化合物可以是对映体纯的或与一些量的(+)(S)-尼伐地平的立体异构体混合物。应当理解的是，本文公开的对映体富集的(-)-尼伐地平涵盖任何旋光活性形式、多晶型物或立体异构形式或其混合物，它们优选具有本文所述的有用特性，在本领域中众所周知如何制备旋光活性形式和如何使用本文所述的标准试验或使用本领域众所周知的其它类似试验测定活性。本文所用的术语“对映体富集的”是指一种化合物，其是其中(-)-对映体以过量存在且优选以90％或更多、95％或更多、更优选98％或更多、包括100％、至多达纯度的可检测限的程度存在的对映体混合物。例如，通过用手性HPLC方法进行检测可以测定纯度。
能用于获得化合物的旋光异构体的方法的实例包括以下方法： 
i)晶体的物理分离-一种技术，其中各对映体的肉眼可见的晶体被手工分离。如果存在独立的对映体晶体，即该物质是聚集物且晶体在视觉上是不同的，则可以使用该技术； 
ii)同时结晶-一种技术，其中各对映体从外消旋物溶液中分别结晶出来，只有当外消旋物是固态聚集物时是可能的； 
iii)酶法拆分-一种技术，其中利用对映体与酶的不同反应速率来部分或完全分离外消旋物； 
iv)酶法不对称合成，即其中合成的至少一个步骤使用酶促反应以获得所需对映体的对映体纯的或对映体富集的合成前体的合成技术； 
v)化学不对称合成-一种合成技术，其中在产生产物不对称性(即手性)的条件下由非手性前体合成所需对映体，其可以使用手性催化剂或手性助剂来实现； 
vi)非对映体分离-一种技术，其中外消旋化合物、前体或半合成中间体与将各对映体转换成非对映体的对映体纯的试剂(手性助剂)反应。然后利用它们目前更为不同的结构差异通过色谱法或结晶法分离所得到的非对映体，之后除去手性助剂，得到所需的对映体(例如参见Fujisawa Pharmaceutical Co.，Ltd的美国专利5,508,413)； 
vii)一级-和二级-不对称转化-一种技术，其中来自外消旋物的非对映体平衡至与所需对映体相比非对映体在溶液中占优势，或其中与所需的对映体相比非对映体优先结晶，打破平衡，使得最终所有物质基本上从所需的对映体转化成结晶性非对映体。然后从非对映体中释放所需的对映体； 
viii)动力学拆分—这种技术是指利用对映体与手性非外消旋试剂或催化剂在动力学条件下的不相等的反应速率来实现外消旋物的部分或完全拆分(或部分拆分的化合物的进一步拆分)； 
ix)从非外消旋前体进行对映体特异性合成—一种合成技术，其中从非手性原料获得所需的对映体且其中立体化学完整性在合成过程中不受损害或仅受到极小程度的损害； 
x)手性液相色谱法—一种技术，其中利用其与固定相的不同相互作用在液体流动相中分离外消旋物的对映体。固定相可以由手性物质制成或者流动相可以含有另外的手性物质以引起不同相互作用； 
xi)手性气相色谱法—一种技术，其中将外消旋物挥发，利用它们在气态流动相中与含有固定的非外消旋手性吸附相的柱的不同相互作用分对映体； 
xii)用手性溶剂提取—一种技术，其中利用一种对映体优先溶于特定手性溶剂中分离对映体；和 
xiii)跨手性膜转运—一种技术，其中使外消旋物与薄膜屏障接触。该屏障典型地分离两种可混溶的流体，其中一种流体含有外消旋物，驱动力例如浓度或压力差导致优先跨膜屏障转运。作为仅允许外消旋物的一种对映体通过的膜的非外消旋手性特性的结果发生分离。 
xiv)液相色谱法—一种技术，其中利用它们相对于手性固定相而言的分配系数差异在正相溶剂系统中分离对映体。该技术用于产生本文所述的(-)-尼伐地平和(+)-尼伐地平的旋光活性制备物(参见图8)。 
已经如下分离了尼伐地平的对映体： 
尼伐地平1 
(-)-尼伐地平 
文献值：[a]D 20-219.6°(c＝1.0，MeOH) 
测定值：[a]D 20-99.0°(c＝0.057，MeOH) 
尼伐地平2 
(-)-尼伐地平 
Figure GPA00001143256000152
文献值：[a]D 20+222.4°(c＝1.0，MeOH) 
测定值：[a]D 25+170.1°(c＝0.05，MeOH) 
