CN101829277B - 一种具有免疫增强功能的口服制剂及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种具有免疫增强功能的口服制剂及其制备方法，它是由免疫增强有效量的活性成分和药学上可接受的载体组成，这其中，所述的活性成分由以下重量配比的原料制备：人参450～550份、天麻450～550份和蜂王浆50～70份。本发明将人参与天麻和蜂王浆配伍使用，使其具有极佳的免疫增强作用，其免疫增强功效及效价比明显优于市面上的一些单纯以人参为主要原料的同类产品。

Description

一种具有免疫增强功能的口服制剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种口服制剂及其制备方法，具体地涉及一种具有免疫增强功能的口服制剂及其制备方法。

背景技术

免疫力是人体自身的防御机制，是人体识别和消灭外来侵入的任何异物(病毒、细菌等)、处理衰老、损伤、死亡、变性的自身细胞、以及识别和处理体内突变细胞和病毒感染细胞的能力。免疫力低下的机体极易被细菌、病毒、真菌等感染，导致各种炎症反复发作，机体消耗加重，因此，免疫能力低下的人群一般还同时具有体质虚弱、营养不良、精神萎糜、疲乏无力、食欲降低、睡眠障碍的特点，致使生活质量低下。

免疫功能可通过如下的方式调节：1)均衡营养；2)劳逸结合；3)锻炼身体；4)调整心态；5)药物调节。现有的免疫调节药物主要包括左旋咪唑、白细胞介素、干扰素、转移因子、胸腺素和环孢素等生物和化学制剂、及人参、灵芝、红景天等沿用上千年的中药。上述生物和化学制剂药物大多具有较强毒副作用；而人参、灵芝、红景天等具有免疫增强功能的传统药材虽然毒副作用小，但由于其需要在长期服用后才能起到明显的免疫增强效果，加上药材本身的价格昂贵，导致其远远超出普通家庭的支付能力。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有免疫增强功能的口服制剂。

本发明的另一目的是提供上述口服制剂的制备方法。

为了达成上述目的，本发明的解决方案是：

一种具有免疫增强功能的口服制剂，它是由免疫增强有效量的活性成分和药学上可接受的载体组成，其特征在于，所述的活性成分由以下重量配比的原料制备：人参450～550份、天麻450～550份和蜂王浆50～70份。

本发明的活性成分优选由以下重量配比的原料制备：人参500份、天麻500份和蜂王浆60份。

所述的载体对于口服液来说，包括但不限于溶剂和甜味剂，所述的溶剂可以是水、有机溶剂如甘油、或乙二醇类如聚乙二醇，或在水中的这些有机溶剂的不同比例的混合物；所述的甜味剂可以是蔗糖、葡萄糖或阿斯巴甜等中的至少一种。

优选地，所述溶剂为水，所述的甜味剂为葡萄糖。

进一步地，还包括防腐剂，所述防腐剂为山梨酸钾。

所述的载体对于片剂、含片、泡腾片或颗粒剂来说，包括但不限于填充剂、崩解剂、粘合剂、润湿剂、润滑剂，所述填充剂为淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、糖粉、微晶纤维素、葡萄糖、葡甲胺、氨基葡萄糖、甘露醇、硫酸钙或硫酸氢钙；崩解剂为羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠或交联羟丙甲基纤维素；粘合剂为羟丙甲基纤维素钠或聚维酮；润湿剂为水或乙醇；润滑剂为硬脂酸镁或滑石粉。

上述口服液的制备方法，包括如下的步骤：

1)按重量份配比取人参450～550份、天麻450～550份、蜂王浆50～70份、葡萄糖450～550份和山梨酸钾3～5份；

2)粉碎人参，而后加入6～8倍量60％～75％乙醇回流提取2次，每次2～3h，过滤，合并滤液；而后在0.06～0.09MPa、55～70℃下减压浓缩，得到相对密度为1.15～1.20(55℃测定)的人参浸膏；

3)粉碎天麻，而后在75～85℃条件下热提两次，两次均加入6～8倍量水，煮1～2小时，过滤，合并滤液；而后在0.06～0.09MPa、75～85℃下减压浓缩，得到相对密度为1.15～1.20(60℃测定)的天麻浸膏；

