CN101774921A

CN101774921A - 二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备方法及其组合物

Info

Publication number: CN101774921A
Application number: CN 201010117661
Authority: CN
Inventors: 肖小河; 袁海龙; 张甜甜; 赵艳玲
Original assignee: 302th Hospital of PLA
Current assignee: 302th Hospital of PLA
Priority date: 2010-03-04
Filing date: 2010-03-04
Publication date: 2010-07-14

Abstract

本发明涉及一种二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备方法及其抗流感和抗肝炎用药物组合物。本发明的二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备方法，从忍冬属植物中提取分离并化学修饰得到二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物，并制备其抗流感和抗肝炎用药物组合物。根据本发明可从二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物含量极低的植物中，大量生产作为有效成分含有二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的抗流感和抗肝炎用药物。

Description

二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备方法及其组合物

技术领域

本发明涉及中药化学领域，具体而言，涉及从忍冬属植物中提取分离并合成二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物药效组分的方法及其抗流感和抗肝炎用组合物。

背景技术

病毒感染性疾病为10大类疾病之一，严重威胁着人们的身体健康。流感病毒是引起急性病毒性呼吸道传染病的主要病原体，具有传染性高、传播迅速、易发生流行等特点。由于病毒只能在活细胞生长、流感病毒的亚型变异速度快而疫苗研究和生产速度较慢，使得化学药物和流感病毒疫苗难以发挥其最佳治疗和预防效果，而且，目前又无法有效预测流感爆发的时间和周期，目前公认有效治疗药物达菲，价格昂贵，副作用也较大。因此，抗流感病毒药物研究受到广泛重视。乙型肝炎是乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)引起的一种传染性疾病。HBV感染人群罹患肝硬化和肝细胞癌的相对危险至少增加1000倍，并最终导致死亡。全球大约有20亿人感染过或者正在感染HBV，其中约4亿为HBV慢性感染者，仅我国就有1.3亿HBV携带者。乙肝的治疗已成为世界各国共同关心的问题。目前临床上应用的抗乙肝病毒药物核苷类似物及其干扰素，毒副作用较大，疗效并不尽如人意。

山银花为忍冬科植物忍冬的干燥花蕾，包括灰毡毛忍冬、红腺忍冬或华南忍冬，具有抑制病毒复制、阻止病毒致细胞病变的功效，有上百年的临床应用历史。李光玉等用灰毡毛忍冬对普通感冒的发热、头痛身酸、咽喉肿痛等进行临床研究，并与贵州华南忍冬作比较，结果表明灰毡毛忍冬对普通感冒的疗效高于贵州华南忍冬。时京珍等对灰毡毛忍冬的总皂苷、总次苷和二十九烷醇及灰毡毛忍冬的水提物做了保肝作用研究，结果表明它们对四氯化碳、D-氨基半乳糖等肝毒物造成大、小鼠肝损伤有保护作用。李永梅等对灰毡毛忍冬进行研究表明其提取液、水提取液、水超声提取液均能显著增强体外细胞抗腺病毒感染的能力。然而，山银花抗病毒的物质基础究竟是什么？有效成分含量与药效有多大的关系？这些问题都有待进一步阐明。

