CN101821403B - 用于异种蛋白制备的细胞及使用所述细胞的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明提供一种可以有效地生产蛋白质的方法。多肽制备方法，其包括：培养高效表达碳酸氢根转运蛋白、且导入有编码期望多肽的DNA的细胞，使其产生期望多肽。

Description

用于异种蛋白制备的细胞及使用所述细胞的制备方法
技术领域
本发明涉及用于异种蛋白制备的细胞及使用所述细胞的制备方法，更具体涉及高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞及使用其制备多肽的方法。
背景技术
在使用基因重组技术生产医药上有用的蛋白质时，若使用动物细胞，则如原核细胞无法进行的复杂的翻译后修饰和折叠成为可能，因此，动物细胞常用作用于生产重组蛋白质的宿主细胞。
近年来，抗体和生理活性蛋白质等较多生物医药制品辈出，使动物细胞高效地生产重组蛋白质的技术关系到生物医药制品的低成本化，可以确保对患者的稳定供给。
因此，期待开发出生产效率更高的蛋白质的制备方法。
阴离子交换蛋白是交换转运细胞膜内外的阴离子的转运蛋白(膜转运蛋白)。SLC4家族为HCO3 -的转运蛋白的家族，附属于其的AE1、AE2及AE3这三个成员具有将细胞膜外的Cl-与细胞膜内的HCO3 -交换的功能。
在肾脏中，AE1见于基底外侧膜的集合管的α闰细胞中(非专利文献1)。已知人的AE1的变异会引起远端肾小管性酸中毒(非专利文献2及3)。
另外，在肾脏中，还发现了AE2的3种亚型AE2a、AE2b及AE2c。AE2被认为是用于传递细胞信号从而控制细胞内pH平衡的(非专利文献4)，AE2基因敲除小鼠死于断奶期，但并未发现肾性表型异常(非专利文献5)。
SLC26是比较新的阴离子交换蛋白家族，其多个成员(例如SLC26A3、SLC26A4、SLC26A6、SLC26A9等)被提示为碳酸氢根交换蛋白(非专利文献6～11)。
另一方面，通过使具有碳酸氢根转运蛋白功能的阴离子交换蛋白高效表达而人为地促进介由阴离子交换蛋白的阴离子向培养细胞内的导入及向细胞外的排出，对培养细胞中的期望重组蛋白质的产量提高的贡献完全不清楚。
非专利文献1：van Adelsberg JS.et.al.，J Biol Chem 1993；268：11283-11289
非专利文献2：Shayakui C.et.al.，Curr Opin Nephrol Hypertens2000；9：541-546
非专利文献3：Alper SL.et.al.，Annu Rev Physiol 2002；64：899-923
非专利文献4：Komlosi P.et.al.，Am J Physiol Renal Physiol 2005；288：F380-F386
非专利文献5：Gawenis LR.et.al.，J Biol Chem 2004；279：30531-30539
非专利文献6：Melvin et al，J Biol Chem 1999；274：22855-22861
非专利文献7：Ko et al.，EMBO J.2002；21：5662-5672
非专利文献8：Soleimani et al.，Am.J.Physiol.Renal Physiol.2001；280：F356-F364
非专利文献9：Wang et al.，Am.J.Physiol.Gastrointest.LiverPhysiol.2002；282：G573-G579
非专利文献10：Petrovic et al.，Am.J.Physiol.Renal Physiol.2004；286：F161-F169
非专利文献11：Xu et al.，Am.J.Physiol.Cell Physiol.2005；289：C493-C505
发明内容
发明拟解决的技术课题
本发明的目的在于，提供可以有效地生产多肽的方法。
解决课题的技术方案
本发明人等为了解决上述课题进行了专心研究，结果发现，通过使用高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞，可以增加期望多肽的产量，由此完成本发明。进而，通过使用共表达碳酸氢根转运蛋白和半胱亚磺酸脱羧酶(以下有时记为“CSAD”)或丙氨酸氨基转移酶(以下有时记为“ALT”)的细胞，可以进一步增加期望多肽的产量。
本发明的主旨如下所述。
(1)多肽制备方法，其包括：培养高效表达碳酸氢根转运蛋白、且导入有编码期望多肽的DNA的细胞，使其产生期望多肽。
(2)(1)的制备方法，其中所述高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞为导入有编码碳酸氢根转运蛋白的DNA的细胞。
(3)(1)或(2)的制备方法，其中所述高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞还高效表达半胱亚磺酸脱羧酶或丙氨酸氨基转移酶。
(4)(1)～(3)的制备方法，其中所述碳酸氢根转运蛋白为SLC4阴离子交换蛋白或SLC26阴离子交换蛋白。
(5)(1)～(3)的制备方法，其中所述碳酸氢根转运蛋白为SLC4阴离子交换蛋白。
(6)(5)的制备方法，其中所述SLC4阴离子交换蛋白为AE1。
(7)(1)～(6)中任一项的制备方法，其中所述细胞为中国仓鼠卵巢细胞。
(8)(1)～(7)中任一项的制备方法，其中所述期望多肽为抗体。
(9)(4)～(6)中任一项的制备方法，其中所述编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA为以下(a)～(e)中的任一种：
(a)编码具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽的DNA；
(b)编码具有在SEQ ID NO：2的氨基酸序列中取代、缺失、附加或/及插入1个或多个氨基酸所得的氨基酸序列、且具有SLC4阴离子交换蛋白活性的多肽的DNA；
(c)编码与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有50％以上的同一性、且具有SLC4阴离子交换蛋白活性的多肽的DNA；
(d)具有SEQ ID NO：1的碱基序列的DNA；
(e)在严格的条件下和与具有SEQ ID NO：1的碱基序列的DNA互补的DNA杂交、且编码具有SLC4阴离子交换蛋白活性的多肽的DNA。
(10)药品制备方法，其中所述药品含有根据(1)～(9)中任一项的方法制备的多肽。
(11)细胞，其导入有：
●编码碳酸氢根转运蛋白的DNA、和
●编码期望多肽的DNA。
(12)(11)的细胞，其还导入有编码半胱亚磺酸脱羧酶或丙氨酸氨基转移酶的DNA。
(13)细胞，其导入有：
●编码碳酸氢根转运蛋白的DNA、和
●编码半胱亚磺酸脱羧酶或丙氨酸氨基转移酶的DNA。
发明效果
根据本发明，可以生产大量的期望多肽。
本说明书包含作为本申请的优选权的基础的日本专利申请、特愿2007-276182的说明书及/或附图所记载的内容。
附图简述
图1为由来源于人肝细胞的AE1的氨基酸序列、基于TMpred程序预测的跨膜区域及方向并以Exo Physiol 91.1pp153-161，2006，SethL.Alper的图1为参考而制作的AE1膜拓扑。
图2为表达人AE1(911个氨基酸)的潮霉素(Hygromycin)筛选用质粒。
图3为表达人AE1(911个氨基酸)的嘌呤霉素(Puromycin)筛选用质粒。
图4为50ml摇瓶流加培养第12天的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量标绘图。pHyg-AE1导入细胞(n＝4)的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量优于pHyg导入细胞(n＝4)(P＜0.05)。
图5为50ml摇瓶流加培养第10天的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量标绘图。向导入了pHyg-AE1的抗体高产生细胞的pHyg-AE1-42株中导入pPur-CSAD的共表达细胞AE1/CSAD株(n＝9)的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量优于向pHyg-AE1-42株中导入pPur的共表达细胞AE1/pPur(n＝8)(P＜0.05)。
图6为50ml摇瓶流加培养第10天的存活率标绘图。向导入了pHyg-AE1的抗体高产生细胞的pHyg-AE1-42株中导入pPur-CSAD的共表达细胞AE1/CSAD株(n＝9)的存活率优于向pHyg-AE1-42株中导入pPur的共表达细胞AE1/pPur(n＝8)(P＜0.01)。培养第7天的存活率也为P＜0.01(未显示数据)。
图7为50ml摇瓶流加培养第8天的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量标绘图。向导入了pHyg-AE1的抗体高产生细胞的pHyg-AE1-42株中导入pPur-ALT1的共表达细胞AE1/ALT1株(n＝10)的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量为AE1/CSAD株(n＝9)以上，优于向pHyg-AE1-42株中导入pPur的共表达细胞AE1/pPur(n＝8)(P＜0.01)。
图8为表示作为AE1/ALT1共表达株的AA53在1L Jar流加培养中的抗体产生量的曲线图。培养第7天的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量为1.9g/L。
图9表示新克隆的来源于CHO细胞的仓鼠CSAD基因的碱基序列及氨基酸序列。
图10为表达仓鼠CSAD(493个氨基酸)的嘌呤霉素(Puromycin)筛选用质粒。
图11为表达人ALT1(496个氨基酸)的嘌呤霉素(Puromycin)筛选用质粒。
图12为表示来源于AE1高效表达宿主的抗IL-6R抗体产生细胞AE1-S08在1L Jar流加培养中的抗体产生量的曲线图。培养第14天的抗IL-6R抗体产生量为3.0g/L。
图13表示新克隆的来源于CHO细胞的仓鼠牛磺酸转运蛋白(Taurine transporter)基因的碱基序列及氨基酸序列。
图14为由新克隆的来源于CHO细胞的仓鼠TauT的氨基酸序列、基于TMpred程序预测的跨膜区域及方向并以Proc.Natl.Acad.Sci.USA Vol.89，pp.8230-8234，September 1992，Shinichi Uchida et.al.的图5为参考而制作的牛磺酸转运蛋白膜拓扑。◎为仓鼠TauT特异性氨基酸残基，在第2环(EX：细胞膜外区域)、第12个跨膜区域(TM)及C末端(IC：细胞内区域)存在许多与仓鼠TauT不同的氨基酸。
图15为表达仓鼠TauT(622个氨基酸)的潮霉素(Hygromycin)筛选用质粒。
实施方式
下面，对本发明的实施方式进行更详细的说明。
本发明提供多肽的制备方法，其包括培养高效表达碳酸氢根转运蛋白、且导入有编码期望多肽的DNA的细胞，使其产生期望多肽。
在本发明的方法中，细胞可以为能够产生期望多肽的天然细胞，也可以为导入有编码期望多肽的DNA的转化细胞，优选为导入有编码期望多肽的DNA的转化细胞。
在本发明的方法中，期望多肽没有特别限定，可以为抗体(例如，抗IL-6受体抗体、抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体、抗CD3抗体、抗CD20抗体、抗GPIIb/IIIa抗体、抗TNF抗体、抗CD25抗体、抗EGFR抗体、抗Her2/neu抗体、抗RSV抗体、抗CD33抗体、抗CD52抗体、抗IgE抗体、抗CD11a抗体、抗VEGF抗体、抗VLA4抗体等)或生理活性蛋白质(粒细胞集落刺激因子(G-CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)、红细胞生成素、干扰素、IL-1或IL-6等白细胞介素、t-PA、尿激酶、血清白蛋白、血液凝固因子、PTH等)等任意的多肽，但特别优选为抗体。抗体可以为天然抗体、Fab、scFv、sc(Fv)2等低分子化抗体、嵌合抗体、人源化抗体等任意的抗体。
通过使用高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞，可以使细胞的多肽的产生量增加。
碳酸氢根转运蛋白在排出碳酸氢根阴离子(HCO3 -)或碳酸根阴离子(CO3 2-)的同时，导入氯阴离子及硫酸根阴离子等，为具有交换转运功能的膜蛋白。作为碳酸氢根转运蛋白，可以例示SLC4阴离子交换蛋白、SLC26阴离子交换蛋白等。
SLC4阴离子交换蛋白为控制细胞内pH平衡及细胞容积的膜蛋白。目前，已知有10种(SLC4A1(AE1)、SLC4A2(AE2)、SLC4A3(AE3)、SLC4A4(NBCe1)、SLC4A5(NBCe2)、SLC4A7(NBCn1)、SLC4A8(kNBC3)、SLC4A9(NBCn2)、SLC4A10(NBCn3)、SLC4A11(NaBC1))SLC4家族，且存在至少1种以上亚型。此外，分别为作为Na+非依赖性的电中性的Cl-和HCO3 -的交换蛋白的SLC4A1(AE1)、SLC4A2(AE2)、ALC4A3(AE3)、ALC4A9(NBCn2或AE4)、生电性的ALC4A4(NBCe1)、ALC4A5(NBCe2)、作为电中性的Na+和HCO3 -的共转运蛋白的ALC4A7(NBCn1)、作为Na+依赖性的电中性的Cl-和HCO3 -的交换蛋白的ALC4A8(kNBC3)、ALC4A10(NBCn3)、作为生电性的Na+和硼酸根(Borate)的共转运蛋白的ALC4A11(NaBC1)等具有不同的功能。它们具有局部特异性作用。例如为AE1的情况下，有助于具有极性的上皮细胞的经上皮分泌及酸碱的再吸收，促进鳟的红细胞的渗透物转运。作为SLC4阴离子交换蛋白，可以例示SLC4A1(AE1)、SLC4A2(AE2)、SLC4A3(AE3)、SLC4A4(NBCe1)、SLC4A5(NBCe2)、SLC4A7(NBCn1)、SLC4A8(kNBC3)、SLC4A9(NBCn2)、SLC4A10(NBCn3)、SLC4A11(NaBC1)等，优选AE1。
SLC26阴离子交换蛋白为在几乎所有的器官系统中作用的多功能膜蛋白，存在进行硫酸根阴离子、碘阴离子、甲酸根阴离子、草酸根阴离子、氯阴离子、氢氧根阴离子、碳酸氢根离子等的交换转运的交换蛋白及氯阴离子通道、或者阴离子依赖性分子发动机。已知有被认为于各种阴离子的平衡有关的10种(SLC26A1、SLC26A2、SLC26A3、SLC26A4、SLC26A5、SLC26A6、SLC26A7、SLC26A8、SLC26A9、SLC26A11)阴离子交换蛋白家族。例如，作为氢氧根阴离子、碳酸氢根阴离子的转运蛋白的SLC26A3、SLC26A4、SLC26A6、SLC26A9与SLC4阴离子交换蛋白同样地控制膜内外的pH。在肾脏中发现的交换蛋白为SLC26A1、SLC26A2、SLC26A4、SLC26A6、SLC26A9、SLC26A11。SLC26A1为了转运硫酸根阴离子和草酸根阴离子，SLC26A6为了导入氯化钠，交换转运各种阴离子。SLC26A1为肾结石的病因，SLC26A4和SLC26A6为高血压症的病因，SLC26A5为听觉丧失的病因。SLC26A7与SLC26A4同样，与酸碱的平衡及血压控制相关。作为SLC26阴离子交换蛋白，可以例示SLC26A1、SLC26A2、SLC26A3、SLC26A4、SLC26A5、SLC26A6、SLC26A7、SLC26A8、SLC26A9、SLC26A11等。
高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞只要是与天然细胞相比碳酸氢根转运蛋白的表达量增加的细胞就没有特别限定。天然细胞没有特别限定，例如可举出：CHO细胞等制备重组蛋白质时作为宿主使用的细胞。
在细胞中高效表达的碳酸氢根转运蛋白可为来源于任意生物的碳酸氢根转运蛋白，没有特别限定。具体而言，可以举出：来源于人、或小鼠、大鼠、仓鼠等啮齿类；黑猩猩、牛、马、狗、狼等哺乳类；鸡等鸟类；斑马鱼、鳗等鱼类；果蝇等昆虫类等生物的碳酸氢根转运蛋白，优选为来源于人、啮齿类或者与宿主细胞同种的生物的碳酸氢根转运蛋白，例如，高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞为中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)时，优选为来源于人或者仓鼠的碳酸氢根转运蛋白。
高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞可以为动物细胞、植物细胞、酵母等真核细胞；大肠杆菌、枯草杆菌等原核细胞等任意的细胞，优选为CHO细胞、COS细胞等动物细胞，特别优选CHO细胞。另外，为了制备期望多肽，优选为适合于导入期望基因的CHO dhfr-细胞等细胞。
作为高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞，例如可以举出：人为导入有碳酸氢根转运蛋白基因(例如，SLC4阴离子交换蛋白基因、SLC26阴离子交换蛋白基因等)的细胞。人为导入有碳酸氢根转运蛋白基因的细胞可以通过本领域技术人员公知的方法进行制备，例如，可以通过将碳酸氢根转运蛋白基因插入载体、并用该载体转化细胞来进行制备。进而，本说明书中，通过基因活化技术(例如参照国际公开第WO94/12650号的单行本)使内源性碳酸氢根转运蛋白基因活化，其结果，高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞也被包括在人为导入有碳酸氢根转运蛋白基因的细胞中。
作为导入细胞的SLC4阴离子交换蛋白基因，可以举出编码SLC4阴离子交换蛋白的以下(a)～(e)中的任一种DNA：
(a)编码具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽的DNA；
(b)编码具有在SEQ ID NO：2的氨基酸序列中取代、缺失、附加或/及插入1个或多个(例如数个)氨基酸所得的氨基酸序列、且具有SLC4阴离子交换蛋白活性的多肽的DNA；
(c)编码与SEQ ID NO：2的氨基酸序列具有50％以上的同一性、且具有SLC4阴离子交换蛋白活性的多肽的DNA；
(d)具有SEQ ID NO：1的碱基序列的DNA；
(e)在严格的条件下和与具有SEQ ID NO：1的碱基序列的DNA互补的DNA杂交、且编码具有SLC4阴离子交换蛋白活性的多肽的DNA。
所谓SLC4阴离子交换蛋白活性，为涵盖为了维持细胞内pH的稳定性及细胞容积而导入培养基中的Cl-及SO4 2-、并排出细胞内的HCO3 -及硼酸根的活性的概念。
SLC4阴离子交换蛋白活性可以如下测定。