4)取9,000～11,000份水，将蜂王浆、葡萄糖、山梨酸钾溶解于部分水中，过滤杂质后获得滤液；

5)将人参浸膏和天麻浸膏加入步骤4中获得的滤液中，而后加入剩余量的水稀释，混匀；将稀释液通过硅藻土过滤机或板框式过滤机，滤液置储罐，备用；

6)超滤灭菌、罐装、扎盖，获得产品。

需要说明的是，本发明中所使用的纯化水通过如下的方式获得：市政生活饮用水经活性炭过滤，经3μ、1μ滤器精密过滤，再采用反渗透纯化水装置(0.5M³/h)处理，最后经紫外线杀菌得到(基本参数：压力0.20～0.25Mpa，电导率2.7～3.5us/cm²)。通过上述的手段可除去水体中的胶体物质、细菌、病毒、二氧化硅和各种中性粒子等水体污染物。

除非特别指名，这里所使用的所有技术和科学术语的含义与本发明所属技术领域一般技术人员通常所理解的含义相同。同样，所有在此提及的出版物、专利申请、专利及其他参考资料均引入本发明作为参考。

下面针对本发明口服制剂的有效成分展开说明：

1)人参：甘、微苦、微温，归脾、肺经，据《本草纲目》中记载，人参“治男妇一切虚证”；现代医学也证明：人参皂苷能明显提高小鼠对感染的抵抗力，降低死亡率；人参多糖则能促进小鼠巨噬细胞的吞噬功能；

2)天麻：性平，味甘；归肝经；据《神农本草经》记载，天麻有“主杀鬼精物、蛊毒恶气，久服益气力、长阴肥健、轻身增年”的奇效；现代医学也证明：天麻多糖具有增强机体非特异性免疫和细胞免疫的作用；

3)蜂王浆：性平，味甘、酸；入脾、肝、肾经；蜂王浆中含有免疫球蛋白，能明显的提高人体免疫力；

本发明将人参与天麻和蜂王浆配伍使用，使其具有极佳的免疫增强作用，其免疫增强功效及效价比明显优于市面上的一些单纯以人参为主要原料的同类产品。

具体实施方式

实施例1

1)取市政生活饮用水，依次经活性炭、3μ、1μ滤器精密过滤，再采用反渗透纯化水装置(0.5M³/h)处理，最后经紫外线杀菌得到纯化水(基本参数：压力0.20～0.25Mpa，电导率2.7～3.5us/cm²)；

2)原辅料检验：原辅料按各自质量标准进行检验，合格者投料；

3)中药材前处理：中药材人参、天麻使用前必须依次经过除杂、冲洗和净制(注：水应该是常温)三个阶段，净制后晾干备用；

4)称取人参8.2kg，粉碎过24目网成粗粉，用6倍量75％食用乙醇浸润后，装入回流提取装置中于80℃回流提取，提取2次，每次3h，过滤，合并两次滤液，于0.06～0.07MPa减压浓缩罐中，在55℃减压浓缩至相对密度1.15～1.20(55℃检测)，制得浸膏，备用；

5)称取天麻8.2kg，粉碎过24目网成粗粉，在75℃热提2次，两次均加6倍量的水，煮1小时，过滤，合并滤液；而后在0.06～0.07MPa减压浓缩罐中，在75℃减压浓缩至相对密度1.15～1.20(60℃检测)，制得浸膏，备用；

4)取1.55kg蜂王浆冻干粉拆包后，经传递窗进入操作间，在不锈钢桶中用适量纯化水、稍微加热(45℃)溶解，而后加入8.2kg葡萄糖、54g山梨酸钾，加纯化水溶解、混匀后，200目过滤，滤液转移至不锈钢桶中，备用；

5)配液：在夹层锅(200L型)内加入人参浸膏、天麻浸膏和步骤4中获得的滤液，并用纯化水定容至规定量；

6)初滤：将定容后处理液通过板框式压滤机(型号：GL-0.4型、压力：0.15～0.3MPa、滤膜：1.6μm)，使滤液澄清度达到企业标准要求，滤液转移置不锈钢储罐中静置澄清，备用；

7)超滤灭菌：将过滤后滤液通过超滤灭菌器进行超滤灭菌，超滤采用0.22μm的聚砜中空纤维微超滤机(常州市常能机械技术有限公司)，压力控制在0.10～0.15MPa，使滤液缓慢通过中空纤维膜，滤液立刻通过不锈钢管道，转移至罐装桶中备用；

8)玻璃瓶及瓶盖清洗、消毒：玻璃瓶及瓶盖经洗净、甩水后，玻璃瓶在灭菌柜中烘干、灭菌(温度：105℃、时间：30分钟)，然后用灭菌车转移至罐装车间，备用。瓶盖用70％乙醇浸泡10分钟，移至洁净车间晾干，备用；

