CN101396346B - 紫杉醇脂质复合物 - Google Patents

Abstract

本发明公开了紫杉醇脂质复合物。本发明的紫杉醇脂质复合物，由紫杉醇和脂质材料复合而成，紫杉醇和脂质材料的重量比例为1:1-19，优选比例为1:2-10，更优选比例为1:3-6。所述的脂质材料选自天然脂质、合成脂质或它们的混合物。紫杉醇脂质复合物还可以含有抗氧化稳定剂。还公开了紫杉醇脂质复合物的制备方法以及在制备注射用亚微乳、干乳剂中的应用。本发明的紫杉醇脂质复合物在油中溶解度高，制备的亚微乳具有载药量高、稳定性高、安全性高、过敏性低的优点。

Description

紫杉醇脂质复合物

技术领域

本发明涉及一种紫杉醇脂质复合物，属于医药制剂技术领域。

背景技术

紫杉醇(paditaxel，Taxol)具有重要的抗肿瘤活性，临床上用于卵巢癌、和乳腺癌、非小细胞肺癌、头癌和颈癌等的治疗。由于其几乎不溶于水(0.006μg/ml)，现在用于临床的紫杉醇注射剂

采用Cremopher EL(聚氧乙基蓖麻油)/乙醇(各50％)的混合溶液5ml溶解30mg紫杉醇制成。该处方给药数分钟后，部分病人会出现药物性皮疹、呼吸急促、支气管痉挛、低血压等过敏反应，这主要是因处方中Cremopher EL引起体内组胺释放所致。目前多采取给药前服用地塞米松、氨茶碱等抗组胺剂以防过敏反应，但仍有5％～30％的病人使用该处方后出现轻微的过敏反应。此外，市售的注射剂放置过程中有时会发生药物析出和沉淀现象，质量稳定性差，进一步加大了安全性隐患。

针对紫杉醇注射剂存在的问题，近十余年来，国内外药剂学工作者开展了广泛的研究。如与环糊精制成包合物，可满足溶解度要求，但高浓度的环糊精存在毒性，并且药物溶液不稳定，含量下降很快。将紫杉醇制成脂质体，单纯用磷脂有聚集现象，而采用磷脂和磷脂酰甘油酯(PC)，用氯仿做溶剂不聚集，但存在脂质体包封率低、易泄漏、有机溶剂不易除尽等问题，产业化发展受到限制。聚合物纳米粒包封率高，长期贮存稳定性良好，但同样存在载药量低、有机溶剂不易除尽的困扰。

亚微乳属亚微米胶体分散系统，是一种热力学不稳定体系，灭菌和贮存过程中易发生破乳、聚集、合并和沉积等现象，最终导致油水分层或药物沉降。药物的理化性质是亚微乳体系稳定性的关键因素，亲脂性强且油中溶解度高的药物易于制备亚微乳。虽然紫杉醇亲脂性强于亲水性，但其油中溶解度亦较低，仅为0.25mg/ml，无法直接制成载药量高的亚微乳，且灭菌和贮存时极易发生破乳、聚集与沉淀，质量不稳定。

发明内容

为解决现有技术中紫杉醇制剂存在的问题，本发明提供一类紫杉醇磷脂复合物。

本发明也提供了这类紫杉醇的磷脂复合物的其制备方法。

本发明又提供了含有这类紫杉醇的磷脂复合物的药物组合物。

本发明还提供了这类紫杉醇的磷脂复合物在制备抗癌药物中的应用。

为解决本发明的技术问题，本发明采用如下技术方案：

本发明的紫杉醇脂质复合物，由紫杉醇和脂质材料复合而成，紫杉醇和脂质材料的重量比例为1:1-19，优选的重量比例为1:2-10，更优选的重量比例为1:3-6。

本发明的紫杉醇脂质复合物中脂质材料选自天然脂质、合成脂质或它们的混合物。

所述的天然脂质选自卵磷脂、豆磷脂、胆甾醇、胆酸类、海藻酸钠或壳聚糖中至少一种；其中优选的是蛋黄卵磷脂、大豆磷脂、胆固醇。所述的合成脂质选自磷脂酰甘油酯、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰脂酰胆碱、二肉蔻酰磷脂酰胆碱或神经酰胺中至少一种，其中优选的是磷脂酰甘油酯、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二肉蔻酰磷脂酰胆碱。

