CN1947703A - 一种稳定的脂质体组合物 - Google Patents
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Abstract
一种稳定的脂质体组合物，由饱和磷脂和胆固醇作为成膜脂质，加入维生素E作为抗氧剂，以蔗糖作为冻干赋形剂，采用薄膜蒸发－冷冻干燥的方法制备。这种脂质体可作为抗癌药物紫杉醇的载体，稳定性试验结果表明其在放置过程中稳定，动物试验结果表明制得的紫杉醇脂质体组合物具有与市售紫杉醇注射液相当的抑瘤作用，而耐受性提高。
Description
技术领域
本发明属于药物制剂领域，涉及一种稳定的脂质体组合物，具体涉及一种以饱和磷脂和胆固醇为成膜脂质的脂质体组合物，尤其涉及一种包含紫杉醇的脂质体组合物。
背景技术
脂质体(liposome)的主要成分和结构与人体细胞膜相近，生物相容性优良，已广泛被用作药物传输的载体。脂质体常用的脂质材料有天然卵磷脂、天然大豆磷脂。这些脂质由于其分子中含有不饱和的脂肪酸基，易氧化水解成过氧化物、丙二醛、脂肪酸及溶血磷脂，后者可进一步水解成甘油磷酸复合物及脂肪酸等。磷脂的氧化水解还可使膜的流动性降低，促进药物渗漏。这些不稳定因素不利于脂质体产品的制备、贮存和临床上的安全使用。
脂肪酸基饱和的磷脂可有效避免上述氧化水解过程。这种含有饱和脂肪酸基的磷脂称为饱和磷脂，如氢化饱和卵磷脂、氢化饱和大豆磷脂，及合成磷脂如二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰丝氨酸、二硬脂酰磷酰丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰甘油、二硬脂酰磷酰甘油、二棕榈酰磷脂酰肌醇、二硬脂酰磷酰肌醇、二棕榈酰磷脂酸、二硬脂酰磷酸，以及二棕榈酰磷脂酰乙醇胺、二硬脂酰磷脂酰乙醇胺。这些饱和磷脂具有不易氧化、水解慢，在体内稳定的优点。其中氢化饱和卵磷脂、氢化饱和大豆磷脂价格低廉，来源广泛，是制备脂质体较理想的饱和磷脂。
但饱和磷脂制备脂质体亦存在一些问题，如饱和磷脂相变温度高，制备过程中需要较高温度，由此会影响到热敏药物的稳定性。饱和磷脂具有较强的刚性，形成脂质体弯曲的双分子膜比较困难。在先的公开文献对饱和磷脂用于制备脂质体作了很多探索，多采用两种或以上的饱和和/或不饱和磷脂制备脂质体。CN95192734提及以基本饱和的中性磷脂和基本饱和的带电磷脂制备大多层脂质体，用以包封非电解水溶性药物。在该公开文件中，制备得到的脂质体粒径大小在0.5～3.0微米的范围内，如此宽范围粒径分布的脂质体在给药后，很难达到被动靶向集中的目的，且用于静脉给药存在风险。还有研究利用饱和磷脂的相变温度通常高于不饱和磷脂的相变温度的特点以避免被包裹的药物的泄漏，提高脂质体的稳定性。这方面的研究有CN01135935所提及的，采用相变温度高的第一磷脂与相变温度低(低于贮存温度)的第二磷脂制备脂质体。其中第一磷脂选自氢化天然磷脂或长碳链饱和的磷脂，第二磷脂选自不饱和磷脂或短碳链饱和的磷脂，因其相变温度的不同，而使双层膜上双相共存，形成两相之间的边界障碍，避免疏水性药物的自行聚集析出和破坏脂质体的结构及稳定，因此提高疏水性药物的包封量，使得药脂比提高。在该公开文件中，采用两种及以上的饱和或/和不饱和磷脂，未提及以一种饱和磷脂和胆固醇制备脂质体的技术方案。
抗癌药物紫杉醇(paclitaxe)是从短叶红豆杉(Taxus brevifolia Nutt.)的树皮中提取的天然产物，具有良好的抗肿瘤活性，但因其在水中的溶解度极微，仅在甲醇、乙醇、二甲基亚砜等有机溶剂中可溶，因而给紫杉醇静脉给药带来极大困难。解决其溶解性的公知的方法之一，是采用表面活性剂聚氧乙烯蓖麻油和乙醇作为溶剂溶解紫杉醇，如1992年美国食品药品管理局(FDA)批准的紫杉醇注射液(美国百时美施贵宝公司生产，商品名为Taxol，在中国注册的商品名为泰素)。聚氧乙烯蓖麻油虽能增加紫杉醇的水溶性，但由于其在体内降解时能释放组织胺，从而可能发生严重的超过敏反应。此外，紫杉醇本身亦有毒性。因此我们期望制备一种不含聚氧乙烯蓖麻油和乙醇，在体内能够定向分布，从而降低全身毒性的紫杉醇制剂。为达到此目的，脂质体不失为其理想的载体之一。
