CN108567742A - Sn38脂质组合物、其制备方法和用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及了一种SN38脂质组合物及其制备方法和应用，所述SN38脂质组合物包括SN38、磷脂、注射用油、胆固醇、长循环膜材、能在脂质表面形成保护层的功能性材料、具有逆转耐药作用的功能性辅料。该SN38脂质组合物解决了药物溶解度差难于制成制剂、现有脂质制剂包封率低、体内外稳定性差、药物易快速泄漏等问题，提高药物在体内循环时间，具有一定的靶向功能，使药物富集于肿瘤部位，降低毒副作用，大大提高了药效，并在一定程度上可克服肿瘤的多药耐药。

Description

SN38脂质组合物、其制备方法和用途
技术领域
本发明属于药物制剂技术领域，具体涉及一种SN38脂质组合物、制备方法及其在制备治疗肿瘤，特别是耐药性肿瘤，的药物制剂中的用途。
背景技术
7-乙基-10-羟基喜树碱(SN38)是伊立替康(CPT-11)的活性代谢产物，是喜树碱经化学结构改进而制得的衍生物。其具有抗癌作用强、抗癌活性高的特点，体外细胞毒性试验表明，对某些肿瘤细胞系，SN38的抗肿瘤活性是伊立替康的100-1000倍。其作用机制是选择性抑制DNA拓扑异构酶I(TOPO I)。在作用过程中，喜树碱类药物内酯环打开，酰基与TOPO I的亲核部分相互作用，并通过与TOPO I-DNA的可裂解复合物可逆结合形成喜树碱类药物-TOPO I-DNA三元复合物，从而稳定TOPO I-DNA复合物，抑制DNA解旋，导致DNA磷酸二酯键断裂，进而出现程序性细胞凋亡和死亡。另外，与其他喜树碱类衍生物相比，SN38无需肝脏活化作用，消除了病患间的差异。虽然SN38具有很强的抗肿瘤活性，但其不仅不溶于水，在大部分生物相容和药剂学上可接受的溶剂中都不溶解，与酸不能成盐。此外，SN38的α-内酯环是其抗癌活性的关键部位，但该内酯环的结构不稳定，对热、光、碱等敏感，在pH7或以上时大部分的内酯环结构开环变成羟基羧酸盐，活性显著降低，副作用增加。通常，喜树碱类药物还呈现出快速分布消除的药动学特征，半衰期只有几分钟或几十分钟，需要反复给药或延长疗程。而且，多药耐药(Multidrug Resistance，MDR)是另外一个限制SN38临床应用的主要问题。多药耐药是指肿瘤细胞对一种抗肿瘤药物出现耐药的同时，对其他结构和作用机理不同的抗肿瘤药物产生交叉耐药性。多药耐药是导致抗癌药化疗失败的主要原因。上述问题的存在大大影响了SN38的临床使用。
应用脂质组合物作为SN38的传递系统，既能解决药物的溶解性问题，又能保护药物的内酯环结构，延缓其在体内的降解，减少用量，增加疗效，降低毒性作用。
目前，已有SN38脂质体制剂的报道，中国专利申请CN101019834A公开了一种SN38脂质体的制备方法，该方法是先制备空白脂质体，再加入SN38碱溶液并调节pH值制成载药脂质体。中国专利申请CN101874788A公开了一种SN38脂质体冻干粉针及其制备方法，该方法是先制备脂质干膜，再加入SN38碱性缓冲液，冻干后再用酸性缓冲液复溶。这两个专利所公开的方法中均需将SN38溶解于碱性溶液中，因SN38结构中的内酯环开环使之由水难溶性药物变成了水溶性药物，一般水溶性药物所制备的脂质体包封率均较低。中国专利申请CN102670507A公开了一种7-乙基-10-羟基喜树碱长循环热敏脂质体冻干粉针及制备方法。中国专利申请CN102670509A公开了一种含有难溶性喜树碱类药物的脂质体制剂及其制备方法，该脂质体制剂中含有高浓度的糖或盐。因SN38与磷脂等脂质的亲和力较差，在膜中难以稳定，所以上述专利所公开的脂质体制剂均存在药物包封率低、粒径大、稳定性差、药物易泄露、制备工艺复杂难以工业化大生产等问题。
发明内容
本发明的目的之一是为临床提供一种稳定的SN38脂质组合物。