用作为pH敏感性染料的BCECF-AM处理功能性地表达SLC4的细胞，比较灌注包含Cl-及Na+的培养基和不包含Cl-及Na+的培养基时的荧光強度，由此，可以测定细胞内pH(pHi)的变化(Dahl NK.et.al.，J Biol Chem 2003；278：44949-44958；Fujinaga J.et.al.，J BiolChem 1999；274：6626-6633)。
在本发明中，作为编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA，使用编码具有SEQ ID NO：2的氨基酸序列的多肽的DNA即可。此外，还可以使用编码具有在SEQ ID NO：2的氨基酸序列中取代、缺失、附加或/及插入1个或多个(例如数个)氨基酸所得的氨基酸序列、且具有SLC4阴离子交换蛋白活性的多肽的DNA。SEQ ID NO：2的氨基酸序列为人AE1的氨基酸序列。对于AE1，除人以外，由于在小鼠GenBanK NM_011403、大鼠GeneBank NM_012651、黑猩猩GenBankXM_001151353、牛GeneBank NM_181036、马GeneBankNM_001081788、狗GenBank AB242566、狼GeneBankNM_001048031、鸡GenBank NM_205522、斑马鱼GenBanKNM_198338等中注册有小鼠、大鼠、黑猩猩、牛、马、狗、狼、鸡、斑马鱼等序列信息，因此，也可以利用它们。对于其它的SLC4阴离子交换蛋白，序列信息也注册在各种数据库中，也可以利用它们。
具有在SEQ ID NO：2的氨基酸序列中取代、缺失、附加或/及插入1个或多个(例如数个)氨基酸所得的氨基酸序列、且具有SLC4阴离子交换蛋白活性的多肽为与人、小鼠、大鼠、鸡、黑猩猩、牛、马、狗、狼、鸡、斑马鱼SLC4阴离子交换蛋白(以下有时记为“人等的SLC4阴离子交换蛋白”)功能相同的多肽。这样的多肽中，例如包括人等的SLC4阴离子交换蛋白的突变体等。在后述的实施例中，使用公开的人SLC4阴离子交换蛋白基因(AE1基因)编码的氨基酸911个中、4个氨基酸(L88R、E693G、V712A、H834Y)被取代的突变体。
作为用于制备和某多肽功能相同的多肽的本领域技术人员公知的方法，已知向多肽中导入突变的方法。例如，本领域技术人员通过使用定点诱变法(Hashimoto-Gotoh，T.et al.(1995)Gene 152，271-275、Zoller，MJ，and Smith，M.(1983)Methods Enzymol.100，468-500、Kramer，W.et al.(1984)Nucleic Acids Res.12，9441-9456、Kramer W，and Fritz HJ(1987)Methods.Enzymol.154，350-367、Kunkel，TA(1985)Proc Natl Acad Sci U S A.82，488-492、Kunkel(1988)MethodsEnzymol.85，2763-2766)等，向人等的SLC4阴离子交换蛋白的氨基酸导入适宜突变，可以制备与人等的SLC4阴离子交换蛋白功能相同的多肽。另外，氨基酸的突变在自然界也可以发生。
作为与人等的SLC4阴离子交换蛋白功能相同的多肽，具体而言，可以举出：人等的SLC4阴离子交换蛋白的氨基酸序列(例如，SEQ IDNO：2的氨基酸序列)中的1或2个以上、优选1个以上30个以下、更优选1个以上10个以下氨基酸缺失的多肽；人等的SLC4阴离子交换蛋白的氨基酸序列中附加1或2个以上、优选1个以上30个以下、更优选1个以上10个以下氨基酸的多肽；人等的SLC4阴离子交换蛋白的氨基酸序列中的1或2个以上、优选1个以上30个以下、更优选1个以上10个以下氨基酸被其它氨基酸取代的多肽等。
突变的氨基酸残基没有特别限定，优选突变为保存有氨基酸侧链的性质的其它氨基酸。例如作为氨基酸侧链的性质，可以举出：疏水性氨基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y、V)、亲水性氨基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T)、具有脂肪族侧链的氨基酸(G、A、V、L、I、P)、具有含羟基侧链的氨基酸(S、T、Y)、具有含硫原子侧链的氨基酸(C、M)、具有含羧酸及酰胺侧链的氨基酸(D、N、E、Q)、具有含碱性侧链的氨基酸(R、K、H)、具有含芳香族侧链的氨基酸(H、F、Y、W)(括号内的字母均为氨基酸的单字母缩写)。
需要说明的是，已知具有通过在某氨基酸序列中缺失、附加及/或用其它氨基酸取代1个或多个氨基酸进行修饰所得的氨基酸序列的多肽可以维持其生物学活性(Mark，D.F.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1984)81，5662-5666、Zoller，M.J.&Smith，M.Nucleic AcidsResearch(1982)10，6487-6500、Wang，A.et al.，Science 224，1431-1433、Dalbadie-McFarland，G.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1982)79，6409-6413)。
作为在人等的SLC4阴离子交换蛋白中附加有1个或多个氨基酸残基的多肽，例如可以举出：含有人等的SLC4阴离子交换蛋白的融合多肽。融合多肽是人等的SLC4阴离子交换蛋白与其它多肽融合所得的多肽。对于制备融合多肽的方法，将编码人等的SLC4阴离子交换蛋白的基因和编码其它的多肽的基因以框架一致的方式连结并将其导入表达载体中，使其被宿主表达即可，可以使用本领域技术人员公知的方法。作为用于与人等的SLC4阴离子交换蛋白融合的其它多肽，没有特别限定。
作为用于与人等的SLC4阴离子交换蛋白融合的其它多肽，例如可以举出：FLAG(Hopp，T.P.et al.，BioTechnology(1988)6，1204-1210)、6个His(组氨酸)残基构成的6×His、10×His、流感凝集素(HA)、人c-myc的片段、VSV-GP的片段、p18HIV的片段、T7-标签、HSV-标签、E-标签、SV40T抗原的片段、lck标签、α-微管蛋白的片段、B-标签、蛋白C的片段、GST(谷胱甘肽-S-转移酶)、HA(流感凝集素)、免疫球蛋白恒定区域、β-半乳糖苷酶、MBP(麦芽糖结合多肽)等。
通过使编码市售的这些多肽的基因和编码人等的SLC4阴离子交换蛋白的基因融合，并使由此制备的融合基因表达，可以制备融合多肽。
另外，作为制备和某多肽功能相同的多肽的本领域技术人员公知的其它方法，可以举出：利用杂交技术(Sambrook，J et al.，MolecularCloning 2nd ed.，9.47-9.58，Cold Spring Harbor Lab.Press，1989)的方法。即，作为本领域技术人员，通常以编码人等的SLC4阴离子交换蛋白的DNA序列(例如SEQ ID NO：1的DNA序列)或其一部分作为基础，分离与其同一性高的DNA，并从该DNA中分离和人等的SLC4阴离子交换蛋白功能相同的多肽。
作为用于分离编码和人等的SLC4阴离子交换蛋白功能相同的多肽的DNA的杂交条件，本领域技术人员可以适当选择。作为杂交的条件，例如可以举出严格性低的条件。所谓严格性低的条件，例如可以举出42℃、2×SSC、0.1％SDS，优选为50℃、2×SSC、0.1％SDS。另外，更优选举出严格性高的条件。所谓严格性高的条件，例如可以举出65℃、2×SSC、0.1％SDS。在这些条件下，不仅可以得到温度越低同一性越高的DNA，还可以得到只具有低的同一性的DNA。相反，可以期待只得到温度越高同一性越高的DNA。其中，作为影响杂交的严格性的要素，除温度之外，还要考虑盐浓度等多个要素，本领域技术人员可以通过适当选择这些要素而实现同样的严格性。
通过上述杂交技术而分离的DNA编码的多肽为与人等的SLC4阴离子交换蛋白的氨基酸序列具有70％以上的同一性的多肽即可，通常与人等的SLC4阴离子交换蛋白的氨基酸序列具有高同一性。所谓高同一性，通常是指97％以上的同一性，优选98％以上的同一性，更优选99％以上的同一性。多肽的同一性的确定遵循文献(Wilbur，W.J.and Lipman，D.J，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1983)80，726-730)中记载的算法进行确定即可。
多肽根据后述的产生其的细胞、宿主或纯化方法的不同，氨基酸序列、分子量、等电点或糖链的有无和形态等可以不同。但是，只要所得的多肽具有和人等的SLC4阴离子交换蛋白相同的功能，就可以在本发明中利用编码该多肽的DNA。例如，使多肽在原核细胞例如大肠杆菌中表达时，蛋氨酸残基被附加在原来的多肽的氨基酸序列的N末端。另外，使其在真核细胞例如哺乳动物细胞中表达时，N末端的信号序列被除去。编码这样的多肽的DNA也可以用于本发明。
在本发明中，作为编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA，可以使用具有SEQ ID NO：1的碱基序列的DNA。此外，还可以使用在严格的条件下和与具有SEQ ID NO：1的碱基序列的DNA互补的DNA杂交、且编码具有SLC4阴离子交换蛋白活性的多肽的DNA。SEQ ID NO：1的碱基序列为人AE1的碱基序列。对于AE1，除人以外，由于在小鼠GenBanK NM_011403、大鼠GeneBank NM_012651、黑猩猩GenBank XM_001151353、牛GeneBank NM_181036、马GeneBankNM_001081788、狗GenBank AB242566、狼GeneBankNM_001048031、鸡GenBank NM_205522、斑马鱼GenBanKNM_198338等中注册有小鼠、大鼠、黑猩猩、牛、马、狗、狼、鸡、斑马鱼等序列信息，因此，也可以利用它们。对于其它的SLC4阴离子交换蛋白，序列信息也注册在各种数据库中，也可以利用它们。
编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA除被用于如上所述的期望多肽的体内和体外生产外，还可以用于制备高效表达SLC4阴离子交换蛋白的细胞。编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA为可以编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA即可，可以为任意的形态。即，其可以为由mRNA合成的cDNA、基因组DNA、化学合成DNA等。另外，只要可以对编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA进行编码，就包括具有基于遗传密码的简并的任意的碱基序列的DNA。
编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA可以通过本领域技术人员公知的方法进行制备。例如，可以如下操作进行制备：由表达SLC4阴离子交换蛋白的细胞制备cDNA文库，将SLC4阴离子交换蛋白的DNA序列(例如，SEQ ID NO：1)的一部分作为探针进行杂交，由此进行制备。cDNA文库可以通过例如Sambrook，J.et al.，Molecularcloning、Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)记载的方法进行制备，也可以使用市售的基因文库。另外，也可以如下操作进行制备：由表达SLC4阴离子交换蛋白的细胞制备RNA，基于SLC4阴离子交换蛋白的DNA序列(例如，SEQ ID NO：1)合成寡聚DNA，并将其用作引物，进行PCR反应，使编码SLC4阴离子交换蛋白的cDNA扩增，由此进行制备。
另外，通过确定所得cDNA的碱基序列，可以确定其编码的翻译区域，可以得到SLC4阴离子交换蛋白的氨基酸序列。另外，通过将得到的cDNA作为探针，对基因组DNA文库进行筛选，可以分离基因组DNA。
具体而言，如下操作进行即可。首先，从表达SLC4阴离子交换蛋白的细胞、组织等中分离mRNA。mRNA的分离可以通过公知的方法例如胍超速离心法(Chirgwin，J.M.et al.，Biochemistry(1979)18，5294-5299)、AGPC法(Chomczynski，P.and Sacchi，N.，Anal.Biochem.(1987)162，156-159)等制备总RNA，使用mRNA纯化试剂盒(Pharmacia)等从总RNA中纯化mRNA。另外，通过使用quickPrepmRNA纯化试剂盒(Pharmacia)，可以直接制备mRNA。
使用逆转录酶由所得mRNA合成cDNA。cDNA的合成也可以使用AMV逆转录酶第一链cDNA合成试剂盒(生化学工业)等进行。另外，可以使用引物等，遵循使用5’-Ampli FINDER RACE试剂盒(clontech制)及聚合酶链式反应(polymerase chain reaction：PCR)的5’-RACE法(Frohman，M.A.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1988)85，8998-9002；Belyavsky，A.et al.，Nucleic Acids Res.(1989)17，2919-2932)，进行cDNA的合成和扩增。
由所得PCR产物制备目的DNA片段，将其与载体DNA连结。进而，利用其制备重组载体，导入大肠杆菌等并选择集落，制备期望的重组载体。目的DNA的碱基序列可以通过公知的方法例如双脱氧核苷酸链终止法进行确认。
另外，对于编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA，考虑表达时使用的宿主的密码子使用频率，可以设计表达效率更高的碱基序列(Grantham，R.et al.Nucelic Acids Research(1981)9，r43-74)。另外，编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA可以通过市售的试剂盒和公知的方法进行改变。作为改变，例如可以举出：利用限制性内切酶进行的消化、合成寡核苷酸或适当的DNA片段的插入、接头的附加、起始密码子(ATG)及/或终止密码子(TAA、TGA或TAG)的插入等。
编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA还包括为在严格的条件下和与具有SEQ ID NO：1的碱基序列的DNA互补的DNA杂交的DNA、且编码和SLC4阴离子交换蛋白功能相同的多肽的DNA。
作为严格的条件，本领域技术人员可以适当选择，例如可以举出严格性低的条件。所谓严格性低的条件，例如可以举出：42℃、2×SSC、0.1％SDS，优选为50℃、2×SSC、0.1％SDS。另外，更优选举出严格性高的条件。所谓严格性高的条件，例如可以举出：65℃、2×SSC及0.1％SDS。在这些条件下，可以得到温度越高同一性越高的DNA。所述杂交的DNA可以优选为天然DNA，例如cDNA或染色体DNA。
通过上述杂交技术而分离的DNA通常与编码人等的SLC4阴离子交换蛋白的DNA的碱基序列具有高同一性。编码SLC4阴离子交换蛋白的DNA也包括编码和人等的SLC4阴离子交换蛋白功能相同的多肽、且和编码人等的SLC4阴离子交换蛋白的DNA具有高同一性的DNA。所谓高同一性，通常是指96％以上的同一性，优选98％以上的同一性，更优选99％以上的同一性。碱基序列的同一性可以通过Karlin和Altschul发明的算法BLAST(Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：5873-5877，1993)确定。基于该算法，开发出了被称为BLASTN和BLASTX的程序(Altschul et al.J.Mol.Biol.215：403-410，1990)。基于BLAST并通过BLASTN解析碱基序列时，参数设定为例如score＝100、wordlength＝12。这些解析方法的具体方法是公知的(http://www.ncbi.nlm.nih.gov.)。
作为导入细胞的碳酸氢根转运蛋白基因，也可以为SLC26阴离子交换蛋白基因。在GenBank AF331525(人推定的SLC26A9)、GenBankNM_052934(人SLC26A9变体1)、GenBank_NM 134325(人SLC26A9变体2)、GenBank NM_134420(小鼠SLC26A6)、GenBankNM_177243(小鼠SLC26A9)、GenBank AY240025(果蝇Slc26d9702)、GenBank AY240023(果蝇Slc26d6928)、GenBank AY240022(果蝇Slc26d6125)、GenBank AY240021(果蝇Slc26d5002)、GenBankAB084425(鳗Slc26A6)等中注册有SLC26阴离子交换蛋白基因的碱基序列及其编码的氨基酸序列信息，因此，可以利用它们。
将编码碳酸氢根转运蛋白的DNA插入载体中即可。
作为载体，例如以大肠杆菌作为宿主时，为了使载体在大肠杆菌(例如，JM109、DH5α、HB101、XL1Blue)等中大量扩增从而大量制备，优选具有用于在大肠杆菌中扩增的“ori”、以及具有经转化的大肠杆菌的筛选基因(例如，可以通过一些药剂(氨苄西林或四环素、卡那霉素、氯霉素)识别的药剂抗性基因)。作为载体的例子，可以举出：M13类载体、pUC类载体、pBR322、pBluescript、pCR-Script等。另外，以cDNA的亚克隆、剪裁为目的时，除上述载体外，还可以举出例如pGEM-T、pDIRECT、pT7等。为了生产期望多肽而使用载体时，表达载体尤其有用。作为表达载体，例如以在大肠杆菌中的表达为目的时，除具有载体在大肠杆菌中扩增的上述特征外，还优选在将宿主设定为JM109、DH5α、HB101、XL1-Blue等大肠杆菌时，具有可以在大肠杆菌中高效表达的启动子，例如lacZ启动子(Ward等，Nature(1989)341，544-546；FASEB J.(1992)6，2422-2427)、araB启动子(Better等，Science(1988)240，1041-1043)、或T7启动子等。作为这样的启动子，除上述载体外，还可以举出：pGEX-5X-1(Pharmacia公司制)、“QIAexpress系统”(Qiagen公司制)、pEGFP或pET(此时，宿主优选表达T7RNA聚合酶的BL21)等。
另外，载体中也可以含有用于多肽分泌的信号序列。作为用于多肽分泌的信号序列，使在大肠杆菌的周质产生时，使用pelB信号系列(Lei，S.P.et al J.Bacteriol.(1987)169，4379)即可。宿主细胞中载体的导入可以使用例如氯化钙法、电穿孔法进行。
除以大肠杆菌作为宿主的情况外，例如，作为用于制备期望多肽的载体，可以举出：来源于哺乳动物的表达载体(例如，pcDNA3(Invitrogen公司制)、pEGF-BOS(Nucleic Acids.Res.1990，18(17)，p5322)、pEF、pCDM8)、来源于昆虫细胞的表达载体(例如，“Bac至BAC杆状病毒表达系统”(GIBCO BRL公司制)、pBacPAK8)、来源于植物的表达载体(例如，pMH1、pMH2)、来源于动物病毒的表达载体(例如，pHSV、pMV、pAdexLcw)、来源于逆转录病毒的表达载体(例如，pZIpneo)、来源于酵母的表达载体(例如，“毕赤酵母表达试剂盒”(Invitrogen公司制)、pNV11、SP-Q01)、来源于枯草杆菌的表达载体(例如，pPL608、pKTH50)等。
