CN101818179A

CN101818179A - 一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法

Info

Publication number: CN101818179A
Application number: CN 201010161585
Authority: CN
Inventors: 杨天奎; 赵紫薇; 牟英
Original assignee: Dalian University of Technology
Current assignee: Dalian University of Technology
Priority date: 2010-04-28
Filing date: 2010-04-28
Publication date: 2010-09-01

Abstract

一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，属于生物工程技术领域。其特征是先利用磷脂酶A和脂肪酶其中一种或两种混合物催化磷脂与多不饱和脂肪酸酯酯交换反应，生成富含多不饱和脂肪酸的磷脂；再利用磷脂酶D催化多不饱和脂肪酸的磷脂与L-丝氨酸转磷酯化反应，生成富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸。本发明的效果和益处是利用两种酶分步催化、在同一反应器内进行反应，反应过程均在非溶剂体系完成，无废水排放，产品质量好，无溶剂残留，工艺操作安全，且反应副产物少，无废弃物生成，可降低成本。生产工艺简单，规模化生产容易，为制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸提供了一种良好可行的方法。

Description

一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法

技术领域

本发明属于生物工程技术领域，涉及到一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法。

背景技术

磷脂是细胞膜的重要组成成分，对维持细胞的正常生命活动起着重要的作用，也是具有生理功效的天然表面活性剂，广泛应用于食品、医药、化妆品、保健品及饲料工业中。磷脂主要包括磷脂酰胆碱(PC)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰丝氨酸(PS)及磷脂酸(PA)等。磷脂的生理活性与其脂肪酸的组成和极性末端的性质密切相关，一些具有特定结构的磷脂有很高的药用价值。下式为磷酸甘油酯的结构式。

磷酸甘油酯结构式

注：R₁，R₂为长碳链脂肪烃(R₁常见的有-C₁₅H₃₁(棕榈酸)、-C₁₇H₃₅(硬脂酸)、-C₁₇H₃₃(油酸)；R₂常见的有-C₁₇H₃₃(油酸)、-C₁₇H₃₁(亚油酸)、-C₁₉H₃₁(花生四烯酸))；-X为不同连接基团(如：-H(磷脂酸)、-CH₂CH₂NH₃(磷脂酰乙醇胺)、-CH₂CH₂N(CH₃)₃(磷脂酰胆碱)、-CH₂CH(NH₂)COOH(磷脂酰丝氨酸)、-CH₂CH(OH)CH₂OH(磷脂酰甘油)、-C₆H₈(OH)₅(磷脂酰肌醇)等)。

磷脂酰丝氨酸(phosphatidylserine，PS)是一种重要的细胞膜活性成分，可影响神经系统的多种生物学变化，可改善记忆力、延缓脑疲劳、治疗老年痴呆症、治疗儿童多动症、缓解精神压力、治疗抑郁症等。PS在植物和微生物中含量极少，主要存在于动物脑组织。在人体中的PS总量约60g，其中一半集中于大脑。与其它磷脂相比，PS不能由人体自身完全合成。当今社会，各种因素导致近年来人类PS的摄取量显著下降。据统计，目前我们每天PS的摄取量与正常需求量间差距在70～150mg之间。PS对脑细胞功能的改善作用早已被无数的科学研究所证明，其健脑的作用远远强于其它的磷脂组分。下式为磷脂酰丝氨酸的结构式。

磷脂酰丝氨酸的结构式

注：R₁，R₂为长碳链脂肪烃(R₁常见的有-C₁₅H₃₁(棕榈酸)、-C₁₇H₃₅(硬脂酸)、-C₁₇H₃₃(油酸)；R₂常见的有-C₁₇H₃₃(油酸)、-C₁₇H₃₁(亚油酸)、-C₁₉H₃₁(花生四烯酸)、-C₁₇H₂₉(α-亚麻酸)、-C₁₉H₂₉(γ-亚麻酸)、-C₁₉H₂₉(EPA)、-C₂₁H₃₁(DHA))。

