CN101822765B - 一种益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的含量检测方法 - Google Patents
一种益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的含量检测方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101822765B CN101822765B CN2010101023572A CN201010102357A CN101822765B CN 101822765 B CN101822765 B CN 101822765B CN 2010101023572 A CN2010101023572 A CN 2010101023572A CN 201010102357 A CN201010102357 A CN 201010102357A CN 101822765 B CN101822765 B CN 101822765B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- add
- water
- adds
- arsenic
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
Images
Landscapes
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明公开了一种熟地黄、炒杜仲、枸杞子、女贞子、炒菟丝子、炒山药、茯苓、发酵虫草菌粉、莲子、芡实、煅牡蛎等十一味原料药组成的具有益肾壮骨、补血益精作用的中药复方制剂的含量检测方法。该方法包括枸杞子、发酵虫草菌粉的薄层鉴别，腺苷的含量测定，总钙量的测定以及砷盐检查；从多个方面反映所述中药复方制剂的质量。
Description
技术领域
本发明涉及中药复方制剂的质量检测方法，特别是一种益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的含量检测方法。
背景技术
地仲强骨胶囊处方组成为熟地黄、炒杜仲、枸杞子、女贞子、炒菟丝子、炒山药、茯苓、发酵虫草菌粉、莲子、芡实和煅牡蛎，具有益肾壮骨、补血益精的功效，临床用于治疗骨质疏松症，疗效确切。地仲强骨胶囊的制备工艺中，既有经过水煎煮提取的，如熟地黄、炒杜仲、枸杞子、女贞子、炒菟丝子、炒山药、茯苓、莲子、芡实等，也有以原粉直接入药的，如发酵虫草菌粉和煅牡蛎，因此质量检测应当对这两部分原料药都有所反映。而且处方中有煅牡蛎，出于用药安全考虑，应当将砷盐检查纳入质量检测。但是现有技术中还没有有关该复方制剂的质量检测方法的报道。在实际中，还有可能处方组成与地仲强骨胶囊相同的其它复方制剂上市，因此，有必要建立所述处方组成的中药复方制剂的质量检测方法，从而保证用药安全。
发明内容
本发明的目的是提供一种益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的含量检测方法。
为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：
本发明所述益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的原料药组成如下：
熟地黄200-600重量份 炒杜仲150-450重量份 枸杞子150-450重量份
女贞子150-450重量份 炒菟丝子250-750重量份 炒山药200-600重量份
茯苓150-450重量份 发酵虫草菌粉40-120重量份
莲子125-375重量份 芡实150-450重量份 煅牡蛎55-165重量份。
上述原料药组成优选：
熟地黄471重量份 炒杜仲333重量份 枸杞子333重量份
女贞子333重量份 炒菟丝子500重量份 炒山药417重量份
茯苓333重量份 发酵虫草菌粉83重量份
莲子250重量份 芡实333重量份 煅牡蛎110重量份
取上述原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床上可以接受的任一种制剂，
如片剂、胶囊剂、颗粒剂、散剂、丸剂、缓释制剂或控释制剂。
本发明所述中药复方胶囊剂的制备工艺是：
按照所述优选的原料药组成，取所述重量份的熟地黄、炒菟丝子、枸杞子、炒杜仲、女贞子、炒山药、茯苓、莲子和芡实，加水煎煮二次，每次加水5倍量，每次40分钟，合并煎液，滤过，浓缩至60℃相对密度1.15的清膏，加乙醇使含醇量达到60％，搅拌，静置48小时，取上清液，药渣甩干，合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃相对密度1.35的稠膏，干燥，粉碎，过60目筛，加入粉碎过60目筛的发酵虫草菌粉和粉碎过100目筛的煅牡蛎粉，搅拌均匀，加入胶囊，制成1000粒，每粒装0.33g，即得。所述中药复方胶囊剂口服，一次3-4粒，一日3次。每1g所述中药复方胶囊剂内容物折算成原料药量，相当于10.43g。
本发明中药复方不同制剂的日服剂量因为制剂工艺的不同而略有差异，而且同一制剂的日服用剂量也有一个变动范围，因此不适宜用日用剂量为单位来称取所述中药复方制剂。但是对于每一种制剂而言，每克制剂折算成的原料药的量是确定，故以折算成原料药的量来称取检测制剂。
本发明所述中药复方制剂的检测方法包括如下I、II的鉴别方法：
I、取相当于原料药52g的所述中药复方制剂，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加热水10ml使溶解，放冷，加稀醋酸调PH至5-6，用乙酸乙酯振摇提取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
II、取相当于原料药21g的所述中药复方制剂，研细，加50％乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取腺苷对照品，加50％乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一以0.1M磷酸氢二钠和0.5％羧甲基纤维素钠等体积混合为粘合剂的的硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶6∶0.3∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
发酵虫草菌粉属贵重药材，除了对其进行定性鉴别外，对其进行含量测定对本发明所述中药复方制剂的质量检测也是有意义的。因此，本发明所述的含量检测方法还包括如下的高效液相色谱法的含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9∶1的PH＝6.5磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相，检测波长为260nm，理论塔板数按腺苷峰计算应不低于2000；其中所述PH＝6.5磷酸盐缓冲液由0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5ml混合得到；
对照品溶液的制备：精密称取腺苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取相当于原料药34g的所述中药复方制剂，研细，称取相当于原料药10g的细粉，精密称定，置具50ml容量瓶中，加90％甲醇适量，密塞，超声处理60分钟，放冷，加90％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml置水浴上蒸至近干，加流动相溶解，移至25ml容量瓶，加流动相至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
相当于原料药3.44g的所述中药复方制剂含腺苷C10H13N5O4，不得少于0.16mg。