9)罐装、扎盖：罐装、扎盖于无菌的10万级空气洁净车间内操作，于自动灌装机罐装，每瓶罐装10mL，并及时扎盖。转移至灯检车间，备用；

10)灯检：按企业标准规定进行灯检，灯检合格后转入外包装间；

11)贴标，包装；

12)成品抽样检验，检验合格后入库。

实施例2

1)取市政生活饮用水，依次经活性炭、3μ、1μ滤器精密过滤，再采用反渗透纯化水装置(0.5M³/h)处理，最后经紫外线杀菌得到纯化水(基本参数：压力0.20～0.25Mpa，电导率2.7～3.5us/cm²)；

2)原辅料检验：原辅料按各自质量标准进行检验，合格者投料；

3)中药材前处理：中药材人参、天麻使用前必须依次经过除杂、冲洗和净制(注：水应该是常温)三个阶段，净制后晾干备用；

4)称取人参11.2kg，粉碎过24目网成粗粉，用8倍量60％食用乙醇浸润后，装入回流提取装置中于80℃回流提取，提取2次，每次2h，过滤，合并两次滤液，于0.08～0.09MPa减压浓缩罐中，在70℃减压浓缩至相对密度1.15～1.20(55℃检测)，制得浸膏，备用；

5)称取天麻11.2kg，粉碎过24目网成粗粉，在85℃热提2次，两次均加8倍量的水，煮2小时，过滤，合并滤液；而后在0.08～0.09MPa减压浓缩罐中，在85℃减压浓缩至相对密度1.15～1.20(60℃检测)，制得浸膏，备用。

4)取0.9kg蜂王浆冻干粉拆包后，经传递窗进入操作间，在不锈钢桶中用适量纯化水、稍微加热(45℃)溶解，而后加入11.2kg葡萄糖、110g山梨酸钾，加纯化水溶解、混匀后，200目过滤，滤液转移至不锈钢桶中，备用；

5)配液：在夹层锅(200L型)内加入人参浸膏、天麻浸膏和步骤4中获得的滤液，并用纯化水定容至规定量；

6)初滤：将定容后处理液通过板框式压滤机(型号：GL-0.4型、压力：0.15～0.3MPa、滤膜：1.6μm)，使滤液澄清度达到企业标准要求，滤液转移置不锈钢储罐中静置澄清，备用；

7)超滤灭菌：将过滤后滤液通过超滤灭菌器进行超滤灭菌，超滤采用0.22μm的聚砜中空纤维微超滤机(常州市常能机械技术有限公司)，压力控制在0.10～0.15MPa，使滤液缓慢通过中空纤维膜，滤液立刻通过不锈钢管道，转移至罐装桶中备用；

8)玻璃瓶及瓶盖清洗、消毒：玻璃瓶及瓶盖经洗净、甩水后，玻璃瓶在灭菌柜中烘干、灭菌(温度：105℃、时间：30分钟)，然后用灭菌车转移至罐装车间，备用。瓶盖用70％乙醇浸泡10分钟，移至洁净车间晾干，备用；

9)罐装、扎盖：罐装、扎盖于无菌的10万级空气洁净车间内操作，于自动灌装机罐装，每瓶罐装10mL，并及时扎盖。转移至灯检车间，备用；

10)灯检：按企业标准规定进行灯检，灯检合格后转入外包装间；

11)贴标，包装；

12)成品抽样检验，检验合格后入库。

实施例3

1)取市政生活饮用水，依次经活性炭、3μ、1μ滤器精密过滤，再采用反渗透纯化水装置(0.5M³/h)处理，最后经紫外线杀菌得到纯化水(基本参数：压力0.20～0.25Mpa，电导率2.7～3.5us/cm²)；

2)原辅料检验：原辅料按各自质量标准进行检验，合格者投料；

3)中药材前处理：中药材人参、天麻使用前必须依次经过除杂、冲洗和净制(注：水应该是常温)三个阶段，净制后晾干备用；

4)称取人参9.7kg，粉碎过24目网成粗粉，用8倍量70％食用乙醇浸润后，装入回流提取装置中于80℃回流提取，提取2次，每次3h，过滤，合并两次滤液，于0.07～0.08MPa减压浓缩罐中，在60℃减压浓缩至相对密度1.15～1.20(55℃检测)，制得浸膏，备用；

5)称取天麻9.7kg，粉碎过24目网成粗粉，在80℃热提2次，两次均加8倍量的水，煮1.5小时，过滤，合并滤液；而后在0.07～0.08MPa减压浓缩罐中，在80℃减压浓缩至相对密度1.15～1.20(60℃检测)，制得浸膏，备用。

4)取1.2kg蜂王浆冻干粉拆包后，经传递窗进入操作间，在不锈钢桶中用适量纯化水、稍微加热(45℃)溶解，而后加入9.7kg葡萄糖、82g山梨酸钾，加纯化水溶解、混匀后，200目过滤，滤液转移至不锈钢桶中，备用；

