CN106706378A - 一种用于蝉花检测的样品制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种用于蝉花检测的样品制备方法，该方法包括如下步骤：取蝉花待测样品，加水提取，提取液加入甲醇；所述甲醇加入量为至甲醇含量达到20％～50％。本发明样品制备方法可用于蝉花子实体、孢子粉、菌质或上述物质的提取物或制剂检测中的样品制备，其腺苷提取率高，且稳定性好。
Description
技术领域
本发明涉及一种用于中药检测的样品制备方法，特别涉及一种用于蝉花检测的样品制备方法。
背景技术
蝉花(Isaria cicadae Miquel)属于真菌界、子囊菌门、盘菌亚门、粪壳菌纲、肉座菌目、虫草科、棒束孢属(Isaria)。
蝉花是我国名贵的中药材，是寄生在蝉(俗称“知了”)上的一种虫草菌。其药用已有1000多年历史，是我国传统的名贵药材之一，具有多方面的药用价值。主要成分有：腺苷、虫草多糖、虫草酸(甘露醇)、虫草素、尿嘧啶、甾醇、生物碱、维生素、无机盐、矿物质元素等。
蝉花具有调节人体免疫的功能，提高食欲，促进睡眠，增强自身抗病的能力。在这些成分当中，虫草多糖具有独特的生物活性，具有抗肿瘤、抗菌、抗病毒、抗辐射、抗衰老等功效，免疫调节作用成为研究开发的热点。腺苷能抑制中枢神经元的兴奋性，可以扩张冠状及周围血管、增加冠状动脉血流量、降低血压、减慢心率等作用。腺苷还具有抗血小板聚集、抗辐射和抗肿瘤等作用。不仅如此，蝉花中的活性成分ISP-1具有双向免疫调节活性，可以大大的提高器官移植手术的成功率，对患者的康复也有着明显的积极效果。
目前，国内已有一些对腺苷含量测定的报道。如《中华人民共和国药典》2010版第一部及《保健食品检验与评价技术规范》中华人民共和国卫生部2003版均有涉及，但本专利发明人在进行蝉花样品腺苷测定的验证试验时发现上述方法腺苷的提取及处理方法会导致腺苷的提取率偏低且干扰较多。因此本专利对样品的提取及处理方法等进行了改进。改进后腺苷的提取率提高数倍，不仅方法简单方便干扰较少稳定性好，而且可以适用于蝉花子实体(孢梗束)、蝉花孢子粉、蝉花菌质等蝉花各个部位及其相关制剂，结果令人满意。
发明内容
本发明的目的在于提供一种用于蝉花检测的样品制备方法。
本发明的目的还在于提供一种蝉花的检测方法。
一种用于蝉花检测的样品制备方法，该方法包括如下步骤：
A、蝉花待测样品用水提取得提取液；和
B、提取液加入甲醇。
进一步，所述蝉花待测样品为蝉花子实体、蝉花孢子粉或蝉花菌质中的任意一种，或以任意一种上述物质为原料经提取得到的提取物，或提取物经精制纯化得到的有效部位，或提取物/有效部位按常规制剂工艺制成的临床上可接受制剂。
进一步，甲醇加入量为至甲醇含量达到20％～50％(体积百分比)；更进一步，至甲醇含量达到30％～50％；更进一步，至甲醇含量达到40％～50％；更进一步，至甲醇含量达到50％；所述百分比为体积百分比。
进一步，所述加水提取方法包括加热提取、回流提取、超声提取等常规提取方法。
本发明样品制备方法可用于蝉花在常规检测方法中的样品制备，如高效液相色谱法、紫外分光光度法。
本发明还提供一种蝉花的检测方法，该方法采用高效液相色谱法，其特征在于该方法中以腺苷为对照品，供试品溶液制备方法包括如下步骤：取蝉花待测样品，加水提取，提取液加入甲醇。
进一步，所述蝉花待测样品可以是蝉花的任何部位，具体为蝉花子实体(孢梗束)、蝉花孢子粉或蝉花菌质中的任意一种，或以上述物质为原料经提取得到的提取物，或经进一步精制纯化得到的有效部位，或进一步按常规制剂工艺制成的临床上可接受制剂。
进一步，甲醇加入量为至甲醇含量达到20％～50％；更进一步，至甲醇含量达到30％～50％；更进一步，至甲醇含量达到40％～50％；更进一步，至甲醇含量达到50％；所述百分比为体积百分比。
进一步，所加述水提取方法包括加热提取、回流提取、超声提取等常规提取方法。
进一步，所述方法以乙腈-磷酸二氢盐溶剂系统为流动相，等度洗脱。
进一步，所述流动相比例为乙腈：磷酸二氢盐溶液＝5-15:85-95；更进一步，流动相比例为乙腈：磷酸二氢盐溶液＝5-10:85-90；更进一步，流动相比例为乙腈：磷酸二氢盐溶液＝5:95。
更进一步，所述磷酸二氢盐溶液浓度为0.02～0.05mol/L；更进一步，为0.04mol/L；更进一步，所述磷酸二氢盐为磷酸二氢钾或磷酸二氢钠。
进一步，所述对照品溶液的制备方法为取腺苷对照品，加甲醇水溶液制成对照品溶液；更进一步，所述甲醇水溶液浓度为20％～50％；更进一步，所述甲醇水溶液浓度为50％；更进一步，所述对照品溶液的浓度为20～30μg/mL
进一步，所述方法的检测波长为200～300nm；更进一步，检测波长为260nm。