本发明的另一目的是提供一种上述SN38脂质组合物在制备治疗或辅助治疗肿瘤，特别是耐药性肿瘤，的药物制剂中的用途。
本发明的另一目的是提供一种药物制剂，其包含上述SN38脂质组合物。
本发明的另一目的是提供一种上述SN38脂质组合物及其制剂的制备方法。
本发明的SN38脂质组合物及其制剂主要解决了现有脂质制剂包封率低、体内外稳定性差、药物易泄漏等问题，能大大提高脂质制剂的稳定性，同时，充分利用SN38的抗肿瘤作用，降低SN38的毒副作用，克服肿瘤的多药耐药。
为了实现上述发明目的，本发明第一方面提供了一种SN38脂质组合物，以重量比计，包括：SN38 1份、磷脂5～60份、注射用油0.1～5份、胆固醇1～30份、长循环膜材0～30份、能在脂质表面形成保护层的功能性材料0～50份、具有逆转耐药作用的功能性辅料0～50份，以及缓冲液适量。优选所述SN38脂质组合物由上述组分组成。
所述的磷脂选自能够用于制备脂质体制剂的任何药学上可接受的磷脂。例如，所述的磷脂可以为选自大豆磷脂(SPC)、蛋黄卵磷脂(EPC)、氢化大豆磷脂(HSPC)、氢化卵磷脂(HEPC)、鞘磷脂(SM)、心磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)、二油酰磷脂酰胆碱(DOPC)、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(DPPE)、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(DMPE)、二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)、二棕榈酰磷脂酰甘油(DPPG)、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(DMPG)和二油酰磷脂酰甘油(DOPG)中的任意一种或几种，优选为选自SPC、EPC、HSPC、DSPC、DSPG中的任意一种或几种。
脂质组合物制剂稳定性与其组成直接相关。本发明人通过研究发现，在磷脂中加入注射用油，不仅可提高药物的包封率，通过分子间相互作用，提高脂膜的刚性，还可减少药物在体内外的泄露，从而大大提高其稳定性。所述注射用油为选自中链三酸甘油酯(MCT)和植物油中的一种或几种，所述植物油可以选自大豆油、茶油、橄榄油、葵花油、花生油、红花油、蓖麻油等，优选注射用油为选自MCT和大豆油。
所述长循环膜材用于实现脂质组合物制剂的长循环作用，延长药物在血液中的循环时间，增加药物在肿瘤部位的蓄积，以进一步提高疗效，降低毒性。所述的长循环材料可以为选自聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)、聚乙二醇-二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DMPE)、聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DPPE)、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)中的一种或多种；其中所述聚乙二醇的平均分子量为2000-5000。
所述能在脂质表面形成保护层的功能性辅料具有可改变组合物的理化特性的效果，在组合物外层形成一层保护性外衣，阻滞组合物的相互聚集，减少生理环境对组合物的破坏，提高组合物在体内外的稳定性，有助于药物在制剂中的保留，阻止了药物快速泄露。所述能在脂质表面形成保护层的功能性辅料可以为选自泊洛沙姆188、聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、壳聚糖中的至少一种。