紫杉醇脂质体的研究从1990年代初开始进行。在WO9513053中，提及以带有负电荷的脂质和两性脂质制备紫杉烷类药物的脂质体，以使制备的脂质体带有电荷，防止聚集。公知的，微粒所带的电荷将影响其在体内的处置。还有研究使用特殊的脂质，如在WO9318751、US5424073、US5648090、CN99801424中，提及紫杉醇脂质体配方中，添加一种特别的磷脂，心磷脂(cardiolipid)；这种磷脂较为特殊，其分子结构具有一个较大的亲水基与四个脂肪碳链，从而提升包裹的紫杉醇的量。但这种磷脂非常昂贵。在中国已经上市的注射用紫杉醇脂质体，如南京思科药业有限公司生产的力扑素，仍存在发生超敏反应的风险，需要提前注射地塞米松等进行抗过敏性预处理。因此，迫切需要提供一种更为安全、有效的新型紫杉醇脂质体组合物。
发明内容
本发明提供了一种以饱和磷脂和胆固醇作为成膜脂质的脂质体组合物及其制备方法。
本发明还提供了一种在制备和贮存过程中稳定的含有抗癌药物的脂质体组合物及其制备方法。尤其提供了一种稳定的紫杉醇脂质体组合物，其不含聚氧乙基代蓖麻油，避免了含聚氧乙基代蓖麻油导致的超敏反应，提高了用药安全性和患者的顺应性。
制备本发明脂质体的必需组分之一是饱和磷脂。通常，这种饱和磷脂含有的饱和脂肪酸基的碳原子数为14～18。碳原子数小于14，脂质体容纳内水相的能力降低，并且给予后，脂质体在血中的稳定性降低。另一方面，碳原子数过多，生物相容性降低，并且由于其碳链增长，相变温度升高，生产脂质体过程中需要非常高的温度，这对药物及脂质体的稳定性都是不利的因素。因此，本发明所使用的饱和磷脂选自例如：氢化饱和的大豆磷脂或卵磷脂、二棕榈酰磷酯胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱。本发明使用的饱和磷脂不限于以上磷脂种类，凡含有的饱和脂肪酸基的碳原子数为14～18的磷脂，均可用于本发明的目的。
本发明优选的饱和磷脂选自氢化饱和的大豆磷脂、氢化饱和的卵磷脂、二棕榈酰磷酯胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱。
如本领域技术人员所公知，饱和磷脂相变温度高，刚性大，单独形成弯曲的稳定的双分子膜有一定困难。在本发明脂质体中，添加胆固醇与饱和磷脂一起作为成膜脂质，可以调节脂质双分子膜的流动性。按照本发明，胆固醇与饱和磷脂的摩尔比例为1∶5至1∶1，优选1∶3至1∶1。
除上述必需的饱和磷脂和胆固醇之外，可以任选的加入抗氧剂如天然型或合成的维生素E，以防止药物的氧化。按照本发明，抗氧剂与成膜脂质的重量比为1∶1000至1∶100，优选1∶300至1∶100。
采用常用的脂质体制备方法可以得到本发明的脂质体，例如采用高压匀化法、微孔挤压法、超声分散法，优选采用高压匀化法。上述提到的参考文献中的制备方法均引入本文作为参考。
如本领域技术人员所公知，其中含有活性化合物的脂质体可用冷冻干燥来稳定，以制成适宜的组合物形式。在该过程中，需要加入冷冻赋形剂，依靠其稳定膜作用，保证脂质体的完整性。已知的冷冻赋形剂是多元醇类，如甘油、葡萄糖、蔗糖、乳糖、海藻糖、氨基酸等。在本发明中，优选蔗糖作为冻干赋形剂。按照本发明，冻干赋形剂与成膜脂质的重量之比为1∶8至1∶1，本发明优选1∶4至1∶1。
本发明的载药脂质体组合物形式可通过上述冷冻干燥的方法来制备。例如，将活性成分、饱和磷脂、胆固醇，如果必要，和抗氧化剂，按比例溶解在适宜的溶剂中成澄明溶液，在50℃～65℃恒温下，按照常规方法，如减压蒸发法，如果必要，在惰性气体存在下减压蒸发，除去该液体混合物中的溶剂，使之成膜，再加入溶有按比例计算的冻干赋形剂的水溶液，水化、超声或匀浆至细度为0.1～0.3微米之间，以0.22微米的微孔滤膜过滤除菌，分装入西林瓶等适宜的容器中，通过冷冻干燥从该混合物中除去溶剂，得到干燥的含药脂质体，再将包装容器封口或压盖，在封口和压盖之前可通惰性气体。
在上述脂质体的制备方法中，不限制所使用的与脂质相关的溶剂的量，并且使脂质体溶解的液体的量是适宜的。通常，适宜的溶剂为非极性的或弱极性的并且能够蒸发后不留下毒性残余物。按照常规方法，如就通常所使用的有机溶剂而言，选自甲醇、乙醇、氯仿或它们的混合物。在本发明中，优选乙醇。本发明中采用的惰性气体选自氮气、氦气、氩气。以该制备方法制得的干燥的含药脂质体能够长期稳定贮存。