本发明在水提液中加入一定量的甲醇，意外的发现能够增加样品的稳定性。
附图说明
图1对照品溶液色谱图
图2提取溶剂为20％乙醇的供试品溶液色谱图
图3提取溶剂为30％乙醇的供试品溶液色谱图
图4提取溶剂为40％乙醇的供试品溶液色谱图
图5提取溶剂为50％乙醇的供试品溶液色谱图
图6提取溶剂为90％乙醇的供试品溶液色谱图
图7提取溶剂为0.5％磷酸水溶液的供试品溶液色谱图
图8提取溶剂为25％甲醇水溶液的供试品溶液色谱图(当日测定)
图9提取溶剂为25％甲醇水溶液的供试品溶液色谱图(隔夜测定)
图10提取溶剂为50％甲醇水溶液的供试品溶液色谱图
图11提取溶剂为75％甲醇水溶液的供试品溶液色谱图
图12提取溶剂为100％甲醇水溶液的供试品溶液色谱图
图13提取溶剂为水的供试品溶液色谱图
图14标准曲线图
图15实施例8蝉花子实体的色谱图
图16实施例8蝉花孢子粉的色谱图
图17实施例8蝉花菌质的色谱图
图18～26实施例9、13～20的色谱图
实验例1提取溶剂的考察
1、仪器和材料
1.1仪器
Waters Symmetry C185μm 4.6*250mm；
Waters高效液相色谱仪(1525二元高压泵；2998二极管阵列检测器；2707自动进样器；Empower 2操作软件)。
SB25-12DT超声波清洗仪(宁波新芝生物科技股份有限公司)；
AL104型电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司)；
Millipore Simplicity超纯水仪(美国Millipore公司)；
H1650台式高速离心机(湘仪离心机仪器有限公司)；
1.2试剂
乙腈(HPLC级，4L/瓶，LOT116824，Fisher)；
甲醇(HPLC级，4L/瓶，LOT120511，Fisher)；
甲醇(AR，500mL/瓶，20120627，国药集团化学试剂有限公司)；
无水乙醇(AR，500mL/瓶，20120111，国药集团化学试剂有限公司)；
磷酸(AR，500mL/瓶，T20100416，国药集团化学试剂有限公司)；
磷酸二氢钾(AR，500g/瓶，F20100413，国药集团化学试剂有限公司)；
腺苷标准品(20mg/支，110879-200202，中国食品药品检定研究院)；
屈臣氏蒸馏水(4.5L/瓶，20111116，上海加州斯帕克林饮用水有限公司)；
1.3实验材料
蝉花子实体[所述蝉花已在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)注册保藏，保藏号为CGMCC No.3453]。
2、方法与结果
色谱及检测条件
流动相：乙腈-0.04mol/L磷酸二氢钾(5:95)等度洗脱；进样量：10μL；流速：1mL/min；柱温：35℃；检测波长：260nm。
对照品溶液的制备：取腺苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇水溶液制成25μg/mL的溶液，即得。
2.1提取溶剂考察：
供试品溶液的制备：取蝉花子实体粉末0.2g，精密称定，分别以如下试剂作为提取溶剂：①乙醇水溶液(浓度分别为20％、30％、40％、50％和90％)、②0.5％磷酸水溶液、③甲醇水溶液(浓度分别为25％、50％、75％、100％)、④纯水，精密加入以上溶剂10mL，25℃超声(40KHz)处理30分钟，取出，10000转/分钟离心3分钟，取上清液过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
测定法：分别吸取供试品溶液，注入液相色谱仪，测定。
结果见表1，对照品溶液及各供试品溶液色谱图见图1～13。
表1不同溶剂提取结果
①乙醇水溶液：只有20％乙醇水溶液能够检测出腺苷峰，但3小时内样品稳定性RSD％为5.7％>3％，说明样品稳定性不好；30％、40％、50％和90％乙醇水溶液，色谱图上未见明确的腺苷峰，说明30％以上的乙醇水溶液提取不出腺苷；表明乙醇水溶液不适宜作为提取溶剂；
②0.5％磷酸水溶液：腺苷色谱峰处出现有肩峰，峰的分离度不好，所以0.5％磷酸水溶液不适合做提取溶剂；
③甲醇水溶液：25％甲醇提取液中腺苷含量较高(2.09mg/g)，但稳定性不好，放置一夜含量会增大一倍；50％甲醇提取液腺苷含量较低(0.26mg/g)；75％和100％甲醇提取液腺苷峰几乎看不到，说明甲醇水溶液不适合作为提取溶剂；
④纯水：以纯水为溶剂可使供试品中的腺苷提取较为充分，腺苷含量高(1.205mg/g)，但供试品水溶液放置1.5h后腺苷含量明显增加(1.457mg/g)，其变化率高达20.9％。
