CN1931157A - 多烯紫杉醇脂质体及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了一种可用于注射或口服的多烯紫杉醇脂质体及其固体制剂。它的特点是用磷脂类物质和附加剂包合多烯紫杉醇，制得粒径小、包封率高、稳定性好、毒副作用低的多烯紫杉醇脂质体制剂。本发明制备的多烯紫杉醇脂质体能增强对癌细胞的靶向作用，增强多烯紫杉醇对肿瘤细胞的抑杀作用，提高疗效，降低其毒副作用。本发明还涉及多烯紫杉醇脂质体的多种制备方法，且工艺简单、成本低廉，适合工业化生产。

Description

多烯紫杉醇脂质体及其制备方法

技术领域

本发明属于药品制剂领域，具体讲涉及含有抗肿瘤活性成分多烯紫杉醇的脂质体，以及该脂质体的制备方法。

背景技术

多烯紫杉醇(DOCETAXEL)商品名为泰素帝是一种半合成紫杉醇衍生物，其抗肿瘤机制与紫杉醇相同，为有丝分裂抑制剂。通过促进微管蛋白聚集并延缓微管的解聚使细胞发生G2/M期阻滞，导致形成稳定的非功能性的微管束，从而破坏有丝分裂和细胞增殖。其细胞毒作用是紫杉醇的1.3～12倍。另外该药还有促进细胞凋亡的作用。临床上已批准用于卵巢癌、乳腺癌以及非小细胞肺癌的一线或二线治疗。

由于多西紫杉醇水溶性差，目前市售的多烯紫杉醇注射剂(40g·L-1)是采用吐温-80(tween-80)作溶剂，同时配有含13％乙醇的稀释液。由于吐温-80具有溶血性，用于静脉内注射，会引起过敏反应，包括休克，呼吸困难，低血压，血管性水肿，风疹等过敏样反应症状，这些不良反应在人的临床实验可以十分严重，且有死亡报道。故临床用药常规实施预处理：从多烯紫杉醇治疗前1天开始口服地塞米松8mg，每天2次，连服3～5天，使用多烯紫杉醇前30～60分钟肌肉注射苯海拉明40mg、静脉注射西咪替丁300mg。一些病人(2.2％)尽管在药物预防之后，仍然会过敏。5％的病人会因为过敏而不得不停止使用泰素帝，6.5％的病人会产生过敏水肿，为了提醒医生和病人对该药毒副反应的严重性，在美国的泰素帝的药物产品说明书中有对该产品的过敏休克副反应加有严重警告术语；吐温-80黏性大，给临床用药带来不便；另外，多烯紫杉醇自身有骨髓抑制、白血球减少、血小板减少等毒性，因此，迫切需要改变多烯紫杉醇的剂型，以增加多烯紫杉醇的水溶性，避免由于溶媒吐温-80引起的过敏反应和多烯紫杉醇自身的毒副作用。

为避免因吐温-80及多烯紫杉醇自身带来的不良反应，提高多烯紫杉醇的抗肿瘤效果，国内外学者现已对之做了多种尝试，其中包括对多烯紫杉醇的衍生物及制剂进行广泛研究。据报道，以橄榄油作载体携带的多烯紫杉醇微滴经纤维蛋白原包裹后，提高了多烯紫杉醇的抗肿瘤活性(Canser Research.2003.63(21).7314-7320)。Le Garrec D等利用两亲性聚合物如PVP-PLA在水中可自发行成聚合物胶束的原理，制备了多烯紫杉醇-聚合物胶束，此胶束对多烯紫杉醇具有极好的增溶效果，体外抗肿瘤效果与市售制剂均等，但不良反应少于市售制剂(J.Control.Release.2004.99(1)83-101)。尽管对多烯紫杉醇的衍生物及制剂的研究取得了明显的进展，但大都尚不符合用药的安全性和工业化生产的要求，至今未见上临床、上市的报道。

