CN1899340A - 鬼针草提取物及其应用 - Google Patents

Abstract

本发明是一种鬼针草提取物及其应用。鬼针草提取物是一种含有黄酮类及双咖啡酰衍生物的混合物，经分离鉴定得14个黄酮类化合物和3个双咖啡酰衍生物。药理试验研究表明，鬼针草提取物对链尿佐菌素所致大鼠血糖升高有显著的降血糖作用。因此，本发明鬼针草提取物可用于制备防治糖尿病的药物或食品。

Description

鬼针草提取物及其应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体是关于鬼针草提取物-含有黄酮类及双咖啡酰衍生物的混合物及其在制备防治糖尿病的药物或食品中的应用。

背景技术

鬼针草(Bidens bipinnata L)又名鬼骨针，婆婆针，是菊科植物鬼针草的全草。药理实验证明鬼针草除具有清热解毒，散淤消肿等作用外还具有预防高血脂造成的脂质代谢紊乱和动脉粥样硬化心脑血管病，治疗胃溃疡等多种作用。已报道的鬼针草含有的主要成分为：金丝桃苷，异奥卡宁7-O-葡萄糖苷，奥卡宁，海生菊苷[王建平，石井永，惠秋莎等.“鬼针草化学成分的研究”，中草药，1992，23(5)：229]，6-O-(6″乙酰基-吡喃葡萄糖基)-6，7，3′，4′-四羟基噢哢，槲皮素3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，槲皮素3-O-α-L-鼠李糖苷[李帅，匡海学，冈田嘉仁等，“鬼针草有效成分的研究II”，中草药，2004，35(9)：972]和鬼针聚炔苷[王建平，“鬼针草抗炎新成分的药理作用”，中草药，1997，28(11)：112]。至今未见对上述化合物进行防治糖尿病的研究报道。

发明内容

本发明提供一种鬼针草提取物及其应用。鬼针草用乙醇渗漉提取，减压浓缩至无乙醇后得浓缩液，浓缩液依次用石油醚，乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯萃取液减压浓缩即得提取物，该提取物是主要含黄酮类和双咖啡酰衍生物的混合物，从该提取物进一步分离并鉴定得14个黄酮类化合物和3个双咖啡酰类化合物，提取物中黄酮类含量为65-70％，双咖啡酰衍生物的含量为5-10％。采用链尿佐菌素所致糖尿病大鼠的动物模型实验，实验结果表明，鬼针草提取物对链尿佐菌素所致大鼠血糖升高有显著的降血糖作用。

14个黄酮类化合物(BL-1-BL-14，其中BL-11和BL-13为新化合物)和3个双咖啡酰类衍生物(BL-15-BL-17)为：

BL-1：3′，4′，7，8-四羟基二氢黄酮醇[Dziedzic，et al.，Journal of Agricultural andFood Chemistry，1985，33(2)，244]；BL-2：异奥卡宁-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷[王建平，惠秋莎，秦红岩等，中草药，1992，23(5)：229-231]；BL-3：2′，3′，4′，3，4-五羟基查尔酮4′-葡萄糖苷[王建平，惠秋莎，秦红岩等，中草药，1992，23(5)：229-231]；BL-4：奥卡宁′-O-β-D-(2″，4″，6″-三乙酰基)-葡萄糖苷[Hoffmann B，Hlzl J，Planta Medica，1998，54(1)：52]；BL-5：3′，4′-二甲氧基槲皮素[姜岩青，左春旭，药学学报，1988，23(10)：749]；BL-6：槲皮素[项光亚，杨瑜，阮金兰，.同济医科大学学报2001，30(5)：481-483]；BL-7：槲皮素-7-O-鼠李糖苷[易金海，张国林，李伯刚，.药学学报，2002，37(5)：352-335]；BL-8：木犀草素[于德泉，杨俊山主编分析化学手册(第二版)第七分册，P818，28]；BL-9：金丝桃苷[王建平，惠秋莎，秦红岩等，中草药，1992，23(5)：229-231]；BL-10：3，5-二羟基-3′，5′-二甲氧基黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷[陈耀祖，张惠迪，张所明等，高等学校化学学报，1989，10(3)：260]；BL-11：8，3′，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷[该化合物的波谱数据：电喷雾质谱(ESI-MS)m/z：449[M-H]⁺，核磁共振氢谱(¹H-NMR)(DMSO-d₆)δ：8.9(s，2H，3′，4′-OH)，8.4(s，1H，8-OH)，7.23(d，J＝9Hz，1H，C-5)，6.86(d，J＝9Hz，1H，C-6)，6.89(d，J＝2，1H，B环C-2′)，6.78(dd，J＝2，8Hz，1H，B环C-6′)，6.75(d，J＝8Hz，1H，B环C-5′)，5.41(1H，ddd，J＝12，12，2Hz，C环，C-2)，3.10(m，1H，C环C-3)，2.70(t，J＝12，17，2Hz，1H，C环C-3)。4.81(d，J＝7Hz，糖上C-1″)；核磁共振碳谱(¹³C-NMR)(DMSO-d₆)δ：191.0(C-4)，135.1(C-8)，150.7(C-7)，145.5(C-4′)，145.1(C-3′)，150.7(C-9)，130.1(C-1′)，117.9(C-5)，108.9(C-6)，117.9(C-6′)，115.2(C-5′)，114.4(C-2′)，116.5(C-10)，79.1(C-2)，43.4(C-3)，糖上101.5(C-1″)，77.0(C-5″)，75.8(C-3″)，73.2(C-2″)，69.7(C-4″)，60.6(C-6″)]；BL-12：5，8，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷[张卫东，陈万生，王永红等，中草药，2000，(31)，8：565]；BL-13：3，6，8-三氯-5，7，3′，4′-四羟基黄酮[高分辨电喷雾质谱(HRESI-MS)：精确分子量388.9217；分子式C₁₅H₆O₆Cl₃；核磁共振氢谱(¹H-NMR)(DMSO-d₆)δ：6.95(1H，d，J＝9.0Hz，5’-H)，7.44(1H，dd，J＝9.0，3.0Hz，6’-H)，7.51(1H，d，J＝3.0Hz，2’-H)，9.98(1H，s，4’-OH)，9.55(1H，s，3’-OH)，13.04(1H，s，5-OH)；核磁共振碳谱(¹³C-NMR)(DMSO-d₆)δ：175.92(CO)，115.52(5’-C)，116.44(2’-C)，122.02(6’-C)，160.80(2-C)，156.28((5-C)，154.40(9-C)，150.00(3’-C)，149.60(4’-C)，145.15(7-C)，120.74(10-C)，104.61(6-C)，103.29(3-C)，99.15(8-C))；BL-14：6，7，3′，4′-四羟基橙酮[Venkateswarlu，et al.，Bioscience，Biotechnology，and Biochemistry；2004，68(10)：2183-2185]；BL-15：3，5-双咖啡酰奎宁酸[Timmermann B et al.，Journal of NaturalProducts，1983，46(3)：365]；BL-16：3，5-双咖啡酰奎宁酸甲酯[Timmermann B，etal.，Journal of Natural Products，1983，46(3)：365]；BL-17：4，5-双咖啡酰奎宁酸[B.H.Um et al.，Fitoterapia，2002，73：550]。