所述具有逆转耐药作用的功能性辅料可以选自双亲性的具有逆转耐药作用的功能性辅料，例如为15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯(HS15)、天然水溶性维生素E(TPGS)、非离子表面活性剂，如，普朗尼克(pluronic)等。所述的具有逆转耐药作用的功能性辅料能通过以下作用机制逆转肿瘤的多药耐药：第一：与MDR细胞膜相互作用，减少膜的微粘度，抑制P-糖蛋白(Pgp)ATP酶活性，从而抑制Pgp外排泵的功能；第二：抑制MDR细胞线粒体的呼吸链，减少细胞膜电位，诱导细胞色素C的释放，增加细胞质活性氧(ROS)的水平，减少ATP的含量；第三：抑制谷胱甘肽(GSH)/谷胱甘肽巯基转移酶(GST)解毒系统的功能；第四：增加促凋亡信号并减少MDR细胞的抗凋亡防御，因而配方中加入非离子表面活性剂可增强耐药性肿瘤对药物的敏感型，逆转肿瘤的多药耐药。所述普朗尼克可以为选自普朗尼克F127、普朗尼克P123、普朗尼克P85、普朗尼克L61中的一种或多种。
所述缓冲液选自醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液(PBS溶液)、柠檬酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、丁二酸盐缓冲液中的一种或几种。所述缓冲液用于调节溶液的最终pH值得范围为3～6.5，其中的盐浓度范围没有具体限定，但是可以为约1～20mM。
本发明的SN38脂质组合物中，优选SN38的浓度不低于约0.5mg/mL。
所述的脂质组合物的粒径可能会影响其在体内的分布，进而可能会影响药物疗效。本发明中，所述脂质组合物的Z均平均粒径优选为50～500nm，更优选为100～300nm。
本发明所述的SN38脂质组合物中，优选地，药物包封率大于80％，更优选大于85％，以便脂质制剂能通过增强渗透和滞留作用(EPR效应)聚集在肿瘤组织，减少在其它正常组织的分布，从而提高药效，降低毒性。
本发明第二方面，提供了上述SN38脂质组合物在制备治疗或辅助治疗肿瘤，特别是耐药性肿瘤，的药物制剂中的用途，其中，所述肿瘤可以为结直肠癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌、皮肤癌、胰腺癌。
本发明第三方面，提供了一种药物制剂，其包含上述SN38脂质组合物。所述药物制剂可以由SN38脂质组合物单独组成或由SN38脂质组合物与药学上可接受的辅料组成。即，所述药物制剂还可以根据剂型需要包含药学上可接受的辅料。
所述药物制剂的剂型没有特殊限制，只要能够满足给药要求并对药效没有负面影响即可，例如可以为注射液、冻干粉针、肠溶片剂、丸剂、散剂、颗粒剂、合剂、糖浆剂、胶囊剂或滴丸剂等，优选为冻干粉针。
在所述冻干粉针中优选包含有冻干保护剂。所述冻干保护剂可以为选自蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖、麦芽糖、白蛋白中的一种或多种。优选地，所述冻干保护剂的用量按磷脂重量比计算，1重量份的磷脂加1～50重量份的冻干保护剂。
本发明的第四方面，提供了所述SN38脂质组合物的制备方法，其采用喷雾干燥法或注入法结合高压均质制备，可实现工业化规模，高效率生产出质量稳定的产品。
所述SN38脂质组合物的制备方法为以下方法之一：
方法一：
a)将SN38、磷脂、注射用油、胆固醇、长循环膜材、具有逆转耐药作用的功能性辅料按比例混合后加到有机溶剂中，得溶液，将所得溶液进行干燥以除去有机溶剂；
b)往步骤a)中加入含能在脂质表面形成保护层的功能性辅料的缓冲液，室温下水化，经高压均质后形成混悬液，即得SN38脂质组合物；
方法二：
c)将SN38、磷脂、注射用油、胆固醇、长循环膜材按比例混合后加到有机溶剂中，得溶液，将所得溶液进行干燥以除去有机溶剂；