上述结果表明，乙醇、磷酸水溶液和甲醇均不适合作为提取溶剂，最佳提取溶剂是纯水，但纯水的稳定性差，需要采取措施解决溶液稳定性问题。
2.2水提取后稳定性考察
发明人意外发现在水提液中加入一定量的甲醇，能够增加样品的稳定性。
供试品溶液制备：用纯水超声提取腺苷，30min后立即加入甲醇稀释，分别使甲醇最终浓度为50％和40％，混匀，过滤，取续滤液，即得。同一份溶液间隔12小时重复进样。
结果见表2。
表2甲醇稀释稳定性实验
上述结果表明，加入甲醇后，样品的稳定性大大提高，12h变化率不大，说明甲醇可使溶液稳定，同时甲醇可以去除水溶液中的糖和蛋白，减少样品溶液对色谱柱的损坏。此外，40％甲醇溶液经0.2μm膜滤过后，4℃放置3天会有沉淀析出，而在50％甲醇溶液中未出现此现象，因此甲醇的浓度以50％为佳。经30h稳定性验证，RSD％为1.7％，表明稳定性良好。
实验例2方法学考察
1、仪器和材料
同实验例1。
2、方法与结果
2.1色谱及检测条件
流动相：乙腈-0.04mol/L磷酸二氢钾(5:95)等度洗脱；进样量：10μL；流速：1mL/min；柱温：35℃；检测波长：260nm。
2.2对照品溶液的制备：取腺苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇水溶液制成25μg/mL的溶液，即得。
2.3供试品溶液的制备：取0.2g蝉花子实体粉末，精密称定，置20mL具塞试管，精密加入5mL蒸馏水，超声(40KHz)处理30分钟，取出，立即精密加入5mL甲醇，混匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
2.4测定法：分别吸取相同体积的对照品与供试品溶液，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图。
2.5精密度考察
2.5.1日内精密度
精密称量0.4g、0.5g、0.6g样品粉末各4份，共12份，按2.3项下制备供试品溶液并测定腺苷含量。用3个浓度12个测定结果评价日内精密度。12个测定结果平均值1.065mg/g，RSD％为1.92％＜2％，说明日内重复性良好。
2.5.2日间精密度
精密称量0.4g、0.5g、0.6g样品粉末各3份，按2.3项下制备供试品溶液并测定腺苷含量，重复做3次(非连续3天，但在半月内)。用3个浓度27个测定结果评价3次日间精密度。27个测定结果平均值1.088mg/g，RSD％为1.84％＜2％，说明日间重复性良好。
2.6稳定性考察
精密称量0.4g、0.5g、0.6g样品粉末各3份，共9份，按2.3项下制备供试品溶液，分别于室温放置0小时、60小时和7天后，测定腺苷含量，用3个浓度的27个测定结果评价供试品溶液稳定性。27个测定结果结果的平均值1.110mg/g，RSD％为2.0％，说明溶液在7天内稳定性良好。
2.7线性关系考察
精密称量腺苷标准品21.0mg，用50％甲醇溶液溶解、稀释、定容至20mL，得1050μg/mL标准溶液，分别精密移取适量1050μg/mL标准溶液，加50％甲醇溶液分别配制成5.25μg/mL、10.5μg/mL、21.0μg/mL、31.5μg/mL、42.0μg/mL、52.5μg/mL、78.75μg/mL和105.0μg/mL对照品溶液，注入高效液相色谱仪测定峰面积积分值。以对照品溶液浓度(μg/mL)为横坐标X，峰面积积分值(微伏·秒)为纵坐标Y，绘制标准曲线(见图14)，得回归方程为Y＝3.04×104X-5.62×103，R2＝0.9999，说明在5.25μg/mL～105μg/mL范围内，腺苷溶液浓度与峰面积积分值呈良好的线性关系。
2.8加样回收率
精密称量腺苷标准品16.3mg，用50％甲醇溶解、稀释、定容至20mL，得0.815mg/mL腺苷标准溶液。精密移取0.815mg/mL腺苷标准溶液0.5mL，用50％甲醇溶解、稀释、定容至20mL，得20.4μg/mL腺苷标准溶液。
精密称量0.4g、0.5g、0.6g样品粉末各3份，共9份，按供试品溶液制备方法制备3个浓度的供试品溶液，9份溶液各精密移取1mL，精密加入20.4μg/mL腺苷标准溶液1mL，混匀，测定腺苷含量。取1.065mg/g为供试品已知腺苷含量，根据回收率计算公式计算高中低3个浓度溶液的回收率。
精密称量0.4g、0.5g、0.6g样品粉末各3份，共9份，每份加入0.815mg/mL腺苷标准溶液0.65mL，按待验证方法测定腺苷含量。取1.065mg/g为供试品已知腺苷含量，根据回收率计算公式计算高中低3个浓度的回收率。
(C-A)/B*100％
式中A：供试品所含被测成分量；
B：加入对照品量；