本发明的紫杉醇脂质复合物还可以含有抗氧化稳定剂；所述的氧化稳定剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素C、EDTA及其盐或维生素E及其衍生物中至少一种。

本发明还公开了紫杉醇磷脂复合物的制备方法，包括如下步骤：

●将紫杉醇与脂质材料按比例混合，加适量有机溶剂溶解；

●在合适的温度条件下搅拌，去除有机溶剂，真空干燥即得。

本发明紫杉醇磷脂复合物的另一种制备方法是包括如下步骤：

●按一定比例取紫杉醇与脂质材料，分别用不同的有机溶剂溶解，

●混合后在合适的温度条件下搅拌，去除有机溶剂，真空干燥即得。

去除有机溶剂的方法包括旋转蒸发或喷雾干燥。

本发明紫杉醇磷脂复合物的制备过程中还可加入适量抗氧化稳定剂。

所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、苯甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃或叔丁醇中至少一种。优选的有机溶剂是丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃。

本发明的紫杉醇脂质复合物可以制备注射用冻干粉针、脂肪乳剂、亚微乳、干乳剂。

本发明的紫杉醇脂质复合物可以在制备抗癌药物中的应用。优选的癌选自卵巢癌、乳腺癌、非小细胞肺癌、头癌或颈癌。

本发明的优点：

溶解度高。紫杉醇形成脂质复合物后，在油中溶解度分别提高8倍及32倍。在复合物中紫杉醇与脂质的极性端通过相互作用结合在一起，当脂质携带药物分子分散时，脂质分子可有序排列形成外观类似脂质体的多层囊。药物与脂质形成复合物后，可表现出与母体药物不同的理化性质，如提高了紫杉醇的溶解度和分散性、增加药物的亲脂性。

载药量高。利用紫杉醇在油相中的溶解度，通过水包油乳滴的形成使系统载药量显著提高，克服了紫杉醇因溶解度低而不利于制成液体制剂的缺点。

利用本发明紫杉醇脂质复合物制备的紫杉醇水包油亚微乳稳定性高、安全性高、过敏性低。解决了紫杉醇在油中溶解度低，直接制备的亚微乳，不仅载药量低，且灭菌和贮存过程中药物易向水相迁移，物理稳定性和化学稳定性均较差，无法满足临床治疗要求的技术问题。

具体实施例

下面的实施例用来进一步说明本发明，但这并不意味着对本发明的任何限制。

实施例1：紫杉醇-蛋黄磷脂复合物

取紫杉醇0.4g，蛋黄卵磷脂2.4g，加入四氢呋喃100ml，40℃复合1小时后，旋转蒸发去除四氢呋喃，经真空干燥12小时以上(20～30℃)，即得载药蛋黄磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。

实施例2：紫杉醇-大豆磷磷脂复合物

取紫杉醇1g，大豆磷脂6g，加入预热至40℃的丙酮250ml，40℃复合1小时后，旋转蒸发去除溶剂，经真空干燥12小时以上(20～30℃)，即得载药大豆磷脂复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。

实施例3：紫杉醇-胆固醇复合物

取紫杉醇2g，胆固醇4g，加入预热至40℃的丙酮750ml，40℃复合2小时后，旋转蒸发去除溶剂，经真空干燥12小时以上(20～30℃)，即得载药胆固醇脂质复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。

实施例4：紫杉醇-磷脂酰甘油酯复合物

取紫杉醇0.2g，磷脂酰甘油酯0.4g，加入乙酸乙酯100ml，40℃复合1小时后，旋转蒸发去除溶剂，经真空干燥12小时以上(20～30℃)，即得载药磷脂酰甘油酯复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。

