发明内容
本发明的技术方案是提供了一种具有抗病毒作用的组合物,本发明还提供了该药物组合物的治疗方法和用途。
本发明提供了一种具有抗病毒作用的组合物,它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂:油患子10-30份、黄芩50-150份、木芙蓉叶5-15份、薄荷0.1-0.3份、莪术0.3-0.7份、柴胡0.5-0.7份。
进一步优选地,它是由下述重量配比的原料药制备而成的制剂:
油患子20份、黄芩100份、木芙蓉叶10份、薄荷0.2份、莪术0.5份、柴胡0.5份。
其中所述的油患子,又名:无患子Sapindus mulorossi Gaertn,为无患子科植物无患子的种子。
所述的木芙蓉叶为锦葵科植物木芙蓉Hibiscus mutabilis的叶片,夏、秋二季,剪下叶片,晒干。
本发明组合物是由油患子、黄芩、木芙蓉叶、柴胡的水或有机溶剂提取物为活性成分,加入莪术油、薄荷油,及药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成常用的制剂。
其中,所述的制剂是口服制剂、外用制剂。
其中,所述的制剂是口服液、喷雾剂或水剂。
本发明还提供了一种制备所述的组合物的方法,它包括如下步骤:
a、取重量配比的各原料:油患子10-30份、黄芩50-150份、木芙蓉叶5-15份、薄荷0.1-0.3份、莪术0.3-0.7份、柴胡0.5-0.7份;
b、取油患子,粉碎成粗颗粒,加水煎煮,滤过,滤液浓缩,离心,取上清液,上大孔吸附树脂柱,然后先用水洗至基本无色,再用30%-70%乙醇洗脱,洗至基本无色,收集乙醇洗脱液,回收乙醇,浓缩,离心,收集上清液即得油患子提取物;
c、取黄芩,粉碎成粗颗粒,加水煎煮,滤过,滤液浓缩,离心,取上清液,上大孔吸附树脂柱,然后先用水洗至基本无色,再用30%-70%乙醇洗脱,洗至基本无色,收集乙醇洗脱液,回收乙醇,浓缩,离心,收集上清液即得黄芩提取物;
d、取木芙蓉叶,粉碎成粗颗粒,加水煎煮,滤过,滤液浓缩,取上清液,上大孔吸附树脂柱,然后先用水洗至基本无色,再用30%-70%乙醇洗脱,洗至基本无色,收集乙醇洗脱液,回收乙醇,浓缩,离心,收集上清液即得木芙蓉叶提取物;
e、取柴胡,粉碎成粗颗粒,加水煎煮,滤过,滤液浓缩,离心,取上清液,浓缩至柴胡的质量体积,加入等体积的无水乙醇静止,过滤,滤液喷雾干燥得柴胡提取物;
f、取莪术,粉碎成粗颗粒,加水煎煮,用挥发油回收装置回收莪术油;
g、取薄荷,粉碎成粗颗粒,加水煎煮,用挥发油回收装置回收薄荷油;
e、将b至g步骤制备的油患子提取物、黄芩提取物、木芙蓉叶提取物、柴胡提取物、莪术油、薄荷油混合,加入药学上可接受的辅料或辅助性成分制备成常用的制剂。
本发明还提供了所述的组合物在制备具有抗病毒药物中的用途。所述的药物是抗流感病毒和副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒。进一步地,所述的抗流感病毒是抗甲型流感病毒、抗乙型流感病毒;所述的副流感病毒为副流感病毒I型、III型;所述的腺病毒为3、7型腺病毒。
本发明还提供了所述的组合物在制备洗水液、果蔬菜清洗剂、空气消毒剂剂、洗浴用品中的用途。
本发明组合物属于纯中药抗病毒制剂,人体使用安全,无腐蚀性、无毒性、对环境无污染;可用于制备抗病毒的洗水液、水果、蔬菜清洗剂、空气清洗剂、洗浴、洗发等各种表面抗病毒水剂。
显然,根据本发明的上述内容,按照本领域的普通技术知识和惯用手段,在不脱离本发明上述基本技术思想前提下,还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式,对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
实施例1本发明组合物水剂的制备