在Satoh，Y.；Okumura，K.；Shiokawa，Y.Chem.Pharm.Bull.42(4)950-952(1994)中报道了尼伐地平对映体的旋光度的文献值。关于分离的化合物的对映体纯度的数据，参见图5。 
术语“约”意指在所述量的±10％内或在测定记数的实验误差内。术语“基本由…组成的组合物”用于涵盖其中活性药物成分如所述的那样的组合物。在一个实施方案中，术语“基本由…组成”排除了未列出的活性药物成分，但不排除药学上可接受的介质、载体或稀释剂或者配制活性药物成分的方式。在一个实施方案中，例如，在治疗方法中，术语“基本由…组成”可涵盖作为用于该特定适应症的仅有的治疗剂施用一种或一种以上活性药物成分，但是不排除由于其它原因或适应征而施用的治疗剂。 
实施例
在下面的非限制性实施例中更具体地描述了本发明的用于在患有与 淀粉样变相关的疾病例如AD的动物或人中减少Aβ的病理作用的方法。实施例1-5提供了用于比较目的的外消旋尼伐地平的数据。 
尼伐地平对映体的色谱纯化 
通过高效液相色谱法(HPLC)使用改性纤维素固定相(ChiralTechnologies，West Chester，PA)实现尼伐地平的两种对映体的色谱纯化。色谱条件如下：柱内径10mm；柱长250mm；流动相95∶5体积比的己烷与乙醇；流速2.5ml/min；柱温7℃。使用以信号为基础的级分收集将外消旋尼伐地平重复进样，得到本文所述实施例的纯化的对映体。参见图8。 
实施例1 
尼伐地平对Aβ沉积(淀粉状蛋白负荷)的长期施用 
使用4G8抗-Aβ单克隆抗体免疫染色技术检验长期施用尼伐地平对TgAPPsw小鼠脑不同区域中Aβ沉积(淀粉状蛋白负荷)的影响。鉴于其对Aβ沉积的定量分析而言稳健的信号和最佳结果，选择4G8免疫技术用于测定Aβ负荷。简言之，如之前(Nakagawa，Y等人，Exp.Neurol.，163：244-252，2000)所述对石蜡切片进行免疫组织化学检查。将切片在二甲苯中脱石蜡，在一系列乙醇和去离子水中水化，通过将切片浸入88％甲酸中60min进行抗原回收步骤，此后对Aβ进行免疫组织化学检查。用水洗涤切片，使用新制备的甲醇(150ml)与过氧化氢(33％，30ml)混合物淬灭内源性过氧化物酶。根据销售商(Vector Laboratories，Burlingame，Calif.)的说明书使用抗生物素蛋白-生物素复合物法。通过测定Aβ染色阳性的脑区域的百分比评价淀粉状蛋白负荷。阴性对照包括对切片应用相同的免疫组织化学方案，不同的是使用免疫前血清，而非一抗。将TgAPPsw小鼠分成接受有效量的尼伐地平的实验组(n＝7)和接受介质的对照组(n＝5)。 
如图1中所示，使用尼伐地平进行治疗与对照组相比在视皮质中减少了约62％的Aβ负荷、与对照组相比在顶叶皮层中减少了约65％的Aβ负荷、与对照组相比在运动皮质中减少了约58％的Aβ负荷、与对照组相比在梨形皮质中减少了约58％的Aβ负荷、与对照组相比在海马的CA1区中减少了约52％的Aβ负荷，与对照组相比在海马的CA2-CA3区中减少了约 50％的Aβ负荷。 
实施例2 
尼伐地平对小神经胶质活化的长期施用 
使用CD45免疫染色技术在小鼠脑的三个区域中检验长期施用尼伐地平对TgAPPsw小鼠小神经胶质活化的影响。 
简言之，在低温恒温器脑切片上进行CD45(小神经胶质细胞的特异性标记物)的免疫组织化学检查。通过在4℃下与抗CD45鼠单克隆抗体(Chemicon International)一起孵育过夜对CD45-阳性小神经胶质细胞进行免疫固定，然后应用生物素化的兔抗小鼠二抗30分钟。使用二氨基联苯胺色原底物完成CD45的检测，所述二氨基联苯胺色原底物在CD45-阳性小神经胶质细胞上产生棕色细胞表面染色。 
如图2中所示，当与对照组相比时，以有效剂量施用的尼伐地平治疗在海马中减少了约33％的小神经胶质活化、在顶叶皮层中减少了约43％的小神经胶质活化，在运动皮质中减少了约27％的小神经胶质活化。 
实施例3 
尼伐地平施用对小神经胶质活化的影响 