发明内容

本发明的目的在于研制了一种性质稳定且可采用现有技术工业化生产的多烯紫杉醇脂质体及其固体制剂。

本发明的另一目的是提供了多烯紫杉醇脂质体及其固体制剂的制备方法。

本发明所述的多烯紫杉醇脂质体的组成成分(以重量份计)为：

多烯紫杉醇：0.5-10份，

磷脂类物质：5-100份，

附加剂：5-100份

为进一步延长多烯紫杉醇脂质体的血液循环时间，提高多烯紫杉醇脂质体的靶向性和生物利用度，降低毒副作用，可对多烯紫杉醇脂质体进行表面修饰制成特殊性能脂质体，如经聚乙二醇、甲基聚唑啉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇-磷脂衍生物等材料修饰制成隐形脂质体A；同活化的单克隆抗体偶联制得免疫脂质体B；经磁性材料修饰制得磁性脂质体C等。其中单克隆抗体可以选用人体大肠癌细胞表面抗原LEA的单克隆抗体ND-1，磁性修饰材料为超细磁粉。

本发明所述的磷脂类物质选自磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰、二棕榈酰磷脂酸、二油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺及其混合物，卵磷脂、豆磷脂、天然或合成的心磷脂、脑磷脂，其中优选卵磷脂、豆磷脂、天然或合成心磷脂、脑磷脂。

本发明所说的附加剂选自胆固醇、维生素E、十八胺、磷酸二鲸蜡酯、表面活性剂，其中表面活性剂选自脱氧胆酸盐、胆酸盐、脱氧胆酸、胆酸、吐温-80、牛磺胆酸盐。

本发明所述的多烯紫杉醇脂质体，可以通过下述任何适宜的不同方法制备：

方法一：将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂按上述比例溶解于适量有机溶剂中，减压蒸发或通氮气除去有机溶剂，形成一层脂质薄膜，加入适量洗膜介质溶解膜，超声处理15-30min，即得多烯紫杉醇脂质体。洗膜介质选自Hepes缓冲液(20Mm)，磷酸盐缓冲液，Tris-HCl缓冲液(pH7.5，含0.15M NaCl)，含甘露醇的水溶液。

方法二：将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂溶于适量有机溶剂中制成脂质溶液，吸取该溶液缓缓注入加热的磷酸盐缓冲溶液中，通氮气或减压蒸发去除残存的溶媒，磷酸盐缓冲液的温度为40-60℃。

方法三：将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂按比例溶于有机溶剂，于室温搅拌下滴入水溶液，使形成稳定的O/W型乳剂，减压蒸去有机溶剂，滴加缓冲液，旋转帮助器壁上的凝胶脱落，然后在减压下继续蒸发，制得水性混悬液，即可。

方法四：将磷脂类物质、附加剂加少量水相溶解，再由胆固醇、多烯紫杉醇熔融后与之混合，然后滴入65℃左右的水相溶液中保温制得。

方法五：可用冷冻干燥法制备，即将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂按比例溶于有机溶剂中，通氮气除去溶剂，然后悬浮在磷酸盐缓冲液中超声处理，真空冷冻干燥，最后加入介质重新水化即得。

方法六：可用硫酸铵梯度法制备，即将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂按比例混和，用有机溶剂溶解，过滤除去不溶物，减压蒸发过滤溶液，制备磷脂膜后，加入一定量硫酸铵溶液水化，即可制得。

方法七：可用超声分散法制备，将磷脂类物质、附加剂和多烯紫杉醇一起溶解于有机溶剂中，混和均匀后旋转蒸发，待有机溶剂蒸发完毕，将剩下的溶液再经超声波处理，分离即可制得。

方法八：可用多相制备法制备，将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂共溶于有机溶剂中，将该溶液恒温搅拌下滴加到磷酸盐缓冲液，再继续搅拌一定时间，加缓冲液至全量，高压乳匀机乳化即得。在搅拌时可以加入高效分散剂聚乙烯吡咯烷酮。