d)往步骤c)中加入含具有逆转耐药作用的功能性辅料和能在脂质表面形成保护层的功能性辅料的缓冲液，室温下水化，经高压均质后形成混悬液，即得SN38脂质组合物；
方法三：
e)将SN38、磷脂、注射用油、胆固醇、长循环膜材、具有逆转耐药作用的功能性辅料按比例混合后溶于有机溶剂中，得有机相；
f)将步骤e)制得的有机相注入到含具有逆转耐药作用的功能性辅料和能形成保护层的功能性辅料的缓冲液高速搅拌，经高压均质工艺，即得SN38脂质组合物。
在上述方法中，优选地，步骤a)、c)和e)中，所述的有机溶剂可以为选自氯仿、甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙醚和丙酮中一种或几种，优选为选自氯仿、甲醇和乙醇中一种或几种；在步骤a)和c)中，所述的干燥为减压干燥或喷雾干燥；在步骤a)、d)和e)中，所述的具有逆转耐药作用的功能性辅料可以为选自普朗尼克F127、普朗尼克P123、普朗尼克P85、普朗尼克L61、HS15、TPGS中的一种或多种；步骤b)、d)和f)中所述高压均质的压力可以为10000～30000psi；步骤f)中所述高速搅拌的转速可以为5000～30000rpm。
本发明的第五方面，提供了所述SN38脂质组合物的冻干粉针的制备方法，所述方法包括：按照上述SN38脂质组合物的制备方法制备SN38脂质组合物；将所得SN38脂质组合物冷冻干燥得到冻干粉针。
优选地，在上述冻干粉针制备方法中的制备SN38脂质组合物的过程中，在步骤b)、d)或f)中，所述的缓冲液中还加入选自蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖和麦芽糖、白蛋白中的一种或多种作为冻干保护剂。优选地，所述冻干保护剂的用量按磷脂重量比计算，1重量份磷脂加1～50重量份冻干保护剂。
有益效果
本发明在脂质组合物制剂中加入注射用油，可通过分子间相互作用，提高药物包封率，增加药物在脂质组合物中的体内外稳定性，大大减少药物的泄露，从而有助于提高疗效；加入能形成保护层的功能性辅料可改变组合物的理化特性，在组合物外层形成一层保护性外衣，阻滞组合物的相互聚集，减少生理环境对组合物的破坏，提高组合物在体内外的稳定性，有助于药物在制剂中的保留，阻止了药物快速泄露；在脂质组合物中加入有逆转耐药作用的功能性辅料，可在一定程度上克服肿瘤的多药耐药问题。上述技术优势在其它相关专利文献中未见报道。
采用脂质组合物作为SN38的载体，将药物包封于脂质组合物中，既解决了药物的溶解性问题，又能保护药物的内酯环结构，抑制内酯环开环，明显提高药物在体内的化学稳定性，更好的发挥抗肿瘤作用；因SN38脂质组合物属纳米制剂范畴，能显著延长药物在血液中的循环时间，改善其体内分布，增加药物在肿瘤部位的聚集，提高药效，降低毒副作用，从而提高治疗指数。
本发明的SN38脂质组合物的粒径为50～500nm，能有效穿透肿瘤血管，通过增强渗透和滞留作用(EPR效应)聚集在肿瘤部位，实现被动靶向作用。
本发明SN38脂质组合物的制备可采用注入法或喷雾干燥法结合高压均质工艺实现，较现有制备方法更易实现工业化生产，并能解决现有制备技术粒径大且不均匀的问题，更好控制产品的质量。
附图说明
图1为根据本发明实施例1制备的SN38脂质组合物冻干粉针复溶后的粒径分布图；
图2为根据本发明实施例1制备的SN38脂质组合物冻干粉针复溶后的zeta电位图；
图3为根据本发明实施例1制备的SN38脂质组合物冻干粉针的药效测试结果图；
图4为根据本发明实施例1制备的SN38脂质组合物冻干粉针在耐药模型上的药效测试结果图。
具体实施方式
在以下实施例中，所有原料和试剂采用市售产品，其中大豆磷脂(上海太伟药业有限公司)；HSPC(上海艾韦特医药科技有限公司)；PEG-DSPE(上海艾韦特医药科技有限公司)；PEG-PE(上海艾韦特医药科技有公司)；PEG-DPPE(上海艾韦特医药科技有限公司)；鞘磷脂(上海紫一试剂厂)；蛋黄卵磷脂(上海太伟药业有限公司)；胆固醇(南京新百药业有限公司)；7-乙基-10-羟基喜树碱(大连美仑生物技术有限公司)；葡聚糖凝胶sephadex G-50(美国GE公司)。缓冲溶液的配制使用常规技术。