在用脂多糖(LPS)体外活化24小时的N9鼠小神经胶质细胞中检验尼伐地平对小神经胶质活化的影响。N9鼠小神经胶质细胞是充分表征的来源于胚胎小鼠脑的清除剂鼠小神经胶质克隆。通过用ELISA测定的TNF-α产生(pg/ml)来确定小神经胶质活化的程度。如图3中所示，未用LPS活化的小神经胶质细胞(对照组细胞)产生了约40pg/ml TNF-α。在50nM尼伐地平存在下小神经胶质细胞产生约40pg/ml TNF-α。将尼伐地平施用增加10倍(500nM)不改变TNF-α产生。在1μg/ml LPS存在下小神经胶质细胞产生约820pg/ml TNF-α，与对照组细胞和施用尼伐地平的细胞相比增加约95％。在1μg/ml LPS+50nM尼伐地平二者均存在下小神经胶质细胞产生约670pg/ml TNF-α。LPS+500nM尼伐地平施用将TNF-α产生降低至约610pg/ml。因此，尼伐地平对抗了约20-25％的LPS-诱导的小神经胶质活化。 
实施例4 
尼伐地平施用对Aβ神经毒性的影响 
使用用30μM预聚集的Aβ1-40(AgAβ)处理3天的人神经元祖细胞(HNPC)检验尼伐地平施用(10nM和100nM)对Aβ神经毒性的影响。HNPC细胞在用环AMP处理后易于分化成神经元。将环AMP(1mM)(Sigma)加入到培养基中，将HNPC细胞在37℃下、在不含血清的条件下孵育48小时或48小时以上。正如通过使用抗微管相关蛋白MAP-2抗体染色大部分细胞所证实的那样，该培养基使得祖细胞分化成神经元谱系的细胞。通过测定从细胞中释放的乳酸脱氢酶(LDH；在所有细胞中发现的胞内酶)的量评价神经毒性。 
如图4中所示，使用AgAβ处理的细胞比用尼伐地平处理的细胞LDH释放增加约44％。当与AgAβ一起加入10nM尼伐地平时，LDH释放没有改变。然而，当尼伐地平的给药剂量从10倍增加至100nM时，LDH释放量减少了约44％。 
实施例5 
尼伐地平施用对APP加工的影响 
使用用APPsw转染的人成胶质细胞瘤细胞检验尼伐地平对APP加工的影响。使用50nM和250nM尼伐地平将细胞处理24和48小时，通过使用商购人Aβ1-40 ELISA(Biosource，CA)测定培养基中Aβ1-40的产生。 
如图5A中所示，处理24小时后，50nM尼伐地平减少了Aβ1-40产生约9％，而250nM尼伐地平减少了Aβ1-40产生约15％。处理48小时后(图5B)，50nM尼伐地平减少了Aβ1-40产生约18％，而250nM尼伐地平减少了Aβ1-40产生约5％。 
实施例6 
可变剂量的外消旋的和分离的尼伐地平对映体对Aβ水平的影响 
处理24小时后使用7W WT APP751中国仓鼠卵巢细胞检验尼伐地平纯对映体形式、(-)-尼伐地平(尼伐地平1)和(+)-尼伐地平(尼伐地平2)(图8)以及两种对映体的混合物(等比例)对Aβ1-40和Aβ1-42产生的影响。通 过分别使用商购人Aβ1-40 ELISA(Biosource，CA)和商购人Aβ1-42 ELISA(Biosource，CA)测定培养基中Aβ1-40和Aβ1-42的产生。 
如图6中所示，两种对映体以类似方式显示剂量依赖性地抑制Aβ1-40产生。然而，(+)-尼伐地平(尼伐地平2)和尼伐地平外消旋混合物(N1+N2)在低剂量下轻度刺激Aβ1-42，而(-)-尼伐地平(尼伐地平1)不显示出这种作用(图7)。 
实施例7 
分离的尼伐地平对映体对大鼠主动脉血管收缩的影响 
检验尼伐地平纯对映体形式、(-)-尼伐地平(尼伐地平1)和(+)-尼伐地平(尼伐地平2)(图8)对FPL64176诱导的大鼠主动脉血管收缩的影响。将正常雄性Sprague-Dawley大鼠(7-8个月龄)人道地实施安乐死，将新剖离的大鼠主动脉分割成3-mm的环并且在容器浴仪器中的挂钩上悬挂在Kreb缓冲液中。这些挂钩与等长传感器连接，所述等长传感器与MacLab系统连接。将主动脉环在组织浴系统中平衡2小时，每30min更换一次Kreb缓冲液。对每一个主动脉环施加2g基线张力。在加入1μM FPL64176(2，5-二甲基-4[2-(苯基甲基)苯甲酰基]-1H-吡咯-3-甲酸甲酯)(一种有效的选择性的L-型钙通道激动剂)之前2分钟用100nM(-)-尼伐地平(尼伐地平1)、100nM(+)-尼伐地平(尼伐地平2)预处理主动脉环或不进行处理。使用FPL64176使主动脉环收缩30分钟。测定与基线相比的收缩量(单位g)并且计算所有这类值的平均值和标准偏差。 