本发明的脂质体可以用作抗癌药物的载体，活性成分与成膜脂质的摩尔比例为1∶50至1∶20。
在本发明中，优选的是，抗癌药物为紫杉烷及其衍生物，更优选紫杉醇。紫杉醇作为活性成分，与成膜脂质的摩尔比例为1∶45至1∶25，以1∶35至1∶30为佳。
这种载有紫杉醇的脂质体组合物可通过上述的制备方法来制备。例如，将紫杉醇、饱和磷脂、胆固醇，如有必要，和抗氧化剂，按比例溶解在适宜的溶剂中成澄明溶液，在50℃～65℃恒温下，按照常规方法，如减压蒸发法，如果必要，在惰性气体存在下减压蒸发，除去该液体混合物中的溶剂，使之成膜，再加入溶有按比例计算的冻干赋形剂的水溶液，水化、超声或匀浆至细度为0.1～0.3微米之间，以0.22微米的微孔滤膜过滤除菌，分装入西林瓶等适宜的容器中，通过适宜的方法如冷冻干燥从该混合物中除去溶剂，得到干燥的紫杉醇脂质体，再将包装容器封口或压盖，在封口和压盖之前可通惰性气体。
通过上述方法制备所得的紫杉醇脂质体，其平均粒径在100纳米～300纳米之间。这种紫杉醇脂质体一方面避免了由于药物溶剂带来的全身毒性；另一方面，该粒径范围内的脂质体在给药后首先被体内的网状内皮系统吞噬，具有被动靶向性，能够降低紫杉醇自身对全身的毒副作用，提高人体耐受性。
该法制得的干燥的紫杉醇脂质在低温下贮存，定期测定其氧化水解产物，结果表明，该紫杉醇脂质体具备良好的抗氧化性能。以注射用水复溶后，其平均粒径在0.1～0.3微米，复溶的脂质体室温存放12小时，紫杉醇脂质体不发生聚集，无紫杉醇结晶析出，可用于静脉注射给药。以上结果表明，以饱和磷脂和胆固醇作为成膜脂质制备的紫杉醇脂质体，具备良好的稳定性，能够满足生产、贮存和临床应用的需要。
将本发明紫杉醇脂质体以40mg/kg/次和50mg/kg/次静脉注射多次给药，小鼠未表现出毒副反应，各项生理指标正常。市售紫杉醇注射液(商品名：泰素)以33.3mg/kg/次，以1ml/min静脉注射给药后，动物出现短暂昏迷，本发明脂质体以等剂量或更高剂量同样方式给药后，动物正常。动物试验结果表明，本发明紫杉醇脂质体可以提高生物体的耐受性。抑瘤试验表明本发明脂质体具有至少与泰素相当的抑瘤效果。
本发明脂质体组合物，采用饱和磷脂和胆固醇作为成膜脂质，这些均为商业上可得到的药用制剂材料。本发明制备工艺简单，步骤少，采用的制剂设备为常规设备，便于投入工业化生产。以紫杉醇作为活性成分制得的脂质体组合物，避免了含聚氧乙基代蓖麻油的紫杉醇制剂导致的超敏反应。根据复溶后紫杉醇脂质体的粒径分布和初步急毒试验结果，可分析得知其静脉注射后具有被动靶向特性，定向分布于网状内皮系统，从而降低紫杉醇的全身毒性，提高了患者用药的耐受性。根据在先文件公开的紫杉醇的药理作用和临床适应症，该紫杉醇脂质体组合物可以适当方式和合理剂量安全地用于哺乳动物卵巢癌、卵巢转移性癌、乳腺癌、非小细胞肺癌的治疗。
下面对本文所用术语作特别说明：
本发明所用的术语“脂质体”，如本领域技术人员所公知，指由具有两亲性的磷脂分子和胆固醇聚合而成的封闭性小囊。在本文中，指一般意义上的单室脂质体。
本发明所用术语“成膜脂质”，指构成脂质体双分子层的材料，在本文中指磷脂和胆固醇所构成的总体。
本发明所用术语“饱和磷脂”，指磷脂分子中的脂肪酸基是饱和的，即脂肪酸基中基本不含“C＝C”双键。文中“氢化磷脂”、“氢化饱和磷脂”与该术语具有同样的含义。
本发明所用术语“粒径”，是指以激光粒径测定仪测得的脂质体的平均粒径。
下面结合实施例对本发明作进一步详细的说明，实施例作为例证的目的给出，不构成对本发明范围的限制。
附图说明：
图1实施例1制得的脂质体的电镜照片
图2实施例1制得的脂质体冻干前粒径分布
图3实施例1制得的脂质体复溶后粒径分布
实施例1紫杉醇脂质体的制备
处方：
紫杉醇 0.15g
氢化大豆磷脂 4g
胆固醇 0.6g
维生素E 25mg
蔗糖 12g
注射用水 120ml
分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E加入100ml无水乙醇，溶解后，以旋转蒸发仪在氮气存在情况下，抽干溶剂，制备成膜，置真空干燥器中过夜放置，除去残留溶剂。加入以注射用水溶解的蔗糖溶液，55℃水浴，磁力搅拌1小时，超声分散，用高压均质机均质，0.22微米PVDF膜无菌过滤，分装入西林瓶，冷冻干燥。将西林瓶通氮气，压盖密封。