本发明所述的中药复方制剂功能益肾壮骨、补血益精，用于治疗骨质疏松症；骨质疏松症的以骨中钙的大量流失、骨量减少为特征，每日补充适量、充足的外源性钙是骨质疏松症治疗的主要手段之一。本发明所述中药复方制剂中的煅牡蛎即可以补充钙质，故有必要建立钙含量检测的方法和标准，以保证本发明所述的中药复方制剂发挥治疗骨质疏松症的作用。所以，本发明所述的含量检测方法还包括如下对总钙的含量测定：
取相当于煅牡蛎0.3g的所述中药复方制剂，研细，混匀，精密称定相当于煅牡蛎0.1g的所述中药复方制剂，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，加稀盐酸10ml，加热搅拌溶解，完全转移至锥形瓶中，加水10ml，加甲基红指示液1滴，加氨试液使溶液由红色变成微黄色，加新配制的20％三乙醇胺溶液10ml，得反应液I；另取水10ml，加氨水-PH10.0的氯化铵缓冲液10ml、稀硫酸镁试剂2滴与铬黑T指示剂少许，滴加0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液至溶液显纯蓝色，加入所述反应液I，摇匀，用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液滴定至溶液自紫红色变成纯蓝色，记录滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积；根据每1ml0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠相当于2.004mg钙，以及滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积，计算即得；
相当于原料药3.44g的所述中药复方制剂含总钙量不得少于45.0mg。
由于本发明所述中药复方制剂以煅牡蛎原粉入药，有可能带入过量的有毒物质，如砷盐，因此所述的含量检测方法还包括如下的按照中国药典(2005年版第一部附录IX F)砷盐检查法第一法进行的砷盐检查：
(1)标准砷溶液的制备
称取三氧化二砷0.132g，置1000ml容量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；
临用前，精密吸取贮备液10ml，置1000ml容量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml相当于1μg的As；
(2)标准砷斑的制备
精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得；
(3)测定法
精密称定相当于原料药4.172g的所述中药复方制剂，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，置A瓶中，加盐酸(还是稀盐酸？)5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，与标准砷斑比较，不得深于标准砷斑；
相当于原料药4.17g的所述中药复方制剂含砷量不得超过2ppm。
本发明所述中药复方制剂的含量检测方法可以有如下几种方案：
1)鉴别方法I和II，以及腺苷的高效液相色谱法含量测定；
2)鉴别方法I和II，腺苷的高效液相色谱法含量测定，以及总钙的含量测定；
3)鉴别方法I和II，腺苷的高效液相色谱法含量测定，以及砷盐检查；
4)鉴别方法I和II，腺苷的高效液相色谱法含量测定，总钙的含量测定，以及砷盐检查。
上述含量检测方法都可以一定程度上反应所述中药复方制剂的质量，当然以所述方案4为优选。
对于本发明所述的胶囊剂，上述检测方法中的取样量和检测结果为：
鉴别方法I取所述胶囊剂内容物5g，照说明书记载的方法进行枸杞子薄层鉴别。
鉴别方法II取所述胶囊剂内容物2g，照说明书记载的方法进行发酵虫草菌粉的薄层鉴别。
腺苷的高效液相色谱法含量测定先取所述胶囊剂内容物3g，混匀，再取1g，照说明书记载的方法进行测定，每粒胶囊含腺苷C10H13N5O4，不得少于0.16mg。
总钙的含量测定先取所述胶囊剂内容物1g，混匀，然后取0.3g所述胶囊剂内容物，照说明书记载的方法测定；每粒胶囊含总钙不少于45.0mg。
砷盐检查时取所述胶囊剂内容物0.4g，照说明书记载的方法检查，每0.4g所述胶囊剂内容物含砷量不超过2ppm。
本发明所述薄层鉴别I可以采用市售的预制硅胶G薄层板，也可以采用手工铺制的G薄层板，鉴别II则采用手工铺制的以含4％磷酸氢钠羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板。
下面以本发明所述中药复方胶囊剂为例通过实验说明本发明所述含量检测方法的建立。
实验例1枸杞子薄层鉴别的专属性试验
鉴别方法I为枸杞子的薄层鉴别。
取处方中不含枸杞子的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，取本发明所述胶囊剂内容物(以下简称供试品)5g，阴性样品5g，枸杞子对照药材(中国药品生物制品检定所，批号：20000628)按说明书所述的方法配制成供试品溶液、阴性样品溶液、对照药材溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取供试品溶液、阴性样品溶液各15μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品色谱中与对照品色谱相应的位置上无相应的斑点。说明阴性无干扰。(见图1)
由于本发明处方中的煅牡蛎主要成分为CaO，故乙醇提取液呈碱性，加稀醋酸调pH值后可较好检出枸杞子斑点。
实验例2发酵虫草菌粉薄层鉴别的专属性试验
鉴别方法II为发酵虫草菌粉的薄层鉴别。
2.1展开剂
试验发现，腺苷在碱性条件下硅胶薄层层析分离效果好，故展开剂应当保持碱性。在此前提下，对三种展开剂进行比较：①体积比为5∶2∶6∶0.6的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水，在饱和氨气下展开；②体积比为8∶2∶6∶0.3∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-浓氨试液；③体积比为8∶2∶6∶0.3的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水，每10ml展开剂加浓氨试液2滴。以②所述展开剂的分离效果最好，故选择体积比为8∶2∶6∶0.3∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-浓氨试液为鉴别II的展开剂。
2.2薄层板
腺苷在紫外灯下没有荧光，故必须选用带有荧光剂的薄层板。比较了①硅胶GF254板，和②以0.1M磷酸氢二钠和0.5％羧甲基纤维素钠等体积混合为粘合剂的硅胶GF254板，发现②所述的薄层板层析效果好，故选用以0.1M磷酸氢二钠和0.5％羧甲基纤维素钠等体积混合为粘合剂的硅胶GF254板。
2.3专属性
取处方中不含发酵虫草菌粉的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，取供试品2g，阴性样品2g，腺苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：879-200001)按说明书所述的方法配制成供试品溶液、阴性样品溶液、对照品溶液。照薄层色谱法(中国药典2000年版一部附录VI B)试验，吸取上述溶液各1μl，分别点于同一含4％磷酸氢钠羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶6∶0.3∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；阴性样品色谱中与对照品色谱相应的位置上无相应的斑点。说明阴性无干扰。(见图2)
实验例3腺苷含量测定
发酵虫草菌粉为贵重药材，因此通过高效液相色谱法测定其含量。
3.1仪器与试药
Hypersil BDS C185μm(4.6mm×200mm)色谱柱，大连依利特P200II高压恒流泵，大连依利特UV200II紫外可变波长检测器，HW-2000型色谱工作站。色谱纯甲醇，其它试剂均为分析纯，水为双蒸水；腺苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：879-200001)。