实施例1 SN38脂质组合物冻干粉针的制备
称取SN38 30mg、600mg大豆磷脂、60mg大豆油、150mg胆固醇和60mgPEG-DSPE置250mL圆底烧瓶中，以30mL氯仿:甲醇(1:1，v/v)溶解后，于60-70℃条件下减压蒸发，在瓶壁形成脂膜，加入30mL含10wt％蔗糖、0.1wt％泊洛沙姆188的PBS溶液(pH＝5)水化1h，使膜充分水合，再经高压均质(均质压力20000psi)5次，即得脂质组合物混悬液，将其分装至西林瓶中，冷冻干燥即得SN38脂质组合物冻干粉针。冷冻干燥后的SN38脂质组合物冻干粉针加水复溶，测定其粒径、电位及包封率，结果其粒径(见图1)、电位(见图2)及包封率分别为150.8nm、-42.2mv和91.4％。
实施例2 SN38脂质组合物冻干粉针的制备
称取SN38 30mg、1200mg氢化大豆磷脂、100mg MCT、200mg胆固醇、50mgDSPG、50mgPEG-DSPE、50mgHS15置于100mL圆底烧瓶中，以50mL氯仿/甲醇(9:1，v/v)混合溶剂溶解后，于60℃条件下减压蒸发，在瓶壁形成脂膜，加入30mL含15wt％蔗糖、0.5wt％PVP-K30的醋酸钠缓冲液(pH＝3)水化2h，再经高压均质得到脂质组合物混悬液，将其分装于西林瓶中，冷冻干燥即得。冷冻干燥后的磷脂组合物冻干粉针加水复溶，测定其粒径及包封率，结果其粒径及包封率分别为178.2nm和86.7％。
实施例3 SN38脂质组合物的制备
称取SN38 30mg、335mg蛋黄卵磷脂、10mg茶油、30mg TPGS、50mg胆固醇和15mgPEG-DSPE置于100mL圆底烧瓶中，以50mL二氯甲烷/甲醇(1:1，v/v)混合溶剂溶解后，经喷雾干燥(入口温度：60℃)得白色颗粒，加入60mL 10wt％海藻糖、0.5wt％壳聚糖的丁二酸钠缓冲液(pH＝4)水化2h，再经高压均质得到脂质组合物混悬液。测定其粒径和包封率分别为120.8nm和85.4％。
实施例4 SN38脂质组合物冻干粉针的制备
称取SN 3830mg、300mg DSPC、50mg橄榄油、100mg胆固醇、100mg PEG-DSPE、10mg普朗尼克P85置于100mL圆底烧瓶中，以50mL氯仿/乙醇(1:1，v/v)混合溶剂溶解后，经喷雾干燥(入口温度：60℃)得白色颗粒，加入30mL 15wt％乳糖、0.5wt％PVP-K29/32的柠檬酸缓冲液(pH＝4)水化4h，再经高压均质得到脂质组合物混悬液，将其分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。
实施例5 SN38脂质组合物冻干粉针的制备
称取SN38 30mg、600mg DOPC、5mg MCT、60mg胆固醇和15mg PEG-PE、20mg普朗尼克L61，以10mL乙醇溶解后，并于60℃保温，加入相同温度的30mL10wt％甘露醇的醋酸钠缓冲液高速搅拌(转速20000rpm)3min，再经高压均质(15000psi)3次，将最终分散物分装入西林瓶中，然后冷冻干燥即得。
实施例6 SN38脂质组合物冻干粉针的制备
称取SN3830mg、1500mg鞘磷脂、30mg红花油、150mg胆固醇、200mg DMPG置于100mL圆底烧瓶中，以50mL氯仿/甲醇(1:1，v/v)混合溶剂溶解后，经喷雾干燥(入口温度：65℃)得白色颗粒，加入50mL 10wt％蔗糖、0.3wt％PEG2000、2.5wt％白蛋白的柠檬酸缓冲液(pH＝4)水化4h，再经30000psi高压均质得到脂质组合物混悬液，将其分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。