制得的脂质体的电镜照片见图1(放大50000倍)。
按照中国药典2005版二部附录XIX E中方法，测得样品的包封率为93.0％。
按照中国药典2005版二部附录XIX E中方法，以激光粒径测定仪测定冻干前脂质体样品，其平均粒径为138.6纳米，注射用水复溶样品的平均粒径为178.5纳米。其粒径分布图见图2和图3。
实施例2紫杉醇脂质体的制备
处方：
紫杉醇 0.15g
氢化卵磷脂 4g
胆固醇 1g
维生素E 20mg
蔗糖 15g
注射用水 150ml
分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E加入100ml无水乙醇，溶解后，用旋转蒸发仪制备成膜，置真空干燥器中过夜放置，除去残留溶剂。加入以注射用水溶解的蔗糖溶液，58℃水浴，磁力搅拌1小时，超声分散，依次采用0.8，0.4，0.2微米聚碳酸酯膜，用挤出器高压挤出，分装入西林瓶，冷冻干燥，压盖密封。
与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为164.6纳米，包封率为92.1％。
实施例3紫杉醇脂质体的制备
处方：
紫杉醇 0.15g
氢化大豆磷脂 3.5g
胆固醇 1.5g
维生素E 16mg
蔗糖 5g
注射用水 50ml
分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E加入100ml无水乙醇，溶解后，用旋转蒸发仪制备成膜，置真空干燥器中过夜放置，除去残留溶剂。加入以注射用水溶解的蔗糖溶液，60℃水浴，磁力搅拌1小时，超声分散，用高压均质机均质，用0.2微米聚碳酸酯膜挤出，0.22微米PVDF膜无菌过滤，分装入西林瓶，冷冻干燥，压盖密封。
与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为152.6纳米，包封率为90.6％。
实施例4紫杉醇脂质体的制备
处方
紫杉醇 0.15g
二硬脂酰磷脂酰胆碱 2.5g
胆固醇 1.2g
维生素E 4mg
蔗糖 15g
注射用水 150ml
分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E加入100ml无水乙醇，溶解后，用旋转蒸发仪制备成膜，置真空干燥器中过夜放置，除去残留溶剂。加入以注射用水溶解的蔗糖溶液，50℃水浴，磁力搅拌1小时，超声分散，用高压均质机均质，用0.2微米聚碳酸酯膜挤出，0.22微米PVDF膜无菌过滤，分装入西林瓶，冷冻干燥，压盖密封。
与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为143.8纳米，包封率为88.2％。
实施例5紫杉醇脂质体的制备
处方
紫杉醇 0.15g
二棕榈酰磷脂酰胆碱 2g
胆固醇 0.5g
维生素E 25mg
蔗糖 6.5g
注射用水 75ml
分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇、维生素E加入100ml无水乙醇，溶解后，用旋转蒸发仪制备成膜，置真空干燥器中过夜放置，除去残留溶剂。加入以注射用水溶解的蔗糖溶液，58℃水浴，磁力搅拌1小时，超声分散，依次采用0.8，0.4，0.2微米聚碳酸酯膜，用挤出器高压挤出，分装入西林瓶，冷冻干燥，压盖密封。
与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为138.6纳米，包封率为86.4％。
实施例6紫杉醇脂质体的制备
处方
紫杉醇 0.15g
氢化卵磷脂 4g
胆固醇 0.4g
蔗糖 35g
注射用水 200ml
分别称取处方量的紫杉醇、氢化大豆磷脂、胆固醇加入100ml无水乙醇，溶解后，用旋转蒸发仪制备成膜，置真空干燥器中过夜放置，除去残留溶剂。加入以注射用水溶解的蔗糖溶液，55℃水浴，磁力搅拌1小时，超声分散，用高压均质机均质，用0.2微米聚碳酸酯膜挤出，0.22微米PVDF膜无菌过滤，分装入西林瓶，冷冻干燥，西林瓶中通以氩气，压盖密封。
与实施例1同样方法测定，冻干前样品的平均粒径为178.5纳米，包封率为92.4％。
实施例7紫杉醇脂质体组合物的稳定性试验
该试验旨在考察实施例中制备的脂质体样品的贮存稳定性和使用稳定性。