富含多不饱和脂肪酸的PS，兼具了不饱和脂肪酸(EPA、DHA或α-亚麻酸或γ-亚麻酸)和PS的生物学功能，具有较高的利用价值。鱼油卵磷脂中因富含EPA和DHA，有很高的药用及保健功效。磷虾油是一种低甘油三酯、高磷脂(38～50g/100g)的油脂，且EPA(15～19g/100g)和DHA(7～16g/100g)含量特别高，被欧盟批准为一种新的特殊功能营养食品，其功效远高于鱼油，被广大研究者关注。EPA可以帮助降低胆固醇和甘油三酯的含量，促进体内饱和脂肪酸代谢，防止脂肪在血管壁的沉积，预防心脑血管疾病；DHA是神经系统细胞生长及维持的一种主要元素，是大脑和视网膜的重要构成成分，且对婴幼儿智力和视力发育至关重要；α-亚麻酸可以调节血脂、降低血压、预防心脑血管疾病、治疗糖尿病、减肥、抑制过敏反应、抗炎、保护视力、增强智力等；γ-亚麻酸具有明显的抗脂质过氧化、降血脂、降低血压、抑制溃疡及胃出血、增加胰岛素分泌、减肥等作用。因此，富含多不饱和脂肪酸的PS应用前景非常广阔。

目前，国内外磷脂的生产主要是从大豆和蛋黄中提取，受原料天然脂肪酸组成特点所限，不能获得富含多不饱和脂肪酸的磷脂。一般地，研究者常利用脂肪酶或磷脂酶A催化磷脂与多不饱和脂肪酸发生酸解反应制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂，但一般情况下，原料磷脂需要用有机溶剂溶解，且磷脂与脂肪酸摩尔比约为1∶8～1∶10，脂肪酸用量大，因此，反应副产物脂肪酸大量存在，使产品的纯化变得复杂。薛长湖等人利用超临界技术和乙醇水溶液萃取方法提取富含EPA和DHA磷脂(CN101333229)，但此过程繁琐，超临界设备昂贵，乙醇用量大，成本高，难以进行大规模生产。

目前，大规模生产富含多不饱和脂肪酸的PS的重要性不仅仅在于其生物学及工业化应用潜力，同时也与其在保健、营养品方面的逐渐应用有关。PS的制备方法包括直接提取法、化学合成法、酶转化法等。最初的制备PS方法就是从自然界(如大豆、花生、动物大脑或内脏)中分离提取的，专利ZL 03807522.9从鱼内脏中提取PS，ZL 200410024225.7从动物脑中提取PS。PS主要来源于牛脑，但由于量的限制，依赖牛脑工业化生产PS是不适宜的，和牛相关的一些传染性疾病如疯牛病也引起人们对来源于牛产品的安全担忧。且提取工艺步骤繁杂，效率低，产品价格昂贵，限制了PS的进一步广泛应用。而化学合成法生产PS过程十分复杂，且仅限于实验室。目前，PS的制备主要依赖磷脂酶D催化转磷酯化反应，即以磷脂(如大豆磷脂)为原料，通过磷脂酶D的催化作用，使得磷脂分子末端极性基团与取代试剂(丝氨酸)互换(转磷酯化)而生成PS。De Ferra等人以PLD为催化剂，在甲苯体系内转磷酯化反应，利用正庚烷-丙酮混和溶剂萃取和纯化产物(US5700668)。Meyer等人利用PLD在正己烷-水溶液混和体系内催化转磷酯化反应，反应完成后，静置分层，含有PLD的水相可再利用，丙酮萃取和精制有机相生产PS(US7049107)。这些反应均发生在有机相中，工艺操作不安全，产品有溶剂残留，危害健康。李兆杰等人在亚临界体系中，利用PLD催化鱿鱼卵磷脂(富含EPA、DHA)与L-丝氨酸反应制备PS(专利CN101157946)，但自然界中这样的鱿鱼卵磷脂含量有限，且亚临界流体相关装置结构复杂、制造成本高，且局限于某一种亚临界流体，因此也难以产业化。

发明内容

本发明提供一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，解决现有技术难以产业化的不足，便于工业化生产。

本发明的技术方案是：

先利用磷脂酶A和脂肪酶其中一种或两种混合物催化磷脂与多不饱和脂肪酸酯酯交换反应，将酶催化剂分离出去或使酶催化剂失活，生成富含多不饱和脂肪酸的磷脂；再利用磷脂酶D催化多不饱和脂肪酸的磷脂与L-丝氨酸转磷酯化反应，使磷脂酶D失活，生成富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸。

利用磷脂酶A和脂肪酶其中一种或两种混合物催化磷脂与多不饱和脂肪酸酯酯交换反应条件为：反应温度为40～60℃，反应时间为6～24h，加酶量为5％～20％，底物比(磷脂/多不饱和脂肪酸或酯)为1∶2～1∶8(mol/mol)，反应需在氮气的保护下进行；反应完成后，将酶催化剂分离出去或加入1.0mol/L的HCl使生物酶失活，然后加入等量1.0mol/L的NaOH中和加入的HCl。

