发明内容
本发明解决的技术问题在于提供一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法,以鲜苹果渣为原料,通过益生菌菌群比例、培养条件、培养方式的综合控制,生产复合益生菌制剂制。
本发明是通过以下技术方案来实现:
一种利用苹果渣制备益生菌制剂的方法,包括以下步骤:
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水=1∶8~12的比例混合后,再加入鲜苹果渣质量1.0%~5.0%的尿素和1.5%~3.5%的乳清粉,混匀,110~121℃灭菌30min,得到苹果渣培养基;
2)益生菌菌种的活化
将乳酸菌以1~4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,35℃~45℃培养2~3天后,得到乳酸菌活化的培养基;
将酵母菌以1~8×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,28℃~33℃培养2~3天,得到酵母菌活化的培养基;
将芽孢杆菌以1~4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,30℃~37℃培养2~3天,得到芽孢杆菌活化的培养基;
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量6~10%的益生菌活化的培养基,其中,乳酸菌活化的培养基为2.0~4.5%、酵母菌活化的培养基为3.0~5.5%、芽孢杆菌活化的培养基为1.0~2.5%;35~39℃下无菌静置培养3~4天后,加入乳酸链球菌素和纳他霉素,使乳酸链球菌素的浓度为1~2.5mg/L,纳他霉素的浓度为3~6mg/L,得到益生菌制剂。
与现有技术相比,本发明具有以下有益的技术效果:
本发明打破了传统益生菌制剂中菌群的培养必须用专用培养基培养的模式,而是采用农产品加工废弃物苹果渣为培养基,结合“母子同体”法培养,即益生菌的活化所用的培养基与益生菌制剂所用的培养基一致。这样一方面可最大限度缩短菌体对环境适应和发酵垫料启动的时间;另一方面可变废为宝,降低生产成本。
本发明采用包括乳酸菌、酵母菌和芽孢杆菌的混合菌群共培养,并通过益生菌菌群比例、培养条件和培养方式(35~39℃,无菌静置培养)、的综合控制,使混合菌群中的不同菌种均可达到最佳的生长状态(共生长、活力强)和最大的活菌数;培养结束后经调配(加入乳酸链球菌素和纳他霉素作为防腐剂),即可制得该益生菌制剂。制成的益生菌制剂随着时间的延长,总的活菌数会逐渐减少,但在常温保存一年后,益生菌制剂的总活菌数仍不低于108cfu/ml。
本发明采用的方法无需离心、冻干或其它干燥过程,工艺及设备简便,成本低,易规模化推广应用,适宜于农业/畜业生产使用。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明做进一步详细描述,所述是对本发明的解释而不是限定。
实施例1
利用苹果渣制备益生菌制剂的方法,包括以下步骤:
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水=1∶8的比例混合后,再加入鲜苹果渣质量1.0%的尿素和1.5%的乳清粉,混匀,110℃灭菌30min;得到苹果渣培养基;
2)益生菌菌种的活化
2.1)一级种子培养:选取国家农业部规定的饲料级益生菌菌种品种目录中的乳酸细菌、酵母菌和芽孢杆菌等作为菌种分别活化。
乳酸菌的活化:将乳酸菌以1ml/100ml的接种量接入MRS液体培养基中,35℃培养24小时后,即得活化的一级乳酸细菌菌种;
酵母菌的活化:将酵母菌以1ml/100ml的接种量接入YPD液体培养基中,28℃培养48小时后,即得活化的一级酵母菌菌种;
芽孢杆菌的活化:将芽孢杆菌以1ml/100ml的接种量接入液体完全培养基(CM)的试管中,30℃培养24小时,即得活化的一级芽孢杆菌菌种。
2.2)二级种子培养:
将乳酸菌以1×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,35℃培养3天后,培养基中的乳酸菌得到扩增,得到乳酸菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的乳酸菌菌种来源;
将酵母菌以1×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,28℃培养3天,培养基中的酵母菌得到扩增,得到酵母菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的酵母菌菌种来源;
将芽孢杆菌以1×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,30℃培养3天,培养基中的芽孢杆菌得到扩增,得到芽孢杆菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的芽孢杆菌菌种来源;
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量6%的益生菌活化的培养基,其中,乳酸菌活化的培养基为2.0%、酵母菌活化的培养基为3.0%、芽孢杆菌活化的培养基为1.0%;35℃下无菌静置培养4天后,加入乳酸链球菌素和纳他霉素,使乳酸链球菌素的浓度为1mg/L、纳他霉素的浓度为3mg/L,得到益生菌制剂。
实施例2
利用苹果渣制备益生菌制剂的方法,包括以下步骤:
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水=1∶12的比例混合后,再加入鲜苹果渣质量5.0%的尿素和3.5%的乳清粉,混匀,121℃灭菌30min,得到苹果渣培养基;
2)益生菌菌种的活化
2.1)一级种子培养:选取国家农业部规定的饲料级益生菌菌种品种目录中的乳酸细菌、酵母菌和芽孢杆菌等作为菌种分别活化。
乳酸菌的活化:将乳酸菌以1ml/100ml的接种量接入MRS液体培养基中,45℃培养12小时后,即得活化的一级乳酸细菌菌种;
酵母菌的活化:将酵母菌以1ml/100ml的接种量接入YPD液体培养基中,33℃培养24小时后,即得活化的一级酵母菌菌种;