如图9中所示，(+)-尼伐地平完全拮抗FPL64176诱导的血管收缩，而(-)-尼伐地平不产生L-型钙通道激动剂的血管作用，这表明(+)-尼伐地平是L-型钙通道阻滞剂，而(-)-尼伐地平无这种作用。本文提供的数据证明了针对(-)-对映体用FPL64176攻击时的基线主动脉收缩，其与(-)-对映体相比于外消旋混合物或显示血管活性(即拮抗诱导的血管收缩)的(+)-对映体而言血管活性降低相关。 
实施例8 
(-)-尼伐地平对脑Aβ水平的影响 
检验分离的(-)-尼伐地平对脑Aβ1-40和Aβ1-42水平的影响。给93-周龄的雄性转基因APPsw小鼠(Tg APPsw品系2576)每天腹膜内注射10mg/Kg体重的溶于DMSO的(-)-尼伐地平(n＝4)或相同体积的(n＝4)介质(100μL)。治疗4天后，在末次注射后1小时将动物人道地实施安乐死，采集其脑并且速冻在液氮中。将脑在4℃下在含有1X蛋白酶抑制剂合剂IV(Calbiochem，CA)的蒸馏水中匀化并且在4℃下以14,000rpm离心30min。将沉淀物重新混悬于等体积的溶于Tris HC1缓冲液(pH＝8)的胍5M中并且在室温下孵育1小时。使用BCA方法(Biorad，CA)测定胍处理的样品中的蛋白质浓度。通过ELISA(Biosource，CA)评价Aβ1-40和Aβ1-42水平并且以每毫克蛋白质中Aβ1-40或Aβ1-42的pg数报道结果。 
如图10中所示，给TgAPPsw小鼠每天以10mg/kg体重的剂量施用(-)-尼伐地平，施用4天，与对照组动物相比，导致脑中Aβ1-42水平(pg/ml)下降26％、脑中Aβ1-40水平下降43％。 
实施例9 
缓慢释放(-)-尼伐地平对脑Aβ水平的影响 
检验缓慢释放(-)-尼伐地平对脑Aβ1-42水平的影响。给66周龄的TgAPPsw(Tg APPsw品系2576)皮下植入确保持续缓慢释放30mg(-)-尼伐地平/Kg体重/天的(-)-尼伐地平生物可降解丸剂(n＝5)、确保释放56mg/Kg/天的(-)-尼伐地平生物可降解丸剂(n＝6)或释放安慰剂的丸剂(n＝6)，释放期为30天。丸剂植入后26天，将动物人道地实施安乐死，采集其脑并且速冻在液氮中。将脑在4℃下在含有1X蛋白酶抑制剂合剂IV(Calbiochem，CA)的蒸馏水中匀化并且在4℃下以14,000rpm离心30min。将上清液重新混悬于等体积的溶于Tris HC1缓冲液(pH＝8)的胍5M中并且在室温下孵育1小时。使用BCA方法(Biorad，CA)测定胍处理的样品中的蛋白质浓度。通过ELISA(Biosouree，CA)评价Aβ1-42水平并且以每毫克蛋白质中Aβ1-42的pg数报道结果。 
如图11中所示，与植入安慰剂丸剂的小鼠相比，给TgAPPsw小鼠施用缓慢释放的(-)-尼伐地平导致被给予30mg/Kg/天缓慢释放(-)-尼伐地平 丸剂的小鼠脑Aβ1-42水平下降2倍，而在用56mg/Kg/天缓慢释放丸剂处理的动物中观察到Aβ1-42下降2.5倍。 
实施例10 
(-)-尼伐地平对跨血脑屏障脑Aβ水平清除的影响 
体外模型 
使用体外和体内模型检验了(-)-尼伐地平对跨血脑屏障(BBB)脑Aβ水平清除的影响。体外模型如图12中所示。将含有2μM荧光素-β-淀粉状蛋白(1-42)的内皮细胞培养基(ECM，ScienCell Research Laboratories)(3)放入底外侧(供体)隔室。使膜的顶(接收)侧接触在ECM中的各种二氢吡啶(DHP)化合物(1、5和10μM)(2)。在0时对供体隔室取样以建立每组中荧光素-β-淀粉状蛋白(1-42)的初始浓度。在插入物与含有荧光淀粉状蛋白的孔接触后，在直至90分钟的不同时间点从顶部隔室采集样品(1)以评价荧光素-β-淀粉状蛋白(1-42)跨人脑微血管内皮细胞(HBMEC)单层(4)的运动(底外侧至顶部)。使用BioTek Synergy HT多检测微量培养板读取器(multi-detection microplate reader)(Winooski，VT)分析样品(λex＝485nm和λem＝516nm)的荧光素-β-淀粉状蛋白(1-42)。使用方程Papp＝1/ACo*(dQ/dt)确定荧光素-β-淀粉状蛋白(1-42)的表观渗透率(Papp)，其中A表示膜的表面积，Co是底外侧供体隔室中荧光素-β-淀粉状蛋白(1-42)的初始浓度，dQ/dt是在给定时间期限中顶部接收隔室中荧光素-β-淀粉状蛋白(1-42)的量(polli)。将在(-)-尼伐地平存在下荧光素-β-淀粉状蛋白(1-42)的Papp与对照孔相比较并且以百分比表示。 