实施例7 SN38脂质组合物冻干粉针的制备
称取SN38 30mg、500mg大豆磷脂、50mg蓖麻油、50mg胆固醇、40mg PEG-DSPE置于100mL圆底烧瓶中，以50mL氯仿/甲醇(1:1，v/v)混合溶剂溶解后，于40℃水浴上旋转蒸发除去有机溶剂，在瓶壁形成脂膜，加入40mL 10wt％蔗糖、0.1wt％泊洛沙姆188、0.5wt％普朗尼克F127的PBS溶液(pH＝5)水化1h，再经30000psi高压均质得到脂质组合物混悬液，将其分装于西林瓶中，然后冷冻干燥。
实施例8 SN38脂质组合物冻干粉针稳定性
取实施例1中的冻干粉针适量，密封，于冰箱4℃放置，于0、1、2、3、6月取样，对粒径、包封率、含量等指标进行测定，评价SN38脂质组合物的稳定性，结果见表1。
结果表明本发明的SN38脂质组合物在放置6个月后，各项质量指标与0月相比无明显变化，表明本发明磷脂组合物稳定性良好，具有潜在临床应用价值。
表1本发明实施例1中的SN38脂质组合物稳定性
实施例9 SN38脂质组合物的急性毒性研究
利用实施例1中所述的制剂评价SN38脂质组合物的毒性。
取体重18～22g性别一致的昆明小鼠60只(购自上海实验动物中心)，随机分成6组，每组10只，分别尾静脉注射浓度为2mg/mL的SN38脂质组合物冻干粉针复溶和CPT-11注射液(参考网页http://www.rxlist.com/camptosar-inj-drug.html中配方自制，批号160901)，组间剂量按等比级数排列，比值1:0.8，观察并记录给药10天内各组动物的反应和死亡率，用简化机率单位法计算LD50，其95％的可信限为：
伊立替康注射液LD50＝78±1.2mg/kg，
SN38脂质组合物LD50＝180±1.6mg/kg。
LD50毒性实验结果表明，是SN38脂质组合物与CPT-11注射液相比，毒性明显降低。
实施例10 SN38脂质组合物的药动学研究
将实施例1的SN38脂质组合物制剂加5％葡萄糖注射液复溶，SN38浓度约为2mg/mL。
SN38溶液剂的制备
5mg SN38加入到0.05mol/L精氨酸2mL中，60℃水浴加热搅拌，基本溶解后，加入0.056mol/LNa2HPO4溶液8mL，继续搅拌至完全溶解，过0.22μm微孔滤膜，得黄色的SN38注射液。
健康SD大鼠6只(购自上海实验动物中心)，雄性，随机分成2组，试验期间自由进食和饮水。以5mg/kg的剂量分别经尾静脉缓慢注射给药SN38脂质组合物制剂和SN38溶液，于给药后0.083、0.25、0.5、1、2、4、6、8和12h经眼眶取血，全血置于涂有肝素的干燥EP管中，4000r/min离心10min分离血浆，-20℃冷冻保存。
取大鼠血浆200μL，加入甲酸20μL酸化1h，加入100μL内标物溶液(2mg/L 10-羟基喜树碱甲醇溶液)和1.5mL乙酸乙酯，涡旋3min，超声提取5min，再涡旋3min，4000r/min离心10min，取1.5mL上清液，于40℃水浴N2气吹干，以100μL流动相溶样，进样20μL。药代动力学参数用WinNonlin Professional v6.3(Pdayarsight,USA)软件采用非房室模型分析处理。
结果(见表2)表明：SN38脂质组合物的t1/2、AUC0-12和AUC0-∞分别是参比制剂SN38注射液的4.71、2.30和2.38倍，具有显著性差异；这说明在同样剂量条件下，药物被脂质组合物包裹后延长了药物在血液中的循环时间，使药物在体内消除速度变慢并保持了较高的血药浓度，从而有可能发挥长效作用。SN38脂质组合物改变了SN38在大鼠体内的药动学性质，具有一定的缓释和长循环特征。
表2本发明SN38脂质组合物和SN38注射液的药动学参数
注：t1/2为半衰期，AUC为血药浓度时间曲线下面积，*表示P<0.05
