CN101851584B - 一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法 - Google Patents
一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101851584B CN101851584B CN2010101934725A CN201010193472A CN101851584B CN 101851584 B CN101851584 B CN 101851584B CN 2010101934725 A CN2010101934725 A CN 2010101934725A CN 201010193472 A CN201010193472 A CN 201010193472A CN 101851584 B CN101851584 B CN 101851584B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- substratum
- activatory
- apple residue
- yeast
- genus bacillus
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Fodder In General (AREA)
Abstract
本发明公开了一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水＝1∶8～12的比例混合后，再加入鲜苹果渣质量1.0％～5.0％的尿素和1.5％～3.5％的乳清粉，混匀，110℃～121℃灭菌30min，得到苹果渣培养基；结合“母子同体”法培养，即益生菌的活化所用的培养基与益生菌制剂所用的培养基一致。制成的益生菌制剂随着时间的延长，总的活菌数会逐渐减少，但在常温保存一年后，总益生菌制剂的活菌数仍不低于108cfu/ml。本发明采用的方法无需离心、冻干或其它干燥过程，工艺及设备简便，成本低，易规模化推广应用，适宜于农业/畜业生产使用。
Description
技术领域
本发明属于微生物应用技术领域，涉及益生菌的制备，特别涉及一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法。
背景技术
目前农用益生菌制剂大多作为饲料、饲料添加剂、饲料发酵剂、农业用发酵剂或粪便无害化处理剂等多用途使用，在改善动物体内微生态环境、增强免疫力、预防疾病、促进生长以及改善养殖环境等方面产生了巨大的经济效应和社会效应。世界多国都有不同类型的益生菌制剂的产品问世，日本在研制开发和利用益生菌制剂方面处于领先，已经研制和投产的产品主要有：EM-1号、EM糠和由EM-1号原菌进一步研发的营养搭档伴侣、曙光一号活菌制剂等。其产品制备过程中菌群培养所用的培养基均采用成分复杂、价格昂贵的专用培养基；制备工艺均采用专用培养基培养后，通过高速离心，收集菌体细胞，再通过冻干或喷雾干燥制得原菌粉(剂)。该法操作过程复杂，设备要求高，成本昂贵，规模化应用受限。
我国在此方面的研究起步较晚，90年代后期才逐渐进入产业化研制阶段，但关键技术，比如菌种、培养基和制备工艺等均被国外所垄断。目前国内使用的一些产品都非原菌粉(剂)，而是直接引进国外产品或技术或合资将原菌剂活化、复壮、扩培后加工而成，例如：畜禽益生菌(光合菌，乳酸菌、酵母菌、革兰氏阳性放线菌)、乳康生(腊样芽孢杆菌、干酪乳杆菌)，生物益生菌补充饲料(植物乳杆菌、酵母菌、乳酸菌)等。从而导致产品依赖性强，无竞争性。
发明内容
本发明解决的技术问题在于提供一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，以鲜苹果渣为原料，通过益生菌菌群比例、培养条件、培养方式的综合控制，生产复合益生菌制剂制。
本发明是通过以下技术方案来实现：
一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，包括以下步骤：
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水＝1∶8～12的比例混合后，再加入鲜苹果渣质量1.0％～5.0％的尿素和1.5％～3.5％的乳清粉，混匀，110～121℃灭菌30min，得到苹果渣培养基；
2)益生菌菌种的活化
将乳酸菌以1～4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，35℃～45℃培养2～3天后，得到乳酸菌活化的培养基；
将酵母菌以1～8×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，28℃～33℃培养2～3天，得到酵母菌活化的培养基；
将芽孢杆菌以1～4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，30℃～37℃培养2～3天，得到芽孢杆菌活化的培养基；
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量6～10％的益生菌活化的培养基，其中，乳酸菌活化的培养基为2.0～4.5％、酵母菌活化的培养基为3.0～5.5％、芽孢杆菌活化的培养基为1.0～2.5％；35～39℃下无菌静置培养3～4天后，加入乳酸链球菌素和纳他霉素，使乳酸链球菌素的浓度为1～2.5mg/L，纳他霉素的浓度为3～6mg/L，得到益生菌制剂。
与现有技术相比，本发明具有以下有益的技术效果：
本发明打破了传统益生菌制剂中菌群的培养必须用专用培养基培养的模式，而是采用农产品加工废弃物苹果渣为培养基，结合“母子同体”法培养，即益生菌的活化所用的培养基与益生菌制剂所用的培养基一致。这样一方面可最大限度缩短菌体对环境适应和发酵垫料启动的时间；另一方面可变废为宝，降低生产成本。
本发明采用包括乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌的混合菌群共培养，并通过益生菌菌群比例、培养条件和培养方式(35～39℃，无菌静置培养)、的综合控制，使混合菌群中的不同菌种均可达到最佳的生长状态(共生长、活力强)和最大的活菌数；培养结束后经调配(加入乳酸链球菌素和纳他霉素作为防腐剂)，即可制得该益生菌制剂。制成的益生菌制剂随着时间的延长，总的活菌数会逐渐减少，但在常温保存一年后，益生菌制剂的总活菌数仍不低于108cfu/ml。
