CN104945361B - 吉玛烷型倍半萜衍生物及其制备方法与应用 - Google Patents

吉玛烷型倍半萜衍生物及其制备方法与应用 Download PDF

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Abstract

本发明提供了一种吉玛烷型倍半萜衍生物，其结构通式为：

Description

吉玛烷型倍半萜衍生物及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及一种吉玛烷型倍半萜衍生物及其制备方法与应用，属于医药领域。
背景技术
流行性感冒病毒(influenza virus)引起的流行性感冒，是一种传染性强、传播速度快的疾病，由于病毒易发生变异，多次引起世界性大流行，每次都造成上百万人的死亡。近年来，以H1、H5、H7亚型引起的高致病力流感，不仅给禽类带来灭顶之灾，更多次发生了人染病致死的情况。该病因具有人群普遍易感性、高传染性、发展迅速及后果严重等特点，受到医患的普遍关注。
临床上常用的抗流感病毒药物主要有两类，M2离子通道阻滞剂(M2ion channelinhibitors)和神经氨酸酶抑制剂(Neuraminidae inhibitor)。M2离子通道阻滞剂(如金刚烷胺)主要对甲型流感病毒有效，对乙型流感病毒几乎无效，且副作用大。神经氨酸酶抑制剂(如奥司他韦，即达菲)虽然对甲型和乙型流感病毒都有效，但是易产生耐药性。有报道称日本接受达菲治疗的50名H3N2流感儿童中有18％出现耐药变异；在越南，一个H5N1感染的女孩体内发现对大剂量达菲产生耐药抵抗。因现有抗流感病毒药物存在作用单一，毒副作用大，易产生耐药性等问题，已无法满足临床需要，急需开发一种更为安全有效的抗流感病毒药物。
吉玛烷型倍半萜为菊科天名精属和旋复花属植物中特征性天然小分子，具有高度氧化、手性中心多、结构新颖的特点。活性研究发现，吉玛烷型倍半萜具有细胞毒活性和抗炎的活性，但其抑制流感病毒方面的活性未见报道。本发明首次发现新的具有抗流感病毒活性的结构类型，该类型化合物具有很强的抑制流感病毒的活性，且抗肿瘤活性也较已有同类(吉玛烷型倍半萜)化合物有显著提高。
发明内容
本发明旨在提供一种新的吉玛烷型倍半萜衍生物，其抑制流感病毒的活性更强，是对现有抗流感药物存在不足的很好补充。
本发明提供了结构通式为Ⅰ的化合物，该化合物为吉玛烷型倍半萜衍生物或其生理上可接受的盐，
其中R1和R2为氢基、甲基、含有1～8个碳原子的酰基中的一种。
发明人在对天名精属植物成分的研究过程中，惊喜地发现了结构通式为Ⅰ的化合物，该化合物在抗流感病毒方面表现出了良好的活性，实验表明，该化合物抗H5N1病毒的效果较莲花清瘟胶囊有显著提高，与公认效果最强的达菲相近。此外，该化合物还具有良好的抗肿瘤活性、特别是对宫颈癌、胃癌的效果更为显著。该化合物的结构及其在抗肿瘤及抗流感病毒方面的活性未见任何报道。
临床数据显示，达菲的耐药性问题日趋明显，但目前缺乏同样具有良好抗病毒活性的药物可替代它，而本发明所述化合物的抗病毒活性虽不及达菲强，但已与其相近，在没有更好的替代产品的情况下，是对其不足的良好补充，是达菲耐药人群的福音。
所述流感病毒特别是指甲型流感病毒，包括H5N1、H1N1、H1N2、H2N2、H3N2、H3N8、H5N2、H5N3、H5N8、H5N9、H7N1、H7N2、H7N3、H7N4、H7N7、H7N9、H9N2和H10N7等亚型病毒。甲型流感病毒中具体亚型(HnNn)的基因组高度同源(基因序列中有90％以上是相同的)，本发明化合物对3种不同的流感病毒(H5N1、H3N2、H1N1)进行了实验，结果均显示出较强的活性，由此可推断对其他HnNn也有效果。