3.2系统适应性试验
用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9∶1的PH＝6.5磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相，检测波长为260nm，理论塔板数按腺苷峰计算应不低于2000；其中所述PH＝6.5磷酸盐缓冲液由0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5ml混合得到。
3.3波长选择
根据文献报道，以及药典有关品种中腺苷的测定，其检测波长均为260nm，故确定采用260nm为检测波长。
3.4流动相的选择
比较了体积比为9∶1、17∶3、42∶8、88∶12的所述磷酸缓冲液-甲醇作为流动相时，腺苷与制剂中其他组分的分离情况，发现腺苷在体积比为9∶1的所述磷酸缓冲液-甲醇流动相中分离效果最好(见图3和4)，因此，确定流动相为体积比为9∶1的PH＝6.5磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相，其中所述PH＝6.5磷酸盐缓冲液由0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5ml混合得到。
3.5供试品溶液的制备
a.提取方法的选择
不同的处理方法对供试品中腺苷的浸出率有重要影响，故考察了超声提取和回流提取对供试品含量测定的影响，试验分组及结果见表1。
表1不同处理方法对比
由上表可见，90％甲醇回流提取和90％甲醇超声提取的效果好于50％乙醇超声提取，二者差异不明显；由于超声提取操作简便，所以前处理选用90％甲醇超声。
b、超声提取时间的选择
为了确定最佳的提取时间，分别考察了超声提取30分钟、60分钟、90分钟提取效果，结果见表2。
表2不同超声时间的对比
结果表明，超声提取60min以上，样品中腺苷已基本提取完全，即使延长提取时间，样品中腺苷的含量也不会继续增加。因此选择60分钟为超声提取时间。
3.6空白试验
取处方中不含发酵虫草菌粉的其它药材按照说明书记载的制备方法制成阴性样品，再按照说明书中记载的供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液，依说明书记载的含量测定方法试验，结果阴性无干扰。(见图5)
3.7线性关系考察
精密称取腺苷对照品适量，加流动相制成每1ml含0.05055mg的溶液，精密吸取上述溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml、6ml分别置10ml容量瓶中，加流动相定容至刻度，摇匀，分别精密吸取上不同浓度的对照品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪中，按照说明书记载的色谱分析条件，测定峰面积，结果见表3。
表3线性关系考察结果
以峰面积积分值为纵坐标，腺苷进样量为横坐标绘制标准曲线(见图6)，计算得回归方程：
Y＝3558243.041X+1452.26667，r＝0.99998
表明腺苷进样量在0.05055μg-0.30330μg范围内具有良好线性关系。
3.8精密度试验
精密吸取腺苷对照品溶液(25.275μg/ml)10μl，连续进样6次，测定峰面积(见表4)，RSD＝0.54％，表明本法精密度良好。
表4精密度试验结果
3.9稳定性试验
取所述胶囊剂内容物约1g，精密称定，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，精密吸取所述供试品溶液10μl，注入液相色谱仪，每隔一定时间进样测定一次，在24小时内，峰面积基本保持一致，RSD＝0.51％。表明腺苷在所述流动相溶液中24小时内稳定，结果见表5。
表5稳定性试验结果
3.10重复性试验
分别取同一批所述胶囊剂内容物6份，精密称定，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定腺苷的含量，RSD＝1.44％，表明本法重复性良好，结果见表6。
表6重复性试验结果
3.11加样回收率试验
取同一批已知含量的所述胶囊剂内容物(0.3693mg/粒)5份，每份约0.5g，精密称定，分别加入腺苷对照品适量，按照说明书记载的方法制成供试品溶液，在说明书记载的色谱条件下，测定腺苷的含量，计算回收率，平均回收率为97.88％，RSD＝2.38％，表明本法回收率良好，结果见表7。
表7回收率试验结果
附图说明
图1是枸杞子薄层鉴别，其中1为阴性样品，2为枸杞子对照药材，3、4、5为三批样品
图2是发酵虫草菌粉薄层鉴别，其中1为阴性样品，2、3、4为三批样品，5为腺苷对照品
图3是腺苷对照品溶液HPLC图谱
图4是所述胶囊剂供试品溶液HPLC图谱
图5是阴性样品溶液HPLC图谱
图6是腺苷标准品溶液标准曲线图
具体实施方式
下述实施例均能实现上述实验例的效果，但本发明并不限于所述实施例。
实施例1本发明胶囊剂
熟地黄417g 炒杜仲333g 枸杞子333g 女贞子333g
炒菟丝子500g 炒山药417g 茯苓333g 发酵虫草菌粉83g
莲子250g 芡实333g 煅牡蛎110g
熟地黄、炒菟丝子、枸杞子、炒杜仲、女贞子、炒山药、茯苓、莲子和芡实，加水煎煮二次，每次加水5倍量，每次40分钟，合并煎液，滤过，浓缩60℃相对密度1.15的清膏，加乙醇使含醇量达到60％，搅拌，静置48小时，取上清液，药渣甩干，合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃相对密度1.35的稠膏，干燥，粉碎，过60目筛，加入粉碎过60目筛的发酵虫草菌粉和粉碎过100目筛的煅牡蛎粉，搅拌均匀，加入胶囊，制成1000粒，每粒装0.33g，即得。
服用方法：口服，一次3-4粒，一天三次。
每1g所述中药复方胶囊剂内容物折算成原料药量，相当于10.43g原料药。
实施例2本发明片剂
熟地黄600g 炒杜仲400g 枸杞子450g 女贞子400g
炒菟丝子700g 炒山药550g 茯苓450g 发酵虫草菌粉120g
莲子350g 芡实450g 煅牡蛎165g
熟地黄、炒菟丝子、枸杞子、炒杜仲、女贞子、炒山药、茯苓、莲子和芡实，加水煎煮二次，每次加水5倍量，每次40分钟，合并煎液，滤过，浓缩至60℃相对密度1.15的清膏，加乙醇使含醇量达到60％，搅拌，静置48小时，取上清液，药渣甩干，合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃相对密度1.35的稠膏，干燥，粉碎，过60目筛，加入粉碎过60目筛的发酵虫草菌粉和粉碎过100目筛的煅牡蛎粉，加入常规辅料，制成颗粒，干燥，整粒，压制成2000片，0.3g/片，一次4-5片，一天三次；或压制成1000片，0.6g/片，一次2-3片，一天三次。
每1g所述中药片剂折算成原料药量，相当于7.725g原料药。
实施例3本发明颗粒剂
熟地黄500g 炒杜仲300g 枸杞子450g 女贞子300g
炒菟丝子750g 炒山药550g 茯苓550g 发酵虫草菌粉100g
莲子200g 芡实250g 煅牡蛎165g
熟地黄、炒菟丝子、枸杞子、炒杜仲、女贞子、炒山药、茯苓、莲子和芡实，加水煎煮二次，每次加水5倍量，每次40分钟，合并煎液，滤过，浓缩至60℃相对密度1.15的清膏，加乙醇使含醇量达到60％，搅拌，静置48小时，取上清液，药渣甩干，合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃相对密度1.35的稠膏，干燥，粉碎，过60目筛，加入粉碎过60目筛的发酵虫草菌粉和粉碎过100目筛的煅牡蛎粉，加入常规辅料，制成颗粒，干燥，整粒，装袋，每袋1.5g。一次一袋，一天三次。
每1g所述中药颗粒剂折算成原料药量，相当于8.03g原料药。
实施例4本发明浓缩丸剂
熟地黄250g 炒杜仲150g 枸杞子150g 女贞子150g
炒菟丝子320g 炒山药250g 茯苓150g 发酵虫草菌粉45g