利用磷脂酶D催化多不饱和脂肪酸的磷脂与L-丝氨酸转磷酯化反应条件为：10～50g/L的磷脂酶A或脂肪酶催化反应后产品及0.5～4mol/L的L-丝氨酸及0.1～1.0U的磷脂酶D/mL溶于0.1～0.3mol/L的醋酸钠缓冲溶液中(pH为5.6)，在25～45℃下反应10～48h，反应完成后，加入1.0mol/L的HCl使磷脂酶D失活。

上述反应在同一反应器内完成，反应副产物少。上述方法制备的富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸，其中Sn-1或Sn-2位上或总多不饱和脂肪酸含量为35％～65％，反应产物磷脂中磷脂酰丝氨酸相对含量为15％～60％。

上述反应所用磷脂原料可为植物磷脂、动物磷脂、微生物磷脂及其混合物。多不饱和脂肪酸酰基供体为α-亚麻酸酯、γ-亚麻酸酯、十八碳四烯酸酯、花生四烯酸酯、二十碳五烯酸酯、二十二碳六烯酸酯及其混合物。这些多不饱和脂肪酸酯来源于植物油、鱼油、微生物油、藻油及其混合物。

反应中所用的磷脂酶A包括磷脂酶A₁和磷脂酶A₂，均为来源于猪胰脏、蛇毒及微生物的磷脂酶A，为单一或两种以上磷脂酶A的混和物；其中所述微生物主要指：沙雷杆菌(Serratia sp.)、液化沙雷菌(Serratia liquefaciens)、鞭毛菌(Tetrahymena thermophila)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)、黑曲霉(Aspergillus nige)、链球菌(Streptococcus sp.)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、少根根霉(Rhizopus arrhizus)及黄青霉(Penicillium chrysogenum)。反应中所用磷脂酶A可为商业磷脂酶

Novo、Ultra。

反应所用脂肪酶选自下述脂肪酶的任意一种或两种或两种以上的混合物，为黑曲霉(Aspergillus niger)，沙门柏干酪青霉(Penicillium camembertii)，娄地青霉(Penicillium roquefortii)，氏根霉(Rhizopus delemar)，爪哇根霉(Rhizopusjavanicus)，日本根霉(Rhizopus japonicus)，雪白根霉(Rhizopus niveus)，米根霉(Rhizopus oryzae)，少根根霉(Rhizopus arrhizus)，皱摺假丝酵母(Candidarugosa)，南极假丝酵母(Candida antarctica)，解脂假丝酵母(Candida lypolytica)，近平滑假丝酵母(Candida parapsilosis)，荧光假单胞菌(Pseudomonasfluorescens)，爪哇毛霉(Mucor javanicus)，色杆菌脂酶(Chromobateriumviscoum)，白地霉脂酶(Geotrichum candidum)，闪光须霉脂酶(Phycomyces nites)，棉状嗜热丝孢菌脂酶(Thermomyces lanuginosa)，燕麦脂酶(Avena sativat)，猪胰脂酶(Pancreatic)，番木瓜果乳胶脂酶(Papaya latex)。反应中所用脂肪酶可为商业脂肪酶Novozyme 435、Lipozyme TL IM、Lipozyme RM IM、Lipozyme TL100L、猪胰脂酶。

催化转磷酯化反应的磷脂酶D主要来源于植物、动物及微生物。植物包括胡萝卜、白菜、菠菜、甜菜、花椰菜、黄瓜、番茄、甘蓝、棉籽、水稻、大豆、玉米、蓖麻、油菜、花生仁、草莓、葡萄、甜瓜、拟南芥、烟草、海藻；动物包括鼠大脑及胰脏；微生物包括链霉菌(Serpomyces)、棒状杆菌(Pseudomonus)、大肠杆菌(Escherichia)、假单胞菌(Pseudomonus)、沙门氏杆菌(Salmonella)、酵母(yeast)。

酯交换和转磷酯反应后，为去除反应物中的水分，可利用冷冻干燥技术对反应最后所得产品进行处理，便于产品的保存和运输。

本发明的效果和益处是利用两种酶分步催化，并在同一反应器内进行反应，为制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸提供了一种良好可行的方法。反应过程均在非溶剂体系完成，无废水排放，产品质量好、无溶剂残留，工艺操作安全，且反应副产物少，无废弃物生成，可大大降低成本。两步反应在同一容器内进行，生产工艺简单，规模化生产较为容易。