上述制备方法中所述的有机溶剂选自乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、异丙醇、氯仿及其混合物。

为延长多烯紫杉醇脂质体的存放时间，便于运输，可将本发明的多烯紫杉醇脂质体通过喷雾干燥或冷冻干燥工艺制成固体成品；为防止干燥工艺中脂质体的聚集需加入支架剂，可以选择的支架剂为氨基酸、乳糖、甘露糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯胶、木糖醇、山梨醇、果糖及其混合物。

本发明的多烯紫杉醇脂质体提供了药物输送系统，能使得高浓度多烯紫杉醇以相对稳定的形式输注到靶部位，提供持续的治疗效果，实验证明该脂质体能改变多烯紫杉醇的药代动力学性质，以在更长时间内维持有效血药浓度。

本发明的多烯紫杉醇脂质体能够以注射或口服方式给药，其中注射方式可以为静脉输注、静脉滴注、皮下注射、肌肉注射、腹腔注射，优选静脉输注方式给予患者。

通过静脉输注方式给予本发明的多烯紫杉醇脂质体时，此过程能在少于3小时的时间内完成，优选在少于1小时内，以80-115mg/m²的剂量给药，不引起大的毒性反应；而且给药前不需通过类固醇、抗组胺药物或其他的治疗药物预先治疗，不仅方便了给药，也增加了病人的顺应性，降低了成本。

脂质体属于超微粒药物载体，具有淋巴系统定向性，属于靶向给药系统的一种新剂型。它具有类细胞结构，或是通过内吞作用进入溶酶体，然后被酶消化释放药物，或是通过细胞融合作用，即脂质膜材与细胞膜构成物相似而融合进入细胞内，继而被消化释放药物，使药物在靶区组织中维持较高浓度，并改变被包封药物的体内分布，使药物主要在肝、脾、肺和骨髓等组织器官中蓄积，从而提高药物的治疗指数、减小药物的给药剂量和降低药物的毒性；经脂质体携带后，可保护药物活性基团在内环境中不被降解，还可延长药物血中循环时间。

实验证明，将多烯紫杉醇包封在脂质体中增加了药物的水溶性，明显降低了药物的毒性及因吐温-80带来的过敏反应，且保持了与市售多烯紫杉醇注射液相同的抗肿瘤活性；药物因受到脂质体双层膜保护，在很大程度上提高了药物的稳定性；脂质体也增加了药物在体内的稳定性及靶向性。

鉴于以上原因，本发明用磷脂类物质、附加剂制成多烯紫杉醇脂质体及其固体制剂，增加了多烯紫杉醇的水溶性，使水不溶性紫杉醇易溶于生理盐水或5％葡萄糖注射液，不但便于临床用药，更重要的是避免了因使用吐温-80所引起的过敏反应，提高了机体耐受性；提高了多烯紫杉醇的稳定性，延长了产品的有效期，提高了药品的质量。

采用本发明方法所制备的多烯紫杉醇脂质体不含致敏性溶剂，能消除过敏反应；经激光粒度仪测定，其平均粒径在1000nm以下，包封率大于80％；且将脂质体冷冻干燥后的固体粉末，能保证制品储存过程中的稳定性；该制备工艺成熟，产品质量稳定，便于工业化生产。

有益效果：

该项发明增加了多烯紫杉醇的水溶性，阻止药物析出聚集，既能消除因吐温-80引起的过敏反应，减少多烯紫杉醇自身的毒性反应，又能提高多烯紫杉醇的生物利用度及其治疗指数。

