CN101874780B

CN101874780B - 一种提高脂质体包封率的制备方法

Info

Publication number: CN101874780B
Application number: CN201010186783.9A
Authority: CN
Inventors: 王淑君; 叶田田
Original assignee: Shenyang Pharmaceutical University
Current assignee: Shenyang Junhong Pharmaceutical Technology Co.,Ltd.; Shenyang Pharmaceutical University
Priority date: 2010-05-31
Filing date: 2010-05-31
Publication date: 2014-01-01
Anticipated expiration: 2030-05-31
Also published as: CN101874780A

Abstract

本发明的目的是提供一种提高脂质体包封率的制备方法。本发明的制备方法如下：将脂溶性成分溶于有机溶剂，水溶性成分溶于有偏酸或偏碱缓冲盐，转移有机溶剂后加入缓冲盐溶液水化，真空冷冻干燥后，用偏碱或偏酸缓冲盐复溶，孵化后即得含药脂质体。酸性化合物易溶于碱性溶液中，而碱性化合物易溶于酸性溶液中。本发明利用这样酸碱差异导致溶解度改变的特性制备脂质体，可以大幅度提高此类化合物的在脂质体中的包封率，为难溶性化合物脂质体的制备提供了新的思路。

Description

一种提高脂质体包封率的制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，涉及一种提高脂质体包封率的制备方法。

背景技术

难溶性化合物体内生物利用度的提高一直是药剂学的研究热点。但是很多难溶性化合物不只不溶于水，还不溶于生理耐受和药剂学常用的溶剂，即脂水不溶性，给剂型设计和应用带来了阻碍。

脂质体在输送至肿瘤血管时，可通过毛细管上皮组织间隙进入肿瘤组织，从而达到一定的肿瘤组织靶向作用。脂质体载药系统的被动靶向作用，因其改变了药物的体内分布，所以可在提高疗效的同时降低毒性，作为提高药物载药量的良好载体。通过脂质体的应用，解决了难溶性药物溶解度低的问题，起到了降低毒性反应，消除副反应的作用，有较高靶向分布特性。

脂质体虽然提高了难溶性化合物溶解度，但大部分包封率不能达到85％的注射液上市标准。为了进一步提高包封率，出现了一些在制备方法和处方上的改进方案，比如：改进制备方法，制备前体脂质体；或者改进处方，加入表面活性剂制备囊泡，加入表面活性剂和骨架材料制备脂质体固体纳米粒。但以上改进方案还存在着对某些脂水不溶性化合物包封率很难提高，或者在处方中加入表面活性剂，毒副作用较大的问题。

发明内容

本发明提供了一种提高脂质体包封率的制备方法。

本发明的技术效果是适用于溶解度有酸碱依赖性的难溶性化合物。

考虑到大部分难溶性化合物的溶解性有酸碱依赖性，酸性化合物易溶于碱性溶液中，而碱性化合物易溶于酸性溶液中。本发明利用这样酸碱差异导致溶解度改变的特性制备脂质体。先将酸性化合物溶于碱性溶液中，或将碱性化合物溶于酸性溶液中，再水化，让药物分布于脂质体的内外水相。但是水溶性药物制备脂质体十分不稳定，很容易发生渗漏，导致溶解度的降低，所以考虑冻干后用药物不溶于的酸性或碱性溶液复溶，使药物随pH梯度进入脂质体的脂质双层，可以大幅度提高此类化合物的在脂质体中的包封率和稳定性，为难溶性化合物脂质体的制备提供了新的思路。

本发明是通过如下详细技术方案制备而成的：

其制备工艺如下：

(1)当主药为酸性化合物时，将磷脂，胆固醇，抗氧剂加入有机溶剂中，转移有机溶剂，制备脂质干膜。将冻干保护剂加入碱性缓冲盐溶液，在水化温度下加入碱性缓冲盐溶液水化，水化完全后真空冻干，取酸性缓冲盐溶液复溶即得。