附图说明

附图是富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的制备工艺流程图。

具体实施方式

下面结合技术方案和附图列举具体实施例，对本发明进行进一步说明，但本发明并不只限于这些实施例。

本实施例采用下述分析条件：

样品中多不饱和脂肪酸相对含量的分析方法为薄层色谱(TLC)-气相色谱(GC)，具体过程为向反应后样品中加入适量氯仿溶解样品，然后于4000r/min下离心10min，将有机相层制备成30～100mg/mL的样品氯仿溶液，取有机相层点于薄层硅胶板上，展开条件为：氯仿∶甲醇∶水＝65∶25∶4(v∶v∶v)，经2′，7′-二氯荧光素显色，然后连同硅胶刮下磷脂酰丝氨酸所在位置的谱带，甲酯化后经气相色谱分析，利用面积归一法计算各种脂肪酸相对含量。

色谱条件为：

仪器：岛津公司GC-2014气相色谱仪

检测器：氢火焰离子检测器(FID)；

毛细管柱：FFAP 30.0m×2.5mm×0.10μm；

进样口温度：220℃；柱温：200℃；检测器温度：260℃；进样分流比：20∶1；

氮气流速：0.6mL/min。

样品中磷脂酰丝氨酸相对含量的分析方法为高效液相色谱(HPLC)，具体过程为向反应后样品中加入适量氯仿溶解样品，然后于4000r/min下离心10min，将有机相层制备成10～20mg/mL的样品氯仿溶液，经膜过滤后经HPLC分析，利用面积归一法计算磷脂各组份相对含量。磷脂酰丝氨酸相对含量的表征方法为：

色谱条件为：

仪器：Waters 2695高效液相色谱仪(配Empower Pro工作站)；

检测器：2487紫外检测器；检测波长：210nm；

分析柱：Lichrosorb Si 60 5μ(250mm×4.6mm)；柱温：30℃；

流动相：乙腈∶甲醇∶85％磷酸＝900∶95∶5(v∶v∶v)；流速：1.0mL/min。

实施例1：

称取0.75g蛋黄卵磷脂(纯度≥99％)和0.918gγ-亚麻酸乙酯(含γ-亚麻酸72.72％)于具塞平底玻璃样品瓶中，向瓶中充入氮气，在50℃下搅拌，使卵磷脂完全溶解于乙酯中，再按10wt％加入磷脂酶A₁(Ultra)，密闭样品瓶，再次向瓶中充氮气，50℃下搅拌反应10h，反应完成后，向样品中加入1.0mol/L的HCl终止反应，再加入等量的1.0mol/L的NaOH中和，然后向样品中加入18mL含有3.4mol/L的L-丝氨酸及4.8U的链霉菌磷脂酶D的0.2mol/L的醋酸钠缓冲溶液(pH5.6)，在30℃、200r/min下反应16h，反应完成后，向样品中加入1.0mol/L的HCl终止反应。取少量试样，加入适量氯仿溶液，然后将样品于4000r/min下离心10min，取有机相氯仿层，对样品进行分析，用TLC-GC检测磷脂的脂肪酸组成，其中γ-亚麻酸占38.45％，用HPLC检测产品中各磷脂组分含量，其中PS相对含量为36.82％。对最后反应产物进行冷冻干燥，将其转变为冻干粉状态，便于保存。

实施例2：

称取1.25g大豆磷脂(纯度≥60％)和1.05g鱼油乙酯(含EPA9％、DHA42％)于具塞平底玻璃样品瓶中，向瓶中充入氮气，在55℃下搅拌，使卵磷脂完全溶解于乙酯中，按20wt％加入磷脂酶A₁(

Novo)，密闭样品瓶，再次向瓶中充氮气，55℃下搅拌反应10h，反应完成后，向样品中加入1.0mol/L的HCl终止反应，再加入等量的1.0mol/L的NaOH中和，然后向样品中加入20mL含有2.0mol/L的L-丝氨酸及10U的大豆磷脂酶D的0.11mol/L的醋酸钠缓冲溶液(pH5.6)，在28℃、200r/min下反应18h，反应完成后，向样品中加入1.0mol/L的HCl终止反应。取少量试样，再加入适量氯仿溶液，然后将样品于4000r/min下离心10min，取有机相氯仿层，对样品进行分析，用TLC-GC检测磷脂的脂肪酸组成，其中EPA为5％、DHA为26.68％，用HPLC检测产品中各磷脂组分含量，其中PS相对含量为45.31％。对最后反应产物进行冷冻干燥，将其转变为冻干粉状态，便于保存。