莲子125g 芡实150g 煅牡蛎65g
熟地黄、炒菟丝子、枸杞子、炒杜仲、女贞子、炒山药、茯苓、莲子和芡实，加水煎煮二次，每次加水5倍量，每次40分钟，合并煎液，滤过，浓缩至60℃相对密度1.15的清膏，加乙醇使含醇量达到60％，搅拌，静置48小时，取上清液，药渣甩干，合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃相对密度1.35的稠膏，干燥，粉碎，过60目筛，加入粉碎过60目筛的发酵虫草菌粉和粉碎过100目筛的煅牡蛎粉，加入常规辅料，制成1000粒浓缩丸，每丸重0.2g。一次6-8丸，一天三次。
每1g所述中药浓缩丸折算成原料药量，相当于9.025g原料药。
实施例5实施例1制备的本发明胶囊剂含量检测方法
【鉴别】照中国药典2000年版一部附录VI B薄层色谱法
I、取所述胶囊剂内容物5g，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加热水10ml使溶解，放冷，加稀醋酸调PH至5-6，用乙酸乙酯振摇提取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
II、取所述胶囊剂内容物2g，加50％乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取腺苷对照品，加50％乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一含4％磷酸氢钠羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶6∶0.3∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】砷盐依照中国药典2005年版一部附录IX F砷盐检查法第一法检查
(1)标准砷溶液的制备
称取三氧化二砷0.132g，置1000ml容量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；
临用前，精密吸取贮备液10ml，置1000ml容量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml相当于1μg的As；
(2)标准砷斑的制备
精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得；
(3)测定法
精密称定约0.4g所述胶囊剂内容物，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，与标准砷斑比较，不得深于标准砷斑；
0.4g所述胶囊剂内容物含砷量不得超过2ppm。
【含量测定】
总钙量
取所述胶囊剂内容物1g，混匀，精密称定约0.3g所述胶囊内容物，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，加稀盐酸10ml，加热搅拌溶解，完全转移至锥形瓶中，加水10ml，加甲基红指示液1滴，加氨试液使溶液由红色变成微黄色，加新配制的20％三乙醇胺溶液10ml，得反应液I；另取水10ml，加氨-PH＝10.0氯化铵缓冲液10ml、稀硫酸镁试剂2滴与铬黑T指示剂少许，滴加0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液至溶液显纯蓝色，加入所述反应液I，摇匀，用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液滴定至溶液自紫红色变成纯蓝色，记录滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积；根据每1ml0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠相当于2.004mg钙，以及滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积，计算即得。
每粒所述胶囊剂含总钙量不得少于45.0mg。
腺苷照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9∶1的PH＝6.5磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相，检测波长为260nm，理论塔板数按腺苷峰计算应不低于2000，腺苷峰与相邻峰的分离度大于1.5；其中所述PH＝6.5磷酸盐缓冲液由0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5ml混合得到。
对照品溶液的制备：精密称取腺苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取所述胶囊剂内容物3g，研细，称取细粉约1g，精密称定，置具50ml容量瓶中，加90％甲醇适量，密塞，超声处理60分钟，放冷，加90％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml置水浴上蒸至近干，加流动相溶解，移至25ml容量瓶，加流动相至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
每粒所述胶囊剂含腺苷C10H13N5O4，不得少于0.16mg。
实施例6实施例2制备的本发明所述片剂的含量检测方法
【鉴别】照中国药典2000年版一部附录VI B薄层鉴别法
I、取相当于原料药52g的本发明所述片剂，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加热水10ml使溶解，放冷，加稀醋酸调PH至5-6，用乙酸乙酯振摇提取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
II、取相当于原料药21g的本发明所述片剂，研细，加50％乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取腺苷对照品，加50％乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一含4％磷酸氢钠羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶6∶0.3∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】砷盐依照中国药典2005年版一部附录IX F砷盐检查法第一法检查
(1)标准砷溶液的制备
称取三氧化二砷0.132g，置1000ml容量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；
临用前，精密吸取贮备液10ml，置1000ml容量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml相当于1μg的As；
(2)标准砷斑的制备
精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得；
(3)测定法
精密称定约相当于原料药4.172g的本发明所述片剂，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，置A瓶中，加盐酸(还是稀盐酸？)5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，与标准砷斑比较，不得深于标准砷斑；
相当于原料药4.17g的所述本发明片剂含砷量不得超过2ppm。
【含量测定】
总钙量