实施例11 SN38脂质组合物的药效学研究
Balb/c裸鼠(购自上海实验动物中心)适应环境5d，将对数生长期的SW620细胞消化后制成5×106/mL细胞悬液，在Balb/c裸鼠右前肢皮下注射0.1mL细胞悬液，建立荷瘤模型。待小鼠肿瘤平均体积长至100mm3左右时，将裸鼠随机分为3组，每组10只。每周尾静脉注射给药3次，连续给药2周，给药剂量为CPT-11注射液5mg/kg，实施例1中的SN38脂质组合物5mg/kg，和生理盐水(对照组)，用卡尺测量各裸鼠肿瘤的长径(a)及短径(b)，按(a×b2)/2公式计算肿瘤体积。
由图3可以看出，SN38脂质组合物及CPT-11注射液对人结肠癌SW620裸鼠皮下抑制瘤均有较好的抑制作用，同剂量的脂质组合物组较CPT-11注射液5mg/kg组有更好的抑瘤效果(P<0.05)。
实施例12 SN38脂质组合物在耐药肿瘤模型上的药效学研究
Balb/c裸鼠(购自上海实验动物中心)适应环境5d，将对数生长期的MCF-7/ADR细胞消化后制成1×108/mL细胞悬液，在Balb/c裸鼠右前肢皮下注射0.1mL细胞悬液，建立荷瘤模型。待小鼠肿瘤平均体积长至50-100mm3左右时，将裸鼠随机分为3组，每组10只。每周尾静脉注射给药3次，连续给药2周，给药剂量为CPT-11注射液15mg/kg，实施例1中的SN38脂质组合物15mg/kg，和生理盐水(对照组)，用卡尺测量各裸鼠肿瘤的长径(a)及短径(b)，按(a×b2)/2公式计算肿瘤体积。
由图4可以看出，SN38脂质组合物及盐酸伊立替康注射液对裸鼠耐药性乳腺癌均有较好的抑制作用，各剂量组肿瘤体积与对照组(即生理盐水组)相比均显著降低(P<0.05，0.01)，且同剂量SN38脂质组合物组较CPT-11注射液组有更好的抑瘤效果(P<0.05)，表明本发明盐酸伊立替康复合磷脂组合物在一定程度上可逆转肿瘤耐药。

Claims (10)

1.一种SN38脂质组合物，其特征在于，以重量比计，包括：SN381份、磷脂5～60份、注射用油0.1～5份、胆固醇1～30份、长循环膜材0～30份、能在脂质表面形成保护层的功能性材料0～50份、具有逆转耐药作用的功能性辅料0～50份，以及缓冲液适量。
2.根据权利要求1所述的SN38脂质组合物，其特征在于，
所述的磷脂为选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、氢化卵磷脂、鞘磷脂、心磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、二油酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油和二油酰磷脂酰甘油中的一种或几种，优选为选自大豆磷脂、蛋黄卵磷脂、氢化大豆磷脂、二硬脂酰磷脂酰胆碱和二硬脂酰磷脂酰甘油中的一种或几种；
所述的注射用油为选自中链三酸甘油酯和植物油中的一种或几种，所述植物油选自大豆油、茶油、橄榄油、葵花油、花生油、红花油、蓖麻油，优选地，注射用油为选自中链三酸甘油酯和大豆油；
所述的长循环材料为选自聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二肉豆蔻酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺中的一种或多种；其中所述聚乙二醇的平均分子量为2000-5000；
所述的能在脂质表面形成保护层的功能性辅料为选自泊洛沙姆188、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮、壳聚糖中的至少一种；
所述的具有逆转耐药作用的功能性辅料选自双亲性的具有逆转耐药作用的功能性辅料，15-羟基硬脂酸聚乙二醇酯、天然水溶性维生素E、非离子表面活性剂普朗尼克；和/或