在此，本发明独辟蹊径，以中药谱效关系为切入点，借鉴基因诊断治疗策略，建立基于目标成分敲除/敲入(component knock-out &knock-in)的中药谱效关系与量效关系研究模式，多快好省地确定中药山银花抗病毒的关键组分和质量控制(含主要药效组分和/或药效相关组分)及其推荐临床使用剂量，达到了“量而又准，关联药效，可控可评”的目标。基于目标成分敲除的中药谱效关系与药效关键组分辨识主要包含以下四步：(1)中药谱效关系的一般分析与目标成分的初步确定：在系统分层筛选的基础上，根据有效萃提物化学指纹图谱和药理药效试验指标，定性定量地分析各个色谱峰与药效作用的相关性，选取与药效指标相关显著的色谱峰作为目标成分(目标成分1、目标成分2、目标成分3……)；(2)目标成分的敲除与目标成分阴性样品的制备：尽可能地采用无破坏、无残留的快速分离纯化技术，富集目标成分，同时收集敲除该目标成分后的剩余萃提物，即目标成分阴性样品。(3)目标成分与目标成分阴性样品的生物等效性试验：采用与方药功效关联性好、观测指标灵敏、操作简便的药理试验模型和方法，对比考察目标成分、目标成分阴性样品与方药总提物的药效作用和毒性及其客观差异。(4)药效关键组分的确定：根据生物等效性试验结果，可作如下解析和判断：①方药总提物比较，如果目标成分与方药总提物的药效作用相同或相似，而目标成分阴性样品无效或很作用很弱，则说明该目标成分与药效作用之间的存在直接或必然相关，该目标成分为方药的主要药效成分之一；②方药总提物比较，如果目标成分无效或作用很弱，而目标成分阴性样品与方药总提物的药效作用相同或相似，则提示该目标成分与药效作用之间的没有直接或必然相关，该目标成分不是方药的主要药效成分，尚需进一步在目标成分阴性样品中继续寻找和确定目标成分；③与方药总提物比较，如果目标成分无效或很作用很弱，目标成分阴性样品也无效或很作用很弱，但二者合并起来又具有与方药总提物相同或相似的药效作用，说明该目标成分与药效作用之间的存在间接或内在相关，该目标成分为方药的药效相关成分之一。④再重复上述筛查程序，逐次确定或排除各个目标成分是否为方药的主要药效成分和/或药效相关成分。一个方药的主要药效成分和/或药效相关成分统称为药效关键组分，也就是方药的药效物质基础。

研究发现，3，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯抗病毒活性非常强，但是在多数植物中的含量很低，约万分之一。而3，5-二咖啡酰奎尼酸含量较高，我们采取了半合成的方式进行化学转化，将二咖啡酰奎尼酸甲酯化，制备二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物药效组分。

发明内容

鉴于上述情况，本发明的目的是提供一种二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备方法，包括提取步骤和合成步骤，具体如下：

所述提取步骤，是对忍冬属植物，优选山银花的干燥药材，进行水煎煮，浓缩，再经纯化得忍冬属植物提取物的步骤。

其中，所述水煎煮、浓缩，纯化的具体条件优选如下：取一定量干燥药材，以5-20倍量水煎煮两次，每次0.5-2小时，合并煎液，减压浓缩至0.5g生药/mL，加于D101型大孔吸附树脂上(上样量与树脂体积比为1∶2～4)，先用3倍柱体积水洗脱，弃去水液。再用5倍柱体积10％乙醇洗脱，弃去10％乙醇洗脱液。继用5倍柱体积30～40％乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥，残渣加水溶解至浓度为0.5～1g生药/ml，加稀盐酸调pH至1～4后，用乙酸乙酯萃取3～5次，合并乙酸乙酯液，回收溶剂，得忍冬属植物提取物。

所述合成步骤，是对所述提取步骤中获得的忍冬属植物提取物，进行甲酯化合成二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的步骤。优选在对甲苯磺酸或二甲氨基吡啶作催化剂的条件下进行。

经所述合成步骤获得的二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物中包括，3，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯、3，4-二咖啡酰奎尼酸甲酯和4，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯。

根据本发明，二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物具有抑制乙型肝炎病毒核糖核酸复制和降低乙肝病毒表面抗原表达的功能。该类化合物来源于对天然产物异绿原酸的结构改造，而他们对于正常细胞的毒性较低，且经过结构改造后的化合物具有较好的抑制乙肝病毒活性，可以预期作为防治病毒性乙肝的药物。本发明涉及的化合物合成方法简单、反应条件温和、产率较好、成本较低，因此具有较可行的市场化前景。

并且，本发明还提供一种二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物，其特征在于，是通过本发明的上述制备方法制取的。

另外，本发明还提供一种抗流感和抗肝炎用药物组合物，其作为有效成分含有二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物及其衍生物或前药、对映异构体、非对映异构体、多晶形物、酯、盐和溶剂化物。其中，所述二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物是通过对忍冬属植物提取物，优选山银花提取物进行甲酯化而获取的。这是由于山银花植物的茎叶中二咖啡酰奎尼酸含量也较高，而且原料价廉易得。所述忍冬属植物提取物制备具体步骤如下：对忍冬属植物的干燥药材，进行水煎煮，浓缩，再经纯化得的提取物。提取物的具体制备方法同于上述的“提取步骤”，所以在此省略其相关描述。所述的甲酯化是在对甲苯磺酸或4-二甲氨基吡啶(DMAP)作为催化剂的条件下，使所述忍冬属植物提取物，经甲酯化合成制得二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的步骤。具体步骤同于上述的“合成步骤”，所以在此省略其相关描述。