取相当于煅牡蛎0.3g的本发明所述片剂，研细，混匀，精密称定约相当于煅牡蛎0.1g的本发明所述片剂，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，加稀盐酸10ml，加热搅拌溶解，完全转移至锥形瓶中，加水10ml，加甲基红指示液1滴，加氨试液使溶液由红色变成微黄色，加新配制的20％三乙醇胺溶液10ml，得反应液I；另取水10ml，加氨-PH＝10.0氯化铵缓冲液10ml、稀硫酸镁试剂2滴与铬黑T指示剂少许，滴加0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液至溶液显纯蓝色，加入所述反应液I，摇匀，用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液滴定至溶液自紫红色变成纯蓝色，记录滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积；根据每1ml0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠相当于2.004mg钙，以及滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积，计算即得。
相当于原料药3.44g的本发明所述片剂含总钙量不得少于45.0mg。
腺苷照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9∶1的PH＝6.5磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相，检测波长为260nm，理论塔板数按腺苷峰计算应不低于2000；其中所述PH＝6.5磷酸盐缓冲液由0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5ml混合得到。
对照品溶液的制备：精密称取腺苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取相当于原料药34g的所述中药复方制剂，研细，称取约相当于原料药10g的细粉，精密称定，置具50ml容量瓶中，加90％甲醇适量，密塞，超声处理60分钟，放冷，加90％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml置水浴上蒸至近干，加流动相溶解，移至25ml容量瓶，加流动相至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
相当于原料药3.44g的本发明所述片剂含腺苷C10H13N5O4，不得少于0.16mg。实施例7实施例3制备的本发明颗粒剂的含量检测方法
【鉴别】照中国药典2000年版一部附录VI B薄层鉴别法
I、取相当于原料药52g的本发明所述颗粒剂，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加热水10ml使溶解，放冷，加稀醋酸调PH至5-6，用乙酸乙酯振摇提取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
II、取相当于原料药21g的本发明所述颗粒剂，研细，加50％乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取腺苷对照品，加50％乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一含4％磷酸氢钠羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶6∶0.3∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【含量测定】
总钙量
取相当于煅牡蛎0.3g的本发明所述颗粒剂，研细，混匀，精密称定约相当于煅牡蛎0.1g的本发明所述颗粒剂，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，加稀盐酸10ml，加热搅拌溶解，完全转移至锥形瓶中，加水10ml，加甲基红指示液1滴，加氨试液使溶液由红色变成微黄色，加新配制的20％三乙醇胺溶液10ml，得反应液I；另取水10ml，加氨-PH＝10.0氯化铵缓冲液10ml、稀硫酸镁试剂2滴与铬黑T指示剂少许，滴加0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液至溶液显纯蓝色，加入所述反应液I，摇匀，用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液滴定至溶液自紫红色变成纯蓝色，记录滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积；根据每1ml0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠相当于2.004mg钙，以及滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积，计算即得。
相当于原料药3.44g的本发明所述颗粒剂含总钙量不得少于45.0mg。
腺苷照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9∶1的PH＝6.5磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相，检测波长为260nm，理论塔板数按腺苷峰计算应不低于2000；其中所述PH＝6.5磷酸盐缓冲液由0.0lmol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.0lmol/L磷酸氢二钠31.5ml混合得到。
对照品溶液的制备：精密称取腺苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取相当于原料药34g的所述中药复方制剂，研细，称取约相当于原料药10g的细粉，精密称定，置具50ml容量瓶中，加90％甲醇适量，密塞，超声处理60分钟，放冷，加90％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml置水浴上蒸至近干，加流动相溶解，移至25ml容量瓶，加流动相至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
相当于原料药3.44g的本发明所述颗粒剂含腺苷C10H13N5O4，不得少于0.16mg。实施例8实施例4制备的本发明浓缩丸剂的含量控制方法
【鉴别】照中国药典2000年版一部附录VI B薄层鉴别法
I、取相当于原料药52g的所述浓缩丸剂，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加热水10ml使溶解，放冷，加稀醋酸调PH至5-6，用乙酸乙酯振摇提取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
II、取相当于原料药21g的所述浓缩丸剂，研细，加50％乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取腺苷对照品，加50％乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μ1，分别点于同一含4％磷酸氢钠羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶6∶0.3∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
【检查】砷盐依照中国药典2005年版一部附录IX F砷盐检查法第一法检查
(1)标准砷溶液的制备
称取三氧化二砷0.132g，置1000ml容量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；
临用前，精密吸取贮备液10ml，置1000ml容量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml相当于1μg的As；
(2)标准砷斑的制备
精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得；
(3)测定法