将实施例1、2、3中制得的干燥的紫杉醇脂质体组合物在2～10℃长期稳定贮存，观察其外观，以注射用水复溶后，以显微镜观察，结果见表1；将此溶液室温存放12小时，定时观察，结果见表2。由结果可知，紫杉醇脂质薄膜在2～10℃贮存12个月后，复溶后不发生聚集，无紫杉醇结晶析出；复溶后放置12小时，不发生聚集，无紫杉醇结晶析出。
表1紫杉醇脂质体低温(2～10℃)放置稳定性试验结果
| 样品来源 | 放置时间(月) | 外观 | 复溶后显微镜检测 |
| 实施例1 | 0 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 |
| 1 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 | |
| 3 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 | |
| 6 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 | |
| 12 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 | |
| 实施 | 0 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 |
| 例2 | 1 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 |
| 3 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 | |
| 6 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 | |
| 12 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 | |
| 实施例3 | 0 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 |
| 1 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 | |
| 3 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 | |
| 6 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 | |
| 12 | 类白色疏松块状物 | 溶解后无结晶析出，外观均匀，不聚集 |
表2紫杉醇脂质体复溶后室温放置稳定性试验结果
| 样品来源 | 复溶后放置时间(小时) | 显微镜检测 |
| 实施例1 | 0 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 |
| 1 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 | |
| 3 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 | |
| 6 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 | |
| 12 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 | |
| 实施例2 | 0 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 |
| 1 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 | |
| 3 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 | |
| 6 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 |
| 12 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 | |