1、油患子提取液:油患子(500g),粉碎成粗颗粒,加8倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并滤液,浓缩至(1000g),离心(4000r/min),取上清液,上大孔吸附树脂柱(D101)(树脂1000g),上样速度为2BV/h,上完后静置1小时,然后先用水洗至基本无色,用水量为8000g左右,水洗速度为3-4BV/h,再用50%乙醇洗脱,洗至基本无色,用醇量为2000g左右,洗脱速度为2BV/h,收集乙醇洗脱液,回收乙醇,并浓缩至500g,离心,收集上清液即得。
2、黄芩提取液:黄芩(500g),粉碎成粗颗粒,加8倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并滤液,浓缩至(1000g),离心(4000r/min),取上清液,上大孔吸附树脂柱(D101)(树脂1000g),上样速度为2BV/h,上完后静置1小时,然后先用水洗至基本无色,用水量为8000g左右,水洗速度为3-4BV/h,再用50%乙醇洗脱,洗至基本无色,用醇量为2000g左右,洗脱速度为2BV/h,收集乙醇洗脱液,回收乙醇,并浓缩至500g,离心,收集上清液即得。
3、木芙蓉叶提取液:木芙蓉叶(500g)粉碎成粗颗粒,加8倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并滤液,浓缩至(1000g),离心(4000r/min),取上清液,上大孔吸附树脂柱(D101)(树脂1000g),上样速度为2BV/h,上完后静置1小时,然后先用水洗至基本无色,用水量为8000g左右,水洗速度为3-4BV/h,再用50%乙醇洗脱,洗至基本无色,用醇量为2000g左右,洗脱速度为2BV/h,收集乙醇洗脱液,回收乙醇,并浓缩至500g,离心,收集上清液即得。
4、柴胡浸膏粉 柴胡(500g)粉碎成粗颗粒,加8倍量水煎煮三次,每次1小时,滤过,合并滤液,浓缩至(800g),离心(4000r/min),取上清液,加入800ml的乙醇静止48h,过滤,喷雾干燥得固体。阴凉干燥处保存。
5、莪术油:莪术(500g)粉碎成粗颗粒,加入6倍水量煎煮,用挥发油回收装置回收莪术油。
6、薄荷油:薄荷(500g)粉碎成粗颗粒,加入6倍水量煎煮,用挥发油回收装置回收薄荷油。
7、抗病毒水剂的制备:油患子提取液20ml,黄芩100ml,木芙蓉叶10ml混合搅拌,再加入莪术油0.5ml,薄荷油0.2ml搅拌均匀,在加入柴胡浸膏粉0.5g,去离子水170ml搅拌2h后得。
实施例2 本发明洗手液的制备
配方:乙酰化羊毛酯0.6-1.8%
甘油1-4.8%
抗病毒水剂(实施例1制备)20-30%
十二烷基二甲基氧化胺(30%浓度)18-35%
脂肪醇聚氧乙烯醚2.5-4.8%
羟乙基纤维素0.5-1%
香精适量
纯水20-30%
实施例3 本发明果蔬清洗剂的制备
配方:抗病毒水剂(实施例1制备):15-30%
浓度为47%的烷基多苷:10-40%
浓度为100%的EDTA0.1-0.5%
氯化钠饱和溶液0.5-1%
实施例4 本发明空气消毒剂的制备
配方:抗病毒水剂(实施例1制备)60-70%
蒸馏水10-20%
香精5-10%
实施例5 本发明水剂的制备
取油患子100g、黄芩500g、木芙蓉叶50g、薄荷1g、莪术3g、柴胡3g,按实施例1的方法提取,制备成水剂。
实施例6 本发明水剂的制备
取油患子300g、黄芩1500g、木芙蓉叶150g、薄荷3份、莪术7g、柴胡7g,按实施例1的方法提取,制备成水剂。
以下通过药效学试验证明本发明的有益效果。
试验例1 试验例1本发明药物原料药配伍筛选试验:
各细胞分别于96孔细胞培养板中生长成单层,吸弃培养上清,用无血清DMEM液洗涤两次,加入10TCID50(10-1)的流感病毒液20ul/L,35℃,5%CO2:培养箱中吸附2h,吸弃病毒液,加入不同配比的抗病毒药液(内含2mg/L胰蛋白酶)100ul/孔培养,测定抗病毒药液的抗病毒的抑制率。用正交试验L1836来确定配方的抗流感病毒抑制率,各配方组均是在同等用量下进行:
A:油患子B:黄芩C:木芙蓉叶D:薄荷E:莪术F:柴胡
A1:10 A2:15 A3:20
B1:120 B2:100 B3:80
C1:12 C2:10 C3:8
D1:0.3 D2:0.2 D3:0.1
E1:0.2 E2:0.3 E3:0.5