所述的生理上可接受的盐，主要是指吉玛烷型倍半萜衍生物的无机酸盐或有机酸盐，其中的无机酸为盐酸、硫酸、磷酸、氢溴酸或氢碘酸；有机酸为酒石酸、柠檬酸、甲酸、乙酸、乙二酸、丁酸、草酸、马来酸、琥珀酸、己二酸、藻酸、柠檬酸、天冬氨酸、苯苯磺酸、樟脑酸、樟脑磺酸、二葡糖酸、环戊烷丙酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、葡庚糖酸、甘油磷酸、半硫酸、庚酸、己酸、延胡索酸、2-羟基乙磺酸、乳酸、马来酸、甲磺酸、烟酸、2-萘磺酸、扑酸、果胶酯酸、3-苯基丙酸、苦味酸、新戊酸、丙酸、琥珀酸、酒石酸、硫代氰酸、对-甲苯磺酸盐和十一烷酸盐等，优选酒石酸、柠檬酸、乙二酸、马来酸、琥珀酸、柠檬酸、苯磺酸。成盐后既不影响药效，又可进一步提高其溶解性；进一步优选为盐酸盐或马来酸盐。
本发明化合物所述的R1和R2优选为含有3～5个碳原子的酰基。所述的R1进一步优选为：3-甲基丁酰基、当归酰基或异丁酰基；R2进一步优选为：3-甲基丁酰基、2-甲基丁酰基、异丁酰基或当归酰基。此时，本发明所述的化合物分别为：
金挖耳内酯S(Cardivins S)、金挖耳内酯T(Cardivins T)、
金挖耳内酯U(Cardivins U)、金挖耳内酯V(Cardivins V)
金挖耳内酯W(Cardivins W)、金挖耳内酯X(Cardivins X)
上述金挖耳内酯S-X的命名是根据文献已经报道的同类化合物的顺序，文献上只有金挖耳内酯A-D，该金挖耳内酯A-D的结构及功效与本发明所述化合物截然不同。
上述化合物的化学名称分别为：
金挖耳内酯S：4β,8α-二羟基-5β-3-甲基丁酰氧基-9β-3-甲基丁酰氧基-3-酮-吉玛烷-6α,11α,12-内酯；
金挖耳内酯T：4β,8α-二羟基-5β-2-甲基丁酰氧基-9β-3-甲基丁酰氧基-3-酮-吉玛烷-6α,11α,12-内酯；
金挖耳内酯U：4β,8α-二羟基-5β-异丁酰氧基-9β-3-甲基丁酰氧基-3-酮-吉玛烷-6α,11α,12-内酯；
金挖耳内酯V：4β,8α-二羟基-5β-异丁酰氧基-9β-当归酰氧基-3-酮-吉玛烷-6α,11α,12-内酯；
金挖耳内酯W：4β,8α-二羟基-5β-异丁酰氧基-9β-异丁酰氧基-3-酮-吉玛烷-6α,11α,12-内酯；
金挖耳内酯X：4β,8α-二羟基-5β-当归酰氧基-9β-当归酰氧基-3-酮-吉玛烷-6α,11α,12-内酯。
在一优选实施例中所述的R1和R2均为异丁酰基，即上述的金挖耳内酯W。当R1和R2均为异丁酰基时，其抗流感病毒的活性更强，细胞实验中，1.17μg/mL的浓度便显示出良好的抗流感病毒活性，是同等抗病毒结果莲花清瘟胶囊用量的1/32，当浓度为2.34μg/mL时，抗流感病毒效果与达菲相当。
本发明所述化合物易溶于甲醇、乙醇，可溶于氯仿、二氯甲烷，其紫外吸收波长多在195-215nm之间，个别化合物在260nm左右(如金挖耳内酯U)。本发明所述结构通式为Ⅰ的化合物除上述化合物外，还包括以下化合物，详见表1：
表1其他吉玛烷型倍半萜衍生物举例
实验证实了本发明化合物中的6个化合物均具有抗病毒活性，而它们在结构上的区别在于部分侧链不同，由此，可以推断抗流感病毒活性主要与母核结构有关，故推断通式(I)化合物均具有抗病毒活性。
本发明化合物较已有同类化合物的溶解性有所改善，这不但降低了其制药难度，更有助于提高其生物利用度，从而在保证疗效的前提下可减少服用/使用量，减小毒副作用。
本发明的目的还在于提供通式Ⅰ化合物的制备方法，该方法为：用有机溶剂提取天名精属植物的花、根、茎叶或全草，提取物用水分散后用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯部分，回收溶剂，得到的萃取物经过柱层析后得到通式Ⅰ化合物。
所述的天名精属植物包括金挖耳、大花金挖耳、暗花金挖耳、小花金挖耳、毛暗花金挖耳、烟管头草、天名精、贵州天名精、高原天名精等。本发明优选以金挖耳为提取原料。药用部位优选为全草。