本发明采用的方法无需离心、冻干或其它干燥过程，工艺及设备简便，成本低，易规模化推广应用，适宜于农业/畜业生产使用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步详细描述，所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，包括以下步骤：
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水＝1∶8的比例混合后，再加入鲜苹果渣质量1.0％的尿素和1.5％的乳清粉，混匀，110℃灭菌30min；得到苹果渣培养基；
2)益生菌菌种的活化
2.1)一级种子培养：选取国家农业部规定的饲料级益生菌菌种品种目录中的乳酸细菌、酵母菌和芽孢杆菌等作为菌种分别活化。
乳酸菌的活化：将乳酸菌以1ml/100ml的接种量接入MRS液体培养基中，35℃培养24小时后，即得活化的一级乳酸细菌菌种；
酵母菌的活化：将酵母菌以1ml/100ml的接种量接入YPD液体培养基中，28℃培养48小时后，即得活化的一级酵母菌菌种；
芽孢杆菌的活化：将芽孢杆菌以1ml/100ml的接种量接入液体完全培养基(CM)的试管中，30℃培养24小时，即得活化的一级芽孢杆菌菌种。
2.2)二级种子培养：
将乳酸菌以1×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，35℃培养3天后，培养基中的乳酸菌得到扩增，得到乳酸菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的乳酸菌菌种来源；
将酵母菌以1×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，28℃培养3天，培养基中的酵母菌得到扩增，得到酵母菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的酵母菌菌种来源；
将芽孢杆菌以1×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，30℃培养3天，培养基中的芽孢杆菌得到扩增，得到芽孢杆菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的芽孢杆菌菌种来源；
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量6％的益生菌活化的培养基，其中，乳酸菌活化的培养基为2.0％、酵母菌活化的培养基为3.0％、芽孢杆菌活化的培养基为1.0％；35℃下无菌静置培养4天后，加入乳酸链球菌素和纳他霉素，使乳酸链球菌素的浓度为1mg/L、纳他霉素的浓度为3mg/L，得到益生菌制剂。
实施例2
利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，包括以下步骤：
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水＝1∶12的比例混合后，再加入鲜苹果渣质量5.0％的尿素和3.5％的乳清粉，混匀，121℃灭菌30min，得到苹果渣培养基；
2)益生菌菌种的活化
2.1)一级种子培养：选取国家农业部规定的饲料级益生菌菌种品种目录中的乳酸细菌、酵母菌和芽孢杆菌等作为菌种分别活化。
乳酸菌的活化：将乳酸菌以1ml/100ml的接种量接入MRS液体培养基中，45℃培养12小时后，即得活化的一级乳酸细菌菌种；
酵母菌的活化：将酵母菌以1ml/100ml的接种量接入YPD液体培养基中，33℃培养24小时后，即得活化的一级酵母菌菌种；
芽孢杆菌的活化：将芽孢杆菌以1ml/100ml的接种量接入液体完全培养基(CM)的试管中，37℃培养18小时，即得活化的一级芽孢杆菌菌种。
2.2)二级种子培养：
将乳酸菌以4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，45℃培养2天后，培养基中的乳酸菌得到扩增，得到乳酸菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的乳酸菌菌种来源；
将酵母菌以8×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，33℃培养2天，培养基中的酵母菌得到扩增，得到酵母菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的酵母菌菌种来源；
将芽孢杆菌以4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，37℃培养2天，培养基中的芽孢杆菌得到扩增，得到芽孢杆菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的芽孢杆菌菌种来源；
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量10％的益生菌活化的培养基，其中，乳酸菌活化的培养基为2.5％、酵母菌活化的培养基为5.0％、芽孢杆菌活化的培养基为2.5％；35℃下无菌静置培养4天后，加入乳酸链球菌素和纳他霉素，使乳酸链球菌素的浓度为2.5mg/L，纳他霉素的浓度为6mg/L，得到益生菌制剂。
实施例3
利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，包括以下步骤：
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水＝1∶10的比例混合后，再加入鲜苹果渣质量2.5％的尿素和2.0％的乳清粉，混匀，120℃灭菌30min，得到苹果渣培养基；
2)益生菌菌种的活化
2.1)一级种子培养：选取国家农业部规定的饲料级益生菌菌种品种目录中的乳酸细菌、酵母菌和芽孢杆菌等作为菌种分别活化。
乳酸菌的活化：将乳酸菌以1ml/100ml的接种量接入MRS液体培养基中，40℃培养15小时后，即得活化的一级乳酸细菌菌种；
酵母菌的活化：将酵母菌以1ml/100ml的接种量接入YPD液体培养基中，30℃培养30小时后，即得活化的一级酵母菌菌种；
芽孢杆菌的活化：将芽孢杆菌以1ml/100ml的接种量接入液体完全培养基(CM)的试管中，35℃培养20小时，即得活化的一级芽孢杆菌菌种。