且制备方法灵活多样，均采用常规的工艺设备，可工业化规模、高效率生产，产品质量保持稳定，可直接或二次加工制备注射或口服制剂。

具体实施方式

实施例1

取多烯紫杉醇30mg、卵磷脂200mg、胆固醇100mg、二棕榈酰磷脂酰乙醇胺20mg于50ml圆底烧瓶中，加入20ml氯仿溶解，旋转蒸发仪上减压蒸发除去有机溶剂，在瓶内壁上形成一层脂质薄膜，缓慢加入20mmol/L Hepes缓冲液，室温超声分散30min，制得小单室脂质体，其平均粒径为57nm，占80％，全部粒子均在100nm以下，粒径分布狭窄，表明脂质体大小较为均一；该脂质体可在室温下稳定数天并在-20℃下稳定至少3个月，贮存期间观察不到沉淀和多烯紫杉醇的降解。

实施例2

精密称取20mg多烯紫杉醇、20mg卵磷脂、200mg胆固醇，用10ml乙醚将之溶解(可适当加热)。然后将此溶液用注射器缓慢注入加热至50～60℃的磷酸盐缓冲液，用电子恒速搅拌器以600r/rain的转速搅拌至乙醚除尽为止，再用磷酸盐缓冲液稀释至100mL，即得多烯紫杉醇脂质体，置4℃冰箱中保存备用。

实施例3

取实施例2中的脂质体进行形态观察、粒径及其分布测定。

取脂质体适量，加入注射用水适量稀释，用1％的磷钨酸染色，透射电镜下观察粒子形态。

取脂质体悬液适量，加入适量水稀释，以Zetamaster光子相关光谱仪测定脂质体的粒径大小和分布以及Zeta电位。

电镜下观察多烯紫杉醇脂质体呈均匀规则的球形粒子，无聚集粘联。

实验测得的多烯紫杉醇脂质体粒径分布均匀，平均粒径为120nm，多分散指数为0.158，zeta电位为-26.4mv。

实施例4

取实施例2中的多烯紫杉醇脂质体进行包封率的测定。

包封率依据RP-HPLC方法测定，多烯紫杉醇脂质体溶液经透析法分离未包裹的多烯紫杉醇，用RP-HPI C测定游离多烯紫杉醇含量。色谱条件：乙腈-水(60∶40，v/v)为流动相，流速2.0ml/min，进样量15μl，229nm检测，按下列公式计算包封率。

包封率(％)＝(脂质体中多烯紫杉醇加入量-游离紫杉醇量)/多烯紫杉醇加入量

依次公式测得包封率为97.45％。

实施例5

按比例称取卵磷脂160mg、胆固醇40mg溶于氯仿与异丙醇(14∶1)30ml混合溶液中。再将10ml磷酸盐缓冲液PBS与有机相混合，水浴式超声处理(8min)，直至形成稳定的W/O型乳剂(水浴温度控制在20℃)，然后于旋转蒸发仪中减压蒸发除去有机溶剂，达到胶态后滴加1～2ml PBS，水化，继续短时减压蒸发，即得淡乳黄色脂质体混悬液。

实施例6

取多烯紫杉醇30mg、卵磷脂120mg、胆固醇30mg于梨形瓶中，用10ml乙醚溶解后，旋转蒸发，减压除去有机溶剂。真空干燥2-3天得恒重薄膜。加入20mmol/Ltris-HCl缓冲液(pH7.0，含0.15mol/L NaCl)，旋转摇动梨形瓶，得到脂质体悬液。用氮气冲洗后，封口室温下平衡1天，探针超声处理15min，然后在500kpa操作压力下通过微流态化器混合室，经60-80冲程的微流态化处理，使脂质体粒径减小，最后对5.4％葡萄糖溶液透析除盐，制得多烯紫杉醇脂质体悬液，再经冷冻干燥制得冻干品。平均粒径136±31nm，全部粒子均在300nm以下。

实施例7

取实施例6中的冻干品适量，密封，于冰箱4℃放置180天，于0、1、2、3、6月重新对粒径、包封率、渗漏率、含量等指标进行测定，评价多烯紫杉醇脂质体冻干品的稳定性。结果见表1。