(2)当主药为碱性化合物时，将磷脂，胆固醇，抗氧剂加入有机溶剂中，转移有机溶剂，制备脂质干膜。将冻干保护剂加入酸性缓冲盐溶液，在水化温度下加入酸性缓冲盐溶液水化，水化完全后真空冻干，取碱性缓冲盐溶液复溶即得。

其中，磷脂胆固醇比值范围在1∶1～1∶6，磷脂含量范围在3％～5％(W∶V)，抗氧剂含量范围在0.5％～1％(W∶W)。

以下以7-乙基-10-羟基喜树碱脂质体的制备为具体实例。

7-乙基-10-羟基喜树碱脂质体的处方及用量如下：

7-乙基-10-羟基喜树碱 1-10克，

磷脂 30-60克，

胆固醇 5-60克，

VE 2-8克，

有机溶剂 2000-8000毫升，

碱性缓冲盐溶液 1000-4000毫升，

酸性缓冲盐溶液 1000-4000毫升

制备工艺如下：

(1)将磷脂，胆固醇，抗氧剂溶于有机溶剂中，真空旋转转移有机溶剂，真空恒温干燥箱中放置过夜挥干残余有机溶剂，制备脂质干膜，以上操作均在无菌条件下完成。

(2)将7-乙基-10-羟基喜树碱，冻干保护剂溶于碱性缓冲盐溶液(pH＝9.9)中，在水化温度下用上述碱性缓冲盐溶液水化脂质干膜，水化完全后用乳匀机降低粒径，即得含药脂质体，上操作均在无菌条件下完成。

(3)真空冷冻干燥得到的含药脂质体冻干粉，用酸性缓冲盐溶液(pH＝3.8)复溶制得的脂质体溶液，孵育后即得。

实验证明，经酸溶液孵育一定时间后，药物转化为亲脂的活性形式，通过孵育向脂质双层转移，最后包裹于脂质双层。包裹于脂质双层的药物由于受到了保护，在很大程度上提高了药物稳定性同时也提高了药物的体内稳定性。进入靶区前，药物包裹在脂质体内部，减轻了静注对血管的刺激，也避免了机体的分解；进入靶区后，脂质体与细胞相互作用或被细胞内吞，经溶酶体的作用，使脂质体解体并释放药物。通过此特性制备的脂质体。良好的解决了7-乙基-10-羟基喜树碱溶解度低，体内代谢快的问题，起到了降低毒性反应，消除副反应的作用，有较高靶向分布特性，延长代谢时间，提高溶解度和生物利用度。

薄膜-超声法制备7-乙基-10-羟基喜树碱脂质体的过程如下：

将7-乙基-10-羟基喜树碱，磷脂，胆固醇，抗氧剂溶于有机溶剂中，真空旋转转移有机溶剂，真空恒温干燥箱中放置过夜挥干残余有机溶剂，制备脂质干膜，在相变温度下，加PBS缓冲溶液(pH＝6.6)水化得脂质体，以上操作均在无菌条件下完成。

根据以上制备过程，考察如下内容：

1分别用常规薄膜-超声法制备脂质体与本发明方法制备7-乙基-10-羟基喜树碱脂质体，分别进行质量评价，有结果可知本发明方法制备7-乙基-10-羟基喜树碱脂质体包封率，粒径，稳定性等质量评价指标均优于常规薄膜-超声方法制备的脂质体。

比较常规薄膜-超声方法制备的脂质体和本发明方法制备的脂质体的包封率，结果如下表：

2考察脂质体冻干前的12小时稳定性和脂质体冻干后的6个月稳定性，结果显示稳定性均良好

试验结果表明应用本发明制备的脂质体冻干前后稳定性均良好，在外观，包封率，粒径，磷脂氧化指数和安全性，均符合规定。

以下以替加氟脂质体的制备为具体实例。

替加氟脂质体的处方及用量如下：

替加氟 3-20克，

磷脂 30-60克，

胆固醇 5-60克，

抗氧剂 2-8克，

冻干保护剂 100-300克，

有机溶剂 2000-8000毫升，

碱性缓冲盐溶液 1000-4000毫升，

酸性缓冲盐溶液 1000-4000毫升

制备工艺如下：

(2)将替加氟，冻干保护剂溶于碱性缓冲盐溶液(pH＝10.0)中，在水化温度下用上述碱性缓冲盐溶液水化脂质干膜，水化完全后用乳匀机降低粒径，即得含药脂质体，上操作均在无菌条件下完成。