并且，本发明的抗流感和抗肝炎用药物组合物中，对所含的二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的量无特别限制，有效剂量即可，通常含有0.1-95％重量。

本发明抗流感和抗肝炎用药物组合物，优选为含有有效量咖啡酰奎尼酸甲酯类化合物及表面活性剂、赋形剂、稀释剂、载体而制成的药物固体制剂，药物表面活性剂包括十二烷基硫酸钠、聚乙烯吡咯烷酮；载体和赋形剂包括乳糖；淀粉及其衍生物类如玉米淀粉、羧甲基淀粉钠等；纤维素衍生物，诸如微晶纤维素，低取代羟丙纤维素、甲基和乙基纤维素；明胶；无机类化合物如轻质氧化镁、滑石粉等；油，诸如植物油、矿物油等；包合剂如β-环糊精；以及二元醇类如聚乙二醇。口服制剂的可做成片剂、胶囊、乳剂、溶液等，也可应用于固体分散片、纳米混悬剂、脂质体制剂、靶向制剂和控释制剂等。

本发明涉及的化合物药效上可接受的衍生物或前药，意思是化合物的任何可接受的盐，酯和酯的盐；或者本发明化合物的其它衍生物，其在给予受者时，能直接或间接的提供本发明的化合物。尤其优选的衍生物和前药是，当这种化合物给予哺乳动物时，能增加本发明化合物稳定性的，和/或能增加本发明化合物生物利用度的(例如，使口复给药的化合物更易于吸收入血)，和/或能增加本化合物在相关本物种的生物隔室(例如，肝脏，肿瘤)的分布。前药是任何和载体的通过共价键的相连的，当这种前药给予哺乳动物患者时，其在体内释放活性化合物。优选的前药包括，但不限定于，增加水溶性或通过生物膜的活性透过性基团连上本发明化合物的结构而形成的衍生物。本发明的化合物的前药的制备是通过修饰在化合物中存在的取代基，用这样的方法，这种修饰对于本化合物是能分离的，无论使用常规的方法或内。前药包括本发明的化合物中羟基连上任何的取代基，当给予哺乳动物患者时，分离后形成自由的羟基。前药的实施例包括但不限于本发明化合物中羟基的乙酰化，甲酰化等。

本发明化合物的各种多晶型物构成本发明的部分并且可以通过在不同的条件下的化合物结晶制备。例如，使用不同的通常使用饿溶剂或它们的混合物来结晶；在不同的温度下结晶；各种不同的模式来冷却；在结晶过程中，从非常快到非常慢的范围。多晶型物可以通过加热或熔融化合物接着渐进的或快速的冷却获得。多晶型物的存在可以NMR，IR，热差扫描，X-光粉末衍射或其它的技术来确证。

药理实验表明本发明的二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物组合物具有显著的抗流感病毒活性、抗乙型肝炎病毒的作用。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备：

二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物按照如下步骤制备(以山银花中的灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.干燥药材为例)：

取干燥药材10kg，以10倍量水煎煮两次，每次1小时，合并煎液，减压浓缩至0.5g生药/mL，加于D101型大孔吸附树脂上(上样量与树脂体积比为1∶2～4)，先用3倍柱体积水洗脱，弃去水液。再用5倍柱体积10％乙醇洗脱，弃去10％乙醇洗脱液。继用5倍柱体积30～40％乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥，残渣加水溶解至浓度为0.5～1g生药/ml，加稀盐酸调pH至1～4后，用乙酸乙酯萃取3～5次，合并乙酸乙酯液，回收溶剂，得原料药提取物140g。

取原料药提取物100g，在反应瓶中加入过量的甲醇，在对甲苯磺酸作催化剂的条件下回流反应，并不断搅拌，回流反应20h，加入等体积水，加压蒸干甲醇，水溶液用乙酸乙酯(2BV)萃取2次，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂得到二咖啡酰奎尼酸类甲酯类化合物(80g)。