上述的有机溶剂选自甲醇、乙醇、丙酮、乙醚及乙酸乙酯中的一种，优选甲醇、乙醇或丙酮。考虑到安全性和成本问题等因素，进一步优选为浓度50-95％乙醇，最优选为浓度90-95％乙醇。提取方法为冷浸或热回流提取法。
上述制备方法进一步为：用浓度为50-95％的低级醇提取天名精属植物的花、根、茎叶或全草，提取物用水分散后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯部分，回收乙酸乙酯，得到的萃取物过层析柱分离得到通式Ⅰ化合物，该通式Ⅰ化合物再经过制备液相色谱及半制备液相色谱可得到高纯度单体化合物，所述的高纯度是指纯度不低于98％。
所述的低级醇包括甲醇和乙醇。所述的制备液相色谱(prepHPLC)，如，色谱柱Daisogel-C18-100A(10μm；250×30mm；20mL/min)，流动相为55～65％的CH3OH，优选流动相为60％的CH3OH；半制备液相色谱(semi-prepHPLC)，如YMC-Pack ODS-A column(5μm；250×10mm；2mL/min)，以60％-90％(0-35min)的CH3OH-H2O为流动相进行梯度洗脱。
所述萃取的步骤中，提取物加4-6倍量的水进行分散，水相与有机相的体积比为(1:3)～(3:1)，优选为1:1；萃取以两层均澄清为终点，萃取次数为1～5次。溶剂回收方法为本领域常规方法。
所述得到的通式(I)化合物为有效部位，该有效部位中约含有通式(I)化合物60～70％。
上述的柱层析包括：所述萃取物首先采用硅胶柱层析分离，用二氯甲烷-甲醇(200:1,60:1,30:1,15:1)进行梯度洗脱，收集15:1部分，回收溶剂至干，再采用凝胶柱层析(如，Sephadex LH-20柱色谱)进行纯化，以甲醇、二氯甲烷-甲醇(1:1)或丙酮为洗脱剂洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，得到通式(I)化合物；优选以甲醇为洗脱剂。
上述以二氯甲烷-甲醇(200:1,60:1,30:1,15:1)梯度洗脱的环节，还可以采用石油醚-丙酮(50:1,25:1,10:1,5:1,2:1)进行梯度洗脱，收集5：1的部分，凝胶柱纯化的方法不变。
所述的硅胶柱层析，选用为粒径200～300目的柱层析硅胶，上样量为6.7％～10％，即上样量与硅胶重量比为(1:10)～(1:15)，梯度洗脱时，每个浓度洗脱液优选洗脱3～5柱体积。
所述的凝胶柱层析，上样量为2％～2.5％，即上样量与硅胶重量比为(1:40)～(1:50)，洗脱7～8柱体积，根据具体情况，选择收集第4～6个柱体积洗脱液。
因柱层析过程中影响流份的因素较多，所以，该过程中优选通过薄层检测法(TLC)来确定所需流份。即，通过薄层检测吉玛烷型倍半萜，254nm下有暗斑，5％浓硫酸显色(95℃烘5分钟)后显紫红色点。
本发明尤其提供了所述通式Ⅰ化合物在制备抗流感病毒药物中的应用，特别是在制备抗甲型流感病毒药物中的应用。
本发明的另一个目的在于，提供一种抗流感病毒的药物组合物，该组合物由有效剂量的本发明所述化合物及药学上可接受的辅料制成。所述的有效量是指5～50mg/天，所述的药学上可接受的辅料，是指为制成适用于人类或动物使用的任何药物剂型所需的辅料，如制成口服固体制剂时，药学上可接受的辅料指稀释剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、润滑剂、助流剂；制成注射液时，药学上可接受的辅料指pH调节剂、助溶剂、抗氧剂、等渗剂等。
除此之外，本发明还提供了所述通式为Ⅰ的化合物在制备抗肿瘤的药物中的应用；所述的药物是治疗宫颈癌、胃癌等症的药物。
发明人通过以下实验来验证本发明化合物的有益效果。