实施例3：

称取大豆磷脂0.95g(纯度≥90％)和3.60g鱼油(含DHA和EPA50％)于具塞平底玻璃样品瓶中，向瓶中充入氮气，在50℃下搅拌，使卵磷脂完全溶解于鱼油中，按10wt％加入Novozym 435，密闭样品瓶，再次向瓶中充氮气，50℃下搅拌反应14h，反应完成后，过滤除去酶，然后向样品中加入30mL含有2.0mol/L的L-丝氨酸及6U的磷脂酶D(来源于棒状杆菌)的0.22mol/L的醋酸钠缓冲溶液(pH5.6)，在30℃、200r/min下反应24h，反应完成后，向样品中加入1.0mol/L的HCl终止反应。取少量试样，加入适量氯仿溶液，然后将样品于4000r/min下离心10min，取有氯仿层，对样品进行分析，用TLC-GC检测磷脂的脂肪酸组成，其中DHA和EPA总含量为38.64％，用HPLC检测产品中各磷脂组分含量，其中PS相对含量为31.32％。对最后产物进行冷冻干燥，将其转变为冻干粉状态，便于保存。

实施例4：

称取0.75g卵磷脂(纯度≥99％)和2.61g亚麻油(含α-亚麻酸55％)于具塞平底玻璃样品瓶中，向瓶中充入氮气，在45℃下搅拌，使卵磷脂完全溶解于亚麻油中，按15wt％加入Lipozyme RM IM，密闭样品瓶，再次向瓶中充氮气，45℃下搅拌反应8h，反应完成后，过滤除去酶，然后向样品中加入15mL含有1.5mol/L的L-丝氨酸及3U的磷脂酶D(来源于酵母)的0.1mol/L的醋酸钠缓冲溶液(pH5.6)，在40℃、200r/min下反应20h，反应完成后，向样品中加入1.0mol/L的HCl终止反应。取少量样品，加入适量氯仿溶液，然后将样品于4000r/min下离心10min，取有机相氯仿层，对样品进行分析，用TLC-GC检测磷脂的脂肪酸组成，其中α-亚麻酸占40.45％，用HPLC检测产品中各磷脂组分含量，其中PS相对含量为26.71％。对最后反应产物进行冷冻干燥，将其转变为冻干粉状态，便于保存。

实施例5：

称取0.75g卵磷脂(纯度≥99％)和0.612gγ-亚麻酸乙酯(含γ-亚麻酸72.72％)和0.70g鱼油乙酯(含EPA9％、DHA42％)于具塞平底玻璃样品瓶中，向瓶中充入氮气，在50℃下搅拌，使卵磷脂完全溶解于混合乙酯中，按20wt％加入Lipozyme TL IM，密闭样品瓶，再次向瓶中充氮气，50℃下搅拌反应12h，反应完成后，过滤除去酶，然后向样品中加入10mL含有1.0mol/L的L-丝氨酸及8U的磷脂酶D(来源于链霉菌)的0.2mol/L的醋酸钠缓冲溶液(pH5.6)，在35℃、200r/min下反应36h，反应完成后，向样品中加入1.0mol/L的HCl终止反应。取少量样品，加入适量氯仿溶液，然后将样品于4000r/min下离心10min，取有机相氯仿层，对样品进行分析，用TLC-GC检测磷脂的脂肪酸组成，其中含多不饱和脂肪酸53.05％(其中含γ-亚麻酸10.21％，DHA34.72％，EPA8.12％)，用HPLC检测产品中各磷脂组分含量，其中PS相对含量为55.62％。可对最后反应产物进行冷冻干燥，将其转变为冻干粉状态，便于保存。

Claims

1.一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，其特征在于：

(1)先利用磷脂酶A和脂肪酶其中一种或两种混合物催化磷脂与多不饱和脂肪酸酯酯交换反应，将酶催化剂分离出去或使酶催化剂失活，生成富含多不饱和脂肪酸的磷脂；

(2)再利用磷脂酶D催化多不饱和脂肪酸的磷脂与L-丝氨酸转磷酯化反应，使磷脂酶D失活，生成富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸；