二咖啡酰奎尼酸类甲酯类化合物经LC-MS、¹H NMR并结合相关文献，结构鉴定为3，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯(3，5-Dicaffeoyquinic acidmethyl ester)、3，4-二咖啡酰奎尼酸甲酯(3，4-Dicaffeoyquinic acidmethyl ester)、4，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯(4，5-Dicaffeoyquinic acidmethyl ester)。

3，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯(化合物I)浅黄色粉末。易溶于甲醇，难溶于水。m/e：529。¹H NMR数据见表1。结构式见式(I)。

3，4-二咖啡酰奎尼酸甲酯(化合物II)浅黄色粉末。易溶于甲醇，难溶于水。m/e：529。¹H NMR数据见表1。结构式见式(II)。

4，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯(化合物III)浅黄色粉末。易溶于甲醇，难溶于水。m/e：529。¹H NMR数据见表1。结构式见式(III)。

表1：3，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯(I)；3，4-二咖啡酰奎尼酸甲酯(II)、4，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯(III)¹H NMR数据

实施例2

二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物组合物的片剂制备：

处方：

原料药(实施例1中制备的

二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物类化合物) 15g

PVPK₃₀ 1.5g

微晶纤维素 4.5g

低取代羟丙纤维素 0.45g

羧甲基淀粉钠 0.45g

硬酯酸镁适量

制成 100片

将上述药物组合物与辅料混合，加入蒸馏水适量，充分搅拌混匀，探头超声(4000r/min)5min后，高压乳匀(压力1000bar)10圈，得混悬液；真空干燥，过80目筛，70％乙醇制粒，干燥，加入硬脂酸镁适量混匀，制成100片，即得。

实施例3

药物的抗甲型流感病毒作用

试验药物：咖啡酰奎尼酸甲酯组分(按实施例1中制备的二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物，批号：20091106)

实验材料：DMEM(Gibco公司)，细胞维持液除含1％胎牛血清(FBS，美国Gibco产品)，其他成分同DMEM培养液。Hep2细胞、MDCK细胞、流感病毒标准株(A/PR8/34)，流感A型病毒(FluA，H1N1)，由解放军传染病研究所提供。96孔细胞培养板，美国Calif产品。

细胞毒性试验：Hep2细胞或MDCK细胞接种于96孔细胞培养板，放在37℃的CO₂培养箱中培养2d，待细胞长成单层后，去掉培养液，加入0.1ml维持液对半稀释的供试药物溶液，同时设0.1mL维持液作为空白对照。继续置于37℃的CO₂培养箱培养2-5d，每天在光镜下观察供试药品对Hep2细胞或MDCK细胞的细胞病变(CPE)情况(0：0％CPE，1：1％-25％CPE，2：25％-50％CPE，3：50％-75％CPE，4：75％-100％CPE)包括细胞单层的脱落、变圆、皱缩、胞浆中颗粒和空泡的形成。半毒性浓度(CC₅₀)以μg.ml^-1表示，最大细胞无毒浓度(MNCC)是指在光镜下观察检测到的对细胞不产生毒性的药品的最大浓度。

抗病毒试验：Hep2细胞或MDCK细胞培养方法同上，去掉培养液，加入0.1ml病毒悬液和0.1ml的MNCC为最高浓度对半稀释后的供试药物溶液，同时以不含供试药物的维持液作为空白对照。96孔板置于37℃的CO₂培养箱中培养2-5d。光镜下检测病毒引起的细胞病变情况(CPE计分同上)。病毒繁殖的减少一病毒对照的百分数(％，viruscontrol＝CPE experiment/CPE virus control*100％)计算，半数抑制率浓度(IC₅₀)以μg.ml^-1表示。治疗指数SI＝CC₅₀/IC₅₀。实验中达菲(奥斯他韦)为平行阳性对照药物。

表2抗FluA(H₁N₁)感染的实验结果(MDCK cells)

结果表明，咖啡酰奎尼酸甲酯组分具有显著的抗流感病毒活性。

实验例4

药物的体外抗肝炎病毒作用

试剂：DMEM(美国Gibco公司产品)；胎牛血清(美国Gibco产品)；G-418(美国Sigma公司产品)；HbeAg，HbsAg固定相放射免疫测定盒(中国同位素公司北方免疫试剂研究所产品)。