表1

批号	测定项目	0个月	1个月	2个月	3个月	6个月
							041101	外观色泽有关物质(％)平均粒径(nm)多分散指数包封率渗漏率含量(％)	符合规定1.11136±310.08996.565.199.81	符合规定1.2132±400.10496.345.0199.89	符合规定1.25141±430.10396.113.8999.45	符合规定1.47143±410.09196.063.4599.54	符合规定2.31150±510.10795.672.7899.24
041102	外观色泽有关物质(％)平均粒径(nm)多分散指数包封率渗漏率含量(％)	符合规定1.14132±230.07297.66.8100.02	符合规定1.22134±390.10197.416.4599.85	符合规定1.28136±320.08897.144.65100.19	符合规定1.52141±380.08797.064.0199.89	符合规定2.41147±540.11495.893.0499.78
							041103	外观色泽有关物质(％)平均粒径(nm)多分散指数包封率渗漏率含量(％)	符合规定1.12140±320.06997.666.299.74	符合规定1.2136±420.197.246.04100.05	符合规定1.26145±330.07397.045.0999.65	符合规定1.5148±420.0996.884.55100.11	符合规定2.21155±580.11296.613.56100.01

表1说明，多烯紫杉醇脂质体冻干品在冰箱4℃放置6个月，其粒径、包封率、含量等质量指标基本不变，表明多烯紫杉醇脂质体冻干品稳定性好。

实施例8

对实施例6中的多烯紫杉醇脂质体进行药效学研究。

配制小鼠乳腺癌细胞EMT-6悬液，使每毫升悬液有5×10⁷个癌细胞。取BALB/C小鼠，每组6只，每鼠皮下接种0.2ml，接种肿瘤后24小时皮下或腹腔给予多烯紫杉醇脂质体，每天一次，连续5天。阴性对照组给予等体积的灭菌生理盐水，各组动物于接种肿瘤后第12天活杀，取肿瘤称重后计算多烯紫杉醇脂质体对肿瘤的抑制率，抑制率％＝[(对照组平均瘤重-治疗组平均瘤重)/对照组平均瘤重]×100％。

皮下给药和腹腔给药多烯紫杉醇脂质体、多烯紫杉醇注射剂对小鼠乳腺癌EMT-6的作用见表2。相同给药方式相同剂量的多烯紫杉醇脂质体与多烯紫杉醇注射液比较有更明显的抑瘤作用，表明多烯紫杉醇脂质体具有更好的抗肿瘤效果。

表2

制剂	剂量(mg/kg)		肿瘤重量(g)		抑制率(％)		P
									sc	ip	sc	ip	sc	ip	sc	ip
	生理盐水多烯紫杉醇注射液多烯紫杉酵脂质体	-202010	-101510	1.30±0.410.61±0.200.40±0.150.51±0.19	1.56±0.510.89±0.230.72±0.250.75±0.21	-53.169.260.7	-42.953.851.9	-＜0.01＜0.01＜0.01									-＜0.05＜0.05＜0.05

实施例9

取实施例6中的多烯紫杉醇脂质体进行刺激性或溶血性实验。

家兔股四头肌注射多烯紫杉醇脂质体、多烯紫杉醇注射液，放血处死后，观察注射部位肌肉组织变化情况。配制2％的兔红细胞悬液，加入供试品，观察其对红细胞的影响。

结果表明，多烯紫杉醇脂质体的家兔肌肉刺激性反应在2级以下。多烯紫杉醇脂质体在观察时间内无溶血凝聚现象，说明多烯紫杉醇脂质体适宜静脉、皮下注射给药。

实施例10

取多烯紫杉醇30mg溶于10ml甲醇，卵磷脂120mg、去氧胆酸钠40mg溶于10ml乙醇，混合溶液在旋转蒸发器内40℃减压除去溶媒，形成薄膜。然后加入20mmol/LTris-HCl缓冲液(pH7.5，含0.15mol/L NaCl)，超声处理30min，制得多烯紫杉醇脂质体悬液。加入8％乳糖作支架剂，经冷冻干燥得多烯紫杉醇脂质体的冻干制剂。