(3)真空冷冻干燥得到的含药脂质体冻干粉，用酸性缓冲盐溶液(pH＝5.0)复溶制得的脂质体溶液，孵育后即得。

替加氟为氟尿嘧啶衍生物，在体外无抗肿瘤作用，在体内主要经肝脏转变为氟尿嘧啶而起作用。其作用与氟尿嘧啶相同，化疗指数为氟尿嘧啶的2倍，本品可通过血脑屏障。主要用于胃癌、胆道癌、直肠癌、结肠癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、肺癌及头颈部癌。临床主要应用其注射剂。本药毒副作用小，安全性好，已越来越受到临床的重视和观注。

替加氟的溶解度也具有酸碱依赖。在碱性溶液中的溶解度较大。根据本发明方法制备替加氟脂质体在制备过程中用碱性溶液(pH＝～10)水化脂质干膜，而冻干后用酸性溶液(pH＝～5)复溶。通过此特性制备的脂质体良好的解决了替加氟对光和热敏感，稳定性差的问题，起到了降低毒性反应，消除副反应的作用，有较高靶向分布特性，延长代谢时间，提高药物稳定性，提高溶解度和生物利用度。

薄膜-超声法制备脂质体的过程如下：将替加氟，磷脂，胆固醇，抗氧剂溶于有机溶剂中，真空旋转转移有机溶剂，真空恒温干燥箱中放置过夜挥干残余有机溶剂，制备脂质干膜，在相变温度下，加PBS缓冲溶液(pH＝6.6)水化得脂质体，以上操作均在无菌条件下完成。

根据以上制备过程，考察如下内容：

1分别用常规薄膜-超声方法制备脂质体与本发明方法制备替加氟脂质体，分别进行质量评价，有结果可知本发明方法制备替加氟脂质体和替加氟脂质体的包封率，粒径，稳定性等质量评价指标均优于常规薄膜-超声方法制备的脂质体。比较常规薄膜-超声方法制备的脂质体和本发明方法制备的脂质体的包封率，结果如下表：

以下以10-羟基喜树碱脂质体的制备为具体实例。

10-羟基喜树碱脂质体的处方及用量如下：

10-羟基喜树碱 2-4克，

磷脂 30-60克，

胆固醇 5-60克，

VE 2-8克，

有机溶剂 2000-8000毫升，

碱性缓冲盐溶液 1000-4000毫升，

酸性缓冲盐溶液 1000-4000毫升

制备工艺如下：

(2)将10-羟基喜树碱，冻干保护剂溶于碱性缓冲盐溶液(pH＝10.0)中，在水化温度下用上述碱性缓冲盐溶液水化脂质干膜，水化完全后用乳匀机降低粒径，即得含药脂质体，上操作均在无菌条件下完成。

(3)真空冷冻干燥得到的含药脂质体冻干粉，用酸性缓冲盐溶液(pH＝4.0)复溶制得的脂质体溶液，孵育后即得。

通过此特性制备的脂质体。良好的解决10-羟基喜树碱溶解度低，毒副作用大，体内代谢快的问题，起到了降低毒性反应，消除副反应的作用，有较高靶向分布特性，延长代谢时间，提高溶解度和生物利用度。

薄膜-超声法制备10-羟基喜树碱脂质体的过程如下：

将10-羟基喜树碱，磷脂，胆固醇，抗氧剂溶于有机溶剂中，真空旋转转移有机溶剂，真空恒温干燥箱中放置过夜挥干残余有机溶剂，制备脂质干膜，在相变温度下，加PBS缓冲溶液(pH＝6.6)水化得脂质体，以上操作均在无菌条件下完成。