芽孢杆菌的活化:将芽孢杆菌以1ml/100ml的接种量接入液体完全培养基(CM)的试管中,37℃培养18小时,即得活化的一级芽孢杆菌菌种。
2.2)二级种子培养:
将乳酸菌以4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,45℃培养2天后,培养基中的乳酸菌得到扩增,得到乳酸菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的乳酸菌菌种来源;
将酵母菌以8×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,33℃培养2天,培养基中的酵母菌得到扩增,得到酵母菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的酵母菌菌种来源;
将芽孢杆菌以4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,37℃培养2天,培养基中的芽孢杆菌得到扩增,得到芽孢杆菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的芽孢杆菌菌种来源;
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量10%的益生菌活化的培养基,其中,乳酸菌活化的培养基为2.5%、酵母菌活化的培养基为5.0%、芽孢杆菌活化的培养基为2.5%;35℃下无菌静置培养4天后,加入乳酸链球菌素和纳他霉素,使乳酸链球菌素的浓度为2.5mg/L,纳他霉素的浓度为6mg/L,得到益生菌制剂。
实施例3
利用苹果渣制备益生菌制剂的方法,包括以下步骤:
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水=1∶10的比例混合后,再加入鲜苹果渣质量2.5%的尿素和2.0%的乳清粉,混匀,120℃灭菌30min,得到苹果渣培养基;
2)益生菌菌种的活化
2.1)一级种子培养:选取国家农业部规定的饲料级益生菌菌种品种目录中的乳酸细菌、酵母菌和芽孢杆菌等作为菌种分别活化。
乳酸菌的活化:将乳酸菌以1ml/100ml的接种量接入MRS液体培养基中,40℃培养15小时后,即得活化的一级乳酸细菌菌种;
酵母菌的活化:将酵母菌以1ml/100ml的接种量接入YPD液体培养基中,30℃培养30小时后,即得活化的一级酵母菌菌种;
芽孢杆菌的活化:将芽孢杆菌以1ml/100ml的接种量接入液体完全培养基(CM)的试管中,35℃培养20小时,即得活化的一级芽孢杆菌菌种。
2.2)二级种子培养:
将乳酸菌以2×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,40℃培养2.5天后,培养基中的乳酸菌得到扩增,得到乳酸菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的乳酸菌菌种来源;
将酵母菌以4×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,30℃培养2.5天,培养基中的酵母菌得到扩增,得到酵母菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的酵母菌菌种来源;
将芽孢杆菌以2×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,35℃培养2.5天,培养基中的芽孢杆菌得到扩增,得到芽孢杆菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的芽孢杆菌菌种来源;
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量8%的益生菌活化的培养基,其中,乳酸菌活化的培养基为2.5%、酵母菌活化的培养基为4.0%、芽孢杆菌活化的培养基为1.5%;36℃下无菌静置培养3.5天后,加入乳酸链球菌素和纳他霉素,使乳酸链球菌素的浓度为1.5mg/L,纳他霉素的浓度为4mg/L,得到益生菌制剂。
实施例4
利用苹果渣制备益生菌制剂的方法,包括以下步骤:
1)培养基的配置
将鲜苹果渣和水按质量比为鲜苹果渣∶水=1∶9的比例混合后,再加入鲜苹果渣质量3.0%的尿素和2.5%的乳清粉,混匀,115℃灭菌30min,得到苹果渣培养基;
2)益生菌菌种的活化
2.1)一级种子培养:选取国家农业部规定的饲料级益生菌菌种品种目录中的乳酸细菌、酵母菌和芽孢杆菌等作为菌种分别活化。
乳酸菌的活化:将乳酸菌以1ml/100ml的接种量接入MRS液体培养基中,38℃培养15小时后,即得活化的一级乳酸细菌菌种;
酵母菌的活化:将酵母菌以1ml/100ml的接种量接入YPD液体培养基中,32℃培养30小时后,即得活化的一级酵母菌菌种;
芽孢杆菌的活化:将芽孢杆菌以1ml/100ml的接种量接入液体完全培养基(CM)的试管中,36℃培养20小时,即得活化的一级芽孢杆菌菌种。
2.2)二级种子培养:
将乳酸菌以3×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,38℃培养2.5天后,培养基中的乳酸菌得到扩增,得到乳酸菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的乳酸菌菌种来源;
将酵母菌以6×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,32℃培养2.5天,培养基中的酵母菌得到扩增,得到酵母菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的酵母菌菌种来源;
将芽孢杆菌以3×106cfu/100ml的接种量接入苹果渣培养基中,36℃培养2.5天,培养基中的芽孢杆菌得到扩增,得到芽孢杆菌活化的培养基,以此作为益生菌制剂培养的芽孢杆菌菌种来源;
3)益生菌培养、制剂
在新鲜苹果渣培养基中投入其质量9.6%的益生菌活化的培养基,其中,乳酸菌活化的培养基为2.5%、酵母菌活化的培养基为5.5%、芽孢杆菌活化的培养基为1.6%;36℃下无菌静置培养3.5天后,加入乳酸链球菌素和纳他霉素,使乳酸链球菌素的浓度为1.5mg/L,纳他霉素的浓度为4mg/L,得到益生菌制剂。