以在CHO细胞、COS细胞、NIH3T3细胞等动物细胞中的表达为目的时，为了使其在细胞内表达，优选具有必要的启动子，例如SV40启动子(Mulligan等，Nature(1979)277，108)、MMLV-LTR启动子、EF1α启动子(Mizushima等，Nucleic Acids Res.(1990)18，5322)、CMV启动子等，更优选具有用于筛选向细胞转化的基因(例如，通过药剂(新霉素、G418等)可以识别的药剂抗性基因)。作为具有这些特性的载体，例如可以举出：pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV、pOP13等。
进而，以使基因稳定地表达、且使细胞内的基因的拷贝数扩增为目的时，可以举出在缺损核酸合成路线的CHO细胞中导入具有弥补所述缺损的DHFR基因的载体(例如，pCHOI等)，并通过甲氨蝶呤(MTX)使其扩增的方法，另外，以基因的暂时表达为目的时，可以举出使用在染色体上具有表达SV40T抗原的基因的COS细胞通过具有SV40的复制起点的载体(pcD等)进行转化的方法。作为复制起点，还可以使用来源于多瘤病毒、腺病毒、牛乳头瘤病毒(BPV)等的复制起点。进而，为了在宿主细胞类中扩增基因拷贝数，表达载体可以包含氨基葡萄糖苷转移酶(APH)基因、胸苷激酶(TK)基因、大肠杆菌黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶(Ecogpt)基因、二氢叶酸还原酶(dhfr)基因等作为筛选标记。
作为导入有编码碳酸氢根转运蛋白的DNA(可以插入载体中)的宿主细胞没有特别限定，例如，可以使用大肠杆菌或各种动物细胞等。若在导入有编码碳酸氢根转运蛋白的DNA的宿主细胞中导入编码期望多肽的DNA，则该宿主细胞可以高效表达碳酸氢根转运蛋白，且可以增加期望多肽的生产。在导入有编码碳酸氢根转运蛋白的DNA的宿主细胞中，还可导入有编码CSAD或ALT的DNA(可以插入载体中)。通过在导入有编码碳酸氢根转运蛋白的DNA的宿主细胞中导入编码期望多肽的DNA和编码CSAD或ALT的DNA，可以使期望多肽的产生量增加。用于多肽制备的产生系统有体外及体内产生系统。作为体外的产生系统，可以举出使用真核细胞的产生系统和使用原核细胞的产生系统。
在使用人为导入有碳酸氢根转运蛋白基因的细胞来制备期望多肽时，碳酸氢根转运蛋白基因和编码期望多肽的基因的导入顺序没有特别限定，可以在导入碳酸氢根转运蛋白基因后导入编码期望多肽的基因，也可以在导入编码期望多肽的基因后导入碳酸氢根转运蛋白基因。另外，也可以同时导入碳酸氢根转运蛋白基因和编码期望多肽的基因。
碳酸氢根转运蛋白基因和编码期望多肽的基因的导入可以通过单一的载体同时导入，也可以使用多个载体分别导入。
为了制备期望多肽，高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞优选还高效表达半胱亚磺酸脱羧酶(CSAD)或丙氨酸氨基转移酶(ALT)。通过在除高效表达碳酸氢根转运蛋白以外还高效表达CSAD或ALT的细胞中导入编码期望多肽的基因，并在培养基中培养该细胞，可以更大量地制备期望多肽。
CSAD原本作为将3-亚磺酸丙氨酸变换为亚牛磺酸的酶而为人所知，通过使其在CHO细胞内高效表达，合成过量的β-丙氨酸。
高效表达CSAD的细胞为CSAD的表达量比天然细胞增加的细胞即可，没有特别限定。天然细胞没有特别限定，例如可以举出：CHO细胞等在制备重组蛋白质时用作宿主的细胞。
作为在细胞中高效表达的CSAD，可为来源于任意生物的CSAD，没有特别限定。具体而言，可以举出：来源于人、小鼠、大鼠、仓鼠啮齿类；河豚类的虎河豚、海鞘类的玻璃海鞘等生物的CSAD，优选为来源于人、啮齿类或者与宿主细胞同种生物的CSAD，例如，高效表达CSAD的细胞为中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)时，优选为来源于人或者仓鼠的CSAD。
作为高效表达CSAD的细胞，可以举出例如：人为导入有CSAD基因的细胞。人为导入有CSAD基因的细胞可以通过本领域技术人员公知的方法进行制备，例如，可以通过将CSAD基因插入载体、用该载体转化细胞来进行制备。进而，在本说明书中，通过基因活化技术(例如参照国际公开第WO94/12650号的单行本)使内源性CSAD基因活化，其结果，CSAD基因高效表达的细胞也被包括在人为导入有CSAD基因的细胞中。
作为导入细胞的CSAD基因，可以举出编码CSAD的以下(a1)～(e1)中的任一个DNA。
(a1)编码具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列或UniProtKnowledgebase(Swiss-Prot和TrEMBL)大鼠CSAD(Q64611)、小鼠CSAD_(Q9DBE0)或者人CSAD_(Q9Y600)的氨基酸序列的多肽的DNA；
(b1)编码具有在SEQ ID NO：4的氨基酸序列或UniProtKnowledgebase(Swiss-Prot和TrEMBL)大鼠CSAD(Q64611)、小鼠CSAD_(Q9DBE0)或者人CSAD_(Q9Y600)的氨基酸序列中取代、缺失、附加或/及插入1个或多个(例如数个)氨基酸所得的氨基酸序列、且具有CSAD活性的多肽的DNA；
(c1)编码与SEQ ID NO：4的氨基酸序列或UniProtKnowledgebase(Swiss-Prot和TrEMBL)大鼠CSAD(Q64611)、小鼠CSAD_(Q9DBE0)或者人CSAD_(Q9Y600)的氨基酸序列具有70％以上的同一性、且具有CSAD活性的多肽的DNA；
(d1)具有SEQ ID NO：3的碱基序列或GenBank大鼠CSADNM_021750、小鼠CSAD NM_144942或者人CSAD NM_015989的碱基序列的DNA；
(e1)在严格的条件下和与具有SEQ ID NO：3的碱基序列或GenBank大鼠CSAD NM_021750、小鼠CSAD NM_144942或者人CSAD NM_015989的碱基序列的DNA互补的DNA杂交、且编码具有CSAD活性的多肽的DNA。
所谓CSAD活性，为涵盖催化3-亚磺酸-L-丙氨酸＝亚牛磺酸+CO2、使其脱碳酸的活性的概念。也为使L-磺基丙氨酸脱碳酸的活性(EC-号4.1.1.29)。
CSAD活性可以如下测定。
如Davis K.et.al.，J Biomed Sci 2001；8：359-364所示，定量利用CSAD的脱碳酸酶活性由L-[1-14C]磺基丙氨酸生成的14CO2。
在本发明中，作为编码CSAD的DNA，使用编码具有SEQ ID NO：4的氨基酸序列或UniProt Knowledgebase(Swiss-Prot和TrEMBL)大鼠CSAD(Q64611)、小鼠CSAD (Q9DBE0)或者人CSAD(Q9Y600)的氨基酸序列的多肽的DNA即可。此外，也可以使用编码具有在SEQ ID NO：4的氨基酸序列或UniProt Knowledgebase(Swiss-Prot和TrEMBL)大鼠CSAD(Q64611)、小鼠CSAD_(Q9DBE0)或者人CSAD_(Q9Y600)的氨基酸序列中取代、缺失、附加或/及插入1个或多个氨基酸所得的氨基酸序列、且具有CSAD活性的多肽的DNA。
具有在SEQ ID NO：4的氨基酸序列或UniProt Knowledgebase(Swiss-Prot和TrEMBL)大鼠CSAD(Q64611)、小鼠CSAD_(Q9DBE0)或者人CSAD_(Q9Y600)的氨基酸序列中取代、缺失、附加或/及插入1个或多个氨基酸所得的氨基酸序列、且具有CSAD活性的多肽为与仓鼠、大鼠、小鼠、人(以下有时记为“仓鼠等的CSAD”)功能相同的多肽。这样的多肽中，例如包括仓鼠等的CSAD的突变体等。
作为用于制备与某多肽功能相同的多肽的本领域技术人员熟知的方法，已知向多肽导入突变的方法。例如，本领域技术人员通过使用定点诱变法(Hashimoto-Gotoh，T.et al.(1995)Gene 152，271-275、Zoller，MJ，and Smith，M.(1983)Methods Enzymol.100，468-500、Kramer，W.et al.(1984)Nucleic Acids Res.12，9441-9456、Kramer W，and Fritz HJ(1987)Methods.Enzymol.154，350-367、Kunkel，TA(1985)Proc Natl Acad Sci U S A.82，488-492、Kunkel(1988)MethodsEnzymol.85，2763-2766)等，适当向仓鼠等的CSAD的氨基酸导入适宜突变，可以制备与仓鼠等的CSAD功能相同的多肽。另外，氨基酸的突变在自然界中也可以发生。
作为与仓鼠等的CSAD功能相同的多肽，具体而言，可以举出：仓鼠等的CSAD的氨基酸序列(例如，SEQ ID NO：4的氨基酸序列或UniProt Knowledgebase(Swiss-Prot和TrEMBL)大鼠CSAD(Q64611)、小鼠CSAD_(Q9DBE0)或者人CSAD_(Q9Y600)的氨基酸序列)中的1或2个以上、优选1个以上30个以下、更优选1个以上10个以下氨基酸缺失的多肽；仓鼠等的CSAD的氨基酸序列中附加有1或2个以上、优选1个以上30个以下、更优选1个以上10个以下的氨基酸的多肽；仓鼠等的CSAD的氨基酸序列中的1或2个以上、优选1个以上30个以下、更优选1个以上10个以下氨基酸被其它氨基酸取代的多肽等。
突变的氨基酸残基没有特别限定，优选突变为保存有氨基酸侧链的性质的其它氨基酸。例如作为氨基酸侧链的性质，可以举出：疏水性氨基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y、V)、亲水性氨基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T)、具有脂肪族侧链的氨基酸(G、A、V、L、I、P)、具有含羟基侧链的氨基酸(S、T、Y)、具有含硫原子侧链的氨基酸(C、M)、具有含羧酸及酰胺侧链的氨基酸(D、N、E、Q)、具有含碱性侧链的氨基酸(R、K、H)、具有含芳香族侧链的氨基酸(H、F、Y、W)(括号内的字母均为氨基酸的单字母缩写)。
需要说明的是，已知具有通过在某氨基酸序列中缺失、附加及/或用其它氨基酸取代1个或多个氨基酸进行修饰所得的氨基酸序列的多肽可以维持其生物学活性(Mark，D.F.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1984)81，5662-5666、Zoller，M.J.&smith，M.Nucleic AcidsResearch(1982)10，6487-6500、Wang，A.et al.，Science 224，1431-1433、Dalbadie-McFarland，G.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1982)79，6409-6413)。
作为在仓鼠等的CSAD中附加有1个或多个氨基酸残基的多肽，例如可以举出：含有仓鼠等的CSAD的融合多肽。融合多肽是仓鼠等的CSAD和其它多肽融合所得的多肽。对于制备融合多肽的方法，将编码仓鼠等的CSAD的基因和编码其它的多肽的基因以框架一致的方式连结并将其导入表达载体中，使其被宿主表达即可，可以使用本领域技术人员公知的方法。作为用于与仓鼠等的CSAD融合的其它多肽，没有特别限定。
作为用于与仓鼠等的CSAD融合的其它多肽，例如可以举出：FLAG(Hopp，T.P.et al.，BioTechnology(1988)6，1204-1210)、6个His(组氨酸)残基构成的6×His、10×His、流感凝集素(HA)、人c-myc的片段、VSV-GP的片段、p18HIV的片段、T7-标签、HSV-标签、E-标签、SV40T抗原的片段、lck标签、α-微管蛋白的片段、B-标签、蛋白C的片段、GST(谷胱甘肽-S-转移酶)、HA(流感凝集素)、免疫球蛋白恒定区域、β-半乳糖苷酶、MBP(麦芽糖结合多肽)等。
通过使编码市售的这些多肽的基因和编码仓鼠等的CSAD的基因融合，并使由此制备的融合基因表达，可以制备融合多肽。
另外，作为制备和某多肽功能相同的多肽的本领域技术人员公知的其它方法，可以举出：利用杂交技术(Sambrook，J et al.，MolecularCloning 2nd ed.，9.47-9.58，Cold Spring Harbor Lab.Press，1989)的方法。即，作为本领域技术人员，通常以编码仓鼠等的CSAD的DNA序列(例如SEQ ID NO：3的DNA序列或GenBank大鼠CSADNM_021750、小鼠CSAD NM_144942或者人CSAD NM_015989的DNA酸序列)或其一部分作为基础，分离与其同一性高的DNA，并从该DNA中分离和仓鼠等的CSAD功能相同的多肽。
作为用于分离编码和仓鼠等的CSAD功能相同的多肽的DNA的杂交条件，本领域技术人员可以适当选择。作为杂交的条件，例如可以举出严格性低的条件。所谓严格性低的条件，例如可以举出42℃、2×SSC、0.1％SDS，优选为50℃、2×SSC、0.1％SDS。另外，更优选举出严格性高的条件。所谓严格性高的条件，例如可以举出65℃、2×SSC、0.1％SDS。在这些条件下，不仅可以得到温度越低同一性越高的DNA，还可以得到只具有低的同一性的DNA。相反，可以期待只得到温度越高同一性越高的DNA。其中，作为影响杂交的严格性的要素，除温度之外，还要考虑盐浓度等多个要素，本领域技术人员可以通过适当选择这些要素而实现同样的严格性。
通过上述杂交技术而分离的DNA编码的多肽为与仓鼠等的CSAD的氨基酸序列具有70％以上的同一性的多肽即可，通常与仓鼠等的CSAD的氨基酸序列具有高同一性。所谓高同一性，通常是指97％以上的同一性，优选98％以上的同一性，更优选99％以上的同一性。多肽的同一性的确定遵循文献(Wilbur，W.J.and Lipman，D.J，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1983)80，726-730)中记载的算法进行确定即可。
多肽根据后述的产生其的细胞、宿主或纯化方法的不同，氨基酸序列、分子量、等电点或糖链的有无和形态等可以不同。但是，所得的多肽只要具有和仓鼠等的CSAD相同的功能，就可以在本发明中利用编码该多肽的DNA。例如，使多肽在原核细胞例如大肠杆菌中表达时，蛋氨酸残基被附加在原来的多肽的氨基酸序列的N末端。另外，使其在真核细胞例如哺乳动物细胞中表达时，N末端的信号序列被除去。编码这样的多肽的DNA也可以用于本发明。
在本发明中，作为编码CSAD的DNA，可以使用具有SEQ ID NO：3的碱基序列或GenBank大鼠CSAD NM_021750、小鼠CSAD NM_144942或者人CSAD NM_015989的碱基序列的DNA。此外，也可以使用在严格的条件下和与具有SEQ ID NO：3的碱基序列或GenBank大鼠CSAD NM_021750、小鼠CSAD NM_144942或者人CSAD NM_015989的碱基序列的DNA互补的DNA杂交、且编码具有CSAD活性的多肽的DNA。
编码CSAD的DNA除被用于如上所述的期望多肽的体内和体外生产外，还可以用于制备高效表达CSAD的细胞。编码CSAD的DNA为可以编码CSAD的DNA即可，可以为任意的形态。即，其可以为由mRNA合成的cDNA、基因组DNA、化学合成DNA等。另外，只要可以对编码CSAD的DNA进行编码，就包括具有基于遗传密码的简并的任意的碱基序列的DNA。
编码CSAD的DNA可以通过本领域技术人员公知的方法进行制备。例如，可以如下操作进行制备：由表达CSAD的细胞制备cDNA文库，将CSAD的DNA序列(例如，SEQ ID NO：3的碱基序列或GenBank大鼠CSAD NM_021750、小鼠CSAD NM_144942或者人CSAD NM_015989的碱基序列)的一部分作为探针进行杂交，由此进行制备。cDNA文库可以通过例如Sambrook，J.et al.，Molecularcloning、Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)记载的方法进行制备，也可以使用市售的基因文库。另外，也可以如下操作进行制备：由表达CSAD的细胞制备RNA，基于CSAD的DNA序列(例如，SEQ ID NO：3的碱基序列或GenBank大鼠CSAD NM_021750、小鼠CSAD NM_144942或者人CSAD NM_015989的碱基序列)合成寡聚DNA，并将其用作引物，进行PCR反应，使编码CSAD的cDNA扩增，由此进行制备。
另外，通过确定所得cDNA的碱基序列，可以确定其编码的翻译区域，可以得到CSAD的氨基酸序列。另外，通过将得到的cDNA作为探针，对基因组DNA文库进行筛选，可以分离基因组DNA。
具体而言，如下操作进行即可。首先，从表达CSAD的细胞、组织等中分离mRNA。mRNA的分离可以通过公知的方法例如胍超速离心法(Chirgwin，J.M.et al.，Biochemistry(1979)18，5294-5299)、AGPC法(Chomczynski，P.and Sacchi，N.，Anal.Biochem.(1987)162，156-159)等制备总RNA，使用mRNA纯化试剂盒(Pharmacia)等从总RNA中纯化mRNA。另外，通过使用QuickPrep mRNA纯化试剂盒(Pharmacia)，可以直接制备mRNA。
使用逆转录酶由所得mRNA合成cDNA。cDNA的合成也可以使用AMV逆转录酶第一链cDNA合成试剂盒(生化学工业)等进行。另外，可以使用引物等，遵循使用5’-Ampli FINDER RACE试剂盒(clontech制)及聚合酶链式反应(polymerase chain reaction：PCR)的5’-RACE法(Frohman，M.A.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1988)85，8998-9002；Belyavsky，A.et al.，Nucleic Acids Res.(1989)17，2919-2932)，进行cDNA的合成和扩增。
由所得PCR产物制备目的DNA片段，将其与载体DNA连结。进而，利用其制备重组载体，导入大肠杆菌等并选择集落，制备期望的重组载体。目的DNA的碱基序列可以通过公知的方法例如双脱氧核苷酸链终止法进行确认。