5)配液：在夹层锅(200L型)内加入人参浸膏、天麻浸膏和步骤4中获得的滤液，并用纯化水定容至规定量；

6)初滤：将定容后处理液通过板框式压滤机(型号：GL-0.4型、压力：0.15～0.3MPa、滤膜：1.6μm)，使滤液澄清度达到企业标准要求，滤液转移置不锈钢储罐中静置澄清，备用；

7)超滤灭菌：将过滤后滤液通过超滤灭菌器进行超滤灭菌，超滤采用0.22μm的聚砜中空纤维微超滤机(常州市常能机械技术有限公司)，压力控制在0.10～0.15MPa，使滤液缓慢通过中空纤维膜，滤液立刻通过不锈钢管道，转移至罐装桶中备用；

8)玻璃瓶及瓶盖清洗、消毒：玻璃瓶及瓶盖经洗净、甩水后，玻璃瓶在灭菌柜中烘干、灭菌(温度：105℃、时间：30分钟)，然后用灭菌车转移至罐装车间，备用。瓶盖用70％乙醇浸泡10分钟，移至洁净车间晾干，备用；

9)罐装、扎盖：罐装、扎盖于无菌的10万级空气洁净车间内操作，于自动灌装机罐装，每瓶罐装10mL，并及时扎盖。转移至灯检车间，备用；

10)灯检：按企业标准规定进行灯检，灯检合格后转入外包装间；

11)贴标，包装；

12)成品抽样检验，检验合格后入库。

试验例一

1材料和方法

1.1样品：实施例3中制得的口服液，内容物呈橙黄色液体，临用前用蒸馏水配至所需浓度；

1.2实验动物：选用上海斯莱克实验动物有限公司提供的清洁级ICR雌性小白鼠200只，体重18～22g，许可证号：SCXK(沪)2003-0003号。

1.3饲养环境：福建省疾病预防控制中心SPF级(屏障系统)动物实验室，许可证号：SYXK(闽)2005-0001。

1.4分组及剂量设计：成人日推荐用量为20ml，即0.333mL/kg体重，(成人体重以60kg计)。试验按体重随机分成20小组，每小组10只动物，每4小组为一个大组，共五大组，分别为免疫一组：空斑、溶血素测定；免疫二组：脏器指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验；免疫三组：NK活性、淋转试验；免疫四组：DTH试验；免疫五组：小鼠碳廓清试验。每大组按人日推荐量的5倍、10倍、30倍分别设1.66、3.33、10.00mL/kg体重三个剂量组和蒸馏水对照组。

1.5样品的配制：低剂量组取样品3.3ml加蒸馏水至40mL；中剂量组取样品6.6mL加蒸馏水至40mL；高剂量组取样品20.0mL加蒸馏水至40mL。

1.6仪器与试剂：

1.6.1仪器：8mm直径打孔器、微量血凝试验板、2-16K通用离心机(毒理127)、MODEL680酶标仪(毒理133)、96孔培养板、Co-150CO₂培养箱(毒理125)、722光栅分光光度计(毒理018)、Olympus IX71倒置显微镜(毒理124)、电子天平(毒理115、112、081)、显微镜(毒理123)。

1.6.2试剂：注射用墨汁、刀豆蛋白(ConA)、MTT、DNFB、丙酮、麻油、SRBC、生理盐水、鸡红细胞、羊红细胞、甲醇、Giemsa染液、YAC-1细胞、Hanks液(PH7.2-7.4)、RPMI1640完全培养液、乳酸锂、碘硝基氯化四氮唑(INT)、吩嗪二甲酯硫酸盐(PMS)、NAD、Tris-HCl缓冲液(pH8.2)、1％NP40、台酚兰、1mol/L盐酸、酸性异丙醇等。

1.7实验数据统计方法：实验数据以SPSS软件进行单因素方差分析。经方差齐性检验，方差齐的实验数据采用LSD法进行统计分析，方差不齐的实验数据采用Tambane法进行统计分析。

1.8试验方法：动物每天按20ml/kg体重连续灌胃30天后，分别进行以下试验。

1.8.1碳廓清实验测定：称重，按10mL/kg体重从小鼠尾部静脉注入稀释的印度墨汁，注入墨汁后2、10min，分别从内眦静脉丛取血20μl，并立即将其加到2mL0.1％Na₂CO₃溶液中。用722分光光度计在600nm处测光密度值(OD)，以Na₂CO₃溶液作为空白对照。将小鼠处死后，解剖动物，取出肝脏、脾脏，用滤纸吸干血迹后称重，计算吞噬指数a。