根据以上制备过程，考察如下内容：

1分别用常规薄膜-超声法制备脂质体与本发明方法制备、10-羟基喜树碱脂质体，分别进行质量评价，有结果可知本发明方法制备10-羟基喜树碱脂质体包封率，粒径，稳定性等质量评价指标均优于常规薄膜-超声方法制备的脂质体。比较常规薄膜-超声方法制备的脂质体和本发明方法制备的脂质体的包封率，结果如下表：

以下以五氟尿嘧啶脂质体的制备为具体实例。

五氟尿嘧啶脂质体的处方及用量如下：

五氟尿嘧啶 3-6克，

磷脂 30-60克，

胆固醇 5-60克，

VE 2-8克，

有机溶剂 2000-8000毫升，

碱性缓冲盐溶液 1000-4000毫升，

酸性缓冲盐溶液 1000-4000毫升

制备工艺如下：

(2)将五氟尿嘧啶，冻干保护剂溶于碱性缓冲盐溶液(pH＝8.9)中，在水化温度下用上述碱性缓冲盐溶液水化脂质干膜，水化完全后用乳匀机降低粒径，即得含药脂质体，上操作均在无菌条件下完成。

(3)真空冷冻干燥得到的含药脂质体冻干粉，用酸性缓冲盐溶液(pH＝2.8)复溶制得的脂质体溶液，孵育后即得。

通过此特性制备的脂质体良好的解决了五氟尿嘧啶溶解度低，稳定性差，毒副作用大的问题，起到了降低毒性反应，消除副反应的作用，有较高靶向分布特性，延长代谢时间，提高溶解度和生物利用度。

薄膜-超声法制备五氟尿嘧啶脂质体的过程如下：

将五氟尿嘧啶，磷脂，胆固醇，抗氧剂溶于有机溶剂中，真空旋转转移有机溶剂，真空恒温干燥箱中放置过夜挥干残余有机溶剂，制备脂质干膜，在相变温度下，加PBS缓冲溶液(pH＝6.6)水化得脂质体，以上操作均在无菌条件下完成。

根据以上制备过程，考察如下内容：

1分别用常规薄膜-超声法制备脂质体与本发明方法制备五氟尿嘧啶脂质体，分别进行质量评价，有结果可知本发明方法制备五氟尿嘧啶脂质体包封率，粒径，稳定性等质量评价指标均优于常规薄膜-超声方法制备的脂质体。

附图说明

图1为本发明酸性化合物脂质体的工艺流程图

图2为本发明碱性化合物脂质体的工艺流程图

具体实施方式

实施例1

7-乙基-10-羟基喜树碱脂质体

(1)将大豆磷脂(注射级)30克，胆固醇(注射级)5克，α-生育酚2克溶于2000ml乙醇(分析纯)中，真空旋转转移有机溶剂，真空恒温干燥箱中放置过夜挥干残余有机溶剂，制备得脂质干膜，以上操作均在无菌条件下完成。

(2)将7-乙基-10-羟基喜树碱1.67克，蔗糖(注射级)100克溶于碳酸钠-碳酸氢钠缓冲盐溶液(pH＝9.9)1000ml中，在45℃水化温度下用上述碱性缓冲盐溶液水化脂质干膜，待水化完全后用乳匀机降低粒径至100-200nm，即得含药脂质体。以上操作均在无菌条件下完成。

(3)真空冷冻干燥含药脂质体溶液，得到黄色无定型含药冻干粉，用乙酸-乙酸钠缓冲盐溶液(pH＝3.8)1000ml复溶，孵育24小时，即得。

实施例2

10-羟基喜树碱脂质体

(1)将神经鞘磷脂(注射级)40克，胆固醇(注射级)10克，α-生育酚4克溶于6000ml乙醇(分析纯)中，真空旋转转移有机溶剂，真空恒温干燥箱中放置过夜挥干残余有机溶剂，制备得脂质干膜，以上操作均在无菌条件下完成。