2.2.15细胞：为了转染HBV(Aayw亚基)全基因组，能分泌HbeAg、HbsAg、HBV-DNA颗粒的人肝母瘤细胞系，(美国Mount sinai医学中心构建，中国医学科学院医药生物技术所病毒室传代培养)。

实验方法：以每毫升10万个2.2.15细胞接种24孔培养板，每孔1ml，37℃5％CO₂培养24小时，加无毒浓度以下2倍稀释试验药液，5个稀释度分别为4、2、1、0.5、0.25mg/ml，每浓度3孔，37℃5％CO₂培养，收集第8天含药培养液，-20℃冰冻保存。参照固相放射免疫测定盒说明书测定，用γ计数仪测定每孔cpm值。实验设HBeAg，HBsAg阳性和阴性对照。

表3咖啡酰奎尼酸甲酯组分在2.2.15细胞中对HBsAg的影响

表4咖啡酰奎尼酸甲酯组分在2.2.15细胞中对HBeAg的影响

实验表明：咖啡酰奎尼酸甲酯组分加入2.2.15细胞培养8天，明显抑制HbsAg和HbeAg的分泌，能抑制2.2.15细胞HbsAg和HbeAg的复制和表达。本发明化合物对2.2.15细胞培养内对乙型肝炎病毒有抑制作用，说明其对乙型肝炎病毒有较强的抑制作用。

实施例5

药物的体内抗肝炎病毒作用

试剂：拉米夫啶(英国葛兰素威康有限公司B022306)；a-³²p-dCTP(北京福瑞生物技术工程公司，批号：081206)；缺口翻译药盒(Promega公司，批号：080426)；鸭乙型肝炎病毒为鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)强阳性上海麻鸭血清(中国医学科学院医药生物技术所病毒室提供，-70℃保存)

动物：1日龄北京维鸭购自北京南苑养鸭场

实验方法：1日龄北京鸭，经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA阳性鸭血清，每只0.3ml，感染后7天取血，分离血清，检测血清中DHBV-DNA含量。雏鸭血清胫检测DHBV呈阳性后，将鸭随机分为5组，病毒对照组、拉米夫啶组(50mg/kg)、3，5-DCQAME(160、80、40mg/kg)三个计量组，每组6只。灌胃给药，1.5ml/只，每天2次。对照组给予同体积生理盐水，连续给药10天。分别于药物治疗后5天(T₅)、10天(T₁₀)和停药后3天(P₃)自鸭胫静脉取血，分离血清，按缺口翻译试剂和说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并作鸭血斑点杂交，放射自显影膜片斑点，酶标仪测定OD值(滤光片为490nm)，计算血清DHBV-DNA光密度，以杂交斑点OD值作为标本DHBV-DNA水平值。

表5咖啡酰奎尼酸甲酯组分治疗组与病毒感染对照组鸭血清DHBV-DNA水平抑制比较

统计结果：给药治疗组DHBV-DNA抑制率与病毒对照组同时间的DHBV-DNA抑制率比较(成组t检验)。^*P＜0.05，^**P＜0.01

试验结果表明，咖啡酰奎尼酸甲酯组分对感染鸭乙型肝炎病毒感染的鸭血清中DHBV-DNA水平的抑制效果有显著作用

实施例6

二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备

二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物按照如下步骤制备(以山银花中的灰毡毛忍冬Lonicera macranthoides Hand.-Mazz.干燥药材部位为例)：

取干燥药材1kg，以10倍量水煎煮两次，每次1小时，合并煎液，减压浓缩至0.5g生药/mL，加于D101型大孔吸附树脂上(上样量与树脂体积比为1∶2～4)，先用3倍柱体积水洗脱，弃去水液。再用5倍柱体积10％乙醇洗脱，弃去10％乙醇洗脱液。继用5倍柱体积30～40％乙醇洗脱，收集洗脱液，干燥，残渣加水溶解至浓度为0.5～1g生药/ml，加稀盐酸调pH至1～4后，用乙酸乙酯萃取3～5次，合并乙酸乙酯液，回收溶剂，得原料药提取物14g。