1.8.2迟发型变态反应(DTH)检测：小鼠腹部皮肤用电动剃毛刀进行脱毛处理，范围约3cm*3cm，后用DNFB溶液50μL均匀涂抹致敏；5天后，再用DNFB溶液10μl均匀涂抹于小鼠右耳两面进行攻击。24小时后颈椎脱臼处死小鼠，剪下左右两耳，用打孔器取下直径8mm的耳片称重，计算左右耳重量差值。

1.8.3抗体生成细胞和血清溶血素测定：每鼠腹腔注射2％(V/V)SRBC悬液0.2mL进行免疫。5天后，摘除眼球采血做血清溶血素检测，并将动物颈椎脱臼处死，取脾脏进行抗体生成细胞检测。

1.8.3.1抗体生成细胞检测：将动物颈椎脱臼处死，取脾脏，用玻璃匀浆器磨碎，并通过四层纱布过滤，离心(1000转/10min)，用Hank′s液洗两遍。将脾细胞悬浮于8mLHank′s液中。将表层培养基(1g琼脂糖加双蒸水100mL)加热溶解后，放入45℃水浴保温，与等量的pH7.2～7.4、2倍浓度的Hank′s液混合，分装小试管，每管0.5mL，再向管内加入50μL 10％SRBC、25μL脾细胞悬液，迅速混匀，倾倒于已刷琼脂薄层的6cm平皿上，放入二氧化碳培养箱中温育1.5h，然后用SA缓冲液稀释的补体(1∶10)加入，继续温育1.5h后，计数溶血空斑数。

1.8.3.2血清溶血素的测定：将小鼠摘除眼球采血，于2000r/min离心10min分离血清，用生理盐水将血清倍比稀释，将不同稀释度的血清分别置于微量血凝板内，每孔100μL，再加入100μL0.5％(V/V)的SRBC悬液，混匀，装入湿润的平盘内加盖，于37℃温箱孵育3h，观察血球凝集程度。

1.8.4小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验(半体内法)和脏器/体重比值：每鼠腹腔注射20％鸡红细胞悬液1mL。间隔30min，颈椎脱臼处死动物，将其仰位固定于鼠板上，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min。然后吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，放入垫有湿纱布的搪瓷盒内，移置37℃孵箱温育30min。孵毕，于生理盐水中漂洗，以除去未贴片细胞，晾干，以1∶1丙酮甲醇溶液固定，4％(V/V)Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干。在油镜下阅片计数，计算吞噬率和吞噬指数。并解剖动物取出脾脏和胸腺，用滤纸吸干血迹后称重。

1.8.5ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验和小鼠NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)：颈椎脱臼法处死小鼠，无菌取脾，置于盛有适量无菌Hanks液的小平皿中，用镊子轻轻将脾撕碎，经200目筛网过滤，制成单细胞悬液，将细胞悬液分为两部分，分别用于ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验和小鼠NK细胞活性测定。

1.8.5.1ConA诱导的小鼠淋巴细胞转化试验：用Hank′s液洗涤细胞悬液2次，每次离心10min(1000r/min)，然后将细胞悬浮于1mL的完全培养液中，台酚兰染色计数活细胞数(95％以上)，调整细胞浓度为3*10⁶个/mL。将每份细胞悬液分两孔加入24孔培养板中，每孔1mL，一孔加75μlConA液，另一孔为对照，置培养箱中培养72h。培养结束前4h，每孔吸去上清液0.7mL，加入0.7mL不含小牛清的RPMI 1640培养液，同时加入MTT50μl/孔，继续培养4h。培养结束后，每孔加入1mL酸性异丙醇，吹打混匀，使紫色结晶完全溶解。然后分装到96孔培养板，每孔做3个平行孔，用酶标仪以570nm波长测定光密度值。

1.8.5.2小鼠NK细胞活性测定(乳酸脱氢酶LDH测定法)：试验前24小时将靶细胞传代培养，用前以Hank′s液洗3次，用RPMI 1640完全培养液调整细胞浓度为4*10⁵个/mL。用Hank′s液洗涤脾细胞悬液2次，每次离心10min(1000r/min)。弃上清液将细胞浆弹起，加入0.5mL灭菌水20秒，裂解红细胞后再加入0.5mL2倍Hank′s液及8mLHank′s液，离心10min(1000r/min)，用1mL完全培养液重悬，用1％冰醋酸稀释后计数，台酚兰染色计数活细胞数(应在95％以上)，调整细胞浓度为2*10⁷个/mL。取靶细胞和效应细胞各100μL(效靶比为50∶1)，加入96孔培养板中；靶细胞自然释放孔加靶细胞和培养液各100μL，靶细胞最大释放孔加靶细胞和1％NP40各100μL，上述各项均设三个平行孔，于37℃、5％CO₂培养箱中培养4小时，然后将培养板离心(1500r/min)5min，每孔吸取上清液100μL置于96孔培养板中，同时加入LDH基质液100μL，反应3min，每孔中加入1mol/L的HCl30μL，在酶标仪490nm处测定光密度值(OD)，计算NK细胞活性。