2.2)二级种子培养：
将乳酸菌以2×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，40℃培养2.5天后，培养基中的乳酸菌得到扩增，得到乳酸菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的乳酸菌菌种来源；
将酵母菌以4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，30℃培养2.5天，培养基中的酵母菌得到扩增，得到酵母菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的酵母菌菌种来源；
将芽孢杆菌以2×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，35℃培养2.5天，培养基中的芽孢杆菌得到扩增，得到芽孢杆菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的芽孢杆菌菌种来源；
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量8％的益生菌活化的培养基，其中，乳酸菌活化的培养基为2.5％、酵母菌活化的培养基为4.0％、芽孢杆菌活化的培养基为1.5％；36℃下无菌静置培养3.5天后，加入乳酸链球菌素和纳他霉素，使乳酸链球菌素的浓度为1.5mg/L，纳他霉素的浓度为4mg/L，得到益生菌制剂。
实施例4
利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，包括以下步骤：
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水＝1∶9的比例混合后，再加入鲜苹果渣质量3.0％的尿素和2.5％的乳清粉，混匀，115℃灭菌30min，得到苹果渣培养基；
2)益生菌菌种的活化
2.1)一级种子培养：选取国家农业部规定的饲料级益生菌菌种品种目录中的乳酸细菌、酵母菌和芽孢杆菌等作为菌种分别活化。
乳酸菌的活化：将乳酸菌以1ml/100ml的接种量接入MRS液体培养基中，38℃培养15小时后，即得活化的一级乳酸细菌菌种；
酵母菌的活化：将酵母菌以1ml/100ml的接种量接入YPD液体培养基中，32℃培养30小时后，即得活化的一级酵母菌菌种；
芽孢杆菌的活化：将芽孢杆菌以1ml/100ml的接种量接入液体完全培养基(CM)的试管中，36℃培养20小时，即得活化的一级芽孢杆菌菌种。
2.2)二级种子培养：
将乳酸菌以3×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，38℃培养2.5天后，培养基中的乳酸菌得到扩增，得到乳酸菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的乳酸菌菌种来源；
将酵母菌以6×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，32℃培养2.5天，培养基中的酵母菌得到扩增，得到酵母菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的酵母菌菌种来源；
将芽孢杆菌以3×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，36℃培养2.5天，培养基中的芽孢杆菌得到扩增，得到芽孢杆菌活化的培养基，以此作为益生菌制剂培养的芽孢杆菌菌种来源；
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量9.6％的益生菌活化的培养基，其中，乳酸菌活化的培养基为2.5％、酵母菌活化的培养基为5.5％、芽孢杆菌活化的培养基为1.6％；36℃下无菌静置培养3.5天后，加入乳酸链球菌素和纳他霉素，使乳酸链球菌素的浓度为1.5mg/L，纳他霉素的浓度为4mg/L，得到益生菌制剂。
Claims (1)
1.一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法，其特征在于，包括以下步骤：
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水＝1∶8～12的比例混合后，再加入鲜苹果渣质量1.0％～5.0％的尿素和1.5％～3.5％的乳清粉，混匀，110～121℃灭菌30min，得到苹果渣培养基；
2)益生菌菌种的活化
选取国家农业部规定的饲料级益生菌菌种品种目录中的乳酸细菌、酵母菌和芽孢杆菌作为菌种进行活化：
将乳酸菌以1～4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，35℃～45℃培养2～3天后，得到乳酸菌活化的培养基；
将酵母菌以1～8×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，28℃～33℃培养2～3天，得到酵母菌活化的培养基；
将芽孢杆菌以1～4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中，30℃～37℃培养2～3天，得到芽孢杆菌活化的培养基；
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量6～10％的益生菌活化的培养基，其中，乳酸菌活化的培养基为2.0～4.5％、酵母菌活化的培养基为3.0～5.5％、芽孢杆菌活化的培养基为1.0～2.5％；35～39℃下无菌静置培养3～4天后，加入乳酸链球菌素和纳他霉素，使乳酸链球菌素的浓度为1～2.5mg/L，纳他霉素的浓度为3～6mg/L，得到益生菌制剂。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101934725A CN101851584B (zh) | 2010-06-07 | 2010-06-07 | 一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101934725A CN101851584B (zh) | 2010-06-07 | 2010-06-07 | 一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101851584A CN101851584A (zh) | 2010-10-06 |