精密称定约相当于原料药4.172g的所述浓缩丸剂，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，置A瓶中，加盐酸(还是稀盐酸？)5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，与标准砷斑比较，不得深于标准砷斑；
相当于原料药4.17g的所述浓缩丸剂含砷量不得超过5ppm。
【含量测定】
腺苷照高效液相色谱法(中国药典2000年版一部附录VI D)测定
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9∶1的PH＝6.5磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相，检测波长为260nm，理论塔板数按腺苷峰计算应不低于2000；其中所述PH＝6.5磷酸盐缓冲液由0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5ml混合得到。
对照品溶液的制备：精密称取腺苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得。
供试品溶液的制备：取相当于原料药34g的所述中药复方制剂，研细，称取约相当于原料药10g的细粉，精密称定，置具50ml容量瓶中，加90％甲醇适量，密塞，超声处理60分钟，放冷，加90％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml置水浴上蒸至近干，加流动相溶解，移至25ml容量瓶，加流动相至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得。
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
相当于原料药3.44g的所述浓缩丸剂含腺苷C10H13N5O4，不得少于0.16mg。
Claims (10)
1.一种原料药组成如下的具有益肾壮骨、补血益精作用的中药复方制剂的含量检测方法，熟地黄200-600重量份，炒杜仲150-450重量份，枸杞子150-450重量份，女贞子150-450重量份，炒菟丝子250-750重量份，炒山药200-600重量份，茯苓150-450重量份，发酵虫草菌粉40-120重量份，莲子125-375重量份，芡实150-450重量份，煅牡蛎55-165重量份；
所述中药复方制剂是指：取上述原料药，按常规工艺，加入常规辅料制备成临床上可以接受的任一种制剂，其特征在于所述含量检测方法如下：
I、取相当于原料药52g的所述中药复方制剂，研细，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加热水10ml使溶解，放冷，加稀醋酸调pH至5-6，用乙酸乙酯振摇提取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
II、取相当于原料药21g的所述中药复方制剂，研细，加50％乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取腺苷对照品，加50％乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一以0.1M磷酸氢二钠和0.5％羧甲基纤维素钠等体积混合为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶6∶0.3∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点；
高效液相色谱法含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9∶1的pH＝6.5磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相，检测波长为260nm，理论塔板数按腺苷峰计算应不低于2000；其中所述pH＝6.5磷酸盐缓冲液由0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5ml混合得到；
对照品溶液的制备：精密称取腺苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取相当于原料药34g的所述中药复方制剂，研细，称取相当于原料药10g的细粉，精密称定，置具50ml容量瓶中，加90％甲醇适量，密塞，超声处理60分钟，放冷，加90％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml置水浴上蒸至近干，加流动 相溶解，移至25ml容量瓶，加流动相至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
相当于原料药3.44g的所述中药复方制剂含腺苷C10H13N5O4，不得少于0.16mg。
2.根据权利要求1所述的中药复方制剂的含量检测方法，其特征在于所述的检测方法还包括如下的含量测定：
取相当于煅牡蛎0.3g的所述中药复方制剂，研细，混匀，精密称定相当于煅牡蛎0.1g的所述中药复方制剂，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，加稀盐酸10ml，加热搅拌溶解，完全转移至锥形瓶中，加水10ml，加甲基红指示液1滴，加氨试液使溶液由红色变成微黄色，加新配制的20％三乙醇胺溶液10ml，得反应液I；另取水10ml，加氨-pH＝10.0氯化铵缓冲液10ml、稀硫酸镁试剂2滴与铬黑T指示剂少许，滴加0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液至溶液显纯蓝色，加入所述反应液I，摇匀，用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液滴定至溶液自紫红色变成纯蓝色，记录滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积；根据每1ml 0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠相当于2.004mg钙，以及滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积，计算即得；
相当于原料药3.44g的所述中药复方制剂含总钙量不得少于45.0mg。
3.根据权利要求1所述的中药复方制剂的含量检测方法，其特征在于所述的含量检测方法还包括如下的按照中国药典2005年版第一部附录IX F砷盐检查法的第一法进行的砷盐检查：
(1)标准砷溶液的制备
称取三氧化二砷0.132g，置1000ml容量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；
临用前，精密吸取贮备液10ml，置1000ml容量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml相当于1μg的As；
(2)标准砷斑的制备
精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得；
(3)测定法
精密称定相当于原料药4.172g的所述中药复方制剂，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g， 立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，与标准砷斑比较，不得深于标准砷斑；
相当于原料药4.17g的所述中药复方制剂含砷量不得超过2ppm。
4.根据权利要求2所述的中药复方制剂的含量检测方法，其特征在于所述的检测方法还包括如下的按照中国药典2005年版附录IX F砷盐检查法第一法进行的砷盐检查：
(1)标准砷溶液的制备
称取三氧化二砷0.132g，置1000ml容量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；