多烯紫杉醇脂质体的冻干制剂临用前只需充分水化短时振荡，就能重新形成脂质体，无变色及沉淀。

实施例11

取实施例10中的多烯紫杉醇脂质体冻干制剂溶于蒸馏水中，制成1mg/ml的溶液，在4℃，25℃和36℃放置四周，于8，12，16，20，24和28天超速离心收集沉淀，用HPLC法测定多烯紫杉醇含量，结果见表3。

表3

多烯紫杉醇终浓度：	0天	8天	12天	16天	20天	24天	28天
								4℃25℃35℃	111	0.990.970.97	0.990.950.9	0.980.90.8	0.980.850.78	0.970.80.7	0.950.710.56

结果表明，多烯紫杉醇脂质体在4℃放置一个月，基本无渗漏；在室温条件下存放两周基本无渗漏；在35℃放置8天，浓度仅下降3％左右，放置12天，浓度变化10％，在环境温度不高于35℃的情况下，该脂质体能保持8天以上的稳定性，表明多烯紫杉醇脂质体稳定性好。

实施例12

使用实施例10中所述的制剂评价多烯紫杉醇脂质体的抑瘤效果。

给药溶液的配制

将多烯紫杉醇脂质体冻干份溶于生理盐水中，使其终浓度为8mg/ml；泰索帝浓缩注射液用生理盐水稀释，使多烯紫杉醇浓度为8mg/ml；空白脂质体冻于粉溶于生理盐水，浓度为26mg/m1；生理盐水。

抑瘤实验

Lewis肺癌接种于40只BDF₁小鼠，接种后第1，3，5，7日间隔腹腔注射4次上述溶液，第12天解剖。抑瘤作用实验结果见表4。

表4

制剂	剂量(mg/kg)	动物数开始/结束	平均体重(g)	平均瘤重(g)	肿瘤抑制率
						多烯紫杉醇注射液多烯紫杉醇脂质体空白脂质体生理盐水	66对照对照	14/1414/1414/1414/14	18.0/24.518.0/24.718.0/26.518.0/16.2	0.52±0.110.18±0.121.75±0.152.80±0.10	8194390

体内抑瘤结果表明：多烯紫杉醇脂质体比多烯紫杉醇注射液相比，具有更高的抑瘤活性。

实施例13

利用实施例10中所述的制剂评价多烯紫杉醇脂质体的毒性试验。

取体重18～22g性别一致的昆明小鼠60只，随机分成6组，每组10只，一次静脉注射多烯紫杉醇脂质体，组间剂量按等比级数排列，比值1∶0.8观察并记录给药10d内各组动物的反应和死亡率，用简化机率单位法计算LD，其95％的可信限为：

多烯紫杉醇浓缩注射液(泰索帝)LD50＝105mg±31mg/kg，

紫杉醇脂质体冻干粉LD50＝218mg±30mg/kg。

LD50的实验结果表明，多烯紫杉醇脂质体与泰索帝注射液相比，毒性明显降低。

实施例14

多烯紫杉醇隐形脂质体A的制备

将PEG-DSPE50mg、氢化大豆磷脂200mg、胆固醇100mg、a-生育酚20mg和多烯紫杉醇20mg溶于30ml氯仿，置梨形瓶内，在氮气流下旋转蒸发，减压除去溶媒。真空于燥2～3d，得恒重薄膜。加0.02mol·L Tris-HCl缓冲液(pH7.0，含0.15mol/LNaCl)，旋转摇动梨形瓶，得到脂质体悬液。用氮气冲洗后，封口室温下平衡1d，探针超声处理15min，然后在500kPa操作压力下通过微流态化器混合室，经60～80冲程的微流态化处理，使脂质体粒径逐渐减小。最后对5.4％葡萄糖溶液透析除盐，得紫杉醇隐形脂质体。再经冷冻干燥制成冻干制剂。