F1:0.2 F2:0.3 F3:0.5
|
A |
B |
C |
D |
E |
F |
抑制率 |
实验1 |
10 |
120 |
12 |
0.3 |
0.5 |
0.2 |
70 |
实验2 |
10 |
100 |
10 |
0.2 |
0.3 |
0.3 |
83 |
实验3 |
10 |
80 |
8 |
0.1 |
0.2 |
0.5 |
68 |
实验4 |
15 |
120 |
12 |
0.3 |
0.3 |
0.5 |
74 |
实验5 |
15 |
100 |
10 |
0.1 |
0.2 |
0.2 |
85 |
实验6 |
15 |
80 |
8 |
0.2 |
0.5 |
0.3 |
71 |
实验7 |
20 |
120 |
10 |
0.3 |
0.5 |
0.3 |
73 |
实验8 |
20 |
100 |
8 |
0.2 |
0.2 |
0.5 |
87 |
实验9 |
20 |
80 |
12 |
0.1 |
0.3 |
0.2 |
73 |
实验10 |
10 |
120 |
8 |
0.1 |
0.3 |
0.3 |
76 |
实验11 |
10 |
100 |
12 |
0.3 |
0.2 |
0.5 |
81 |
实验12 |
10 |
80 |
10 |
0.2 |
0.5 |
0.2 |
83 |
实验13 |
15 |
120 |
10 |
0.1 |
0.5 |
0.5 |
82 |
实验14 |
15 |
100 |
8 |
0.3 |
0.3 |
0.2 |
79 |
实验15 |
15 |
80 |
12 |
0.2 |
0.2 |
0.3 |
88 |
实验16 |
20 |
120 |
8 |
0.2 |
0.2 |
0.2 |
81 |
实验17 |
20 |
100 |
12 |
0.1 |
0.5 |
0.3 |
93 |
实验18 |
20 |
80 |
10 |
0.3 |
0.3 |
0.5 |
86 |
首先,把每个因素1水平所有方案试验结果相加;把2水平方案试验结果相加;把3水平方案试验结果相加。这实际上是把每1个因素的试验结果分成了3组。所得的结果如下:
A因素的平均抑制率:a1=77 a2=80 a3=82
B因素的抑平均制率:b1=76 b2=85 b3=78
C因素的平均抑制率:c1=80 c2=82 c3=77
D因素的平均抑制率:d1=77 d2=82 d3=79.5
E因素的平均抑制率:e1=79 e2=80.5 e3=82
F因素的平均抑制率:f1=78.5 f2=80.5 f3=81
为了直观的表示,把A,B,C,D,E,F因素的平均值表示出来,如图1所示:从上图可明显看出,正交试验确定的最佳方案为:A3B2C2D2E3F3。即最佳配比为:油患子20份、黄芩100份、木芙蓉10份、薄荷0.2份、莪术0.5份、柴胡0.5份。通过实验验证,该最佳配比的抑制率为95%。
将上述最佳配比按实施例1的方法制备成水剂进行下述药效学试验。
试验例2莪术、柴胡、黄芩、木芙蓉叶、抗病毒水剂抗病毒比较试验:
1、体外试验:
1.1本发明抗病毒水剂对病毒增殖的影响:
各细胞分别于96孔细胞培养板中生长成单层,吸弃培养上清,用无血清DMEM液洗涤两次,加入10TCID50(10-1)的流感病毒液20ul/L,35℃,5%CO2:培养箱中吸附2h,吸弃病毒液,加入不同浓度的药液(内含2mg/L胰蛋白酶)100ul/孔培养。试验时各稀释药物设3个复孔,同时设刚性溶媒对照、病毒对照及正常细胞对照。莪术、柴胡、黄芩、木芙蓉叶、抗病毒水剂(由实施例1制备)设两个稀释度1∶5,1∶10,均是在同等剂量下进行比较。每个稀释度加入10倍稀释的不同滴度病毒,每个滴度接种两管细胞,将流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒组放入35℃温箱旋转培养,腺病毒组放入37℃温箱培养,次日开始观察病变,连续观察十天判定结果,见如下表:
MDCK细胞中抗流感病毒情况
型号 |
流感病毒甲1 |
流感病毒甲3 |
病毒滴定 |
10-1 10-2 10-3 |
10-1 10-2 10-3 |