14个黄酮类化合物的化学结构如下：

BL-1  R₁＝-OH                    BL-3  R₂＝-葡萄糖基

BL-2  R₁＝-葡萄糖基                BL-4  R₂＝2″，4″，6″-三乙酰基葡萄糖苷

BL-5  R₃＝R₄＝-OH，R₅＝R₆＝-OCH₃       BL-10R₇＝R₁₀＝-H，R₈＝R₁₂＝-OH，R₉＝R₁₁＝-OCH₃

BL-6  R₃＝R₄＝R₅＝R₆＝-OH                BL-11R₇＝R₉＝R₁₀＝-OH，R₈＝R₁₀＝R₁₁＝R₁₂＝-H

BL-7  R₃＝鼠李糖基，R₄＝R₅＝R₆＝-OH      BL-12R₇＝R₈＝R₁₀＝-OH，R₉＝R₁₁＝R₁₂＝-H

BL-8  R₃＝R₅＝R₆＝-OH，R₄＝-H

BL-9  R₄＝葡萄糖基，R₃＝R₅＝R₆＝-OH

3个双咖啡酰衍生物化学结构如下：

具体实施方式

下面用鬼针草提取物-含有黄酮类和双咖啡酰衍生物的混合物的药理活性试验及结果来说明其应用。

实施例1 鬼针草提取物的制备方法

鬼针草干燥药材10Kg，用20倍量80％乙醇渗漉提取，减压浓缩至无乙醇后得浓缩液，浓缩液依次用1000ml石油醚萃取3次，合并石油醚萃取液，减压浓缩得到石油醚部分10g。再用1000ml乙酸乙酯萃取4次，合并乙酸乙酯萃取液减压浓缩得到乙酸乙酯部分40g，即乙酸乙酯提取物，该提取物是主要含黄酮类和双咖啡酰衍生物的混合物(该提取物含黄酮类成分约70％，双咖啡酰衍生物成分约10％)。该提取物再经硅胶柱层析分离，以石油醚∶乙酸乙酯不同比例洗脱，部分收集流份，共分五个梯度(体积/体积)：10∶1，5∶1，2∶1，1∶1，乙酸乙酯洗脱。每500ml为一个收集流分，分别回收流份并检查，从石油醚∶乙酸乙酯(10∶1)洗脱梯度得到化合物BL-1，BL-5，BL-13和BL-14四个化合物；从石油醚∶乙酸乙酯(5∶1)洗脱梯度得到化合物BL-4，BL-6和BL-8三个化合物；从石油醚∶乙酸乙酯(2∶1)洗脱梯度得到化合物BL-10，BL-15，BL-16和BL-17四个化合物；从石油醚∶乙酸乙酯(1∶1)洗脱梯度得到化合物BL-2，BL-3，BL-7和BL-9四个化合物；乙酸乙酯洗脱得到BL-11和BL-12二个化合物。通过波谱分析测定和与文献比较(对已知化合物)结果一致，分别确定了它们的化学结构。