另外，对于编码CSAD的DNA，考虑表达时使用的宿主的密码子使用频率，可以设计表达效率更高的碱基序列(Grantham，R.et al.Nucelic Acids Research(1981)9，r43-74)。另外，编码CSAD的DNA可以通过市售的试剂盒和公知的方法进行改变。作为改变，例如可以举出：利用限制性内切酶进行的消化、合成寡核苷酸和适当的DNA片段的插入、接头的附加、起始密码子(ATG)及/或终止密码子(TAA、TGA或TAG)的插入等。
编码CSAD的DNA还包括为在严格的条件下和与具有SEQ IDNO：3的碱基序列或GenBank大鼠CSAD NM_021750、小鼠CSAD NM_144942或者人CSAD NM_015989的碱基序列的DNA互补的DNA杂交的DNA、且编码与CSAD功能相同的多肽的DNA。
作为严格的条件，本领域技术人员可以适当选择，例如可以举出严格性低的条件。所谓严格性低的条件，例如可以举出42℃、2×SSC、0.1％SDS，优选为50℃、2×SSC、0.1％SDS。另外，更优选举出严格性高的条件。所谓严格性高的条件，例如可以举出65℃、2×SSC及0.1％SDS。在这些条件下，可以得到温度越高同一性越高的DNA。所述杂交的DNA可以优选为天然DNA，例如cDNA或染色体DNA。
通过上述杂交技术而分离的DNA通常与编码仓鼠等的CSAD的DNA的碱基序列具有高同一性。编码ALT的DNA中还包括编码和仓鼠等的CSAD功能相同的多肽、且和编码仓鼠等的CSAD的DNA具有高同一性的DNA。所谓高同一性，通常是指96％以上的同一性，优选98％以上的同一性，更优选99％以上的同一性。碱基序列的同一性可以通过Karlin和Altschul发明的算法BLAST(Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90：5873-5877，1993)确定。基于该算法，开发出了被称为BLASTN和BLASTX的程序(Altschul et al.J.Mol.Biol.215：403-410，1990)。基于BLAST并通过BLASTN解析碱基序列时，参数设定为例如score＝100、wordlength＝12。这些解析方法的具体方法是公知的(http://www.ncbi.nlm.nih.gov.)。
另外，ALT原本作为使丙氨酸的氨基转变为2-酮戊二酸、生成谷氨酸的酶而为人所知，但只要通过使其在CHO细胞等宿主细胞内高效表达，如果可以促进由丙氨酸生物合成丙酮酸或谷氨酸的反应，则可以用于TCA循环中的代谢及糖异生的葡萄糖生成，改善细胞的培养，可以期待期望多肽的高产。
高效表达ALT的细胞为ALT的表达量比天然细胞增加的细胞即可，没有特别限定。天然细胞没有特别限定，例如可以举出：CHO细胞等制备重组蛋白质时用作宿主的细胞。
作为高效表达ALT的细胞，例如可以举出：人为导入有ALT基因的细胞。人为导入有ALT基因的细胞可以通过本领域技术人员公知的方法进行制备，例如，可以通过将ALT基因插入载体、通过用该载体转化细胞来进行制备。进而，在本说明书中，通过基因活化技术(例如参照国际公开第WO94/12650号的单行本)使内源性ALT基因活化，其结果，ALT高效表达的细胞也被包括在人为导入有ALT基因的细胞中。
在细胞中高效表达的ALT为来源于任意的生物的ALT即可，没有特别限定。具体而言，公知的有：人、小鼠、大鼠、狗、非洲爪蟾、果蝇、线虫、日本米、原始红藻、酿酒酵母、丝状菌-Ashbya gossypii、真菌-白色念珠菌(Candida albicans)、裂殖酵母、真菌-构巢曲霉菌(Aspergillus nidulans)、真菌-烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)、清酒酒曲-米曲霉菌(Aspergillus oryzae)、真菌-新型隐球菌(Cryptococcus neoformans)、细胞性粘菌-盘基网柄菌(Dictyostelium discoideum)、布鲁斯锥虫(Trypanosoma brucei)、细胞内寄生性原虫-硕大利什曼原虫(Leishmania major)、痢疾阿米巴-溶组织内阿米巴(Entamoeba histolytica)或细胞内寄生性原虫-克鲁斯锥虫(Trypanosoma cruzi)等的ALT，可以使用上述ALT，但优选为来源于人、啮齿类或与宿主细胞为同种的生物的ALT，例如，使ALT高效表达的细胞为中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)时，优选为来源于人或仓鼠的ALT。人、小鼠、酵母等的ALT存在变体(ALT1和ALT2)。ALT2与ALT1的氨基酸有80％以上的同一性。在后述的实施例中，使ALT1强制表达。
作为导入细胞的ALT基因，可以举出编码ALT的以下(a2)～(e2)中的任一种DNA。
(a2)编码具有下列的氨基酸序列的多肽的DNA：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(Homo sapiens)(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(Homo sapiens)(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(Mus musculus)(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(Mus musculus)(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(Rattus norvegicus)(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(Canis familiaris)(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(Xenopus laevis)(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(Caenorhabditiselegans)(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(Oryza sativa japonica)(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(Oryza sativa japonica)(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻(Cyanidioschyzonmerolae)：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae)：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌(Candida albicans)：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母(Schizosaccharomycespombe)：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌(Aspergillus nidulans)：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌(Aspergillus oryzae)：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌(Cryptococcusneoformans)：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌(Dictyosteliumdiscoideum)：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫(Trypanosoma brucei)：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫(Leishmaniamajor)：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴(Entamoebahistolytica)：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴(Entamoebahistolytica)：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫(Trypanosoma cruzi)：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫(Trypanosoma cruzi)：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫(Trypanosoma cruzi)：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫(Trypanosoma cruzi)：510889.140；
(b2)编码具有在下列的氨基酸序列中取代、缺失、附加或/及插入1个或多个(例如数个)氨基酸所得的氨基酸序列、且具有ALT活性的多肽的DNA：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140；
(c2)编码与下列的氨基酸序列具有70％以上的同一性、且具有ALT活性的多肽的DNA：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140；
(d2)具有下列的碱基序列的DNA：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140；
(e2)在严格的条件下和与具有下列的碱基序列的DNA互补的DNA杂交、且编码具有ALT活性的多肽的DNA：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140。
所谓ALT活性，为涵盖催化氨基酸和α-酮酸之间的氨基转移的酶活性的概念。
ALT活性可以如下测定。
使用自动分析用丙氨酸氨基转移酶测定试剂(ランピアリキツドS-ALT，批准编号20900AMZ00597000)及、RajamohanF.et.al.Protein Expression and Purification(2006)48，81-89中所示的方法求出ALT活性值。
在本发明中，作为编码ALT的基因，使用编码具有下列的氨基酸序列的多肽的DNA即可：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremothecium
gossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140。
此外，也可以使用编码具有在上述氨基酸序列中取代、缺失、附加或/及插入1个或多个氨基酸所得的氨基酸序列、且具有ALT活性的多肽的DNA。
具有在下列的氨基酸序列中取代、缺失、附加或/及插入1个或多个氨基酸所得的氨基酸序列、且具有ALT活性的多肽为与人、小鼠、大鼠、狗、非洲爪蟾、果蝇、线虫、日本米、原始红藻、酿酒酵母、丝状菌-Ashbya gossypii、真菌-白色念珠菌、裂殖酵母、真菌-构巢曲霉菌、真菌-烟曲霉菌、清酒酒曲-米曲霉菌、真菌-新型隐球菌、细胞性粘菌-盘基网柄菌、布鲁斯锥虫、细胞内寄生性原虫-硕大利什曼原虫、痢疾阿米巴-溶组织内阿米巴或细胞内寄生性原虫-克鲁斯锥虫ALT(以下有时记为“人等的ALT”)功能相同的多肽：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140。
这样的多肽中，例如，包括人等的ALT的突变体等。在后述的实施例及参考例中，使用公开的在人ALT1基因编码的氨基酸496个中、4氨基酸(R53S、Q72R、F286S、M332K)被取代的突变体。
作为用于制备与某多肽功能相同的多肽的本领域技术人员公知的方法，已知向多肽中导入突变的方法。例如，本领域技术人员通过使用定点诱变法(Hashimoto-Gotoh，T.et al.(1995)Gene 152，271-275、Zoller，MJ，and Smith，M.(1983)Methods Enzymol.100，468-500、Kramer，W.et al.(1984)Nucleic Acids Res.12，9441-9456、Kramer W，and Fritz HJ(1987)Methods.Enzymol.154，350-367、Kunkel，TA(1985)Proc Natl Acad Sci U S A.82，488-492、Kunkel(1988)MethodsEnzymol. 85，2763-2766)等，向人等的ALT的氨基酸导入适宜突变，可以制备与人等的ALT功能相同的多肽。另外，氨基酸的突变在自然界中也可以发生。
作为与人等的ALT功能相同的多肽，具体而言，可以举出：
人等的ALT的氨基酸序列中的1或2个以上、优选1个以上30个以下、更优选1个以上10个以下氨基酸缺失的多肽；
人等的ALT的氨基酸序列中附加有1或2个以上、优选1个以上30个以下、更优选1个以上10个以下氨基酸的多肽；
人等的ALT的氨基酸序列中的1或2个以上、优选1个以上30个以下、更优选1个以上10个以下氨基酸被其它氨基酸取代的多肽等，
所述人等的ALT的氨基酸序列为例如下列的氨基酸序列：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140。
突变的氨基酸残基没有特别限定，优选突变为保存有氨基酸侧链的性质的其它氨基酸。例如作为氨基酸侧链的性质，可以举出：疏水性氨基酸(A、I、L、M、F、P、W、Y、V)、亲水性氨基酸(R、D、N、C、E、Q、G、H、K、S、T)、具有脂肪族侧链的氨基酸(G、A、V、L、I、P)、具有含羟基侧链的氨基酸(S、T、Y)、具有含硫原子侧链的氨基酸(C、M)、具有含羧酸及酰胺侧链的氨基酸(D、N、E、Q)、具有含碱性侧链的氨基酸(R、K、H)、具有含芳香族侧链的氨基酸(H、F、Y、W)(括号内的字母均为氨基酸的单字母缩写)。
需要说明的是，已知具有通过在某氨基酸序列中缺失、附加及/或用其它氨基酸取代1个或多个氨基酸进行修饰所得的氨基酸序列的多肽可以维持其生物学活性(Mark，D.F.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1984)81，5662-5666、Zoller，M.J.&Smith，M.Nucleic AcidsResearch(1982)10，6487-6500、Wang，A.et al.，Science 224，1431-1433、Dalbadie-McFarland，G.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1982)79，6409-6413)。
作为在人等的ALT中附加有1个或多个氨基酸残基的多肽，例如可以举出：含有人等的ALT的融合多肽。融合多肽是人等的ALT和其它多肽融合所得的多肽。对于制备融合多肽的方法，将编码人等的ALT的基因和编码其它多肽的基因以框架一致的方式连结并将其导入表达载体中，使其被宿主表达即可，可以使用本领域技术人员公知的方法。作为用于与人等的ALT融合的其它多肽，没有特别限定。
作为用于与人等的ALT融合的其它多肽，例如可以举出：FLAG(Hopp，T.P.et al.，BioTechnology(1988)6，1204-1210)、6个His(组氨酸)残基构成的6×His、10×His、流感凝集素(HA)、人c-myc的片段、VSV-GP的片段、p18HIV的片段、T7-标签、HSV-标签、E-标签、SV40T抗原的片段、lck标签、α-微管蛋白的片段、B-标签、蛋白C的片段、GST(谷胱甘肽-S-转移酶)、HA(流感凝集素)、免疫球蛋白恒定区域、β-半乳糖苷酶、MBP(麦芽糖结合多肽)等。
通过使编码市售的这些多肽的基因和编码人等的ALT的基因融合，并使由此制备的融合基因表达，可以制备融合多肽。
另外，作为制备与某多肽功能相同的多肽的本领域技术人员公知的其它方法，可以举出：利用杂交技术(Sambrook，J et al.，MolecularCloning 2nd ed.，9.47-9.58，Cold Spring Harbor Lab.press，1989)的方法。即，作为本领域技术人员，通常以编码人等的ALT的DNA序列或其一部分为基础，分离与其同一性高的DNA，并从该DNA中分离与人等的ALT功能相同的多肽，
所述编码人等的ALT的DNA序列为例如下列的DNA序列：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140。
作为用于分离编码和人等的ALT功能相同的多肽的DNA的杂交条件，本领域技术人员可以适当选择。作为杂交的条件，例如可以举出严格性低的条件。所谓严格性低的条件，例如可以举出42℃、2×SSC、0.1％SDS，优选为50℃、2×SSC、0.1％SDS。另外，更优选举出严格性高的条件。所谓严格性高的条件，例如可以举出65℃、2×SSC、0.1％SDS。在这些条件下，不仅可以得到温度越低同一性越高的DNA，还可以得到只具有低的同一性的DNA。相反，可以期待只得到温度越高同一性越高的DNA。其中，作为影响杂交的严格性的要素，除温度之外，还要考虑盐浓度等多个要素，本领域技术人员可以通过适当选择这些要素而实现同样的严格性。
通过上述杂交技术而分离的DNA编码的多肽为与人等的ALT的氨基酸序列具有70％以上的同一性的多肽即可，通常与人等的ALT的氨基酸序列具有高同一性。所谓高同一性，通常是指97％以上的同一性，优选98％以上的同一性，更优选99％以上的同一性。多肽的同一性的确定遵循文献(Wilbur，W.J.and Lipman，D.J，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1983)80，726-730)中记载的算法进行确定即可。
多肽根据后述的产生其的细胞、宿主或纯化方法的不同，氨基酸序列、分子量、等电点或糖链的有无和形态等可以不同。但是，所得的多肽只要具有和人等的ALT相同的功能，就可以在本发明中利用编码该多肽的DNA。例如，使多肽在原核细胞例如大肠杆菌中表达时，蛋氨酸残基被附加在原来的多肽的氨基酸序列的N末端。另外，使其在真核细胞例如哺乳动物细胞中表达时，N末端的信号序列被除去。编码这样的多肽的DNA可以用于本发明。
在本发明中，作为编码ALT的DNA，使用具有下列的碱基序列的DNA：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140。
此外，也可以使用在严格的条件下和与具有上述碱基序列的DNA互补的DNA杂交、且编码具有ALT活性的多肽的DNA。
编码ALT的DNA除被用于如上所述的期望多肽的体内和体外生产外，还可以用于制备高效表达ALT的细胞。编码ALT的DNA为可以编码ALT的DNA即可，可以为任意的形态。即，其可以为由mRNA合成的cDNA、基因组DNA、化学合成DNA等。另外，只要可以对编码ALT的DNA进行编码，就包括具有基于遗传密码的简并的任意的碱基序列的DNA。