实施例5：紫杉醇-二硬脂酰磷脂酰胆碱复合物

取紫杉醇0.2g，二硬脂酰磷脂酰胆碱0.4g，加入四氢呋喃100ml，40℃复合1小时后，旋转蒸发去除溶剂，经真空干燥12小时以上(20～30℃)，即得载药二硬脂酰磷脂酰胆碱复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。

实施例6：紫杉醇-二肉蔻酰磷脂酰胆碱复合物

取紫杉醇0.2g，二肉蔻酰磷脂酰胆碱0.2g，加入四氢呋喃100ml，40℃复合1小时后，旋转蒸发去除溶剂，经真空干燥12小时以上(20～30℃)，即得载药二肉蔻酰磷脂酰胆碱复合物，密闭包装，放入冰箱冷藏保存。

试验例

试验例1：紫杉醇脂质复合物油中溶解度考察

取实施例2、实施例3制备的脂质复合物适量，置25mL锥形瓶中，加入大豆油，剪切5min，置60℃水浴中，搅拌24h，制备过饱和溶液，取样5mL，用0.45μm滤膜过滤，取续滤液用无水乙醇稀释后，照HPLC法测定药物浓度，计算溶解度。将结果与游离紫杉醇进行比较，见下表：

表1复合物在大豆油中的溶解度考察

 

样品	溶解度
		紫杉醇	0.25mg/ml
紫杉醇/磷脂复合物	2mg/ml(以紫杉醇计)
		紫杉醇/胆固醇复合物	8mg/ml(以紫杉醇计)

结果表明，紫杉醇形成磷脂复合物及胆固醇复合物，油中溶解度分别提高8倍及32倍。

试验例2：脂质复合物亚微乳剂

取实施例3制备的紫杉醇脂质复合物，按如下处方投料，制备载药量为1.0mg/ml的乳剂。

[处方组成]以1000ml计

 

原辅料	比例	投料量
			紫杉醇脂质复合物	按载药量为1.0mg/ml投料	3000mg(紫杉醇1000mg)
大豆油	25％(ml/ml)	250ml
			卵磷脂	1.5％(g/ml)	15g
泊洛沙姆188	3％(g/ml)	30g
			甘油	2.5％(g/ml)	25g
注射用水	约75％(ml/ml)	加至1000ml

调节pH至4.0-6.0

[制备方法]取甘油和注射用水，加热至40-60℃，加入泊洛沙姆，搅拌均匀制成水相，保温；另取紫杉醇脂质复合物、精制卵磷脂，加入至大豆油中，加热到40～60℃，置组织捣碎机中，高速搅拌使成均匀油相。在搅拌条件下将水相缓缓加入至油相，置组织捣碎机中高速搅拌使形成均匀初乳。将初乳迅速转移至高压均质机中均质，收集全部乳液，pH调节剂调节pH值至4.0-6.0，测定粒径，平均粒径为180nm。

上述制备的亚微乳，经4℃放置6个月和25℃放置3个月，外观性状、pH值、含量及粒径均无明显变，有关物质略有增加，但未超过2％。提示亚微乳在低温下保存质量稳定。

表面化：亚微乳稳定性考察结果

试验例3：亚微乳过敏性考察

1试验材料

1.1试验药物

受试药物：试验例2制备的紫杉醇亚微乳剂(1.0mg/mL)

参比制剂：市售紫杉醇注射液(以Cremophor EL/无水乙醇＝1:1为溶媒，6.0mg/ml)，临用时生理盐水稀释至所需浓度。

阳性对照：卵白蛋白(北京化学试剂公司)

空白乳剂(自制)

空白溶媒(自制)

1.2试验动物

豚鼠，雌雄各半，体重300g±20g，中国药品生物制品检定所实验动物中心提供

2试验方法

2.1给药方案

试验开始前，动物预先饲养1周以观察其活动表现。取健康豚鼠30只，随机分组，每组6只，雌雄各半。各组豚鼠隔日腹腔注射供试品0.5mL(紫杉醇剂量2mg/kg)，共注射3次，使其致敏。然后于末次给药后第12d分别静脉注射进行激发，体积1.5ml(紫杉醇剂量6mg/kg)，观察豚鼠在静脉注射后的动物的反应。见表3。