实施例15

多烯紫杉醇免疫脂质体B的制备

1.多烯紫杉醇脂质体的制备

将100mg卵磷脂、100mg胆固醇、20mg双棕榈酰磷脂酰乙醇胺-珀酰亚胺4(对马来酰亚胺苯基)丁酸酯(DPPE-MPB)、40mg多烯紫杉醇混合溶于盛有40ml氯仿的圆底烧瓶中，旋转蒸发器上40℃缓慢蒸干，于圆底烧瓶中缓慢加入20mmol/L Hepes缓冲液，超声分散法室温超声30min，制成小单层脂质体

2.抗体的修饰

参考Duncan等方法，将人大肠癌单抗ND21与偶联剂琥珀酰亚胺S-乙酰硫代乙酸酯(SATA)以1∶14比例(摩尔比)室温下反应2h。产物去乙酰化，得到活化的抗体Ab-A TA。

3.免疫脂质体的制备

A b-A TA(2mg/ml)与载药脂质体(6Cμmol/ml)在pH6.5条件下室温反应8h，产物经SephadexG200层析分离，去除未反应的游离单抗，即得免疫脂质体B。

实施例16

多烯紫杉醇磁性脂质体C的制备

将卵磷脂100mg、胆固醇100mg、双鲸蜡磷脂酸20mg、n-生育酚20mg和多烯紫杉醇20mg溶于20ml乙醚中，减压蒸发除去有机溶剂至瓶内壁上形成一层脂质薄膜，加入含0.5％超细磁粉的缓冲液，在水溶型超声仪上超声至混合物形成单相体系，再减压蒸发至凝胶形成，继续减压蒸发至形成水性悬浊液，充氮气，冰浴超声一定时间即得磁性脂质体，加入8％的乳糖作支架剂，经冷冻干燥法制备得到磁性脂质体冻干品。

Claims (18)

1.一种下述配方组成成分(以重量份计)的多烯紫杉醇脂质体，

多烯紫杉醇    0.5-10份

磷脂类物质    5-100份

附加剂        5-100份，

经隐形材料修饰制成隐形多烯紫杉醇脂质体A，经同单克隆抗体偶联制成免疫多烯紫杉醇脂质体B，经磁性材料修饰制得磁性多烯紫杉醇脂质体C。

2.根据权利要求1所述的多烯紫杉醇脂质体，其特征在于磷脂类物质可以选自磷脂酰胆碱、磷脂酰肌醇、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、二月桂酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰甘油、二棕榈酰磷脂酰、二棕榈酰磷脂酸、二油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、卵磷脂、大豆磷脂、天然或合成的脑磷脂、心磷脂及其混合物。

3.根据权利要求1所述的多烯紫杉醇脂质体，其特征在于所述的磷脂类物质优选卵磷脂、大豆磷脂、脑磷脂或心磷脂。

4.根据权利要求1所述的多烯紫杉醇脂质体，其特征在于所述的附加剂为胆固醇、维生素E、十八胺、磷酸二鲸蜡酯、表面活性剂。

5.根据权利要求4所述的多烯紫杉醇脂质体，其特征在于所述的表面活性剂选自脱氧胆酸盐、胆酸盐、脱氧胆酸、胆酸、吐温-80、牛磺胆酸盐。

6.根据权利要求1所述的多烯紫杉醇脂质体，其特征在于该脂质体粒径小于1000nm。

7.如权利要求1所述的多烯紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于可以采用下述不同方法制备：

1)薄膜超声法制备，将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂按比例溶于有机溶剂，混合溶液在旋转蒸发器上减压或通氮气除去溶媒，形成薄膜，加入洗膜介质洗膜超声处理后即得；