再次重申：以下实验只是本发明研发过程中众多实验中的举例性实验，并未涵盖和穷尽了发明人为本发明所做的所有实验，目的仅仅在于用那些数据来阐述本发明化合物的抗流感病毒活性。
对H5N1型及H3N2型流感病毒的抑制作用
1、实验材料
细胞：小猎犬肾细胞(Mardin-Darby canine kidney，MDCK)；
流感病毒：A/Tiger/Harbin/01/2002(H5N1)病毒株；
A/Tiger/Harbin/01/2002(H3N2)病毒株；
供试样品：本发明化合物金挖耳内酯S～X，自制；
达菲，购自瑞士巴塞尔豪夫迈罗氏公司，批号：B1354；
莲花清瘟胶囊，购自河北石家庄以岭药业公司，批号：20140905。
2、实验方法
细胞株和病毒的制备：小猎犬肾细胞，用含10％胎牛血清DMEM(dulbecco'smodified eagle medium)培养基按常规方法进行贴壁培养，使用时，待细胞在培养瓶壁形成单层后，以胰酶消化液进行消化，用新鲜DMEM培养基悬浮后用于实验，细胞密度为2～4×105/mL。高致病性H5N1或H3N2流感病毒接种于9日龄鸡胚的尿囊腔，恒温培养72小时后，将鸡胚放置于4℃冰箱6小时收获，传代3次，收集鸡胚尿囊液作为病毒液。
空白组为小猎犬肾细胞只接种H5N1或H3N2病毒，不加入任何试药。
莲花清瘟胶囊(甲醇提取物，LH-MeOH)制备方法：取12粒胶囊，打开胶囊后将药粉倒入100ml三角瓶里，甲醇超声提取三次，每次1小时，过滤提取液，浓缩干燥后得提取物，备用。
达菲(水提取物，DF-H2O)：取2粒胶囊取出药粉后置于50ml三角瓶里，用蒸馏水超声提取二次，每次半小时，过滤提取液，浓缩干燥后得提取物，备用。
样品溶液配制：精确称取本发明化合物金挖耳内酯S～X及LH-MeOH各3mg，以适量的DMSO溶解，然后加DMSO溶液稀释至浓度系列为：37.5、18.8、9.37、4.68、2.34和1.17μg/ml；精确称取DF-H2O 3mg，以适量的水溶解，然后加水稀释到浓度为2.34、1.17和0.590μg/ml。
抗流感病毒活性测试方法：小猎犬肾细胞接种于96孔细胞培养板中，放入37℃、5％CO2、饱和湿度条件的温箱中培养24小时，形成单层细胞后倾掉培养液，接种H5N1病毒或H3N2病毒，培养2小时，弃除培养液，加各供试样品维持液，培养72小时。在倒置显微镜观察下观察细胞病变效应，测定细胞活性，确定样品对H5N1或H3N2病毒感染后细胞病变的影响，测试结果见表2-3，评判标准见表4。
表2 Cardivins S～X对H5N1流感病毒抑制作用
表3 Cardivins S～X对H3N2流感病毒抑制作用
表4流感病毒抑制作用评判标准
3、实验结果
由表2可知，本发明所述通式Ⅰ中的化合物Cardivins S～X对H5N1病毒的抑制作用明显，虽未达到公认活性最强的达菲的效果，但已与之接近。当浓度为4.68μg/mL时，6化合物均表现出50～75％的病毒抑制率，比临床用药莲花清瘟胶囊的效果有显著提高。特别是其中的化合物Cardivins W和Cardivins U，1.17μg/mL的浓度即可达到37.5μg/mL莲花清瘟胶囊的活性效果。表3结果表明，化合物Cardivins S～X对H3N2病毒也有较强活性。
具体实施方式
实施例1：
通式(I)化合物(总内酯)的制备：
取干燥的金挖耳(Carpesium divaricatum)全草9.0kg用8倍量的95％乙醇回流提取3次，每次3小时，合并提取液，回收乙醇，得干浸膏720g，提取物(干浸膏)用加约3L水分散，依次用等体积的石油醚及乙酸乙酯萃取，各萃取3次，收集乙酸乙酯部分，回收溶剂，得到的乙酸乙酯萃取物270g。将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱(200-300目的柱层析硅胶，样品与硅胶质量比为1:10)层析纯化，用CH2Cl2-MeOH(200:1,60:1,30:1,15:1)进行梯度洗脱，每个梯度洗脱3个柱体积，收集CH2Cl2-MeOH(15:1)洗脱液，回收溶剂，得到通式(I)化合物的粗提物。该粗提取再采用Sephadex LH-20柱色谱(样品与凝胶质量比为1:40)进行分离，以甲醇洗脱，洗脱8个柱体积，收集第5-6个柱体积的洗脱液，回收溶剂，得到通式(I)总内酯95g。