如图13中所示，(-)-尼伐地平在血脑屏障体外模型中剂量依赖性地刺激Aβ从脑侧(B)向外周侧(A)转运。 
还用体外模型检验了(-)-尼伐地平相比于尼伐地平外消旋混合物对跨BBB脑Aβ清除的体外影响。在这些实验中使用了与上述方案类似的方案，主要不同是为了比较目的加入外消旋混合物。如图14中所示，(-)-尼伐地平和尼伐地平外消旋混合物在体外模型中均剂量依赖性地刺激Aβ跨血脑屏障(B)向外周(A)转运。 
体内模型 
使用体内模型检验了(-)-尼伐地平对脑Aβ水平跨BBB清除的影响。使用3％异氟烷/氧混合物通过吸入麻醉野生型雌性B6/SJL小鼠。在麻醉下，给小鼠腹膜内(i.p.)注射介质(DMSO)或(-)-尼伐地平。i.p.注射后5分钟，以脑功能区定位方式给小鼠脑室内区域中注射3μl人β-淀粉状蛋白(1-42)(1mM在DMSO中的溶液)(前卤后3mm，前卤侧1.0mm，脑表面以下4mm)。注射人β-淀粉状蛋白(1-42)后10分钟，对小鼠实施安乐死。采集血浆样品并且使用用于人β-淀粉状蛋白(1-42)的夹心ELISA分析人β-淀粉状蛋白(1-42)。将采集自(-)-尼伐地平处理的小鼠的血浆样品中β-淀粉状蛋白(1-42)水平与仅接受介质的那些小鼠比较。另外，使用皮下植入(-)-尼伐地平的生物可降解丸剂或安慰剂并且在植入丸剂后13天接受脑内注射Aβ1-42的动物进行类似实验。所有使用动物的实验均用按照实验动物伦理委员会(Institutional Animal Care and Use Committee)批准的方案进行。 
如图15中所示，尼伐地平外消旋混合物和(-)-尼伐地平都增加体内Aβ跨血脑屏障的转运。2mg/Kg体重的(-)-尼伐地平刺激Aβ从脑向血液的清除达2倍，在5mg/Kg体重的剂量下达4倍，而尼伐地平外消旋混合物在2mg/Kg体重剂量下增加Aβ清除达4倍。 
图16是说明使用皮下植入(-)-尼伐地平的生物可降解丸剂或安慰剂并且植入丸剂后13天接受脑内注射Aβ1-42的动物获得的(-)-尼伐地平对脑Aβ水平跨BBB清除的影响的棒形图。如图16中所示，与植入安慰剂丸剂的对照小鼠相比，30mg/Kg体重/天的剂量的生物可降解丸剂确保的(-)-尼伐地平缓慢释放使脑内Aβ清除增加3倍。 
这些(-)-尼伐地平对脑Aβ水平跨血脑屏障(BBB)清除的影响的体外和体内研究揭示了潜在的治疗相关结果。数据表明，(-)-尼伐地平对清除的影响是增加脑Aβ跨BBB迁移。这源于所观察到的施用(-)-尼伐地平后血清Aβ水平增加。 
如图17A和B中所示，在FPL64176大鼠主动脉血管收缩模型中，在表现出血管作用特性之前，可以以比(+)-尼伐地平高得多的剂量施用(-)-尼 伐地平。 
总的结论 
就不同尼伐地平对映体的作用而言，两种对映体以类似方式剂量依赖性地抑制Aβ1-40产生，但是(+)-尼伐地平和外消旋尼伐地平在低剂量下轻度刺激Aβ1-42。(-)-尼伐地平对Aβ1-42的影响较低，无统计学显著性。例如参见图6和7。还令人惊奇地发现(+)-尼伐地平完全拮抗FPL64176-诱导的血管收缩，而(-)-尼伐地平不拮抗FPL64176-诱导的L-型钙通道激动剂的血管收缩作用。本文所给出的数据证明了针对(-)-对映体用FPL64176攻击时的基线主动脉收缩，其与(-)-对映体比外消旋混合物或显示出血管活性(即拮抗诱导的血管收缩)的(+)-对映体相比血管活性降低相关。(-)-尼伐地平对脑Aβ水平的影响的评价显示，在仅治疗4天后在TgAPPsw小鼠中施用(-)-尼伐地平(10mg/kg体重/天)产生了26％的Aβ1-42脑水平降低(pg/ml)和43％的Aβ1-40脑水平降低。如图11中所示，与植入安慰剂丸剂的小鼠相比，给TgAPPsw小鼠施用缓慢释放(-)-尼伐地平达26天导致给药30mg/Kg/天(-)-尼伐地平缓慢释放丸剂的小鼠脑Aβ1-42水平降低2倍，而在用56mg/Kg/天缓慢释放丸剂处理的动物中观察到Aβ1-42降低2.5倍。 