编码ALT的DNA可以通过本领域技术人员公知的方法进行制备。
例如，可以由表达ALT的细胞制备cDNA文库，将ALT的DNA序列的一部分作为探针进行杂交，由此进行制备，
所述ALT的DNA序列为例如下列的DNA序列：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140。
cDNA文库可以通过例如Sambrook，J.et al.，Molecular cloning、Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989)记载的方法进行制备，也可以使用市售的基因文库。
另外，也可以由表达ALT的细胞制备RNA，基于ALT的DNA序列，合成寡聚DNA，并将其用作引物，进行PCR反应，使编码ALT的cDNA扩增，由此进行制备。
所述ALT的DNA序列为例如下列的DNA序列：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140。
另外，通过确定所得cDNA的碱基序列，可以确定其编码的翻译区域，可以得到ALT的氨基酸序列。另外，通过将得到的cDNA作为探针，对基因组DNA文库进行筛选，可以分离基因组DNA。
具体而言，如下操作进行即可。首先，从表达ALT的细胞、组织等中分离mRNA。mRNA的分离可以通过公知的方法例如胍超速离心法(Chirgwin，J.M.et al.，Biochemistry(1979)18，5294-5299)、AGPC法(Chomczynski，P.and  Sacchi，N.，Anal.Biochem.(1987)162，156-159)等制备总RNA，使用mRNA纯化试剂盒(Pharmacia)等从总RNA中纯化mRNA。另外，通过使用quickPrep mRNA纯化试剂盒(Pharmacia)，可以直接制备mRNA。
使用逆转录酶由所得mRNA合成cDNA。cDNA的合成也可以使用AMV逆转录酶第一链cDNA合成试剂盒(生化学工业)等进行。另外，可以使用引物等，遵循使用5’-Ampli FINDER RACE试剂盒(clontech制)及聚合酶链式反应(polymerase chain reaction：PCR)的5’-RACE法(Frohman，M.A.et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.(1988)85，8998-9002；Belyavsky，A.et al.，Nucleic Acids Res.(1989)17，2919-2932)，进行cDNA的合成和扩增。
由所得PCR产物制备目的DNA片段，将其与载体DNA连结。进而，利用其制备重组载体，导入大肠杆菌等并选择集落，制备期望的重组载体。目的DNA的碱基序列可以通过公知的方法例如双脱氧核苷酸链终止法进行确认。
另外，对于编码ALT的DNA，考虑表达时使用的宿主的密码子使用频率，可以设计表达效率更高的碱基序列(Grantham，R.et al.Nucelic Acids Research(1981)9，r43-74)。另外，编码ALT的DNA可以通过市售的试剂盒和公知的方法进行改变。作为改变，例如可以举出：利用限制性内切酶进行的消化、合成寡核苷酸和适当的DNA片段的插入、接头的附加、起始密码子(ATG)及/或终止密码子(TAA、TGA或TAG)的插入等。
编码ALT的DNA还包括为在严格的条件下和与具有下列的碱基序列的DNA互补的DNA杂交的DNA、且编码与ALT功能相同的多肽的DNA：
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：84706、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：76282、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/小家鼠(小鼠)：108682、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/褐家鼠(大鼠)：81670、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/家犬(狗)：609510、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/光滑爪蟾(非洲爪蟾)：444533、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/黑腹果蝇(果蝇)：Dmel_CG1640、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/漂亮新小杆线虫(线虫)：C32F10.8、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4342210、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/日本水稻(日本米)：4348524、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/原始红藻：CMM066C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YLR089C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/酿酒酵母：YDR111C、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/Ashbya gossypii(Eremotheciumgossypii)：AGOS_AGR085W、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/白色念珠菌：CaO19_346、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/裂殖酵母：SPBC582.08、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/构巢曲霉菌：AN1923.2、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/烟曲霉菌：AFUA_6G07770、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/米曲霉菌：AO090003000164、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/新型隐球菌：JEC21：CNG01490、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/盘基网柄菌：DDB_0232139、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/布鲁斯锥虫：Tb927.1.3950、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/硕大利什曼原虫：LmjF12.0630、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：233.t00009、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/溶组织内阿米巴：24.t00016、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.420、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：506529.430、
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.120、或
KEGG/ENZYME：2.6.1.2/克鲁斯锥虫：510889.140。
作为严格的条件，本领域技术人员可以适当选择，例如可以举出严格性低的条件。所谓严格性低的条件，例如可以举出42℃、2×SSC、0.1％SDS，优选为50℃、2×SSC、0.1％SDS。另外，更优选举出严格性高的条件。所谓严格性高的条件，例如可以举出65℃、2×SSC、0.1％SDS。在这些条件下，可以得到温度越高同一性越高的DNA。所述杂交的DNA可以优选为天然DNA，例如cDNA或染色体DNA。
通过上述杂交技术而分离的DNA通常与编码人等的ALT的DNA的碱基序列具有高同一性。编码ALT的DNA包括编码和人等的ALT功能相同的多肽、且和编码人等的ALT的DNA具有高同一性的DNA。所谓高同一性，通常是指96％以上的同一性，优选98％以上的同一性，更优选99％以上的同一性。碱基序列的同一性可以通过Karlin和Altschul发明的算法BLAST(Proc.Natl.Acad.Sci.USA90：5873-5877，1993)确定。基于该算法，开发了被称为BLASTN和BLASTX的程序(Altschul et al.J.Mol.Biol.215：403-410，1990)。基于BLAST并通过BLASTN解析碱基序列时，参数设定为例如score＝100、wordlength＝12。这些解析方法的具体方法是公知的(http://www.ncbi.nlm.nih.gov.)。
制备期望多肽时，可以通过在高效表达碳酸氢根转运蛋白和CSAD或ALT的细胞中导入编码期望多肽的基因、并在培养基中培养该细胞来进行制备。
使用人为导入有碳酸氢根转运蛋白基因和CSAD或ALT基因的细胞制备期望多肽时，碳酸氢根转运蛋白基因和CSAD或ALT基因和编码期望多肽的基因的导入顺序没有特别限定，可以在导入碳酸氢根转运蛋白基因和CSAD或ALT基因后导入编码期望多肽的基因，也可以在导入编码期望多肽的基因后导入碳酸氢根转运蛋白基因和CSAD或ALT基因。另外，也可以同时导入碳酸氢根转运蛋白基因和CSAD或ALT基因、和编码期望多肽的基因。
碳酸氢根转运蛋白基因、CSAD或ALT基因及编码期望多肽的基因的导入可以通过单一的载体同时进行，也可以使用多个载体分别进行。
高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞(也可以高效表达CSAD或ALT)的培养中，可以使用通常的细胞(优选动物细胞)培养中使用的培养基。这些培养基中通常含有氨基酸、维生素类、脂质因子、能源、渗透压调节剂、铁源、pH缓冲剂。对于这些成分的含量，通常，氨基酸在0.05～1500mg/L、维生素类在0.001～10mg/L、脂质因子在0～200mg/L、能源在1～20g/L、渗透压调节剂在0.1～10000mg/L、铁源在0.1～500mg/L、pH缓冲剂在1～10000mg/L、微量金属元素在0.00001～200mg/L、表面活性剂在0～5000mg/L、生长辅助因子在0.05～10000μg/L及核苷在0.001～50mg/L的范围是合适的，但并不限定这些范围，可以根据培养的细胞的种类、期望多肽的种类等适当决定。
除上述成分以外，例如，还可以添加微量金属元素、表面活性剂、增殖辅助因子、核苷等。
具体而言，例如可以举出包含以下成分的培养基：
●L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-半胱氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-鸟氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸等，优选L-丙氨酸、L-精氨酸、L-天冬酰胺、L-天冬氨酸、L-胱氨酸、L-谷氨酰胺、L-谷氨酸、甘氨酸、L-组氨酸、L-异亮氨酸、L-亮氨酸、L-赖氨酸、L-蛋氨酸、L-苯丙氨酸、L-脯氨酸、L-丝氨酸、L-苏氨酸、L-色氨酸、L-酪氨酸、L-缬氨酸等氨基酸类；
●i-肌醇、生物素、叶酸、硫辛酸、烟酰胺、烟酸、对氨基苯甲酸、泛酸钙、盐酸吡哆醛、盐酸吡哆醇、核黄素、盐酸硫胺、维生素B12、抗坏血酸等，优选生物素、叶酸、硫辛酸、烟酸酰胺、泛酸钙、盐酸吡哆醛、核黄素、盐酸硫胺、维生素B12、抗坏血酸等维生素类；
●氯化胆碱、酒石酸胆碱、亚油酸、油酸、胆固醇等，优选氯化胆碱等脂质因子；
●葡萄糖、半乳糖、甘露糖、果糖等，优选葡萄糖等能源；
●氯化钠、氯化钾、硝酸钾等，优选氯化钠等渗透压调节剂；
●EDTA铁、柠檬酸铁、氯化亚铁、氯化铁、硫酸亚铁、硫酸铁、硝酸铁等，优选氯化铁、EDTA铁、柠檬酸铁等铁源类；
●碳酸氢钠、氯化钙、磷酸二氢钠、HEPES、MOPS等，优选碳酸氢钠等pH缓冲剂。
除上述成分以外，例如，还可以添加：
●硫酸铜、硫酸锰、硫酸锌、硫酸镁、氯化镍、氯化锡、氯化镁、亚硅酸钠等，优选硫酸铜、硫酸锌、硫酸镁等微量金属元素；
●Tween80、普流尼克F68等表面活性剂；及
●重组型胰岛素、重组型IGF-1、重组型EGF、重组型FGF、重组型PDGF、重组型TGF-α、盐酸乙醇胺、亚硒酸钠、视黄酸、盐酸腐胺等，优选亚硒酸钠、盐酸乙醇胺、重组型IGF-1、盐酸腐胺等增殖辅助因子；
●脱氧腺苷、脱氧胞苷、脱氧鸟苷、腺苷、胞苷、鸟苷、尿苷等核苷等。
需要说明的是，在上述培养基的优选例中，还可以含有：
●链霉素、青霉素G钾及庆大霉素等抗生素、及
●酚红等pH指示剂。
培养基的pH根据所培养的细胞的不同而不同，通常在pH6.8～7.6是合适的，多数情况下为pH7.0～7.4是合适的。
培养基还可以使用市售的动物细胞培养用培养基，例如D-MEM(Dulbecco’s改良的Eagle培养基)、D-MEM/F-121∶1混合物(Dulbecco’s改良的Eagle培养基：营养混合物F-12)、RPMI1640、CHO-S-SFM II(Invitrogen公司)、CHO-SF(Sigma-Aldrich公司)、EX-CELL 301(JRH biosciences公司)、CD-CHO(Invitrogen公司)、IS CHO-V(Irvine Scientific公司)、PF-ACF-CHO(Sigma-Aldrich公司)等培养基。
另外，培养基还可以为无血清培养基。
高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞(也可以高效表达CSAD或ALT)为CHO细胞时，CHO细胞的培养可以使用本领域技术人员公知的方法进行。例如，通常，可以在气相的CO2浓度0～40％、优选2～10％的气氛下，在30～39℃、优选37℃左右下培养。
使用高效表达碳酸氢根转运蛋白的细胞(也可以高效表达CSAD或ALT)产生期望多肽的适当的培养时间通常为1天～3个月、优选为1天～2个月、更优选为1天～1个月。
另外，作为动物细胞培养用各种培养装置，例如，可以使用发酵槽型槽培养装置、气升型培养装置、培养瓶型培养装置、旋转瓶(Spinner flask)型培养装置、微载体型培养装置、流动层型培养装置、中空纤维型培养装置、滚瓶(Roller Bottle)型培养装置、填充槽型培养装置等。
培养也可以使用分批培养(batch culture)、流加培养(fed-batchculture)、连续培养(continuous culture)等中的任一种方法，优选流加培养或连续培养，更优选流加培养。
通过本发明的方法制备的多肽具有可用作药物的生物学活性时，可以通过将该多肽与药学可接受的载体或添加剂混合而进行制剂化，从而制备药品。
作为药学可接受的载体及添加剂的例子，可以举出：水、药学可接受的有机溶剂、胶原、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、羧乙烯聚合物、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸钠、藻酸钠、水溶性右旋糖酐、羧甲基淀粉钠、果胶、甲基纤维素、乙基纤维素、黄原胶、阿拉伯胶、酪蛋白、琼脂、聚乙二醇、双甘油、甘油、丙二醇、凡士林、石蜡、硬脂醇、硬脂酸、人血清白蛋白(HSA)、甘露醇、山梨糖醇、乳糖、容许用作医药添加剂的表面活性剂等。
实际的添加剂可以根据本发明治疗剂的剂型从上述添加剂单独或适当组合选择，当然并不限定于这些物质。例如，作为注射用制剂使用时，可以使用将纯化的多肽溶解在溶剂例如生理盐水、缓冲液、葡萄糖溶液等中，并在其中加入防吸附剂例如Tween80、Tween20、明胶、人血清白蛋白等所得的物质。或者，为了在使用前形成溶解再构成的剂型，可以为冻结干燥过的物质，作为用于冻结干燥的赋形剂，可以使用例如甘露醇、葡萄糖等糖醇和糖类。
多肽的有效给药量根据多肽的种类、作为治疗和预防对象的患者的种类、患者的年龄、疾病的严重程度等进行适当选择。例如，多肽为抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖抗体时，抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖抗体的有效给药量为：一次每1kg体重为0.001mg～1000mg的范围。或者，可以选择每个患者为0.01～100000mg/人的给药量。但并不限定于上述给药量。
多肽的给药方法可以为经口、非经口给药中的任一种，优选为非经口给药，具体而言，可以举出：注射(例如通过静脉内注射、肌肉内注射、腹腔内注射、皮下注射等的全身或局部给药)、经鼻给药、经肺给药、经皮给药等。
本发明还提供导入有编码碳酸氢根转运蛋白的DNA和编码半胱亚磺酸脱羧酶或丙氨酸氨基转移酶的DNA的细胞(DNA均可以插入载体中)。
使用真核细胞时，例如，可以使用动物细胞、植物细胞、真菌细胞作为宿主。作为动物细胞，已知有哺乳类动物细胞，例如CHO(J.Exp.Med.(1995)108，945)、COS、3T3、骨髓瘤、BHK(幼仓鼠肾)、HeLa、Vero；两栖类动物细胞，例如非洲爪蟾卵母细胞(Valle，etal.，Nature(1981)291，358-340))或昆虫细胞，例如，Sf9、Sf21、Tn5。作为CHO细胞，可以特别优选使用作为缺损DHFR基因的CHO细胞的dhfr-CHO(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1980)77，4216-4220)和CHO K-1(Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1968)60，1275)。以在动物细胞中大量表达为目的时，特别优选CHO细胞。DNA(可以插入载体中)向宿主细胞的导入可以通过例如磷酸钙法、DEAE右旋糖酐法、使用阳离子脂质体DOTAP(Boeringer Mannheim公司制)的方法、电穿孔法、脂转染等方法而进行。
作为植物细胞，已知有例如来源于烟草(Nicotiana tabacum)的细胞作为多肽生产系统，使其进行愈伤组织培养即可。作为真菌细胞，已知有酵母，例如酵母(Saccharomyces)属，例如酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)；丝状菌，例如曲霉(Aspergillus)属，例如黑曲霉(Aspergillus niger)。