(2)将10-羟基喜树碱2克，海藻糖(注射级)100克溶于磷酸二氢钾-氢氧化钠缓冲液(pH＝10.0)3000ml中，在45℃水化温度下用上述碱性缓冲盐溶液水化脂质干膜，待水化完全后用乳匀机降低粒径至100-200nm，即得含药脂质体。以上操作均在无菌条件下完成。

(3)真空冷冻干燥含药脂质体溶液，得到黄色无定型含药冻干粉，用磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液(pH＝4.0)3000ml复溶，孵育24小时，即得。

实施例3

替加氟脂质体

(1)将磷脂酰丝氨酸(注射级)50克，胆固醇(注射级)30克，α-生育酚6克溶于8000ml乙醇(分析纯)中，真空旋转转移有机溶剂，真空恒温干燥箱中放置过夜挥干残余有机溶剂，制备得脂质干膜，以上操作均在无菌条件下完成。

(2)将替加氟1.67克，氨基乙酸(注射级)300克溶于碳酸钠-碳酸氢钠缓冲盐溶液(pH＝10.0)4000ml中，在45℃水化温度下用上述碱性缓冲盐溶液水化脂质干膜，待水化完全后用乳匀机降低粒径至100-200nm，即得含药脂质体。上操作均在无菌条件下完成。

(3)真空冷冻干燥含药脂质体溶液，得到黄色无定型含药冻干粉，用柠檬酸-柠檬酸钠(pH＝5.0)4000ml复溶，孵育24小时，即得。

实施例4

五氟尿嘧啶脂质体

(1)将大豆磷脂(注射级)60克，胆固醇(注射级)60克，α-生育酚8克溶于2000ml乙醇(分析纯)中，真空旋转转移有机溶剂，真空恒温干燥箱中放置过夜挥干残余有机溶剂，制备得脂质干膜，以上操作均在无菌条件下完成。

(2)将替加氟1.67克，蔗糖和海藻糖(注射级)(1∶1)300克溶于碳酸钠-碳酸氢钠缓冲盐溶液(pH＝8.9)1000ml中，在45℃水化温度下用上述碱性缓冲盐溶液水化脂质干膜，待水化完全后用乳匀机降低粒径至100-200nm，即得含药脂质体。上操作均在无菌条件下完成。

(3)真空冷冻干燥含药脂质体溶液，得到黄色无定型含药冻干粉，用乙酸-乙酸钠缓冲盐溶液(pH＝2.8)1000ml复溶，孵育24小时，即得。

Claims

1.一种提高脂质体包封率的制备方法,其特征在于，

替加氟 3-20克，

磷脂 30-60克，

胆固醇 5-60克，

抗氧剂 2-8克，

冻干保护剂 100-300克，

有机溶剂 2000-8000毫升，

碱性缓冲盐溶液 1000-4000毫升，

酸性缓冲盐溶液 1000-4000毫升，

制备工艺如下：

（1）将磷脂，胆固醇，抗氧剂溶于有机溶剂中，真空旋转转移有机溶剂，真空恒温干燥箱中放置过夜挥干残余有机溶剂，制备脂质干膜，以上操作均在无菌条件下完成；

（2）将替加氟，冻干保护剂溶于pH=10.0的碱性缓冲盐溶液中，在水化温度下用上述碱性缓冲盐溶液水化脂质干膜，水化完全后用乳匀机降低粒径，即得含药脂质体，上操作均在无菌条件下完成；

（3）真空冷冻干燥得到的含药脂质体冻干粉，用pH=5.0的酸性缓冲盐溶液复溶制得的脂质体溶液，孵育后即得。

2.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的冻干保护剂为乳糖，海藻糖，蔗糖，氨基乙酸或它们的混合物。

3.如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述的碱性缓冲盐溶液选自磷酸二氢钾–氢氧化钠缓冲液，巴比妥钠-盐酸缓冲液或碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液。