临用前，精密吸取贮备液10ml，置1000ml容量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml相当于1μg的As；
(2)标准砷斑的制备
精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得；
(3)测定法
精密称定相当于原料药4.172g的所述中药复方制剂，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，与标准砷斑比较，不得深于标准砷斑；
相当于原料药4.17g的所述中药复方制剂含砷量不得超过2ppm。
5.根据权利要求1所述的中药复方制剂的含量检测方法，其特征在于所述的中药复方制剂是原料药组成如下的胶囊剂：
熟地黄417重量份，炒杜仲333重量份，枸杞子333重量份，女贞子333重量份，炒菟丝子500重量份，炒山药417重量份，茯苓333重量份，发酵虫草菌粉83重量份，莲子250重量份，芡实333重量份，煅牡蛎110重量份；
所述胶囊剂通过如下方法制备：
所述重量份的熟地黄、炒菟丝子、枸杞子、炒杜仲、女贞子、炒山药、茯苓、莲子和芡实，加水煎煮二次，每次加水5倍量，每次40分钟，合并煎液，滤过，浓缩至60℃相对密度1.15的清膏，加乙醇使含醇量达到60％，搅拌，静置48小时，取上清液，药渣甩干，合并滤液，回收乙醇，浓缩至60℃相对密度1.35的稠膏，干燥，粉碎，过60目筛，加入粉碎过60目筛的发酵虫草菌粉和粉碎过100目筛的煅牡蛎粉，搅拌均匀，加入胶囊，制成1000 粒，每粒装0.33g，即得。
6.根据权利要求5所述的中药复方制剂的含量检测方法，其特征在于所述胶囊剂的含量检测方法包括如下方法
I、取所述胶囊剂内容物5g，加无水乙醇30ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加热水10ml使溶解，放冷，加稀醋酸调pH至5-6，用乙酸乙酯振摇提取2次，第一次15ml，第二次10ml，合并乙酸乙酯提取液，浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取枸杞子对照药材0.5g，加水35ml，加热煮沸15分钟，放冷，滤过，滤液用乙酸乙酯15ml振摇提取，提取液浓缩至1ml，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取供试品溶液15μl，对照药材溶液10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以体积比为3∶2∶1的乙酸乙酯-三氯甲烷-甲醇为展开剂，展开，取出，晾干，置365nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点；
II、取所述胶囊剂内容物2g，加50％乙醇10ml，超声处理30分钟，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液；另取腺苷对照品，加50％乙醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液；照薄层色谱法试验，吸取上述两种溶液各1μl，分别点于同一以0.1M磷酸氢二钠和0.5％羧甲基纤维素钠等体积混合为粘合剂的硅胶GF254薄层板上，以体积比为8∶2∶6∶0.3∶0.2的三氯甲烷-乙酸乙酯-异丙醇-水-浓氨溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置254nm紫外灯下检视，供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
7.根据权利要求6所述的中药复方制剂的含量检测方法，其特征在于所述胶囊剂的含量检测方法还包括如下的高效液相色谱法的含量测定：
色谱条件与系统适用性试验：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为9∶1的pH＝6.5磷酸盐缓冲液-甲醇为流动相，检测波长为260nm，理论塔板数按腺苷峰计算应不低于2000，腺苷峰与相邻峰的分离度大于1.5；其中所述pH＝6.5磷酸盐缓冲液由0.01mol/L磷酸二氢钠68.5ml与0.01mol/L磷酸氢二钠31.5ml混合得到；
对照品溶液的制备：精密称取腺苷对照品适量，加流动相制成每1ml含20μg的溶液，摇匀，即得；
供试品溶液的制备：取所述胶囊剂内容物3g，研细，称取细粉1g，精密称定，置具50ml容量瓶中，加90％甲醇适量，密塞，超声处理60分钟，放冷，加90％甲醇至刻度，摇匀，滤过，精密吸取续滤液25ml置水浴上蒸至近干，加流动相溶解，移至25ml容量瓶，加流动相至刻度，摇匀，用孔径0.45μm的微孔滤膜滤过，取滤液，即得；
测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
每粒所述胶囊剂含腺苷C10H13N5O4，不得少于0.16mg。
8.根据权利要求6或7所述的中药复方制剂的含量检测方法，其特征在于所述的胶囊 剂的含量检测方法还包括如下的含量测定：
取所述胶囊剂内容物1g，混匀，精密称定0.3g所述胶囊剂内容物，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，加稀盐酸10ml，加热搅拌溶解，完全转移至锥形瓶中，加水10ml，加甲基红指示液1滴，加氨试液使溶液由红色变成微黄色，加新配制的20％三乙醇胺溶液10ml，得反应液I；另取水10ml，加氨水-pH10.0的氯化铵缓冲液10ml、稀硫酸镁试剂2滴与铬黑T指示剂少许，滴加0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液至溶液显纯蓝色，加入所述反应液I，摇匀，用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液滴定至溶液自紫红色变成纯蓝色，记录滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积；根据每1ml 0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠相当于2.004mg钙，以及滴定所用0.05mol/L乙二胺四醋酸二钠液的体积，计算即得；
每粒所述胶囊剂含总钙量不得少于45.0mg。
9.根据权利要求6或7所述的中药复方制剂的含量检测方法，其特征在于所述的胶囊剂的含量检测方法还包括如下的按照中国药典2005年版附录IX F砷盐检查法第一法进行的砷盐检查：
(1)标准砷溶液的制备
称取三氧化二砷0.132g，置1000ml容量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；
临用前，精密吸取贮备液10ml，置1000ml容量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml相当于1μg的As；
(2)标准砷斑的制备
精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得；
(3)测定法
精密称定0.4g所述胶囊剂内容物，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，与标准砷斑比较，不得深于标准砷斑；
0.4g所述胶囊剂内容物含砷量不得超过5ppm。
10.根据权利要求8所述的中药复方制剂的含量检测方法，其特征在于所述的胶囊剂的含量检测方法还包括如下的按照中国药典2005年版附录IX F砷盐检查法第一法进行的砷盐 检查：
(1)标准砷溶液的制备
称取三氧化二砷0.132g，置1000ml容量瓶中，加20％氢氧化钠溶液5ml溶解后，用适量稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，作为贮备液；
临用前，精密吸取贮备液10ml，置1000ml容量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀，即得每1ml相当于1μg的As；
(2)标准砷斑的制备