| 实施例3 | 0 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 |
| 1 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 | |
| 3 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 | |
| 6 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 | |
| 12 | 外观均匀，不聚集，无结晶析出 |
实施例8紫杉醇脂质体的急性毒性试验
该实施例旨在考察本发明紫杉醇脂质体按常规方式给药后的即时毒性反应和多次给药的耐受性。
将实施例1中制备的紫杉醇脂质体以注射用水复溶。试验动物：昆明种雌性小鼠，体重18～20g，随机分为4组，每组5只，阴性组给以与试验组最高体积的相应溶剂。在第1，4，7天对各组以静脉注射给药。
试验结果：(1)即时毒副反应观察：各组小鼠给药后即时观察，无明显毒副反应。(2)小鼠体重变化：紫杉醇组给药后小鼠体重变化不大，第三次给药后小鼠体重有下降，之后体重逐步上升。空白溶剂组小鼠体重逐步上升。
具体结果见表3。
表3紫杉醇脂质体急性毒性试验中动物体重变化
| 时间(天) | 各组小鼠体重动态变化称量结果(g) | ||
| 阴性 | 紫杉醇脂质体低剂量组(40mg/kg/次) | 紫杉醇脂质体高剂量组(50mg/kg/次) | |
| 1 | 22.2±1.5 | 22.2±1.2 | 22.0±1.4 |
| 2 | 23.6±0.5 | 23.2±0.7 | 22.6±1.0 |
| 3 | 24.4±0.8 | 24.0±0.6 | 23.4±1.2 |
| 4 | 24.4±0.5 | 24.0±0.9 | 23.4±1.0 |
| 5 | 25.0±0.6 | 24.0±0.6 | 23.6±0.5 |
| 6 | 25.6±0.5 | 22.8±0.7 | 24.0±0.6 |
| 7 | 25.6±0.5 | 20.0±1.4 | 24.2±0.7 |
| 8 | 26.0±0.6 | 19.0±0.7 | 22.6±0.8 |
| 9 | 26.6±1.0 | 17.5±1.1 | 21.6±1.0 |
| 10 | 26.4±0.5 | 19.8±1.5 | 21.4±1.0 |
| 11 | 26.6±0.8 | 23.0±0.7 | 23.2±1.2 |
| 12 | 27.0±0.6 | 24.0±0.7 | 23.2±0.7 |
实施例9抗肿瘤作用试验
以实施例1中制备的紫杉醇脂质体组合物进行初步抗肿瘤试验。实验动物采用C57BL/6黑小鼠，雄性，体重19～22g，随机分组，每组10只。取B16黑色素瘤源，采用匀浆法，以生理盐水1∶6制备成瘤细胞悬液，右腋皮下接种B16黑色素瘤，肿瘤接种后24小时，小鼠尾静脉注射给药，观察即时反应及体重变化。实验结束后，剖取肿瘤称重，按下式计算肿瘤抑制率。
肿瘤抑制率％＝[(对照组平均瘤重-给药组平均瘤重)/对照组平均瘤重]*100％
试验结果：(1)即时反应观察：紫杉醇脂质体各组给药后无即时明显毒副性反应。泰素各组小鼠静脉给药后(注速为1ml/min)，即时小鼠呈半昏迷状态，15分钟左右可逐渐恢复。(2)各组动物体重均无明显变化。(3)在总剂量相等的情况下，紫杉醇脂质体与泰素的抑瘤效果无明显差异(见表4)。
表4紫杉醇脂质体不同给药方案对小鼠黑色素瘤B16(皮下接种)疗效试验
| 分组 | 给药方案 | 动物数(只)始/终 | 抑瘤率(％) | |
| 样品 | 剂量(mg/kg) | |||
| 紫杉醇脂质体 | 50 | 第1、7天静注给药 | 10/10 | 64.87 |
| 33.3 | 第1、5、9天静注给药 | 10/10 | 65.38 | |
| 25 | 第1、4、7、10天静注给药 | 10/0 | 65.77 | |
| 泰素 | 33.3 | 第1、5、9天静注给药 | 10/10 | 68.11 |
| 25 | 第1、4、7、10天静注给药 | 10/10 | 69.18 | |
| 顺铂 | 7 | 第1、3天静注给药 | 10/10 | 87.25 |
Claims (26)