实施例2 鬼针草提取物对链尿佐菌素所致大鼠血糖升高模型的降血糖作用试验

2.1.材料：

受试药物样品：鬼针草提取物。

试剂：链尿佐菌素  Sigma公司产品。

实验动物：SD大鼠，清洁级，雌雄兼用，购自海军医学研究所动物中心，并饲养在该中心动物房，动物合格证号：SYXK-军-2002-044。

给药剂量：本实验中，大鼠低、高剂量组的给药剂量分别为150mg/kg/次，300mg/kg/次。

检测指标：血糖含量的变化。

检测方法：强生随手测型血糖仪；随手测试纸。

2.2大鼠糖尿病模型的制备：

链尿佐菌素溶液的配制：链尿佐菌素在低温和PH为4的条件下配制为2％的水溶液并保存。

取体重180～240g的SD大鼠，在适应性饲养后禁食24小时，大鼠开始腹腔一次性快速注射给药链尿佐菌素剂量为60mg/kg。72小时后出现稳定的高血糖相，血糖≥16.7mmol/L，即糖尿病阶段。

2.3给药方法：

药物以10％吐温-80助溶后加生理盐水配制或稀释成所要的浓度，配制好后密封置棕色试剂瓶内室温保存，称量动物体重后采用灌胃的方法给药。给药体积均为5ml/kg。糖尿病大鼠在禁食后7小时后测空腹血糖，然后给药一次。

2.4判断标准与实验数据处理

测量给药前血糖水平为基础值，测给药后1小时、2小时和3小时血糖水平与基础值比较，观察是否有降糖作用。实验结果以 X±S表示，采用非配对t检验法统计，全部实验结果均以均数±标准误差表示。P＜0.05，表示有显著性统计学差异。

2.5分组：

鬼针草提取物对大鼠糖尿病模型的抑制作用实验分为2组，第一组的动物数为10只，给药剂量150mg/kg，第二组的动物数为8只，给药剂量300mg/kg。分别在给药后1小时，2小时，3小时抽取大鼠尾部的静脉血做血糖含量测定。测量给药前血糖水平为基础值，测给药后1小时、2小时和3小时血糖水平与基础值比较，观察是否有降低血糖作用。测定的血糖水平均为空腹血糖(空腹血糖以FSG代表)水平。

2.6实验结果：

鬼针草提取物对大鼠糖尿病模型的抑制作用的实验结果，见下表1。

                                   表1

组别剂量	n	给药前血糖水平(FSGmmol/L)	给药后1小时血糖水平(FSGmmol/L)	给药后2小时血糖水平(FSGmmol/L)	给药后3小时血糖水平(FSGmmol/L)
						第一组150mg/kg第二组300mg/kg	108	29.3±4.6522.9±8.42	27.8±7.4719.3±4.38	23.0±6.49*15.6±7.45**	24.9±5.2014.8±8.69**

^**P＜0.01(差别非常显著)，^*P＜0.05(差别显著)，与自身给药前血糖水平对照比较

实验结果表明，鬼针草提取物对链尿佐菌素所致大鼠血糖升高有显著的降低血糖作用。

结论

以上实施例2的试验结果表明：在所试验的剂量范围内，鬼针草提取物-含有黄酮类和双咖啡酰衍生物的混合物已具备作为治疗糖尿病(降低血糖)的药物的基本条件。因此，本发明鬼针草提取物可用于制备防治糖尿病的药物或食品。

Claims (4)

1.一种鬼针草提取物，其特征在于该提取物是含有黄酮类及双咖啡酰衍生物的混合物。

2.如权利要求1所述的鬼针草提取物，其特征在于所述提取物中黄酮类含量为65-70％，双咖啡酰衍生物的含量为5-10％。

3.如权利要求1或2所述的鬼针草提取物，其特征在于所述提取物中含有如下化合物：3′，4′，7，8-四羟基二氢黄酮醇；异奥卡宁-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷；2′，3′，4′，3，4-五羟基查尔酮4′-葡萄糖苷；奥卡宁′-O-β-D-(2″，4″，6″-三乙酰基)-葡萄糖苷；3′，4′-二甲氧基槲皮素；槲皮素；槲皮素-7-O-鼠李糖苷；木犀草素；金丝桃苷；3，5-二羟基-3′，5′-二甲氧基黄酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷；8，3′，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷；5，8，4′-三羟基黄酮-7-O-β-D葡萄糖苷；3，6，8-三氯-5，7，3′，4′-四羟基黄酮；6，7，3′，4′-四羟基橙酮；3，5-双咖啡酰奎宁酸；3，5-双咖啡酰奎宁酸甲酯；4，5-双咖啡酰奎宁酸。

4.权利要求1或2所述的鬼针草提取物在制备防治糖尿病的药物或食品中的应用。