所述的缓冲液选自醋酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液、柠檬酸缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、丁二酸盐缓冲液中的一种或几种，其浓度范围为约1～20mM，调节溶液的最终pH值得范围为3～6.5。
3.根据权利要求1或2所述的SN38脂质组合物，其特征在于，所述的SN38脂质组合物的Z均平均粒径为50～500nm，优选为100～300nm；和/或
所述的SN38脂质组合物中SN38的浓度不低于0.5mg/mL。
4.根据权利要求1-3中任一项所述的SN38脂质组合物在制备治疗或辅助治疗肿瘤，特别是耐药性肿瘤，的药物制剂中的用途，优选地，所述肿瘤为结直肠癌、非小细胞肺癌、卵巢癌、宫颈癌、胃癌、恶性淋巴瘤、乳腺癌、皮肤癌、胰腺癌。
5.一种药物制剂，其包含根据权利要求1-3中任一项所述的SN38脂质组合物。
6.根据权利要求5所述的药物制剂，其为冻干粉针，优选地，所述冻干粉针包含有冻干保护剂，优选地，所述冻干保护剂为选自蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖、麦芽糖、白蛋白中的一种或多种；优选地，所述冻干保护剂的用量按磷脂重量比计算，1重量份的磷脂加1～50重量份的冻干保护剂。
7.一种制备根据权利要求1-3任一项所述的SN38脂质组合物的方法，所述方法为以下方法之一：
方法一：
a)将SN38、磷脂、注射用油、胆固醇、长循环膜材、具有逆转耐药作用的功能性辅料按比例混合后加到有机溶剂中，得溶液，将所得溶液进行干燥以除去有机溶剂；
b)往步骤a)中加入含能在脂质表面形成保护层的功能性辅料的缓冲液，室温下水化，经高压均质后形成混悬液，即得SN38脂质组合物；
方法二：
c)将SN38、磷脂、注射用油、胆固醇、长循环膜材按比例混合后加到有机溶剂中，得溶液，将所得溶液进行干燥以除去有机溶剂；
d)往步骤c)中加入含具有逆转耐药作用的功能性辅料和能在脂质表面形成保护层的功能性辅料的缓冲液，室温下水化，经高压均质后形成混悬液，即得SN38脂质组合物；
方法三：
e)将SN38、磷脂、注射用油、胆固醇、长循环膜材、具有逆转耐药作用的功能性辅料按比例混合后溶于有机溶剂中，得有机相；
f)将步骤e)制得的有机相注入到含具有逆转耐药作用的功能性辅料和能形成保护层的功能性辅料的缓冲液高速搅拌，经高压均质工艺，即得SN38脂质组合物。
8.根据权利要求7所述的方法，其中，
步骤a)、c)和e)中，所述的有机溶剂为选自氯仿、甲醇、乙醇、二氯甲烷、乙醚和丙酮中一种或几种，优选为选自氯仿、甲醇和乙醇中一种或几种；
在步骤a)和c)中，所述的干燥为减压干燥或喷雾干燥；
在步骤a)、d)和e)中，所述的具有逆转耐药作用的功能性辅料优选为选自普朗尼克F127、普朗尼克P123、普朗尼克P85、普朗尼克L61、HS15、TPGS中的一种或多种；
在步骤b)、d)和f)中所述高压均质的压力可以为10000～30000psi；和/或步骤f)中所述高速搅拌的转速可以为5000～30000rpm。
9.一种制备根据权利要求6所述的冻干粉针的方法，所述方法包括：
采用权利要求7或8所述的方法制备SN38脂质组合物；
将所得SN38脂质组合物冷冻干燥得到冻干粉针。
10.根据权利要求9所述的方法，其中，在采用权利要求7或8所述的方法制备SN38脂质组合物的过程中，在步骤b)、d)或f)中，所述的缓冲液中还加入选自蔗糖、乳糖、甘露醇、海藻糖和麦芽糖、白蛋白中的一种或多种作为冻干保护剂，优选地，所述冻干保护剂的用量按磷脂重量比计算，1重量份磷脂加1～50重量份冻干保护剂。
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