2结果：

2.1样品对小鼠体重的影响：由表1-1、表1-2、表1-3、表1-4和表1-5中可见，样品各组小鼠的体重与对照组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，见表1。

表1-1样品(免疫一组)对小鼠体重的影响

表1-2样品(免疫二组)对小鼠体重的影响

表1-3样品(免疫三组)对小鼠体重的影响

表1-4样品(免疫四组)对小鼠体重的影响

表1-5样品(免疫五组)对小鼠体重的影响

2.2脏器/体重比值的测定：样品中剂量组胸腺指数明显高于对照组，经统计差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表2。

表2胸腺指数、脾指数的测定

^*与对照组比较P＜0.05

2.3细胞免疫功能测定

2.3.1ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验：样品高剂量组淋转OD差值明显高于对照组，经统计差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表3。

表3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验

^*与对照组比较P＜0.05

2.3.2迟发性变态反应试验：样品高剂量组左右耳肿胀度差值明显高于对照组，经统计差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表4。

表4DTH测定结果

^*与对照组比较P＜0.05

2.4体液免疫功能测定：

2.4.1血清溶血素试验：样品高剂量组小鼠抗体积数明显高于对照组，经统计差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表5。

表5血清溶血素试验

^*与对照组比较P＜0.05

2.4.2抗体生成细胞检测试验：样品高剂量组溶血空斑数明显高于对照组，经统计差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表6。

表6抗体生成细胞检测试验

^*与对照组比较P＜0.05

2.5单核-巨噬细胞功能测定：2.5.1小鼠碳廓清试验：样品各剂量组碳廓吞噬指数a与对照组相比，均无统计学意义(P＞0.05)，结果见表7。

表7碳廓清试验

2.5.2小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验：样品高剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬指数明显高于对照组，经统计差异有统计学意义(P＜0.05)，而各剂量组小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞吞噬率与对照组相比，均无统计学意义(P＞0.05)，结果见表8。

表8巨噬细胞吞噬试验

^*与对照组比较P＜0.05

2.6NK细胞活性测定：样品高剂量组能明显增强NK细胞活性，与对照组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)，结果见表9。

表9NK细胞活性测定

^*与对照组比较P＜0.05

3结论

样品组与对照组相比：

1)各剂量组小鼠体重、脾指数、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率、小鼠碳廓清能力均无统计学意义。

2)中剂量组胸腺指数明显增加；

3)高剂量组明显增强DNFB诱导的小鼠迟发型变态反应，促进抗体生成细胞的生成、明显增加小鼠血清溶血素和小鼠腹腔吞噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬指数，并使NK细胞活性明显升高。

4)中、高剂量组明显增强ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖能力。

根据《保健食品检验与评价技术规范》(卫生部2003)，提示该样品具有增强免疫力功能。

试验例二

1材料及方法

1.1样品：实施例3中制得的口服液，成品人日推荐剂量为20mL，相当于0.333mL/kg体重(成人体重以60kg计)。提供实施例3口服液的3.33倍浓缩液供试验用(即每1mL浓缩液相当于3.33mL产品)。

1.2试验动物：实验选用上海斯莱克实验动物有限责任公司提供的清洁级SD大鼠80只，雌雄各半，体重56～72g。许可证号：SCXK(沪)2003-0003。

1.3饲养环境：福建省疾病预防控制中心SPF级(屏障系统)动物实验室，许可证号：SYXK(闽)2005-0001。

1.4仪器：日立7060C全自动生化分析仪(毒理702)、SHANDON EXCELSIOR全自动密封脱水机(毒理120)、BM-VI生物组织冷冻包埋机(毒理046)、SHANDON Finesse325石蜡切片机(毒理050)、CS-IV摊片烤片机(毒理047)、电热鼓风干燥箱(毒理128)、OLYMPUSBX-51研究型生物显微镜(毒理055)、美国雅培CELL-DUN3700血球分析仪(毒理119)、全自动染色机(毒理129)、电子天平(毒理117、081、115)。