(-)-尼伐地平对脑Aβ水平跨血脑屏障(BBB)清除的影响的体外和体内研究还产生了出乎意料的和令人鼓舞的结果。数据显示(-)-尼伐地平对这种清除的影响是增加脑Aβ跨BBB迁移。这源于所观察到的施用(-)-尼伐地平后血清Aβ水平增加。 
根据上述数据能推知，给患有脑致淀粉样变疾病例如AD的动物或人施用对映体富集的(-)-尼伐地平能显著降低脑关键区域中Aβ沉积的量(其特征性地证明了该类病理性沉积物的丰度)，并且减少脑中已经沉积的Aβ的量，同时没有不必要地影响血压或其它可能的副作用。另外，对映体富集的(-)-尼伐地平的施用可对抗Aβ的神经毒性作用(其被认为是造成AD中所观察到的广泛的和破坏性的神经元破坏的原因)，并且减少小神经胶质活化(其导致在AD患者的脑中观察到的特征性炎性反应)，同时副作用减少。最后，对映体富集的(-)-尼伐地平治疗可以降低患有脑致淀粉样变疾病例如 AD的动物或人脑中已经沉积的Aβ浓度，同时没有不希望的副作用。 
对本领域技术人员而言显而易见的是，可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下对本发明的方法进行各种调整和改变。因此，本发明包括所附权利要求范围内的变型和变体及其等效方案。将本文所引述的所有参考文献引入作为参考。 

Claims (31)

1.药物组合物，其包含旋光活性的尼伐地平和药学上可接受的载体，所述药物组合物包含相对于(+)-尼伐地平过量的(-)-尼伐地平。
2.权利要求1的药物组合物，其中所述药物组合物具有至少90％的相对于(+)-尼伐地平对映体过量的(-)-尼伐地平。
3.权利要求1的药物组合物，其中所述药物组合物具有至少95％的相对于(+)-尼伐地平对映体过量的(-)-尼伐地平。
4.权利要求1的药物组合物，其中所述药物组合物具有至少98％的相对于(+)-尼伐地平对映体过量的(-)-尼伐地平。
5.权利要求1的药物组合物，其中所述药物组合物含有检测不到的(+)-尼伐地平。
6.权利要求1-5中任一项的药物组合物，其中所述药物组合物是单位剂型的形式。
7.权利要求1-5中任一项的药物组合物，其中所述药物组合物是包裹在硬或软明胶胶囊中或者压成片剂的单位剂型的形式。
8.权利要求1-5中任一项的药物组合物，其中所述药物组合物是适于胃肠外、口服或腹膜内施用的单位剂型的形式。
9.对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在患有脑致淀粉样变疾病的动物或人中减少Aβ沉积、Aβ神经毒性和小神经胶质增生，其中所述药物包含治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物。
10.对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在患有外伤性脑损伤的动物或人中降低Aβ沉积、Aβ神经毒性和小神经胶质增生所导致的脑致淀粉样变疾病风险，其中所述药物包含治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物，其中所述药物被施用于急性头部损伤后的动物或人。
11.对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在被诊断为具有发生脑致淀粉样变疾病的风险的动物或人中降低发生脑致淀粉样变疾病的风险，其中所述药物包含治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物。
12.权利要求9至11中任一项的用途，其中所述脑致淀粉样变疾病选自阿尔茨海默病、外伤性脑损伤和脑淀粉样血管病。
13.权利要求9至11中任一项的用途，其中所述对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物的治疗有效量选自0.05-20mg/天。