C：实测值。
供试品溶液加样回收率结果：低浓度平均回收率103.0％，中浓度平均回收率99.8％，高浓度平均回收率100.3％，总平均回收率101.0％，RSD％为1.71％，回收率在99％～103％，说明不考虑样品提取过程的情况下，测定方法准确度良好。
供试品加样回收率结果：低浓度平均回收率99.2％，中浓度平均回收率102.2％，高浓度平均回收率98.0％，总平均回收率99.8％，RSD％为2.16％，回收率在98％～102％，说明待验证方法准确度较好。
上述验证表明，本发明腺苷含量测定方法，适用于蝉花子实体腺苷含量测定，方法准确、可靠，能获得被检测样品的实际数据和结果。
具体实施方式
实施例1
蝉花检测的样品制备：
取蝉花子实体粉末0.2g，精密称定，置20mL具塞试管，精密加入5mL蒸馏水，超声(40KHz)处理30分钟，取出，立即精密加入5mL甲醇，混匀，过0.22μm微孔滤膜，取续滤液，即得。
实施例2
与实施例1样品制备方法基本相同，区别在于精密加入4.5mL甲醇，提取方法为回流提取30min。
实施例3
与实施例1样品制备方法基本相同，区别在于精密加入4mL甲醇。
实施例4
与实施例1样品制备方法基本相同，区别在于精密加入3mL甲醇。
实施例5
与实施例1样品制备方法基本相同，区别在于精密加入2mL甲醇。
实施例6
与实施例1样品制备方法基本相同，区别在于样品原料为蝉花孢子粉。
实施例7
与实施例1样品制备方法基本相同，区别在于样品原料为蝉花菌质。
实施例8
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量：
色谱及检测条件：Symmetry C18(Waters，4.6mm×250mm，5μm，L.N.0264313291)；以乙腈-0.04mol/L磷酸二氢钾(5:95)为流动相等度洗脱；流速1.0mL/min；检测波长260nm；柱温35℃；
对照品溶液的制备：取腺苷对照品适量，精密称定，加50％甲醇水溶液制成25μg/mL的溶液；
测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入高效液相色谱仪，测定，即得。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
其中，按实施例1方法制备的蝉花子实体供试品溶液色谱图见图15；按实施例6方法制备的蝉花孢子粉供试品溶液色谱图见图16；按实施例7方法制备的蝉花菌质供试品溶液色谱图见图17。图15～17表明本发明样品制备方法适用于蝉花子实体、孢子粉、菌质中腺苷的检测。
实施例9
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，检测条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于流动相6:94的乙腈-0.04mol/L磷酸二氢钾；制备对照品溶液所用溶剂为45％甲醇水溶液。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
其中，按实施例1方法制备供试品溶液色谱图见图18。图18表明流动相比例调整为6:94不影响腺苷色谱峰的分离效果，能够实现对本发明对腺苷的检测。
实施例10
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，检测条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于流动相8:92的乙腈-0.04mol/L磷酸二氢钾；制备对照品溶液所用溶剂为40％甲醇水溶液。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
实施例11
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，检测条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于流动相10:90的乙腈-0.04mol/L磷酸二氢钾；制备对照品溶液所用溶剂为30％甲醇水溶液。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
实施例12
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，检测条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于流动相15:85的乙腈-0.04mol/L磷酸二氢钾；制备对照品溶液所用溶剂为20％甲醇水溶液。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