1.一种脂质体，其特征在于，脂质体的成膜脂质由饱和磷脂和胆固醇组成，活性成分包裹在脂质体中。
2.如权利要求1所述的脂质体，其特征在于，其中饱和磷脂选自氢化饱和卵磷脂、氢化饱和大豆磷脂。
3.如权利要求1所述的脂质体，其特征在于，其中饱和磷脂选自二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱。
4.如权利要求1至3任一所述的脂质体，其特征在于，胆固醇与饱和磷脂的摩尔比例为1∶5至1∶1。
5.如权利要求4所述的脂质体，其特征在于，胆固醇与饱和磷脂的摩尔比例为1∶3至1∶1。
6.如权利要求5所述的脂质体，其特征在于，还含有抗氧化剂。
7.如权利要求6所述的脂质体，其特征在于，抗氧化剂选自天然型维生素E或合成维生素E，其与成膜脂质的重量比为1∶1000至1∶100。
8.如权利要求7所述的脂质体，其中活性成分选自抗肿瘤药物。
9.如权利要求8所述的脂质体，其中活性成分选自紫杉烷或其衍生物。
10.如权利要求9所述的脂质体，其中活性成分为紫杉醇。
11.如权利要求10所述的脂质体，其特征在于，紫杉醇与成膜脂质的摩尔比例为1∶45至1∶25。
12.如权利要求11所述的脂质体，其特征在于，脂质体的平均粒径在100纳米至300纳米范围内。
13.一种包含权利要求1至12任一所述脂质体的组合物，其特征在于，还包含药学上可接受的赋形剂。
14.如权利要求13所述的脂质体组合物，其特征在于，含有冻干赋形剂。
15.如权利要求14所述的脂质体组合物，其特征在于，冻干赋形剂选自蔗糖、海藻糖、甘露醇、乳糖。
16.如权利要求15所述的脂质体组合物，其特征在于，冻干赋形剂为蔗糖。
17.如权利要求14至16任一所述的脂质体组合物，其特征在于，按重量比，成膜脂质与冻干赋形剂的比例为1∶8至1∶1。
18.如权利要求17所述的脂质体组合物，其特征在于，按重量比，成膜脂质与冻干赋形剂的比例为1∶4至1∶1。
19.一种制备权利要求14至18任一所述脂质体组合物的方法，其步骤为：将活性成分与磷脂、胆固醇，如有必要，和抗氧化剂，按比例搅拌溶于乙醇中，使溶液成澄明溶液，然后放入温度为50℃～65℃的恒温水浴中，在旋转蒸发器中减压除去溶剂后成膜，再加入冻干赋形剂的水溶液，水化、超声或匀浆或挤出至细度为0.1～0.3微米之间，以0.22微米的微孔滤膜过滤除菌，分装于容器内，冷冻干燥后通入惰性气体，密封容器，得到紫杉醇脂质体组合物。
20.如权利要求19所述的制备方法，其特征为，惰性气体选自氮气、氦气、氩气。
21.如权利要求19所述的制备方法，其特征为，所采用的分装容器为西林瓶。
22.权利要求13-18任一所述脂质体组合物在治疗癌症方面的应用。
23.如权利要求22所述的应用，使用之前以注射用水复溶，再以5％葡萄糖溶液稀释。
24.如权利要求22所述的应用，其使用方式为静脉注射或腹腔注射或瘤体注射。
25.如权利要求22所述的应用，其中癌症种类为卵巢癌、卵巢转移性癌、乳腺癌、非小细胞肺癌。
26.如权利要求22所述的应用，其特征在于与顺铂联合应用。
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| CN 200610028725 CN1947703A (zh) | 2006-07-07 | 2006-07-07 | 一种稳定的脂质体组合物 |
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|---|---|---|---|---|
| CN101396343B (zh) * | 2007-09-26 | 2011-12-07 | 中国医学科学院药物研究所 | 以脂质复合物为中间载体的紫杉醇亚微乳 |
| CN102813682A (zh) * | 2012-07-19 | 2012-12-12 | 李振刚 | 薄膜超声法炙制富含紫杉醇脂质体的红豆杉粉的技术 |
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2006
- 2006-07-07 CN CN 200610028725 patent/CN1947703A/zh active Pending
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