2.2观察指标及判断标准

致敏期间：每日观察每只动物的状况。(初次，最后一次致敏和激发当日测定每组每只动物的体重。)

激发期间：静脉注射后立刻至30min，按表4症状详细观察每只动物的反应，症状的出现及消失时间。最长观察3hr。

表3过敏性判断指标

 

0正常	7呼吸急促	14步态不稳
			1躁动	8排尿	15跳跃
2竖毛	9排粪	16喘息
			3颤抖	10流泪	17痉挛
4搔鼻	11呼吸困难	18旋转
			5喷嚏	12哮鸣音	19潮式呼吸
6咳嗽	13紫癜	20死亡

表4过敏性评价标准

 

0	-	过敏反应阴性
			1-4症状	+	过敏反应弱阳性
5-10症状	++	过敏反应阳性
			11-19症状	+++	过敏反应强阳性
20	++++	过敏反应极强阳性

3试验结果

激发后，对比动物出现的症状，根据评价标准判定过敏反应发生程度，结果见下表。

表5过敏性考察结果

4讨论

过敏试验结果显示，对照组紫杉醇注射液在激发后即出现步态不稳，呼吸困难，痉挛，旋转，四肢无力等症状，表明其具有明显的过敏反应和毒性症状，结果为强阳性。亚微乳组豚鼠未见明显异常现象，过敏反应为阴性。空白溶媒由于含有聚氧乙烯蓖麻油，使得动物过敏反应也表现为强阳性。空白乳组豚鼠给药后未见明显异常，无过敏反应。结果表明，紫杉醇注射液强过敏反应主要是由于溶媒聚氧乙烯蓖麻油引起，紫杉醇原料、亚微乳及空白亚微乳均不会引起过敏反应。

本发明制备的紫杉醇亚微乳剂，处方中不含cremophor EL，大大降低了制剂的过敏反应和毒性，提高了制剂使用的安全性。

试验例4：脂质复合物亚微乳剂冻干粉针

取实施例2制备的亚微乳，加入5％(W/V)甘露醇溶解，经0.2μm微孔滤膜过滤，进行冷冻干燥，即得干乳剂。

Claims (10)

1.一种紫杉醇脂质复合物，其特征在于，由紫杉醇和脂质材料复合而成，紫杉醇和脂质材料的重量比例为1∶1-19；所述的脂质材料为胆固醇。

2.根据权利要求1所述的紫杉醇脂质复合物，其特征在于，紫杉醇和脂质材料的重量比例为1∶2-10。

3.根据权利要求2所述的紫杉醇脂质复合物，其特征在于，紫杉醇和脂质材料的重量比例为1∶3-6。

4.根据权利要求1-3中任一项所述的紫杉醇脂质复合物，其特征在于，所述的紫杉醇脂质复合物还含有抗氧化稳定剂。

5.根据权利要求4所述的紫杉醇脂质复合物，其特征在于，所述氧化稳定剂选自亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、维生素C、EDTA及其盐或维生素E及其衍生物中的至少一种。

6.制备根据权利要求1-5中任一项所述的紫杉醇脂质复合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

●将紫杉醇与脂质材料按比例混合，加适量有机溶剂溶解；

●在合适的温度条件下搅拌，去除有机溶剂，真空干燥即得。

7.制备根据权利要求1-5中任一项所述的紫杉醇脂质复合物的方法，其特征在于，包括如下步骤：

●按比例取紫杉醇与脂质材料，分别用不同的有机溶剂溶解，

●混合后在合适的温度条件下搅拌，去除有机溶剂，真空干燥即得。

8.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，制备过程中还加入适量抗氧化稳定剂。

9.根据权利要求6或7所述的方法，其特征在于，所述有机溶剂选自乙醇、甲醇、苯甲醇、丙酮、乙酸乙酯、四氢呋喃或叔丁醇中至少一种。

10.根据权利要求1-5中任一项所述的紫杉醇脂质复合物在制备注射用亚微乳、干乳剂中的应用。