实施例13
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，色谱条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于检测波长为255nm。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
其中，按实施例1方法制备供试品溶液色谱图见图19。图19表明检测波长调整为255nm不影响腺苷色谱峰的分离效果，能够实现本发明对腺苷的检测。
实施例14
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，色谱条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于检测波长为265nm。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
其中，按实施例1方法制备供试品溶液色谱图见图20。图20表明检测波长调整为265nm不影响腺苷色谱峰的分离效果，能够实现本发明对腺苷的检测。
实施例15
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，色谱条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于流速为1.2mL/min。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
其中，按实施例1方法制备供试品溶液色谱图见图21。图21表明流速调整为1.2mL/min不影响腺苷色谱峰的分离效果，能够实现本发明对腺苷的检测。
实施例16
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，色谱条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于流速为0.8mL/min。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
其中，按实施例1方法制备供试品溶液色谱图见图22。图22表明流速调整为0.8mL/min不影响腺苷色谱峰的分离效果，能够实现本发明对腺苷的检测。
实施例17
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，色谱条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于柱温为30℃。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
其中，按实施例1方法制备供试品溶液色谱图见图23。图23表明柱温调整为30℃不影响腺苷色谱峰的分离效果，能够实现本发明对腺苷的检测。
实施例18
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，色谱条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于柱温为40℃。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
其中，按实施例1方法制备供试品溶液色谱图见图24。图24表明柱温调整为40℃不影响腺苷色谱峰的分离效果，能够实现本发明对腺苷的检测。
实施例19
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，色谱条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于色谱柱型号为ZORBAX Eclipse XDB-C18(Agilent，4.6mm×250mm，5μm)。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
其中，按实施例1方法制备供试品溶液色谱图见图25。图25表明色谱柱型号的改变不影响腺苷色谱峰的分离效果，能够实现本发明对腺苷的检测。
实施例20
按实施例1～7任一方法制备供试品溶液，采用高效液相色谱法检测样品中腺苷的含量，色谱条件、对照品溶液制备和测定方法与实施例8相同，区别在于色谱柱型号为Symmetryshield RP18(Waters，4.6mm×250mm，5μm)。