使用原核细胞时，有使用细菌细胞的产生系统。作为细菌细胞，可以举出大肠杆菌(E.coli)，例如JM109、DH5α、HB101等，此外，已知有枯草杆菌。
通过利用以这些细胞为目的的基因进行转化，并将转化所得的细胞在体外进行培养，可以得到目的基因编码的多肽。培养可以通过公知的方法进行。例如，作为动物细胞的培养液，可以使用例如DMEM、MEM、RPMI1640、IMDM。此时，可以并用胎牛血清(FCS)等血清补液，也可以进行无血清培养。培养时的pH优选为约6～8。培养通常在约30～40℃下进行约15～200小时，并根据需要进行培养基的交换、通气、搅拌。
另一方面，作为在体内产生多肽的系统，例如可以举出：使用动物的产生系统和使用植物的产生系统。向这些动物或植物中导入目的基因，在动物或植物体内产生多肽、并回收。本发明中的“宿主”包括这些动物和植物。
使用动物时，有使用哺乳类动物、昆虫的产生系统。作为哺乳类动物，可以使用山羊、猪、绵羊、小鼠、牛(Vicki Glaser，SPECTRUMBiotechnology Applications，1993)。另外，使用哺乳类动物时，可以使用转基因动物。
例如，可将目的基因以与编码山羊β酪蛋白这样的乳汁中固有产生的多肽的基因的融合基因的形式进行制备。接着，将含有该融合基因的基因片段注入山羊的胚胎中，将该胚胎移植到雌山羊中。从由接受胚胎的山羊生下的转基因山羊或其子孙产生的乳汁中，可以得到目的多肽。为了增加转基因山羊产生的含有多肽的乳汁量，可以在转基因山羊中使用适量激素(Ebert，K.M.et al.，Bio/Technology(1994)12，699-702)。
另外，作为昆虫，可以使用例如蚕。使用蚕时，通过使蚕感染插入有编码目的多肽的基因的杆状病毒，可以从该蚕的体液中得到目的多肽(Susumu，M.et al.，Nature(1985)315，592-594)。
进而，使用植物时，可以使用例如烟草。使用烟草时，将编码目的多肽的基因插入植物表达用载体例如pMON 530中，将该载体导入根癌土壤杆菌(Agrobacterium tumefaciens)这样的细菌中。使烟草例如Nicotiana tabacum感染该细菌，从而可以由该烟草的叶子得到期望多肽(Julian K.-C.Ma et，al.，Eur.J.Immunol.(1994)24，131-138)。
由此得到的多肽可以从宿主细胞内或细胞外(培养基等)分离，并纯化为基本上纯且均匀的多肽。多肽的分离、纯化使用通常的多肽的纯化中使用的分离、纯化方法进行即可，没有任何限制。例如，通过适当选择并组合色谱法、过滤、超滤、盐析、溶剂沉淀、溶剂萃取、蒸馏、免疫沉降、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳、等电点电泳法、透析、重结晶等，可以分离、纯化多肽。
作为色谱法，例如可以举出：亲和色谱法、离子交换色谱法、疏水性色谱法、凝胶过滤、反相色谱法、吸附色谱法等(Strategies forProtein Purification and Characterization；A Laboratory CourseManual.Ed Daniel R.Marshak et al.，Cold Spring Harbor LaboratoryPress，1996)。这些色谱法可以使用液相色谱例如HPLC、FPLC等液相色谱进行。本发明也包括使用这些纯化方法进行高度纯化所得的多肽。
需要说明的是，通过在多肽纯化前或纯化后使适当的多肽修饰酶作用，可以任意添加修饰而部分除去肽。作为多肽修饰酶，例如可以使用胰蛋白酶、糜蛋白酶、赖氨酰内肽酶、蛋白激酶、葡萄糖苷酶等。
需要说明的是，在本发明中，所谓“导入有DNA的细胞”或“导入DNA的细胞”，为除通过基因重组技术导入有外来性DNA的细胞外，还包括通过基因活化技术(例如参照国际公开第WO94/12650号的单行本)使内源性DNA活化、从而对应于该DNA的蛋白质的表达或该DNA的转录开始或增加的细胞的概念。
实施例
以下，通过实施例对本发明进行具体说明。需要说明的是，这些实施例为用于说明本发明的示例，并不限定本发明的范围。
实施例1：人肝细胞阴离子交换蛋白(阴离子交换蛋白1，带3) 基因克隆
将市售的人肝QUICK-克隆cDNA(Clontech公司制)作为模板，通过PCR法得到来源于人肝脏的阴离子交换蛋白(AE1)基因。测定克隆所得基因的碱基序列，从与公开的人AE1的同一性确认编码AE1。所得AE1基因在2733个碱基中，有8个位点(t263g、t357c、a645t、a672c、c951t、a2078g、t2195c、c2500t)发生突变，编码的氨基酸在911个中、有4个氨基酸(L88R、E693G、V712A、H834Y)不同。但预测为具有13个跨膜区域的转运蛋白(图1)，因此，作为来源于人肝脏的AE1用于细胞改变中。
实施例2：通过导入人阴离子交换蛋白基因来增加抗体产生量
在通过实施例1的PCR克隆得到的人AE1(以下称为AE1)基因中加入Kozak序列，构筑CMV启动子表达质粒pHyg-AE1(图2)、pPur-AE1(图3)。将不含有pHyg-AE1或AE1基因的pHyg表达质粒(构筑将Clontech公司的来源于pTK5的潮霉素抗性基因表达单元导入pSV2-dhfr质粒(ATCC No.37146)中的质粒后，除去dhfr表达单元所得的质粒。)通过电穿孔法导入作为亲本株的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生CHO细胞(参照国际公开第WO 2006/006693号的单行本)，在潮霉素(200μg/ml)的存在下静置培养，扩大高增殖的细胞株后，由pHyg-AE1细胞株制备总RNA，通过TaqMan法筛选高效表达人AE1的5株。进而通过振动培养，将和作为对照的pHyg导入细胞(4株)的增殖程度相同的4株作为人AE1导入细胞，进行抗体产生量比较。在利用初始密度2×105细胞/mL的50ml摇瓶的流加培养中，摇瓶培养后期第12天的pHyg-AE1导入细胞(4株)的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量优于pHyg导入细胞(4株)(t检验P＜0.05，图4)。
接着，以pHyg-AE1导入细胞4株中抗体产生量最高的AE1表达株作为亲本株，通过电穿孔法导入含有嘌呤霉素抗性基因的半胱亚磺酸脱羧酶(CSAD)表达质粒pPur-CSAD(图10、后述的参考例2)、含有嘌呤霉素抗性基因的丙氨酸氨基转移酶(ALT1)表达质粒pPur-ALT1(图11、后述的参考例4)，对照质粒pPur(Clontech公司的pPUR(嘌呤霉素抗性表达载体))。在嘌呤霉素(6μg/ml)的存在下静置培养，扩大高增殖的细胞株后，制备总RNA，筛选高效表达新导入的基因的AE1/CSAD共表达株(9株)、AE1/ALT1共表达株(10株)、AE1/pPur共表达株(8株)，比较抗体产生量及存活率。在以初始密度2×105细胞/mL利用50ml摇瓶进行流加培养时，AE1/CSAD共表达株(9株)与对照AE1/pPur共表达株(8株)相比，摇瓶培养后期第10天的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量(t检验P＜0.05，图5)、存活率(t检验P＜0.01，图6)均优异。3种共表达株中，抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量最高的细胞株为AE1/ALT1共表达株(10株)，在摇瓶流加培养第8天，优于对照AE1/pPur共表达株(8株)(t检验P＜0.01，图7)。且，AE1/ALT1共表达株(10株)中，在摇瓶流加培养研究中，将抗体产生量最高且高效表达ALT1mRNA的AA53(1497mg/L/8天)以初始密度10×105细胞/mL进行1L Jar流加培养时，在培养第7天为1.9g/L/7天，通过短期培养产生大量的抗体(图8)。在培养第21天为5.3g/L的TauT/ALT1表达株TA41(后述的参考例4)在培养第7天为1.5g/L，因此认为，AA53在TA41以上具有可在短期产生大量抗体的可能，适合用于实际生产。
以上结果表明，通过人为地使阴离子交换蛋白(AE1)高效表达、或通过使AE1和CSAD或ALT1同时高效表达，可以得到产生大量抗体的细胞。
AE1高效表达效果还可以通过使用AE1高效表达宿主细胞的抗IL-6R抗体产生株的构筑来表示。通过电穿孔法在通常的宿主细胞DXB11中导入pHyg-AE1(图2)，在潮霉素(200μg/ml)的存在下静置培养，筛选高增殖的细胞株并扩大后，利用TaqMan法将高效表达人AE1的细胞作为AE1/DXB11宿主细胞。在AE1/DXB11宿主细胞中导入抗IL-6R抗体表达质粒、并进行单克隆的AE1-S08细胞产生大量抗IL-6R抗体，如图12所示，初始密度7×105细胞/mL的1L Jar流加培养第14天的产生量为3.0g/L。可以确认，产生大量抗体的细胞AE1-S08及宿主细胞AE1/DXB11在继代培养的稳定性试验中均稳定、且维持AE1高表达。
以上结果表明，AE1基因导入效果在抗体基因导入前后均积极作用。
本发明可以应用于所有多肽(优选抗体)产生细胞。
参考例1：来源于CHO细胞的仓鼠半胱亚磺酸脱羧酶(CSAD) 基因克隆
从在CHO DXB11细胞中导入有抗IL-6受体抗体基因的抗IL-6受体抗体产生细胞(日本特开平8-99902号公报)中提取总RNA后，依赖于多聚A合成cDNA。通过将以SalI、XhoI、EcoRI三种限制性内切酶进行片段化的cDNA作为模板，利用PCR得到仓鼠CSAD基因。对于PCR引物，设计已知的在大鼠与小鼠间保存有基因序列的含有5’，3’的引物进行使用。测定克隆的基因的碱基序列，从和已知生物种的CSAD的同一性确认编码仓鼠CSAD(图9)。预测仓鼠CSAD与小鼠(96％同一性)、大鼠(96％同一性)、人(91％同一性)的已知的氨基酸具有高同一性，为具有相同的活性的酶。仓鼠的CSAD的碱基序列如SEQ ID NO：3所示。仓鼠的CSAD的氨基酸序列如SEQ ID NO：4所示。
参考例2：表达仓鼠CSAD的嘌呤霉素筛选用质粒的构筑
在参考例1的通过克隆得到的仓鼠CSAD(以下CSAD)基因中加入Kozak序列，构筑CMV启动子表达质粒pPur/CSAD(图10)。
参考例3：人肝细胞丙氨酸氨基转移酶(Alanine aminotransferase)基因克隆
以市售的人肝QUICK-克隆cDNA(Clontech公司)为模板，利用PCR法得到来源于人肝脏的丙氨酸氨基转移酶(ALT1)基因。测定克隆的基因的碱基序列，从与公开的人ALT1的同一性确认编码ALT1。得到的ALT1基因中，1488碱基中有5个位点(c157a、a215g、c765t、t857c、t995a)发生突变，编码的氨基酸中，496个中有4个氨基酸(R53S、Q72R、F286S、M332K)不同，作为来源于人肝脏的ALT1PCR克隆用于细胞改变。
参考例4：通过导入人丙氨酸氨基转移酶来增加抗体产生量
在参考例3的通过克隆得到的人ALT1(以下ALT1)基因中加入Kozak序列，构筑CMV启动子表达质粒pPur-ALT1(图11)。通过电穿孔法将不含有pPur-ALT1或者ALT1基因的pPur表达质粒导入作为亲本株的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生CHO细胞(参照国际公开第WO 2006/006693号的单行本)，在嘌呤霉素(6μg/ml)存在下静置培养，筛选高增殖的细胞株(pPur-ALT1：7株，pPur：3株)。扩大后，由pPur-ALT1细胞株制备总RNA，通过TaqMan法筛选高效表达人ALT1的6株，进而通过振动培养，将和作为对照的pPur导入细胞(3株)的增殖程度相同的4株作为人ALT1导入细胞，进行抗体产生量比较。在利用初始密度2×105细胞/mL的50ml摇瓶的流加培养中，摇瓶培养后期第17天的pPur-ALT1导入细胞(4株)的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量(1236±149mg/L)优于pPur导入细胞(3株)的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量(871±119mg/L)(t检验P＜0.01)。在摇瓶流加培养研究中，将抗体产生量分别最高的pPur-ALT1表达株A72及Pur表达株P41以初始密度10×105细胞/mL进行1L Jar流加培养时，A72的抗体产生量在培养第19天为2.9g/L，为P41的抗体产生量(2.2g/L)以上，为高产生量。在培养第14天以后，未发现P41的产生量增加，因此认为产生大量A72的抗体是由存活率维持效果获得的(培养第14天存活率，pPur-ALT1表达A72为60％、pPur表达株P41为23％)。
接着，以pHyg-TauT导入细胞T10(参照后述的参考例6)为亲本株，共同导入pPur-ALT1或者pPur，筛选高增殖且高度表达人ALT1的TauT/ALT1共表达细胞(6株)及高增殖的TauT/pPur共表达细胞(8株)，以初始密度10×105细胞/mL利用50ml摇瓶进行流加培养。作为ALT表达细胞的TauT/ALT1共表达株的摇瓶培养第4天的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量(745±87mg/L)优于TauT/pPur表达株的摇瓶培养第4天的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量(616±29mg/L)(t检验P＜0.01)。
将摇瓶流加培养研究中抗体产生量最高且ALT1mRNA最大表达的TauT/ALT1共表达株TA41(881mg/L/4天)以初始密度10×105细胞/mL进行1L Jar流加培养时，其抗体产生量在培养第7天为1.3g/L，在培养第10天为3.0g/L，在培养第12天为3.5g/L，在培养第17天为4.6g/L，在培养第21天为5.3g/L，明显高于TauT/pPur共表达株中产生量最高的对照株TP08(656mg/L/4天)(在培养第10天为2.4g/L)。
参考例5：来源于CHO细胞的仓鼠牛磺酸转运蛋白基因克隆
从在CHO DXB11细胞中导入有抗IL-6受体抗体基因的抗IL-6受体抗体产生细胞(日本特开平8-99902号公报)中提取总RNA后，依赖于多聚A合成cDNA。通过将以SalI、XhoI、EcoRI三种限制性内切酶进行片段化的cDNA作为模板，利用PCR得到仓鼠牛磺酸转运蛋白(TauT)基因。对于PCR引物，设计已知的在大鼠/小鼠TauT间保存有基因序列的含有5’，3’的引物进行使用。测定克隆的基因的碱基序列，从和已知生物种的TauT的同一性确认编码仓鼠TauT(图13)。预测仓鼠TauT氨基酸序列对小鼠(96％同一性)、大鼠(96％同一性)、人(93％同一性)TauT具有高同一性，为具有12个跨膜区域的牛磺酸转运蛋白(图14)。
参考例6：通过导入仓鼠牛磺酸转运蛋白增加活细胞密度、抑制 乳酸产生量及增加抗体产生量
在参考例5的通过克隆得到的仓鼠TauT(以下称为TauT)基因中加Kozak序列，构筑CMV启动子表达质粒pHyg/TauT(图15)。将不含有pHyg/TauT或TauT基因的对照质粒pHyg通过电穿孔法导入作为亲本株的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生CHO细胞(参照国际公开第WO 2006/006693号的单行本)。在潮霉素(400μg/ml)的存在下筛选表达质粒导入细胞后，扩大所有稳定地增殖的细胞株(pHyg/TauT：8株，pHyg：7株)。制备TauT mRNA后，通过TaqMan法，将可以确认优于亲本株的表达的7株作为pHyg/TauT导入细胞。导入细胞(7株)的mRNA平均表达量为对照(7株)的约40倍。总计14株的细胞以2×105细胞/mL的初始密度通过50ml摇瓶进行分批(batch)培养及流加(fed-batch)培养，比较培养后期第7天的活细胞密度、乳酸产生量、抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量。在分批培养中，随着细胞增殖，在培养液中积蓄乳酸等生长抑制物质，增殖受到抑制，但pHyg/TauT导入细胞的活细胞密度(9.28±3.27×105细胞/ml)及乳酸产生量(1.54±0.20g/L)优于pHyg导入细胞(活细胞密度：5.69±2.09×105细胞/ml、乳酸产生量：1.75±0.15g/L)(t检验P＜0.05)。对于抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量，pHyg/TauT导入细胞的7株中4株(平均抗体产生量：440.6mg/L)为pHyg导入细胞的最高值以上(389.6mg/L)。进而，由于通过流加培养使pHyg/TauT导入细胞的抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体产生量的优势(t检验P＜0.01)变得更明显，因此进行上述4株中增殖潜能最高的pHyg/TauT导入细胞(T10)和亲本株的1L Jar流加培养时，即使在培养第32天，T10也维持80％以上的存活率，乳酸的产生受到抑制。其结果，抗磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3抗体的产生量在培养第35天达到2.9g/L。通过流式细胞仪分析确认TauT导入T10细胞在细胞膜上表达TauT分子。由以上结果可知，通过人为地使仓鼠TauT表达，抗体产生细胞的潜能增加，得到抗体高产生株。
本说明书中引用的全部刊物、专利及专利申请均通过引用整体并入本说明书中。
工业实用性
本发明可以用于多肽的生产。
序列表说明
<SEQ ID NO：1>
SEQ ID NO：1表示编码人AE1的基因的碱基序列(GenBankM27819)。
<SEQ ID NO：2>
SEQ ID NO：2表示人AE1的氨基酸序列(UniProtKB/Swiss-ProtP02730)。
<SEQ ID NO：3>
SEQ ID NO：3表示编码仓鼠CSAD的基因的碱基序列。
<SEQ ID NO：4>
SEQ ID NO：4表示仓鼠CSAD的氨基酸序列。
<SEQ ID NO：5>
SEQ ID NO：5表示编码人ALT1的基因的碱基序列(KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875)。
<SEQ ID NO：6>
SEQ ID NO：6表示人ALT1的氨基酸序列(KEGG/ENZYME：2.6.1.2/智人(人)：2875)。
<SEQ ID NO：7>
SEQ ID NO：7表示编码仓鼠牛磺酸转运蛋白的基因的碱基序列。
<SEQ ID NO：8>
SEQ ID NO：8表示仓鼠牛磺酸转运蛋白的氨基酸序列。
序列表
<110>CHUGAI PARMACEUTICAL CO.，LTD.