2)注入法制备，将磷脂类物质、胆固醇溶于适量有机溶剂中制成脂质溶液，吸取该溶液缓缓注入加热的磷酸盐缓冲溶液中，通过通氮气的方法或减压蒸发去除残留的溶媒即得；

3)逆向蒸发法制备，即将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂按比例溶于有机溶剂，于室温搅拌下滴入水溶液，使形成稳定的O/W型乳剂，减压蒸去有机溶剂，滴加磷酸盐缓冲液，旋转帮助器壁上的凝胶脱落，然后在减压下继续蒸发，制得水性混悬液，即得；

4)熔融法制备，即将磷脂类物质、附加剂加少量水相溶解，胆固醇、多烯紫杉醇熔融后与之混合，然后滴入65℃左右的水相溶液中保温制得；

5)冷冻干燥法制备，即将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂按比例溶于有机溶剂中，通氮气除去溶剂，然后悬浮在磷酸盐缓冲液中超声处理，真空冷冻干燥，最后加入介质重新水化即得；

6)硫酸铵梯度法制备，即将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂按比例混和，用适量乙醇溶解，过滤除去不溶物，减压蒸发过滤溶液，制备磷脂膜后，加入一定量硫酸铵溶液水化，即可制得；

7)超声分散法制备，将磷脂类物质、附加剂和多烯紫杉醇一起溶解于有机溶媒中，混和均匀后旋转蒸发，至有机溶媒蒸发完毕，将剩下的溶液再经超声波处理，分离即得；

8)多相制备法制备，将多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂共溶于有机溶媒中，将该溶液恒温搅拌下滴加到磷酸盐缓冲液，再继续搅拌一定时间，加缓冲液至全量，高压乳匀机乳化即得。

8.根据权利要求7所述的多烯紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于方法1)中洗膜介质可以为Hepes缓冲液(20Mm)、磷酸盐缓冲液、Tris-Hcl缓冲液(PH7.5，含0.15M NaCl)、含甘露醇的水溶液。

9.根据权利要求7所述的多烯紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于有机溶剂可以是乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、异丙醇、氯仿、二氯甲烷及其混合物。

10.根据权利要求7所述的多烯紫杉醇脂质体A的制备方法，其特征在于方法2)中磷酸盐缓冲液的温度需加热至40-60℃。

11.根据权利要求7所述的多烯紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于方法8)中搅拌时可以加入高效分散剂聚乙烯吡咯烷酮。

12.根据权利要求1所述的多烯紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于脂质体A的制备为多烯紫杉醇、磷脂类物质、附加剂与隐形修饰材料溶于有机溶剂中，去除溶媒，形成脂质薄膜，加入洗膜介质，超声或乳匀分散制得，其中隐形修饰材料的用量为多烯紫杉醇的0.1-100倍。

13.根据权利要求12所述的多烯紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于脂质体A的隐形修饰材料包括聚乙二醇、甲基聚唑啉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇一磷脂衍生物或它们的混合物。

14.根据权利要求1所述的多烯紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于脂质体B用多烯紫杉醇脂质体A与活化的单克隆抗体室温反应6-10小时偶联制成，其中单克隆抗体为抗人体大肠癌细胞表面抗原LEA的单克隆抗体ND-1。

15.根据权利要求1所述的多烯紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于脂质体C用薄膜—分散法制备，即将多烯紫杉醇脂质体加入含有磁性材料的洗膜介质进行超声或乳匀即得，其中磁性材料为超细磁粉。

16.根据权利要求7或12或14或15所述的多烯紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于可加入支架剂采用冷冻干燥及喷雾干燥工艺制成固体制剂。

17.根据权利要求16所述的多烯紫杉醇脂质体的制备方法，其特征在于支架剂选自氨基酸、乳糖、甘露糖、葡萄糖、海藻糖、阿拉伯胶、木糖醇、山梨醇、果糖及其混合物。

18.根据权利要求1所述的多烯紫杉醇脂质体，其特征在于可进一步制备成医用注射剂和口服制剂。