14.权利要求9至11中任一项的用途，其中所述对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物的治疗有效量选自2-15mg/天。
15.权利要求9至11中任一项的用途，其中所述对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物的治疗有效量选自4-12mg/天。
16.权利要求9至11中任一项的用途，其中所述对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物的治疗有效量是8mg/天。
17.权利要求9至11中任一项的用途，其中包含对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物的药物被施用于血压在正常范围或在低血压范围的人或动物。
18.权利要求9至11中任一项的用途，其中包含对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物的药物被施用于血压在高血压范围的人或动物。
19.权利要求9至11中任一项的用途，其中对映体富集的(-)-尼伐地平是指一种化合物，其是其中(-)-尼伐地平以90％或更多、至多达纯度的可检测限的程度过量存在的对映体混合物。
20.权利要求9至11中任一项的用途，其中对映体富集的(-)-尼伐地平是指一种化合物，其是其中(-)-尼伐地平以95％或更多、至多达纯度的可检测限的程度过量存在的对映体混合物。
21.权利要求9至11中任一项的用途，其中对映体富集的(-)-尼伐地平是指一种化合物，其是其中(-)-尼伐地平以98％或更多、至多达纯度的可检测限的程度过量存在的对映体混合物。
22.权利要求9至11中任一项的用途，其中对映体富集的(-)-尼伐地平是指一种化合物，其是其中(-)-尼伐地平以100％的程度过量存在的对映体混合物。
23.权利要求9至11中任一项的用途，其中用所述治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物进行治疗的治疗期限长达动物或人的终生。
24.权利要求9至11中任一项的用途，其中用所述治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物进行治疗的治疗期限选自1小时-5年。
25.权利要求9至11中任一项的用途，其中用所述治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物进行治疗的治疗期限选自1天-12个月。
26.权利要求9至11中任一项的用途，其中用所述治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物进行治疗的治疗期限选自1周-6个月。
27.权利要求9至11中任一项的用途，其中用所述治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物进行治疗的治疗期限选自2周-4周。
28.权利要求9至11中任一项的用途，其中用所述治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物进行治疗的治疗期限选自2周-3年。
29.权利要求9至11中任一项的用途，其中用所述治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物进行治疗的治疗期限选自6个月-12个月。
30.权利要求9至11中任一项的用途，其中包含对映体富集的(-)-尼伐地平或者权利要求1-8中任一项的组合物的药物以单位剂型被施用于动物或人，所述单位剂型选自硬或软壳明胶胶囊、片剂、小药囊、锭剂、混悬剂、糯米纸囊剂、粉末、颗粒、溶液和乳剂。
31.由治疗有效量的对映体富集的(-)-尼伐地平和药学上可接受的载体组成的组合物在制备药物中的用途，所述药物用于在患有脑致淀粉样变疾病的动物或人中治疗脑致淀粉样变疾病。
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