| CN101851584B true CN101851584B (zh) | 2012-02-15 |
Family
ID=42803265
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101934725A Expired - Fee Related CN101851584B (zh) | 2010-06-07 | 2010-06-07 | 一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101851584B (zh) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102523914A (zh) * | 2010-11-30 | 2012-07-04 | 国立大学法人信州大学 | 能够再利用于家畜饲料的蘑菇培养基及其制造方法 |
| CN110839540A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-02-28 | 广西壮族自治区畜禽品种改良站 | 一种益生菌垫料及其在奶水牛生态养殖的应用 |
-
2010
- 2010-06-07 CN CN2010101934725A patent/CN101851584B/zh not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101851584A (zh) | 2010-10-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN102093967B (zh) | 一株水貂源屎肠球菌及其应用 | |
| CN103988977B (zh) | 饲用微生态制剂及其制备方法 | |
| CN102199590B (zh) | 一种微胶囊化增殖培养制备酪酸菌菌粉的方法及其应用 | |
| CN102488084B (zh) | 好氧混合菌发酵秸秆饼粕制备蛋白饲料的方法 | |
| CN102660473B (zh) | 一种连续发酵法生产酪酸菌制剂的方法 | |
| CN102391962B (zh) | 一种屎肠球菌制剂及其生产工艺 | |
| AU2016297405B2 (en) | Bacillus pumilus strain and microbial ecological combined agent thereof for weaned piglet | |
| CN103865854A (zh) | 一种复合微生态制剂及其制备方法 | |
| CN102212493A (zh) | 一种鸡舍发酵床复合微生物菌剂及其制备方法 | |
| CN110257292A (zh) | 一种水产养殖用的微生物菌剂及其制备方法 | |
| CN103289935A (zh) | 一种复合菌株微生态制剂及其制备方法 | |
| CN108103128A (zh) | 一种用于治疗仔猪腹泻的乳酸菌素的制备方法 | |
| CN103283948A (zh) | 一种以两歧双歧杆菌为主的微生态制剂 | |
| CN109971682A (zh) | 一种用于水产养殖的em菌液及其制作方法和应用 | |
| CN103875922B (zh) | 一种复合益生菌微生态饲用添加剂及其制备方法 | |
| CN103074228B (zh) | 用于处理畜禽废物的复合发酵菌剂及其制备方法和应用 | |
| CN107022511A (zh) | 一种驴用促生长复合活菌制剂及其制备方法 | |
| CN104082528A (zh) | 一种饲料添加剂及其制备方法 | |
| CN102940145A (zh) | 一种发酵型水产保健饲料的制备方法 | |
| CN101851584B (zh) | 一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法 | |
| CN107259139A (zh) | 嗜酸乳杆菌固态发酵母猪配合饲料的制备方法及其应用 | |
| CN109652335A (zh) | 一种饲用固态乳酸菌高活性菌剂的制备方法 | |
| CN107699527A (zh) | 一种益生菌微生态制剂及其制备方法和应用 | |
| CN103289915A (zh) | 一种稳定安全的枯草芽孢杆菌制剂及其制备方法和用途 | |
| CN106666178A (zh) | 一种家禽饲料微生物添加剂及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| EE01 | Entry into force of recordation of patent licensing contract |
Application publication date: 20101006 Assignee: SHANXI LINUO SECCO VETERINARY DRUG CO., LTD. Assignor: Shaanxi University of Science and Technology Contract record no.: 2013610000027 Denomination of invention: Method for preparing probiotic preparation by using apple residue Granted publication date: 20120215 License type: Exclusive License Record date: 20130425 |
|
| LICC | Enforcement, change and cancellation of record of contracts on the licence for exploitation of a patent or utility model | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120215 Termination date: 20180607 |