病毒对照 |
+++ + - |
+++ + - |
病毒+1:5莪术 |
+++ + - |
+++ + - |
病毒+1:10莪术 |
+++ + - |
+++ + - |
病毒+1:5柴胡 |
+++ - - |
+++ - - |
病毒+1:10柴胡 |
+++ + - |
+++ + - |
病毒+1:5黄芩 |
++ - - |
++ - - |
病毒+1:10黄芩 |
+++ + - |
+++ + - |
病毒+1:5木芙蓉叶 |
++ - - |
++ - - |
病毒+1:10木芙蓉叶 |
+++ + - |
+++ + - |
病毒+1:5抗病毒水剂 |
+ - - |
+ - - |
病毒+1:10抗病毒水剂 |
+ + - |
+ + - |
正常细胞对照 |
- - - |
- - - |
在Vero细胞中抗副流感病毒的情况如下:
型号 |
I |
II |
III |
病毒滴定 |
10-1 10-1.5 10-2 10-3 |
10-1 10-1.5 10-2 10-3 |
10-1 10-1.5 10-2 10-3 |
病毒对照 |
++++ +++ ++ - |
++++ +++ ++ - |
++++ +++ ++ - |
病毒+1:5莪术 |
+++ ++ + - |
+++ ++ + - |
+++ ++ + - |
病毒+1:10莪术 |
++++ +++ ++ - |
++++ +++ ++ - |
++++ +++ ++ - |
病毒+1:5柴胡 |
+++ ++ + - |
+++ ++ + - |
+++ ++ + - |
病毒+1:10柴胡 |
++++ +++ ++ - |
++++ +++ ++ - |
++++ +++ ++ - |
病毒+1:5黄芩 |
+++ ++ + - |
+++ ++ + - |
+++ ++ + - |
病毒+1:10黄芩 |
++++ +++ ++ - |
++++ +++ ++ - |
++++ +++ ++ - |
病毒+1:5木芙蓉叶 |
++ + ± - |
++ + ± - |
++ ++ ± - |
病毒+1:10木芙蓉叶 |
+++ ++ + - |
++ ++ + - |
+++ ++ ++ - |
病毒+1:5抗病毒水剂 |
+ + + - |
- - - - |
++ ++ + - |
病毒+1:10抗病毒水剂 |
++ ++ + - |
- ± - - |
+++ ++ + - |
正常细胞对照 |
- - - - |
- - - - |
- - - - |
在HEP-2细胞中抗3、7型腺病毒及抗呼吸道合病毒的情况如下:
型号 |
腺病毒3型 |
腺病毒7型 |
呼吸道合胞病毒 |
病毒滴定 |
10-1 10-1.5 10-2 10-3 |
10-1 10-1.5 10-2 10-3 |
10-1 10-1.5 10-2 10-3 |
病毒对照 |
+++ ++ + - |
++ ++ + - |
+++ ++ + - |
病毒+1:5莪术 |
++ ++ ± - |
++ + + - |
++ ++ + - |
病毒+1:10莪术 |
+++ ++ + - |
++ ++ + - |
+++ ++ ++ - |
病毒+1:5柴胡 |
++ ++ ± - |
++ + + - |
++ ++ + - |
病毒+1:10柴胡 |
+++ ++ + - |
++ ++ + - |
+++ ++ ++ - |
病毒+1:5黄芩 |
++ ++ ± - |
++ + + - |
++ ++ + - |
病毒+1:10黄芩 |
+++ ++ + - |
++ ++ + - |
+++ ++ ++ - |
病毒+1:5木芙蓉叶 |
++ + ± - |
++ + ± - |
++ ++ ± - |
病毒+1:10木芙蓉叶 |
++ ++ + - |
++ ++ + - |
+++ ++ ++ - |
病毒+1:5抗病毒水剂 |
+ - - - |
+ + - - |
++ ++ - - |
病毒+1:10抗病毒水剂 |
++ ++ + - |
++ ++ + - |
+++ ++ ++ - |