1.5试验方法：各性别动物按体重随机分成4组，每组10只。试验按受试物人日推荐量的25、50和100倍，设3个剂量组为8.3、16.7、33.3mL/kg体重(以成品计)。低、中、高剂量组分别按25、50、100％三个浓度配制(以浓缩液计)，同时设蒸馏水对照组，以经口灌胃方式给予，灌胃体积为10.0mL/kg体重。实验期间动物单笼喂养，自由进食饮水，每天观察动物形态，记录饲料洒漏量，每周记录一次体重和2次食物摄入量。喂养30天后，摘眼球采血作血常规及生化指标测定，取出肝、肾、脾、睾丸称重，并对肝、肾、脾、胃肠、睾丸、卵巢作病理学检查。

1.6观察指标

1.6.1动物的一般表现、体重、进食量、食物利用率。

1.6.2血常规及生化指标：红细胞计数、白细胞计数、白细胞分类、血红蛋白、谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素、肌酐、总胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白。

1.6.3病理解剖：脏体比，大体观察及病理组织学检查(肝、脾、肾、胃肠、睾丸和卵巢)。

1.7实验数据统计方法：实验数据以SPSS软件进行单因素方差分析。经方差齐性检验，方差齐的实验数据采用LSD法进行统计分析，方差不齐的实验数据采用Tambane法进行统计分析。

2结果

2.1一般形态观察：该样品三个剂量组的大鼠毛质白、有光泽、外观形态与对照组比较无区别，也无死亡现象。

2.2动物体重增长与食物利用率：由表10、表11、表12中可见，各剂量组大鼠实验结束时体重及体重增重、进食量、食物利用率与对照组比较，差异无显著性(P＞0.05)。

表10样品对大鼠体重的影响

表11样品对大鼠进食量的影响

表12样品对大鼠食物利用率的影响

2.3血常规检查结果：由表13、表14-1和表14-2可见，三个剂量组大鼠的血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数和白细胞分类均在正常值范围内。

表13血液学检查结果

表14-1样品对大鼠WBC的影响

表14-2(续上表)

2.4血清生化检验结果：由表15-1、15-2和15-3可见，三个剂量组大鼠的血清谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素、肌酐、总胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白测定值均在正常值范围内。

表15-1末期血清生化检验结果

表15-2(续上表)

表15-3(续上表)

2.5对大鼠脏体比的影响：由表16-1、表16-2可见，各剂量组大鼠脏体比与对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)。

表16-1样品对大鼠脏体比的影响

表16-2(续前表)

2.6病理组织学检查：各剂量组动物大体检查未发现明显病变，且生化指标未改变，因此，仅选对照组及高剂量组作组织病理学检查。由表17-1、表17-2、表17-3、表17-4、表17-5、表17-6和表17-7可见，高剂量组动物肝、肾、胃肠、脾、睾丸、卵巢组织学检查未发现特异性病变。

表17-1大鼠肝脏病理检测的结果

表17-2大鼠胃病理检测的结果

表17-3大鼠肠病理检测的结果

表17-4大鼠肾脏病理检测的结果

表17-5大鼠脾脏病理检测的结果

表17-6大鼠睾丸病理检测的结果

表17-7大鼠卵巢病理检测的结果

结论：样品各剂量组灌胃大鼠30天，试验期间，各组动物生长活动正常。试验结束时，样品各剂量组动物体重、体重增重、进食量、食物利用率、脏体比与对照组比较，差异均无显著性(P＞0.05)。样品各剂量组动物血常规(血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数、白细胞分类)、各项生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、总胆固醇、甘油三酯、尿素、肌酐、血糖、总蛋白、白蛋白)均在正常值范围内。对受检脏器作组织病理学检查，未见特异性病变。

病理学检查结果：肝：正常肝小叶结构存在，肝细胞无明显肿胀，仅少数肝细胞胞浆内出现少许细小的脂肪空泡，呈轻度脂肪变，这种脂变肝细胞呈散在小灶分布，范围小。少数肝细胞可见肿胀和颗粒变性，肝细胞无坏死改变。少数肝汇管区见淋巴细胞等炎细胞浸润，无纤维组织增生，胆管未见异常。肾：肾皮髓质结构清楚，肾小管上皮无肿胀变性。少数肾间质中有灶性炎细胞浸润。脾：脾白髓、红髓结构清楚，白髓、红髓无明显扩张或萎缩现象。胃和十二指肠：粘膜完整，无明显出血、坏死、糜烂、溃疡及炎细胞浸润，无明显腺体增生萎缩改变。睾丸：曲细精管正常，可见各级生精细胞及成熟精子。个别间质轻度水肿。卵巢：发育正常，可见各级卵泡和成熟黄体。

以上病理学改变仅在个别动物中发生，各组标本病理变化无明显差异，因此，认为被检脏器(肝、肾、脾、胃和十二指肠、睾丸或卵巢)未见与受试物有关的病理学改变。

试验例三

一、材料：

1、受试物：实施例3中制得的口服液，呈橙黄色液体，人体推荐量为20mL/d，相当于0.33mL/kg体重(成人体重以60kg计)。提供实施例3口服液的3.33倍浓缩液供试验用。

2、动物：选用福建省疾病预防控制中心繁殖的清洁级健康ICR小鼠，许可证号：SCXK(闽)2005-0001.