<120>用于异种蛋白制备的细胞及使用所述细胞的制备方法
<130>FP-118PCT
<150>JP P2007-276182
<151>2008-10-24
<160>8
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>2736
<212>DNA
<213>智人(Homo sapiens)
<400>1
atggaggagc tgcaggatga ttatgaagac atgatggagg agaatctgga gcaggaggaa   60
tatgaagacc cagacatccc cgagtcccag atggaggagc cggcagctca cgacaccgag  120
gcaacagcca cagactacca caccacatca cacccgggta cccacaaggt ctatgtggag  180
ctgcaggagc tggtgatgga cgaaaagaac caggagctga gatggatgga ggcggcgcgc  240
tgggtgcaac tggaggagaa cctgggggag aatggggcct ggggccgccc gcacctctct  300
cacctcacct tctggagcct cctagagctg cgtagagtct tcaccaaggg tactgttctc  360
ctagacctgc aagagacctc cctggctgga gtggccaacc aactgctaga caggtttatc  420
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tccaactcct cagcccgggg ctgggtcatc cacccactgg gcttgcgttc cgagtttccc    1980
atctggatga tgtttgcctc cgccctgcct gctctgctgg tcttcatcct catattcctg    2040
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cgggatgaat acgacgaagt ggccatgcct gtgtga                            2736
<210>2
<211>911
<212>PRT
<213>智人
<400>2
Met Glu Glu Leu Gln Asp Asp Tyr Glu Asp Met Met Glu Glu Asn Leu
1               5                   10                  15
Glu Gln Glu Glu Tyr Glu Asp Pro Asp Ile Pro Glu Ser Gln Met Glu
            20                  25                  30
Glu Pro Ala Ala His Asp Thr Glu Ala Thr Ala Thr Asp Tyr His Thr
        35                  40                  45
Thr Ser His Pro Gly Thr His Lys Val Tyr Val Glu Leu Gln Glu Leu
    50                  55                  60
Val Met Asp Glu Lys Asn Gln Glu Leu Arg Trp Met Glu Ala Ala Arg
65                  70                  75                  80
Trp Val Gln Leu Glu Glu Asn Leu Gly Glu Asn Gly Ala Trp Gly Arg
                85                  90                  95
Pro His Leu Ser His Leu Thr Phe Trp Ser Leu Leu Glu Leu Arg Arg
            100                 105                 110
Val Phe Thr Lys Gly Thr Val Leu Leu Asp Leu Gln Glu Thr Ser Leu
        115                 120                 125
Ala Gly Val Ala Asn Gln Leu Leu Asp Arg Phe Ile Phe Glu Asp Gln
    130                 135                 140
Ile Arg Pro Gln Asp Arg Glu Glu Leu Leu Arg Ala Leu Leu Leu Lys
145                 150                 155                 160
His Ser His Ala Gly Glu Leu Glu Ala Leu Gly Gly Val Lys Pro Ala
                165                 170                 175
Val Leu Thr Arg Ser Gly Asp Pro Ser Gln Pro Leu Leu Pro Gln His
            180                 185                 190
Ser Ser Leu Glu Thr Gln Leu Phe Cys Glu Gln Gly Asp Gly Gly Thr
        195                 200                 205
Glu Gly His Ser Pro Ser Gly Ile Leu Glu Lys Ile Pro Pro Asp Ser
    210                 215                 220
Glu Ala Thr Leu Val Leu Val Gly Arg Ala Asp Phe Leu Glu Gln Pro
225                 230                 235                 240
Val Leu Gly Phe Val Arg Leu Gln Glu Ala Ala Glu Leu Glu Ala Val
                245                 250                 255
Glu Leu Pro Val Pro Ile Arg Phe Leu Phe Val Leu Leu Gly Pro Glu
            260                 265                 270
Ala Pro His Ile Asp Tyr Thr Gln Leu Gly Arg Ala Ala Ala Thr Leu
        275                 280                 285
Met Ser Glu Arg Val Phe Arg Ile Asp Ala Tyr Met Ala Gln Ser Arg
    290                 295                 300
Gly Glu Leu Leu His Ser Leu Glu Gly Phe Leu Asp Cys Ser Leu Val
305                 310                 315                 320
Leu Pro Pro Thr Asp Ala Pro Ser Glu Gln Ala Leu Leu Ser Leu Val
                325                 330                 335
Pro Val Gln Arg Glu Leu Leu Arg Arg Arg Tyr Gln Ser Ser Pro Ala
            340                 345                 350
Lys Pro Asp Ser Ser Phe Tyr Lys Gly Leu Asp Leu Asn Gly Gly Pro
        355                 360                 365
Asp Asp Pro Leu Gln Gln Thr Gly Gln Leu Phe Gly Gly Leu Val Arg
    370                 375                 380
Asp Ile Arg Arg Arg Tyr Pro Tyr Tyr Leu Ser Asp Ile Thr Asp Ala
385                 390                 395                 400
Phe Ser Pro Gln Val Leu Ala Ala Val Ile Phe Ile Tyr Phe Ala Ala
                405                 410                 415
Leu Ser Pro Ala Ile Thr Phe Gly Gly Leu Leu Gly Glu Lys Thr Arg
            420                 425                 430
Asn Gln Met Gly Val Ser Glu Leu LeuIle Ser Thr Ala Val Gln Gly
        435                 440                 445
Ile Leu Phe Ala Leu Leu Gly Ala Gln Pro Leu Leu Val Val Gly Phe
    450                 455                 460
Ser Gly Pro Leu Leu Val Phe Glu Glu Ala Phe Phe Ser Phe Cys Glu
465                 470                 475                 480
Thr Asn Gly Leu Glu Tyr Ile Val Gly Arg Val Trp Ile Gly Phe Trp
                485                 490                 495
Leu Ile Leu Leu Val Val Leu Val Val Ala Phe Glu Gly Ser Phe Leu
            500                 505                 510
Val Arg Phe Ile Ser Arg Tyr Thr Gln Glu Ile Phe Ser Phe Leu Ile
        515                 520                 525
Ser Leu Ile Phe Ile Tyr Glu Thr Phe Ser Lys Leu Ile Lys Ile Phe
    530                 535                 540
Gln Asp His Pro Leu Gln Lys Thr Tyr Asn Tyr Asn Val Leu Met Val
545                 550                 555                 560
Pro Lys Pro Gln Gly Pro Leu Pro Asn Thr Ala Leu Leu Ser Leu Val
                565                 570                 575
Leu Met Ala Gly Thr Phe Phe Phe Ala Met Met Leu Arg Lys Phe Lys
            580                 585                 590
Asn Ser Ser Tyr Phe Pro Gly Lys Leu Arg Arg Val Ile Gly Asp Phe
        595                 600                 605
Gly Val Pro Ile Ser Ile Leu Ile Met Val Leu Val Asp Phe Phe Ile
    610                 615                 620
Gln Asp Thr Tyr Thr Gln Lys Leu Ser Val Pro Asp Gly Phe Lys Val
625                 630                 635                 640
Ser Asn Ser Ser Ala Arg Gly Trp Val Ile His Pro Leu Gly Leu Arg
                645                 650                 655
Ser Glu Phe Pro Ile Trp Met Met Phe Ala Ser Ala Leu Pro Ala Leu
            660                 665                 670
Leu Val Phe Ile Leu Ile Phe Leu Glu Ser Gln Ile Thr Thr Leu Ile
        675                 680                 685
Val Ser Lys Pro Glu Arg Lys Met Val Lys Gly Ser Gly Phe His Leu
    690                 695                 700
Asp Leu Leu Leu Val Val Gly Met Gly Gly Val Ala Ala Leu Phe Gly
705                 710                 715                 720
Met Pro Trp Leu Ser Ala Thr Thr Val Arg Ser Val Thr His Ala Asn
                725                 730                 735
Ala Leu Thr Val Met Gly Lys Ala Ser Thr Pro Gly Ala Ala Ala Gln
            740                 745                 750
Ile Gln Glu Val Lys Glu Gln Arg Ile Ser Gly Leu Leu Val Ala Val
        755                 760                 765
Leu Val Gly Leu Ser Ile Leu Met Glu Pro Ile Leu Ser Arg Ile Pro
    770                 775                 780
Leu Ala Val Leu Phe Gly Ile Phe Leu Tyr Met Gly Val Thr Ser Leu
785                 790                 795                 800
Ser Gly Ile Gln Leu Phe Asp Arg Ile Leu Leu Leu Phe Lys Pro Pro
                805                 810                 815
Lys Tyr His Pro Asp Val Pro Tyr Val Lys Arg Val Lys Thr Trp Arg
            820                 825                 830
Met His Leu Phe Thr Gly Ile Gln Ile Ile Cys Leu Ala Val Leu Trp
        835                 840                 845
Val Val Lys Ser Thr Pro Ala Ser Leu Ala Leu Pro Phe Val Leu Ile
    850                 855                 860
Leu Thr Val Pro Leu Arg Arg Val Leu Leu Pro Leu Ile Phe Arg Asn
865                 870                 875                 880
Val Glu Leu Gln Cys Leu Asp Ala Asp Asp Ala Lys Ala Thr Phe Asp
                885                 890                 895
Glu Glu Glu Gly Arg Asp Glu Tyr Asp Glu Val Ala Met Pro Val
            900                 905                 910
<210>3
<211>1482
<212>DNA
<213>中国仓鼠(Cricetulus griseus)
<400>3
atggctgact caaaaccact caatgccctg gatggggacc ctgtggctgt ggagtcctta  60
ctccgggatg tgtttgggat tgttgtagat gaggccattc ggaaagggac cagtgcctcg  120
gagaaggttt gtgaatggaa ggagcctgaa gagctcaagc atctgctgga tttggagctg  180
cagagccagg gcgagtctca agagcagatt ctagagcgct gccgggctgt gattcactac  240
agtgtcaaga ctggtcaccc ccggttcttc aaccagctct tctcagggtt agacccccat  300
gctctggctg ggcgcatcat cacagaaagc ctcaacacca gccagtacac atatgagatt  360
gcccctgtgt ttgtcctcat ggaagaggag gtgctgaaga aactccgtgc cctggtgggc  420
tggaactctg gggatggggt cttctgtcct ggtggctcca tctcgaacat gtatgccatg  480
aacctggccc gctatcagcg ctacccagac tgcaagcaaa gaggcctccg ggccctgccg  540
cccttggctc tcttcacttc aaaggagtgt cactactcca tcagtaaggg agctgctttt  600
ctgggacttg gcactgacag tgtccgagtg gtcaaggctg atgagagagg gaaaatgatc  660
cctgaggatc tggagaggca gatcagtctg gctgaggcag agggctctgt gccatttctg  720
gtcagtacca cctctggtac caccgtgcta ggggcctttg accccctgga tgcaattgct  780
gatgtttgcc agcgtcacgg attatggtta cacgtggatg ccgcctgggg tgggagcgtc  840
ctgctgtccc ggacacacag gcatctcctg gatgggatcc agagggctga ctctgtggcc  900
tggaaccctc acaagcttct cggtgcaggg ctgcagtgct ctgctcttct tctccgggac  960
acctcgaacc tgctcaagcg ctgccatggg tcccaggcca gctacctgtt ccagcaggac  1020
aaattctatg acgtggctct tgacactgga gacaaggtgg tgcagtgtgg ccgccgtgtg  1080
gactgtctga agttgtggct catgtggaag gcacagggtg ggcaaggact ggagcggcgc  1140
atcgaccagg cctttgctct cacccggtac ctggtggagg agataaaaaa gcgggaagga  1200
tttgagttgg tcatggagcc tgagtttgtc aatgtgtgct tctggtttgt gcctcccagc  1260
ctgcggggga agaaagagag tccagattac agcaaaaggc tgtctcaggt ggcgcctgta  1320
ctcaaggagc gcatggtgaa gaagggctcc atgatgattg gctaccagcc ccatgggacc  1380
cgggccaact tcttccggat ggtggtggcc aaccccacac tgacccaggc tgatatagac  1440
ttccttctgg gcgagctgga gcgtctgggc caggacctgt ga                     1482
<210>4
<211>493
<212>PRT
<213>中国仓鼠
<400>4
Met Ala Asp Ser Lys Pro Leu Asn Ala Leu Asp Gly Asp Pro Val Ala
1               5                   10                  15
Val Glu Ser Leu Leu Arg Asp Val Phe Gly Ile Val Val Asp Glu Ala
            20                  25                  30
Ile Arg Lys Gly Thr Ser Ala Ser Glu Lys Val Cys Glu Trp Lys Glu
        35                  40                  45
Pro Glu Glu Leu Lys His Leu Leu Asp Leu Glu Leu Gln Ser Gln Gly
    50                  55                  60
Glu Ser Gln Glu Gln Ile Leu Glu Arg Cys Arg Ala Val Ile His Tyr
65                  70                  75                  80
Ser Val Lys Thr Gly His Pro Arg Phe Phe Asn Gln Leu Phe Ser Gly
                85                  90                  95
Leu Asp Pro His Ala Leu Ala Gly Arg Ile Ile Thr Glu Ser Leu Asn
            100                 105                 110
Thr Ser Gln Tyr Thr Tyr Glu Ile Ala Pro Val Phe Val Leu Met Glu
        115                 120                 125
Glu Glu Val Leu Lys Lys Leu Arg Ala Leu Val Gly Trp Asn Ser Gly
    130                 135                 140
Asp Gly Val Phe Cys Pro Gly Gly Ser Ile Ser Asn Met Tyr Ala Met
145                 150                 155                 160
Asn Leu Ala Arg Tyr Gln Arg Tyr Pro Asp Cys Lys Gln Arg Gly Leu
                165                 170                 175
Arg Ala Leu Pro Pro Leu Ala Leu Phe Thr Ser Lys Glu Cys His Tyr
            180                 185                 190
Ser Ile Ser Lys Gly Ala Ala Phe Leu Gly Leu Gly Thr Asp Ser Val
        195                 200                 205
Arg Val Val Lys Ala Asp Glu Arg Gly Lys Met Ile Pro Glu Asp Leu
    210                 215                 220
Glu Arg Gln Ile Ser Leu Ala Glu Ala Glu Gly Ser Val Pro Phe Leu
225                 230                 235                 240
Val Ser Thr Thr Ser Gly Thr Thr Val Leu Gly Ala Phe Asp Pro Leu
                245                 250                 255
Asp Ala Ile Ala Asp Val Cys Gln Arg His Gly Leu Trp Leu His Val
            260                 265                 270
Asp Ala Ala Trp Gly Gly Ser Val Leu Leu Ser Arg Thr His Arg His
        275                 280                 285
Leu Leu Asp Gly Ile Gln Arg Ala Asp Ser Val Ala Trp Asn Pro His
    290                 295                 300
Lys Leu Leu Gly Ala Gly Leu Gln Cys Ser Ala Leu Leu Leu Arg Asp
305                 310                 315                 320
Thr Ser Asn Leu Leu Lys Arg Cys His Gly Ser Gln Ala Ser Tyr Leu
                325                 330                 335
Phe Gln Gln Asp Lys Phe Tyr Asp Val Ala Leu Asp Thr Gly Asp Lys
            340                 345                 350
Val Val Gln Cys Gly Arg Arg Val Asp Cys Leu Lys Leu Trp Leu Met
        355                 360                 365
Trp Lys Ala Gln Gly Gly Gln Gly Leu Glu Arg Arg Ile Asp Gln Ala
    370                 375                 380
Phe Ala Leu Thr Arg Tyr Leu Val Glu Glu Ile Lys Lys Arg Glu Gly
385                 390                 395                 400
Phe Glu Leu Val Met Glu Pro Glu Phe Val Asn Val Cys Phe Trp Phe
                405                 410                 415
Val Pro Pro Ser Leu Arg Gly Lys Lys Glu Ser Pro Asp Tyr Ser Lys
            420                 425                 430
Arg Leu Ser Gln Val Ala Pro Val Leu Lys Glu Arg Met Val Lys Lys
        435                 440                 445
Gly Ser Met Met Ile Gly Tyr Gln Pro His Gly Thr Arg Ala Asn Phe
    450                 455                 460
Phe Arg Met Val Val Ala Asn Pro Thr Leu Thr Gln Ala Asp Ile Asp
465                 470                 475                 480
Phe Leu Leu Gly Glu Leu Glu Arg Leu Gly Gln Asp Leu
                485                 490
<210>5
<211>1491
<212>DNA
<213>智人
<400>5
atggcctcga gcacaggtga ccggagccag gcggtgaggc atggactgag ggcgaaggtg   60
ctgacgctgg acggcatgaa cccgcgtgtg cggagagtgg agtacgcagt gcgtggcccc  120
atagtgcagc gagccttgga gctggagcag gagctgcgcc agggtgtgaa gaagcctttc  180
accgaggtca tccgtgccaa catcggggac gcacaggcta tggggcagag gcccatcacc  240
ttcctgcgcc aggtcttggc cctctgtgtt aaccctgatc ttctgagcag ccccaacttc  300
cctgacgatg ccaagaaaag ggcggagcgc atcttgcagg cgtgtggggg ccacagtctg  360
ggggcctaca gcgtcagctc cggcatccag ctgatccggg aggacgtggc gcggtacatt  420
gagaggcgtg acggaggcat ccctgcggac cccaacaacg tcttcctgtc cacaggggcc  480
agcgatgcca tcgtgacggt gctgaagctg ctggtggccg gcgagggcca cacacgcacg  540
ggtgtgctca tccccatccc ccagtaccca ctctactcgg ccacgctggc agagctgggc  600
gcagtgcagg tggattacta cctggacgag gagcgtgcct gggcgctgga cgtggccgag  660
cttcaccgtg cactgggcca ggcgcgtgac cactgccgcc ctcgtgcgct ctgtgtcatc  720
aaccctggca accccaccgg gcaggtgcag acccgcgagt gcatcgaggc cgtgatccgc  780
ttcgccttcg aagagcggct ctttctgctg gcggacgagg tgtaccagga caacgtgtac  840
gccgcgggtt cgcagttcca ctcattcaag aaggtgctca tggagatggg gccgccctac  900
gccgggcagc aggagcttgc ctccttccac tccacctcca agggctacat gggcgagtgc   960
gggttccgcg gcggctatgt ggaggtggtg aacatggacg ctgcagtgca gcagcagatg  1020
ctgaagctga tgagtgtgcg gctgtgcccg ccggtgccag gacaggccct gctggacctg  1080
gtggtcagcc cgcccgcgcc caccgacccc tcctttgcgc agttccaggc tgagaagcag  1140
gcagtgctgg cagagctggc ggccaaggcc aagctcaccg agcaggtctt caatgaggct  1200
cctggcatca gctgcaaccc agtgcagggc gccatgtact ccttcccgcg cgtgcagctg  1260
cccccgcggg cggtggagcg cgctcaggag ctgggcctgg cccccgatat gttcttctgc  1320
ctgcgcctcc tggaggagac cggcatctgc gtggtgccag ggagcggctt tgggcagcgg  1380
gaaggcacct accacttccg gatgaccatt ctgcccccct tggagaaact gcggctgctg  1440