(3)上述的反应(1)和(2)在同一反应器内完成。

2.根据权利要求1所述的一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，其特征在于：

所述的利用磷脂酶A和脂肪酶其中一种或两种混合物催化磷脂与多不饱和脂肪酸酯酯交换反应条件为：反应温度为40～60℃，反应时间为6～24h，加酶量为5％～20％，磷脂∶多不饱和脂肪酸或酯＝1∶2～1∶8(mol/mol)，反应在氮气的保护下进行；反应完成后，过滤分离酶催化剂或加入1.0mol/L的HCl使生物酶失活，然后加入等量1.0mol/L的NaOH中和加入的HCl；

所述的利用磷脂酶D催化多不饱和脂肪酸的磷脂与L-丝氨酸转磷酯化反应条件为：10～50g/L的磷脂酶A或脂肪酶催化反应后产品及0.5～4mol/L的L-丝氨酸及0.1～1.0U的磷脂酶D/mL溶于0.1～0.3mol/L的醋酸钠缓冲溶液中(pH为5.6)，在25～45℃下反应10～48h，反应完成后，加入1.0mol/L的HCl使磷脂酶D失活。

3.根据权利要求1或2所述的一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，其特征在于：所述的磷脂为植物磷脂、动物磷脂、微生物磷脂及其混合物。

4.根据权利要求1或2所述的一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，其特征在于：所述的多不饱和脂肪酸酯为α-亚麻酸酯、γ-亚麻酸酯、十八碳四烯酸酯、花生四烯酸酯、二十碳五烯酸酯、二十二碳六烯酸酯及其混合物。

5.权利要求1或2所述的一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，其特征在于，反应所用到的多不饱和脂肪酸酯来源于植物油、鱼油、微生物油、藻油及其混合物。

6.权利要求1或2所述的一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，其特征在于：反应所用到的磷脂酶A包括磷脂酶A₁和磷脂酶A₂，均为来源于猪胰脏、蛇毒及微生物的磷脂酶A，可为单一或两种以上磷脂酶A的混和物，可为商业磷脂酶

Novo、Ultra，其中所述微生物主要指：沙雷杆菌(Serratia sp.)、液化沙雷菌(Serratia liquefaciens)、鞭毛菌(Tetrahymenathermophila)、米曲霉(Aspergillus oryzae)、烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus)、黑曲霉(Aspergillus nige)、链球菌(Streptococcus sp.)、尖孢镰刀菌(Fusariumoxysporum)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)、少根根霉(Rhizopus arrhizus)及黄青霉(Penicillium chrysogenum)。

7.根据权利要求1或2所述的一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，其特征在于：反应所用的脂肪酶选自下述脂肪酶的任意一种或两种或两种以上的混合物，商业脂肪酶Novozyme 435，Lipozyme TL IM，Lipozyme RMIM，Lipozyme TL 100L，猪胰脂酶(Pancreatic)，黑曲霉(Aspergillus niger)，沙门柏干酪青霉(Penicillium camembertii)，娄地青霉(Penicillium roquefortii)，氏根霉(Rhizopus delemar)，爪哇根霉(Rhizopus javanicus)，日本根霉(Rhizopusjaponicus)，雪白根霉(Rhizopus niveus)，米根霉(Rhizopus oryzae)，少根根霉(Rhizopus arrhizus)，皱摺假丝酵母(Candida rugosa)，南极假丝酵母(Candidaantarctica)，解脂假丝酵母(Candida lypolytica)，近平滑假丝酵母(Candidaparapsilosis)，荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)，爪哇毛霉(Mucorjavanicus)，色杆菌脂酶(Chromobaterium viscoum)，白地霉脂酶(Geotrichumcandidum)，闪光须霉脂酶(Phycomyces nites)，棉状嗜热丝孢菌脂酶(Thermomyces lanuginosa)，燕麦脂酶(Avena sativat)，番木瓜果乳胶脂酶(Papaya latex)。

8.根据权利要求1或2所述的一种制备富含多不饱和脂肪酸的磷脂酰丝氨酸的方法，其特征在于：所述磷脂酶D来源于植物、动物及微生物；植物包括胡萝卜、白菜、菠菜、甜菜、花椰菜、黄瓜、番茄、甘蓝、棉籽、水稻、大豆、玉米、蓖麻籽、油菜、花生仁、草莓、葡萄、甜瓜、拟南芥、烟草、海藻；动物包括鼠大脑及胰脏；微生物包括链霉菌(Serpomyces)、棒状杆菌(Pseudomonus)、大肠杆菌(Escherichia)、假单胞菌(Pseudomonus)、沙门氏杆菌(Salmonella)、酵母(yeast)。