正常细胞对照 |
- - - - |
- - - - |
- - - - |
上述结果表明:本发明抗病毒水剂在流感病毒,副流感病毒,呼吸道合胞病毒,3、7型腺病毒的抑制作用明显优于单个的莪术、黄芩、木芙蓉叶。
2体内抗病毒的保护作用
2.1对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用
甲型流感病毒株感染半数小鼠致死量(LD50))滴定
取ICR小鼠56只,体质量13-16g,雌雄各半,随机分7组,每组8只,取增毒3次的病毒尿囊液,稀释10倍,每组滴1个病毒浓度,各组小鼠在乙醚浅麻醉下以血凝滴度为640病毒尿囊液30ūl滴鼻感染小鼠,观察14d内死亡数,按Reed-Muench法计算,结果LD50为10-2.5。
本发明抗病毒水剂对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用:
取TCR小鼠120只,体质量13~16g,雌雄各半,随机分6组,每组20只:①正常对照组:等量NS;②模型对照组等量NS;③利巴韦林组;④本发明抗病毒水剂(由实施例1制备)小剂量组:10ml/kg;⑤抗病毒水剂中剂量组:20mlg/kg;⑥抗病毒水剂大剂量组:50ml/kg(由实施例1制备)。以上各组小鼠均灌胃给药,给药容量10ml/kg,1次/d×5d,于给药d1各组小鼠(除正常对照组外),在乙醚浅麻醉下,以血凝滴度640以上的尿囊液,给小鼠滴鼻感染,每鼠50ul(20个LD50致死量),观察动物感染后发病及死亡情况,记录14d内死亡数,结果见表:
抗病毒水剂对甲型流感病毒小鼠死亡的保护作用
组别 |
N |
剂量/ml.kg-1 |
死亡数/只 |
存活率(%) |
存活天数/d |
正常组 |
20 |
- |
0 |
100% |
- |
模型组 |
20 |
- |
17 |
15% |
6.40±3.64 |
利巴韦林组 |
20 |
5 |
8 |
60% |
10.85±4.00 |
小剂量组 |
20 |
10 |
14 |
30% |
9.05±3.79 |
中剂量组 |
20 |
20 |
12 |
40% |
9.90±3.86 |
大剂量组 |
20 |
50 |
10 |
50% |
10.8±3.64 |
2.2对乙型流感病毒感染小鼠的保护作用
血凝试验:根据文献方法确定血凝滴度640以上,可用于乙型流感病毒感染小鼠致死量(LD50))滴度。
取TCR小鼠120只,体质量13~16g,雌雄各半,随机分6组,每组20只:①正常对照组:等量NS;②模型对照组等量NS;③利巴韦林组;④抗病毒水剂(由实施例1制备)小剂量组:10ml/kg;⑤抗病毒水剂中剂量组:20ml/kg;⑥抗病毒水剂大剂量组:50ml/kg。以上各组小鼠均灌胃给药,给药容量10ml/kg,1次/d×5d,于给药d1各组小鼠(除正常对照组外),在乙醚浅麻醉下,以血凝滴度640以上的尿囊液,给小鼠滴鼻感染,每鼠50ul(20个LD50致死量),观察动物感染后发病及死亡情况,记录14d内死亡数,结果见表:抗病毒水剂对乙型流感病毒感染死亡的保护作用
组别 |
n |
剂量/ml.kg-1 |
死亡数/只 |
存活率(%) |
存活天数/d |
正常组 |
20 |
- |
0 |
100% |
- |
模型组 |
20 |
- |
18 |
10% |
7.47±3.08 |
利巴韦林组 |
20 |
5 |
9 |
55% |
11.2±3.43 |
小剂量组 |
20 |
10 |
13 |
35% |
9.7±3.69 |
中剂量组 |
20 |
20 |
11 |
45% |
10.2±3.8 |
大剂量组 |
20 |
50 |
8 |
60% |
12.6±3.20 |
结果表明:对甲型流感病毒,乙型流感病毒感染体有一定的保护作用。
上述试验证明,本发明药物属于纯中药抗病毒制剂,人体使用安全,无腐蚀性、无毒性、对环境无污染;用于制备抗病毒的洗水液、水果、蔬菜清洗剂、空气清洗剂、洗浴、洗发等各种表面抗病毒水剂,外用及内服均具有明显的抗病毒功效,也可用于甲型、乙型流感病毒的预防和治疗。