ctggagaagc tgagcaggtt ccatgccaag ttcaccctcg agtactcctg a           1491
<210>6
<211>992
<212>PRT
<213>智人
<400>6
Met Ala Ser Ser Thr Gly Asp Arg Ser Gln Ala Val Arg His Gly Leu
1               5                   10                  15
Arg Ala Lys Val Leu Thr Leu Asp Gly Met Asn Pro Arg Val Arg Arg
            20                  25                  30
Val Glu Tyr Ala Val Arg Gly Pro Ile Val Gln Arg Ala Leu Glu Leu
        35                  40                  45
Glu Gln Glu Leu Arg Gln Gly Val Lys Lys Pro Phe Thr Glu Val Ile
    50                  55                  60
Arg Ala Asn Ile Gly Asp Ala Gln Ala Met Gly Gln Arg Pro Ile Thr
65                  70                  75                  80
Phe Leu Arg Gln Val Leu Ala Leu Cys Val Asn Pro Asp Leu Leu Ser
                85                  90                  95
Ser Pro Asn Phe Pro Asp Asp Ala Lys Lys Arg Ala Glu Arg Ile Leu
            100                 105                 110
Gln Ala Cys Gly Gly His Ser Leu Gly Ala Tyr Ser Val Ser Ser Gly
        115                 120                 125
Ile Gln Leu Ile Arg Glu Asp Val Ala Arg Tyr Ile Glu Arg Arg Asp
    130                 135                 140
Gly Gly Ile Pro Ala Asp Pro Asn Asn Val Phe Leu Ser Thr Gly Ala
145                 150                 155                 160
Ser Asp Ala Ile Val Thr Val Leu Lys Leu Leu Val Ala Gly Glu Gly
                165                 170                 175
His Thr Arg Thr Gly Val Leu Ile Pro Ile Pro Gln Tyr Pro Leu Tyr
            180                 185                 190
Ser Ala Thr Leu Ala Glu Leu Gly Ala Val Gln Val Asp Tyr Tyr Leu
        195                 200                 205
Asp Glu Glu Arg Ala Trp Ala Leu Asp Val Ala Glu Leu His Arg Ala
    210                 215                 220
Leu Gly Gln Ala Arg Asp His Cys Arg Pro Arg Ala Leu Cys Val Ile
225                 230                 235                 240
Asn Pro Gly Asn Pro Thr Gly Gln Val Gln Thr Arg Glu Cys Ile Glu
                245                 250                 255
Ala Val Ile Arg Phe Ala Phe Glu Glu Arg Leu Phe Leu Leu Ala Asp
            260                 265                 270
Glu Val Tyr Gln Asp Asn Val Tyr Ala Ala Gly Ser Gln Phe His Ser
        275                 280                 285
Phe Lys Lys Val Leu Met Glu Met Gly Pro Pro Tyr Ala Gly Gln Gln
    290                 295                 300
Glu Leu Ala Ser Phe His Ser Thr Ser Lys Gly Tyr Met Gly Glu Cys
305                 310                 315                 320
Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Val Glu Val Val Asn Met Asp Ala Ala Val
                325                 330                 335
Gln Gln Gln Met Leu Lys Leu Met Ser Val Arg Leu Cys Pro Pro Val
            340                 345                 350
Pro Gly Gln Ala Leu Leu Asp Leu Val Val Ser Pro Pro Ala Pro Thr
        355                 360                 365
Asp Pro Ser Phe Ala Gln Phe Gln Ala Glu Lys Gln Ala Val Leu Ala
    370                 375                 380
Glu Leu Ala Ala Lys Ala Lys Leu Thr Glu Gln Val Phe Asn Glu Ala
385                 390                 395                 400
Pro Gly Ile Ser Cys Asn Pro Val Gln Gly Ala Met Tyr Ser Phe Pro
                405                 410                 415
Arg Val Gln Leu Pro Pro Arg Ala Val Glu Arg Ala Gln Glu Leu Gly
            420                 425                 430
Leu Ala Pro Asp Met Phe Phe Cys Leu Arg Leu Leu Glu Glu Thr Gly
        435                 440                 445
Ile Cys Val Val Pro Gly Ser Gly Phe Gly Gln Arg Glu Gly Thr Tyr
    450                 455                 460
His Phe Arg Met Thr Ile Leu Pro Pro Leu Glu Lys Leu Arg Leu Leu
465                 470                 475                 480
Leu Glu Lys Leu Ser Arg Phe His Ala Lys Phe Thr Leu Glu Tyr Ser
                485                 490                 495
Met Ala Ser Ser Thr Gly Asp Arg Ser Gln Ala Val Arg His Gly Leu
            500                 505                 510
Arg Ala Lys Val Leu Thr Leu Asp Gly Met Asn Pro Arg Val Arg Arg
        515                 520                 525
Val Glu Tyr Ala Val Arg Gly Pro Ile Val Gln Arg Ala Leu Glu Leu
    530                 535                 540
Glu Gln Glu Leu Arg Gln Gly Val Lys Lys Pro Phe Thr Glu Val Ile
545                 550                 555                 560
Arg Ala Asn Ile Gly Asp Ala Gln Ala Met Gly Gln Arg Pro Ile Thr
                565                 570                 575
Phe Leu Arg Gln Val Leu Ala Leu Cys Val Asn Pro Asp Leu Leu Ser
            580                 585                 590
Ser Pro Asn Phe Pro Asp Asp Ala Lys Lys Arg Ala Glu Arg Ile Leu
        595                 600                 605
Gln Ala Cys Gly Gly His Ser Leu Gly Ala Tyr Ser Val Ser Ser Gly
    610                 615                 620
Ile Gln Leu Ile Arg Glu Asp Val Ala Arg Tyr Ile Glu Arg Arg Asp
625v630                 635                 640
Gly Gly Ile Pro Ala Asp Pro Asn Asn Val Phe Leu Ser Thr Gly Ala
                645                 650                 655
Ser Asp Ala Ile Val Thr Val Leu Lys Leu Leu Val Ala Gly Glu Gly
            660                 665                 670
His Thr Arg Thr Gly Val Leu Ile Pro Ile Pro Gln Tyr Pro Leu Tyr
        675                 680                 685
Ser Ala Thr Leu Ala Glu Leu Gly Ala Val Gln Val Asp Tyr Tyr Leu
    690                 695                 700
Asp Glu Glu Arg Ala Trp Ala Leu Asp Val Ala Glu Leu His Arg Ala
705                 710                 715                 720
Leu Gly Gln Ala Arg Asp His Cys Arg Pro Arg Ala Leu Cys Val Ile
                725                 730                 735
Asn Pro Gly Asn Pro Thr Gly Gln Val Gln Thr Arg Glu Cys Ile Glu
            740                 745                 750
Ala Val Ile Arg Phe Ala Phe Glu Glu Arg Leu Phe Leu Leu Ala Asp
        755                 760                 765
Glu Val Tyr Gln Asp Asn Val Tyr Ala Ala Gly Ser Gln Phe His Ser
    770                 775                 780
Phe Lys Lys Val Leu Met Glu Met Gly Pro Pro Tyr Ala Gly Gln Gln
785                 790                 795                 800
Glu Leu Ala Ser Phe His Ser Thr Ser Lys Gly Tyr Met Gly Glu Cys
                805                 810                 815
Gly Phe Arg Gly Gly Tyr Val Glu Val Val Asn Met Asp Ala Ala Val
            820                 825                 830
Gln Gln Gln Met Leu Lys Leu Met Ser Val Arg Leu Cys Pro Pro Val
        835                 840                 845
Pro Gly Gln Ala Leu Leu Asp Leu Val Val Ser Pro Pro Ala Pro Thr
    850                 855                 860
Asp Pro Ser Phe Ala Gln Phe Gln Ala Glu Lys Gln Ala Val Leu Ala
865                 870                 875                 880
Glu Leu Ala Ala Lys Ala Lys Leu Thr Glu Gln Val Phe Asn Glu Ala
                885                 890                 895
Pro Gly Ile Ser Cys Asn Pro Val Gln Gly Ala Met Tyr Ser Phe Pro
            900                 905                 910
Arg Val Gln Leu Pro Pro Arg Ala Val Glu Arg Ala Gln Glu Leu Gly
        915                 920                 925
Leu Ala Pro Asp Met Phe Phe Cys Leu Arg Leu Leu Glu Glu Thr Gly
    930                 935                 940
Ile Cys Val Val Pro Gly Ser Gly Phe Gly Gln Arg Glu Gly Thr Tyr
945                 950                 955                 960
His Phe Arg Met Thr Ile Leu Pro Pro Leu Glu Lys Leu Arg Leu Leu
                965                 970                 975
Leu Glu Lys Leu Ser Arg Phe His Ala Lys Phe Thr Leu Glu Tyr Ser
            980                 985                 990
<210>7
<211>1869
<212>DNA
<213>中国仓鼠
<400>7
atggccacca aggagaagct gcagtgtctg aaagacttcc acaaagacat cctgaagcct   60
tctccaggga agagcccagg cacacggcct gaggatgagg ctgaggggaa gccccctcag  120
agggagaagt ggtccagcaa gattgacttt gtgctgtctg tggccggagg cttcgtgggt  180
ttgggcaacg tttggcgttt cccgtacctc tgctacaaaa atggtggagg tgctttcctc  240
ataccgtatt ttattttcct gtttgggagt ggcctgcctg tgtttttcct ggaggtcata  300
ataggccagt acacctcaga agggggaatc acctgctggg agaagatctg ccccttgttc  360
tctggcattg gctacgcatc catcgtcatc gtgtccctcc tgaatgtgta ctacattgtc  420
atcctggcct gggccacata ctacctattt cactccttcc agacagagct tccctgggcc  480
cactgcaacc acagctggaa cacaccacat tgcatggagg acaccctgcg taggaatgag  540
agtctctggg tctcccttag cgcctccaac ttcacctcgc ctgtcatcga gttctgggag  600
cgcaatgtac tcagcctgtc ttccggaatc gacgaaccag gcgctctgaa atgggacctt  660
gcgctctgcc tcctcttagt ctggcttgtc tgttttttct gcatatggaa gggtgttcga  720
tccacaggca aggttgtcta cttcaccgcc actttcccgt ttgccatgct tctggtgctg  780
ctggtccgtg gactgaccct gccgggtgct ggcgaaggca tcaaattcta cctgtaccct   840
gacatcagcc gccttgagga cccacaggtg tggatcgacg ccggaaccca gatattcttt   900
tcctatgcca tctgcctggg ggccatgacc tcactgggaa gctacaacaa gtacaagtat   960
aactcgtaca gggactgtat gctgctggga tgcctgaaca gtggtaccag ttttgtgtct  1020
ggcttcgcag ttttttccat cctgggcttc atggcacaag agcaaggggt ggacattgct  1080
gatgtggctg agtcaggtcc tggcttggcc ttcattgcct atccaaaagc tgtgactatg  1140
atgccgctgc ccaccttttg gtccattctg ttttttatta tgctcctctt gcttggactg  1200
gacagccagt ttgttgaagt cgaaggacag atcacatcct tggttgatct ttacccgtcc  1260
ttcctaagga agggttatcg tcgggaagtc ttcatcgcca tcctgtgtag catcagctac  1320
ctgctggggc tgtcgatggt gacggagggt ggcatgtatg tgtttcaact ctttgactac  1380
tatgcagcta gtggtgtatg ccttttgtgg gttgcattct ttgaatgttt tgttattgcc  1440
tggatatatg gtggtgataa cttatatgac ggtattgagg acatgattgg ctatcggcct  1500
gggccctgga tgaagtacag ctgggctgtc atcactccag ttctctgtgc tggatgtttc  1560
atcttctctc ttgtcaagta tgtacccctg acctacaaca aagtctacgt gtatcctgat  1620
tgggcaattg ggctgggctg gggcctggcc ctatcctcca tggtgtgtat ccccttggtc  1680
attgccatcc tcctctgccg gacggaggga ccgttccgcg tgagaatcca atacctgata  1740
acccccaggg agcccaaccg ctgggctgtg gagcgtgagg gggccacacc cttccactcc  1800
cgcacaagcc tcgtcatgaa cggcgcactc atgaaaccca gtcacgtcat tgtggagacc  1860
atgatgtga                                                          1869
<210>8
<211>622
<212>PRT
<213>中国仓鼠
<400>8
Met Ala Thr Lys Glu Lys Leu Gln Cys Leu Lys Asp Phe His Lys Asp
1               5                   10                  15
Ile Leu Lys Pro Ser Pro Gly Lys Ser Pro Gly Thr Arg Pro Glu Asp
            20                   25                 30
Glu Ala Glu Gly Lys Pro Pro Gln Arg Glu Lys Trp Ser Ser Lys Ile
        35                  40                  45
Asp Phe Val Leu Ser Val Ala Gly Gly Phe Val Gly Leu Gly Asn Val
    50                  55                  60
Trp Arg Phe Pro Tyr Leu Cys Tyr Lys Asn Gly Gly Gly Ala Phe Leu
65                  70                  75                  80
Ile Pro Tyr Phe Ile Phe Leu Phe Gly Ser Gly Leu Pro Val Phe Phe
                85                  90                  95
Leu Glu Val Ile Ile Gly Gln Tyr Thr Ser Glu Gly Gly Ile Thr Cys
            100                 105                 110
Trp Glu Lys Ile Cys Pro Leu Phe Ser Gly Ile Gly Tyr Ala Ser Ile
        115                 120                 125
Val Ile Val Ser Leu Leu Asn Val Tyr Tyr Ile Val Ile Leu Ala Trp
    130                 135                 140
Ala Thr Tyr Tyr Leu Phe His Ser Phe Gln Thr Glu Leu Pro Trp Ala
145                 150                 155                 160
His Cys Asn His Ser Trp Asn Thr Pro His Cys Met Glu Asp Thr Leu
                165                 170                 175
Arg Arg Asn Glu Ser Leu Trp Val Ser Leu Ser Ala Ser Asn Phe Thr
            180                 185                 190
Ser Pro Val Ile Glu Phe Trp Glu Arg Asn Val Leu Ser Leu Ser Ser
        195                 200                 205
Gly Ile Asp Glu Pro Gly Ala Leu Lys Trp Asp Leu Ala Leu Cys Leu
    210                 215                 220
Leu Leu Val Trp Leu Val Cys Phe Phe Cys Ile Trp Lys Gly Val Arg
225                 230                 235                 240
Ser Thr Gly Lys Val Val Tyr Phe Thr Ala Thr Phe Pro Phe Ala Met
                245                 250                 255
Leu Leu Val Leu Leu Val Arg Gly Leu Thr Leu Pro Gly Ala Gly Glu
            260                 265                 270
Gly Ile Lys Phe Tyr Leu Tyr Pro Asp Ile Ser Arg Leu Glu Asp Pro
        275                 280                 285
Gln Val Trp Ile Asp Ala Gly Thr Gln Ile Phe Phe Ser Tyr Ala Ile
    290                 295                 300
Cys Leu Gly Ala Met Thr Ser Leu Gly Ser Tyr Asn Lys Tyr Lys Tyr
305                 310                 315                 320
Asn Ser Tyr Arg Asp Cys Met Leu Leu Gly Cys Leu Asn Ser Gly Thr
                325                 330                 335
Ser Phe Val Ser Gly Phe Ala Val Phe Ser Ile Leu Gly Phe Met Ala
            340                 345                 350
Gln Glu Gln Gly Val Asp Ile Ala Asp Val Ala Glu Ser Gly Pro Gly
        355                 360                 365
Leu Ala Phe Ile Ala Tyr Pro Lys Ala Val Thr Met Met Pro Leu Pro
    370                 375                 380
Thr Phe Trp Ser Ile Leu Phe Phe Ile Met Leu Leu Leu Leu Gly Leu
385                 390                 395                 400
Asp Ser Gln Phe Val Glu Val Glu Gly Gln Ile Thr Ser Leu Val Asp
                405                 410                 415
Leu Tyr Pro Ser Phe Leu Arg Lys Gly Tyr Arg Arg Glu Val Phe Ile
            420                 425                 430
Ala Ile Leu Cys Ser Ile Ser Tyr Leu Leu Gly Leu Ser Met Val Thr
        435                 440                 445
Glu Gly Gly Met Tyr Val Phe Gln Leu Phe Asp Tyr Tyr Ala Ala Ser
    450                 455                 460
Gly Val Cys Leu Leu Trp Val Ala Phe Phe Glu Cys Phe Val Ile Ala
465                 470                 475                 480
Trp Ile Tyr Gly Gly Asp Asn Leu Tyr Asp Gly Ile Glu Asp Met Ile
                485                 490                 495
Gly Tyr Arg Pro Gly Pro Trp Met Lys Tyr Ser Trp Ala Val Ile Thr
            500                 505                 510
Pro Val Leu Cys Ala Gly Cys Phe Ile Phe Ser Leu Val Lys Tyr Val
        515                 520                 525
Pro Leu Thr Tyr Asn Lys Val Tyr Val Tyr Pro Asp Trp Ala Ile Gly
    530                 535                 540
Leu Gly Trp Gly Leu Ala Leu Ser Ser Met Val Cys Ile Pro Leu Val
545                 550                 555                 560
Ile Ala Ile Leu Leu Cys Arg Thr Glu Gly Pro Phe Arg Val Arg Ile
                565                 570                 575
Gln Tyr Leu Ile Thr Pro Arg Glu Pro Asn Arg Trp Ala Val Glu Arg
            580                 585                 590
Glu Gly Ala Thr Pro Phe His Ser Arg Thr Ser Leu Val Met Asn Gly
        595                 600                 605
Ala Leu Met Lys Pro Ser His Val Ile Val Glu Thr Met Met
    610                 615                 620

Claims (8)

1.抗体制备方法，其包括：培养高效表达碳酸氢根转运蛋白、且导入有编码期望抗体的DNA的中国仓鼠卵巢细胞，使其产生期望抗体，其中所述碳酸氢根转运蛋白为SLC4A1阴离子交换蛋白。
2.权利要求1的制备方法，其中所述高效表达碳酸氢根转运蛋白的中国仓鼠卵巢细胞为导入有编码碳酸氢根转运蛋白的DNA的中国仓鼠卵巢细胞。
3.权利要求1或2的制备方法，其中所述高效表达碳酸氢根转运蛋白的中国仓鼠卵巢细胞还高效表达半胱亚磺酸脱羧酶或丙氨酸氨基转移酶。
4.权利要求1～3中任一项的制备方法，其中所述编码SLC4A1阴离子交换蛋白的DNA为编码由SEQ ID NO：2的氨基酸序列构成的多肽的DNA。
5.权利要求4的制备方法，其中所述编码由SEQ ID NO：2的氨基酸序列构成的多肽的DNA是由SEQ ID NO：1的碱基序列构成的DNA。
6.药品制备方法，其包括下列步骤：
根据权利要求1～5中任一项的方法制备抗体；以及
将上述所制备的抗体与药学可接受的载体或添加剂混合而进行制剂化。
7.中国仓鼠卵巢细胞，其导入有：
·编码碳酸氢根转运蛋白的DNA，其中所述碳酸氢根转运蛋白为SLC4A1阴离子交换蛋白、和
·编码期望抗体的DNA。
8.权利要求7的中国仓鼠卵巢细胞，其还导入有编码半胱亚磺酸脱羧酶或丙氨酸氨基转移酶的DNA。
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