测定结果显示实施例1～7任一方法制备的供试品溶液采用本实施例高效液相色谱法进行测定，其腺苷色谱峰峰形良好，无拖尾，无干扰峰，能够实现对腺苷的检测。
其中，按实施例1方法制备供试品溶液色谱图见图26。图26表明色谱柱型号的改变不影响腺苷色谱峰的分离效果，能够实现本发明对腺苷的检测。
Claims (10)
1.一种用于蝉花检测的样品制备方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：
A、蝉花待测样品用水提取得提取液；和
B、提取液加入甲醇。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述蝉花待测样品为蝉花子实体、蝉花孢子粉或蝉花菌质中的任意一种，或以任意一种上述物质为原料经提取得到的提取物，或提取物经精制纯化得到的有效部位，或提取物/有效部位按常规制剂工艺制成的临床上可接受制剂。
3.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甲醇加入量为至甲醇含量达到20％～50％。
4.如权利要求3所述的方法，其特征在于，所述甲醇加入量为至甲醇含量达到40％～50％。
5.一种蝉花的检测方法，该方法采用高效液相色谱法，其特征在于，所述方法以腺苷为对照品，供试品溶液制备方法包括如下步骤：取蝉花待测样品，加水提取，提取液加入甲醇。
6.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述甲醇加入量为至甲醇含量达到20％～50％。
7.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法以乙腈-磷酸二氢盐溶剂系统为流动相，等度洗脱。
8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述流动相比例为乙腈：磷酸二氢盐溶液＝5-15:85-95。
9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述流动相比例为乙腈：磷酸二氢盐溶液＝5:95。
10.如权利要求5所述的方法，其特征在于，所述对照品溶液的制备方法为：取腺苷对照品，加甲醇水溶液制成对照品溶液。
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Citations (4)
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| CN101822765A (zh) * | 2010-01-28 | 2010-09-08 | 江西新赣江药业有限公司 | 一种益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的质量检测方法 |
| CN102269749A (zh) * | 2011-06-17 | 2011-12-07 | 上海雷允上科技发展有限公司 | 一种猴头菌片中腺苷含量的检测方法 |
| CN102526128A (zh) * | 2011-12-15 | 2012-07-04 | 浙江大德药业集团有限公司 | 一种中药灵芝颗粒及其制备方法和检测方法 |
-
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101732406A (zh) * | 2010-01-28 | 2010-06-16 | 昆明中药厂有限公司 | 板蓝清热颗粒的质量检测方法 |
| CN101822765A (zh) * | 2010-01-28 | 2010-09-08 | 江西新赣江药业有限公司 | 一种益肾壮骨、补血益精中药复方制剂的质量检测方法 |
| CN102269749A (zh) * | 2011-06-17 | 2011-12-07 | 上海雷允上科技发展有限公司 | 一种猴头菌片中腺苷含量的检测方法 |
| CN102526128A (zh) * | 2011-12-15 | 2012-07-04 | 浙江大德药业集团有限公司 | 一种中药灵芝颗粒及其制备方法和检测方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 周靖 等: "蝉花菌丝体粉胶囊的质量标准研究", 《中成药》 * |
| 程利娟 等: "高效液相色谱法测定牛樟芝中腺苷的含量", 《解放军医药杂志》 * |
| 颜栋林: "HPLC法测定冬虫夏草胶囊中腺苷含量", 《药学实践杂志》 * |
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