精密量取标准砷溶液2ml，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，即得；
(3)测定法
精密称定0.4g所述胶囊剂内容物，置瓷坩埚内，加硫酸0.5-1.0ml湿润，低温加热至硫酸蒸气除尽，在700-800℃炽灼至灰化，放冷，置A瓶中，加盐酸5ml与水21ml，再加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒2g，立即将导气管C密塞于A瓶上，并将A瓶置30℃水浴中，反应45分钟，取出溴化汞试纸，与标准砷斑比较，不得深于标准砷斑；
0.4g所述胶囊剂内容物含砷量不得超过5ppm。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101023572A CN101822765B (zh) | 2010-01-28 | 2010-01-28 | 一种益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的含量检测方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN2010101023572A CN101822765B (zh) | 2010-01-28 | 2010-01-28 | 一种益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的含量检测方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101822765A CN101822765A (zh) | 2010-09-08 |
| CN101822765B true CN101822765B (zh) | 2012-02-29 |
Family
ID=42687070
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN2010101023572A Active CN101822765B (zh) | 2010-01-28 | 2010-01-28 | 一种益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的含量检测方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101822765B (zh) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN106706378A (zh) * | 2015-11-17 | 2017-05-24 | 浙江泛亚生物医药股份有限公司 | 一种用于蝉花检测的样品制备方法 |
| CN106072537A (zh) * | 2016-06-18 | 2016-11-09 | 江苏阜丰生物科技有限公司 | 一种供肿瘤患者食用的全营养配方食品 |
| CN110763642B (zh) * | 2018-07-27 | 2023-07-07 | 九芝堂股份有限公司 | 一种中药制剂的检测方法 |
| CN109645476A (zh) * | 2019-02-14 | 2019-04-19 | 王书敏 | 一种虫草钙压片组合物及其制备方法 |
| CN112147238B (zh) * | 2019-06-26 | 2021-11-26 | 上海医药工业研究院 | 茯苓中核苷含量的检测方法 |
| CN111024877A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-04-17 | 扬州市食品药品检验检测中心 | 益肾壮骨丸中的中药成分检测方法 |
| CN111249416A (zh) * | 2020-03-31 | 2020-06-09 | 江西九华药业有限公司 | 一种复方中药组合物及其制备方法 |
| CN112834650B (zh) * | 2021-01-12 | 2022-10-21 | 湖南天劲制药有限责任公司 | 一种强骨生血口服液的质量检测方法 |
-
2010
- 2010-01-28 CN CN2010101023572A patent/CN101822765B/zh active Active
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101822765A (zh) | 2010-09-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101822765B (zh) | 一种益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的含量检测方法 | |
| CN112666268A (zh) | 一种中药组合物中多种成分鉴别及含量的测定方法 | |
| CN104161847B (zh) | 一种治疗糖尿病视网膜病变的中药组合物的质量检测方法 | |
| CN109613166B (zh) | 一种首荟通便胶囊质量检测方法 | |
| CN102269751B (zh) | 六味能消制剂的检测方法 | |
| CN107991425B (zh) | 一种治疗跌打损伤的中药组合物的检测方法 | |
| CN100418563C (zh) | 一种中药制剂的质量控制方法 | |
| CN101708223A (zh) | 中药复方大青叶制剂的制备方法、质量控制方法和应用 | |
| CN101829266A (zh) | 牛黄蛇胆川贝液的质量检测方法 | |
| CN102879495B (zh) | 一种藏药组合物解毒胶囊及其制剂的质量检测方法 | |
| CN103285306A (zh) | 益气补肾的中药组合物的制备方法及检测方法 | |
| CN102552496A (zh) | 复方胃痛胶囊的质量检测方法 | |
| CN102872186B (zh) | 一种复方硫酸亚铁叶酸片的生产方法 | |
| CN101874852A (zh) | 八珍益母胶囊的质量检测方法 | |
| CN102068598B (zh) | 治疗妇女血亏月经不调的养荣百草丸的检测方法 | |
| CN102641328A (zh) | 一种补骨脂提取物及其制备和应用方法 | |
| CN110579545A (zh) | 清热宣肺的中药组合物的质量检测方法 | |
| CN102379927B (zh) | 罂粟壳浸膏和止咳片剂的制备方法 | |
| CN101884746B (zh) | 一种治疗咳喘病的胶囊剂的检测方法 | |
| CN109633003A (zh) | 一种测定远志中远志口山酮ⅲ和3,6，-二芥子酰基蔗糖含量的方法 | |
| CN102091297A (zh) | 一种肝保健药品的质量控制方法 | |
| CN100540037C (zh) | 一种小儿清肺化痰制剂的检测方法 | |
| CN101352565A (zh) | 一种活血化瘀、解毒消肿颗粒剂的质量控制方法 | |
| CN101317935B (zh) | 一种乳结泰制剂及其质量检测方法 | |
| CN102645505A (zh) | 顺气化痰颗粒中马来酸氯苯那敏含量及其均匀度测定方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 343000 No. 36 Yunzhang Road, Jizhou District, Ji'an City, Jiangxi Province Patentee after: Jiangxi New Ganjiang Pharmaceutical Co., Ltd. Address before: 343000 Jiangxi Ji'an Beimen Shanghang Jiangxi New Ganjiang Pharmaceutical Co., Ltd. Patentee before: Jiangxi Xinganjiang Pharmaceutical Co., Ltd. |