在反应瓶中加入过量的200mg二环己基碳二亚胺(DCC)和催化量的50mg，4-二甲氨基吡啶(DMAP)，以100ml二氯甲烷做反应溶剂在室温下回流反应，并不断搅拌，反应1h。之后，往反应瓶中加入实施例1中原料药提取物1g，室温条件下回流反应，并不断搅拌，回流反应24h，将反应液减压抽虑，减压回收反应溶剂。加入100ml甲醇，甲醇溶液用石油醚(2BV)萃取2次，石油醚层弃去。将甲醇层减压回收，加入100ml乙酸乙酯，乙酸乙酯溶液用水(2BV)萃取两次，水层弃去，减压蒸干乙酸乙酯得咖啡酰奎尼酸类甲酯类化合物600mg。

二咖啡酰奎尼酸类甲酯类化合物经LC-MS、¹H NMR并结合相关文献，结构鉴定为3，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯、3，4-二咖啡酰奎尼酸甲酯、4，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯。

实施例7

二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备

取灰毡毛忍冬干燥茎叶1kg，置于圆底烧瓶内，加入12倍重量的蒸馏水回流提取，第一次10倍量蒸馏水煎煮1.0小时，滤过，滤渣加入10倍量蒸馏水回流提取1.0小时，滤过，合并二次提取液，提取液经减压浓缩干燥后，制得浸膏；将制得的浸膏用水溶解后，上预先处理好的D101型大孔吸附树脂，结合HPLC色谱分析，收集含有异绿原酸的部分；大孔吸附树脂的洗脱条件：大孔树脂使用前先用5％NaOH、10％醋酸和95％乙醇分别处理，待用蒸馏水将树脂洗到无醇味时，上样，上样浓度为0.5g生药/ml，上样量与树脂的比例为1∶3，上样流速控制在0.5BV/h。先用3倍柱体积水按照流速为1BV/h冲洗，再用5倍量10％乙醇按照流速为1BV/h冲洗绿原酸，后用35％乙醇洗脱，按照流速为1BV/h收集该部分作为下一步的分离对象。35％乙醇洗脱部分溶解在蒸馏水里，调整浓度为0.7g生药/ml，调节pH至2～3范围，然后加入2倍量体积的乙酸乙酯萃取3次，得到较纯的异绿原酸类化合物。得到的异绿原酸类化合物，经减压浓缩真空或冷冻干燥后得干粉。

取提取物1g，在反应瓶中加入过量的甲醇，在对甲苯磺酸作催化剂的条件下回流反应，并不断搅拌，回流反应20h，加入等体积水，加压蒸干甲醇，水溶液用乙酸乙酯(2BV)萃取2次，合并萃取液，用无水硫酸钠干燥，减压蒸干溶剂得到咖啡酰奎尼酸类甲酯类化合物(0.7g)。

Claims

1.一种二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备方法，包括：

提取步骤，是对忍冬属植物的干燥药材，进行水煎煮，浓缩，再经纯化得忍冬属植物提取物的步骤；和

合成步骤，是对所述提取步骤中得的忍冬属植物提取物，进行甲酯化合成二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的步骤。

2.如权利要求1所述的二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备方法，其特征在于，所述提取步骤中，所述水煎煮是以5-20倍量水煎煮两次，每次0.5-2小时；所述浓缩是减压浓缩；所述纯化是加于大孔吸附树脂上的柱层析，

所述合成步骤是在对甲苯磺酸或二甲氨基吡啶作催化剂的条件下进行的。

3.如权利要求1所述的二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备方法，其特征在于，所述二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物包括：3，5-二咖啡酰奎尼酸甲酯、3，4-二咖啡酰奎尼酸甲酯、和4，5-二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物。

4.如权利要求1所述的二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物的制备方法，其特征在于，所述忍冬属植物为山银花。

5.二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物，其特征在于，是通过权利要求1至4中所述的任一制备方法制取。

6.一种抗流感和抗肝炎用药物组合物，其作为有效成分含有权利要求5所述的二咖啡酰奎尼酸类甲酯化合物及药效上可接受的衍生物或前药、对映异构体、非对映异构体、多晶形物、酯、盐和溶剂化物。

7.如权利要求6所述的药物组合物在用于制备抗流感和抗肝炎药物中的应用。