3、饲养环境：福建省疾病预防控制中心(SPF)级(屏障系统)动物实验室，许可证号：SYXK(闽)2005-0001。

4、检测仪器：电子天平(毒理112、115、117)。

二、方法：

1、检测依据：《保健食品检验与评价技术规范》(卫生部2003)。

2、操作步骤：选取18～22g健康ICR小鼠，各性别小鼠按体重随机分成2组，每组10只。试验前小鼠隔夜禁食16小时，不禁水。设样品组，剂量为66mL/kg体重(以成品计，取样品浓缩液直接灌胃)，另设蒸馏水对照组，采用灌胃方式给予受试物，灌胃容量为0.02mL/g体重。灌胃后，连续观察14天，观察并记录动物中毒的表现和死亡情况。

三、结果：

动物未见异常，结果见表18。

表18样品口服液急性毒性试验结果

四、结论：

该样品经口急性毒性实验结果为LD50＞66mL/kg BW(以成品计)，相当于人体推荐量的200倍。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种具有免疫增强功能的口服制剂，它是由免疫增强有效量的活性成分和药学上可接受的载体组成，其特征在于，所述的活性成分由以下重量配比的原料制备：人参450～550份、天麻450～550份和蜂王浆50～70份。

2.根据权利要求1中所述的一种具有免疫增强功能的口服制剂，其特征在于，所述的活性成分由以下重量配比的原料制备：人参500份、天麻500份和蜂王浆60份。

3.根据权利要求1或2中所述的一种具有免疫增强功能的口服制剂，其特征在于：所述口服制剂为口服液，所述载体包括溶剂和甜味剂，所述的溶剂为水或有机溶剂，或在水中的有机溶剂的不同比例的混合物；所述的甜味剂为蔗糖、葡萄糖或阿斯巴甜中的至少一种。

4.根据权利要求3中所述的一种具有免疫增强功能的口服制剂，其特征在于：还包括防腐剂，所述防腐剂是山梨酸钾。

5.根据权利要求4中所述的一种具有免疫增强功能的口服制剂，其特征在于：所述溶剂为水，所述的甜味剂为葡萄糖。

6.根据权利要求1或2中所述的一种具有免疫增强功能的口服制剂，其特征在于：所述口服制剂为片剂、含片、泡腾片或颗粒剂，所述载体包括填充剂、崩解剂、粘合剂、润湿剂、润滑剂，所述填充剂为淀粉、糊精、乳糖、蔗糖、糖粉、微晶纤维素、葡萄糖、葡甲胺、氨基葡萄糖、甘露醇、硫酸钙或硫酸氢钙；崩解剂为羟丙纤维素、羧甲基淀粉钠、交联聚维酮、交联羧甲基纤维素钠或交联羟丙甲基纤维素；粘合剂为羟丙甲基纤维素钠或聚维酮；润湿剂为水或乙醇；润滑剂为硬脂酸镁或滑石粉。

7.权利要求5的口服制剂的制备方法，其特征在于，包括如下的步骤：

1)按重量份配比取人参450～550份、天麻450～550份、蜂王浆50～70份、葡萄糖450～550份和山梨酸钾3～5份；

2)粉碎人参，而后加入6～8倍量60％～75％乙醇回流提取2次，每次2～3h，过滤，合并滤液；而后在0.06～0.09MPa、55～70℃下减压浓缩，得到相对密度为1.15～1.20的人参浸膏；

3)粉碎天麻，而后在75～85℃条件下热提两次，两次均加入6～8倍量水，煮1～2小时，过滤，合并滤液；而后在0.06～0.09MPa、75～85℃下减压浓缩，得到相对密度为1.15～1.20的天麻浸膏；

4)取9,000～11,000份水，将蜂王浆、葡萄糖、山梨酸钾溶解于部分水中，过滤杂质后获得滤液；

5)将人参浸膏和天麻浸膏加入步骤4中获得的滤液中，而后加入剩余量的水稀释，混匀；将稀释液通过硅藻土过滤机和/或板框式过滤机，滤液置储罐，备用；

6)超滤灭菌、罐装、扎盖，获得产品。