CN101825610A - 一种用高效液相色谱法测定奥替溴铵有关物质的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种奥替溴铵有关物质的高效液相色谱法测定方法，选用氰基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以乙腈为有机相，水相为缓冲盐的混合溶剂作为流动相，可用于奥替溴铵和含有奥替溴铵的药物组合物的质量控制。

Description

一种用高效液相色谱法测定奥替溴铵有关物质的方法

技术领域：

本发明涉及一种高效液相方法，特别是一种奥替溴铵有关物质的高效液相色谱法测定方法。

背景技术：

奥替溴铵属于一类解痉挛和抗胆碱能药物，此药对于消化道平滑肌具有选择性和强烈的解痉挛作用。分子式为C₂₉H₄₃BrN₂O₄，化学名为N，N-二乙基-N-甲基-2-[[4-[[2-辛氧基(苯甲酰胺基)]苯甲酰]氧]溴乙胺盐，其化学结构式如下：

奥替溴铵的主要中间体杂质有3个，中间体-4、中间体-5和中间体-6，在奥替溴铵的合成过程中生成。其中中间体-5不稳定，故主要考察中间体-4和中间体-6与终产品的分离效果。这些主要中间体对于最终产品的质量生产过程的质量控制是非常重要的。

本法采用氰基色谱柱快速准确的实现了奥替溴铵有关物质的测定，从而实现了奥替溴铵中间体杂质的控制，保证了奥替溴铵的质量可控，具有现实意义。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种用高效液相色谱法分离测定奥替溴铵有关物质的方法，可用于奥替溴铵的制备过程和最终产品的质量控制。

本发明提供一种用高效液相色谱测定奥替溴铵有关物质的方法，选用氰基硅烷键和硅胶为填料的色谱柱，以乙腈为有机相，水相为缓冲盐作为流动相。

本发明方法的流动相有机相选自乙腈、甲醇，优选乙腈。

本发明的方法流动相中，有机相为乙腈，乙腈与水相的比例为：30～60∶40～60，优选50∶50。

本发明的方法水相为磷酸盐缓冲液，磷酸盐选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠或磷酸氢二钾中的一种或其混合物，磷酸盐优选磷酸二氢钠。

本发明提供一种用高效液相色谱测定奥替溴铵有关物质的方法，可按以下方法实现：

1)取奥替溴铵样品适量用流动相溶解，并配制成每1ml含奥替溴铵0.5mg的样品溶液。

2)设置流动相流速为0.5～1.5ml/min，流动相的流速优选为1ml/min；检测波长210～300nm，最佳检测波长为291nm；选用氰基色谱柱；色谱柱柱温20～30℃，柱温最佳为25℃。

3)取1)的样品溶液5～20ul，优选10ul，注入高效液相色谱仪，完成奥替溴铵有关物质的测定。

其中：

高效液相色谱仪：岛津：LC-10ATvp，SPD-10Avp

色谱柱：氰基硅烷键合色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)

流动相：乙腈-0.02mol/L磷酸二氢钠(10％磷酸调pH值为3.5)＝50∶50

流速：1.0mL/min

检测波长：291nm

柱温：25℃

进样体积：10μL

本发明采用氰基色谱柱能够有效的分离分析奥替溴铵有关物质，用流动相溶解，能够消除溶剂对检测的干扰，加入离子对试剂跟中间体和样品进行结合，从而达到更好的分离，本发明能够有效测定奥替溴铵的有关物质，方法简单快捷，分析灵敏度高，结果准确可靠，可用于奥替溴铵及含有奥替溴铵的药物组合物的质量控制。

附图说明

图1奥替溴铵及其中间体杂质的液相色谱图

图2奥替溴铵的高效液相色谱图

图3奥替溴铵有关物质高效液相色谱图

图4奥替溴铵及其中间体杂质系统耐用性高效液相色谱图

具体实施方式：

以下实施例用于进一步理解本发明，但不限于本实施的范围。

实施例1

仪器与条件

日本岛津LC-10ATVP泵，岛津SPD-10AVP紫外可见光多波长检测器，RHEODYNE 7725i进样器及TL9900色谱数据工作站，色谱柱：氰基柱250×4.6mm，5μm，紫外检测波长：291nm，流动相：0.02mol/L磷酸二氢钠(10％磷酸调pH值至3.5)-乙腈(50∶50)

实验步骤

取奥替溴铵及其中间体杂质各约5mg，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取供试品溶液，按上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图1。

图1中保留时间为11.183min的色谱峰为奥替溴铵的色谱峰，10.111min的色谱峰为中间体-6色谱峰，25.914min的色谱峰为中间体-4色谱峰，在上述条件下奥替溴铵及其中间体杂质的色谱峰分离度良好，可以满足中国药典的要求。

实施例2

仪器与条件

日本岛津LC-10ATVP泵，岛津SPD-10AVP紫外可见光多波长检测器，RHEODYNE 7725i进样器及TL9900色谱数据工作站，色谱柱：氰基柱250×4.6mm，5μm，紫外检测波长：291nm，流动相：0.02mol/L磷酸二氢钠(10％磷酸调pH值至3.5)-乙腈(50∶50)

实验步骤

取奥替溴铵约2mg，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

取供试溶液，照上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图3。

图3中保留时间为11.314分钟的色谱峰为奥替溴铵的色谱峰，其有关物质单一杂质小于0.5％，总杂质小于1.0％，结果表明奥替溴铵的有关物质达到原料药要求，本法可以用于奥替溴铵的质量监测。

实施例3

仪器与条件

日本岛津LC-10ATVP泵，岛津SPD-10AVP紫外可见光多波长检测器，RHEODYNE 7725i进样器及TL9900色谱数据工作站，色谱柱：氰基柱250×4.6mm，5μm，紫外检测波长：291nm，流动相：0.02mol/L磷酸二氢钠(10％磷酸调pH值至3.5)-乙腈(52∶48)

实验步骤

取奥替溴铵及其中间体杂质各约5mg，置于100ml量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液，按上述条件进行高效液相分析，记录色谱图，结果见图4。

图4证明，在流动相比例微调的条件下，奥替溴铵和各中间体仍然有很好的分离，本法可以用于奥替溴铵的质量监测。

Claims (7)

1.一种用高效液相色谱测定奥替溴铵有关物质的方法，其特征在于选用氰基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱，以乙腈为有机相，水相为缓冲盐作为流动相，可用于奥替溴铵和含有奥替溴铵的药物组合物的质量控制。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征是流动相中的有机相选自乙腈、甲醇。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征是流动相中的有机相为乙腈，乙腈与水相的比例为：30～60∶40～60。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征是所述水相为磷酸盐缓冲液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征是所述磷酸盐选自磷酸二氢钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠或磷酸氢二钾中的一种或其混合物。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于所述磷酸盐为磷酸二氢钠。

7.根据权利要求1～6任一项所述的方法，其特征在于：取奥替溴铵适量，用流动相溶解，配制成每1ml含奥替溴铵0.5mg的样品溶液，流速为1ml/min，检测波长291nm，选用氰基柱，柱温25℃，取样品溶液10ul，注入高效液相色谱仪，完成奥替溴铵有关物质的测定。

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