实施例2：
通式(I)化合物(总内酯)的制备：
取干燥的大花金挖耳(Carpesium divaricatum)全草9.0kg用6倍量的95％乙醇冷浸提取3次，每次2天，合并提取液，回收乙醇，得干浸膏570g，提取物(干浸膏)用加约2.5L水分散，加两倍体积的乙酸乙酯萃取，萃取5次，取乙酸乙酯部分，回收溶剂，得到的乙酸乙酯萃取物207g。将乙酸乙酯萃取物用硅胶柱(200-300目的柱层析硅胶，样品与硅胶质量比为1:15)层析纯化，用CH2Cl2-MeOH(200:1,60:1,30:1,15:1)进行梯度洗脱，每个梯度洗脱5个柱体积，收集CH2Cl2-MeOH(15:1)洗脱液，回收溶剂，得到通式(I)化合物的粗提物。该粗提取再采用Sephadex LH-20柱色谱(样品与凝胶质量比为1:50)进行分离，以甲醇洗脱，洗脱8个柱体积，收集第4-5个柱体积的洗脱液，回收溶剂，得到通式(I)总内酯72g。
实施例3：
与实施例1不同之处在于，被提取物为暗花金挖耳，药用部位为茎叶，所以溶剂为甲醇。得到通式(I)总内酯30g。
实施例4：
与实施例2不同之处在于，被提取物为小花金挖耳，药用部位为根，所以溶剂为丙酮。得到通式(I)总内酯20g。
实施例5：
与实施例1不同之处在于，被提取物为毛暗花金挖耳，所以溶剂为50％乙醇。到通式(I)总内酯10g。
实施例6：
化合物金挖耳内酯S(Cardivins S)的制备：
实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(60％CH3OH)和semi-prepHPLC(60％-90％CH3OH-H2O 0～35min梯度洗脱)制备，得到化合物金挖耳内酯S。
金挖耳内酯S(Cardivins S)的理化数据如下：白色粉末，(c 0.085,MeOH)；UV(MeOH)λmax:201nm,IR(KBr)vmax:3468,1746,1720cm-1；HRESIMS(pos.):m/z537.2681[M+Na]+(calcd for C26H42O10Na,537.2676)；1H NMR(CD3OD，600MHz)和13C NMR(CD3OD，150MHz)数据见表1。
以核磁共振法确认该化合物结构：1H NMR(CD3OD,600MHz)δ1.82(1H,m,H-1a)，1.54(1H,m,H-1b)，3.87(1H,dd,J＝12.6,3.6Hz,H-2a)，2.13(1H,m,H-2b)，5.44(1H,d,J＝9.6Hz,H-5)，4.50(1H,dd,J＝9.6,9.0Hz,H-6)，2.57(1H,dd,J＝9.0,8.4Hz,H-7)，4.47(1H,br d,J＝10.8Hz,H-8)，4.85(1H,o,H-9)，2.10(1H,o,H-10)，3.26(1H,ddd,J＝9.0,7.8,4.2Hz,H-11)，3.65(1H,dd,J＝10.2,4.2Hz,H-13a)，3.41(1H,dd,J＝10.2,3.6Hz,H-13b)，0.87(3H,d,J＝6.6Hz,H-14)，1.18(3H,s,H-15)，3.34(3H,s,H-16)，2.27(2H,o,H-2′)，2.10(1H,o,H-3′)，0.97(3H,d,J＝6.6Hz,H-4′)，0.97(3H,d,J＝6.6Hz,H-5′)，2.31(1H,d,J＝6.6Hz,H-2″a)，2.23(1H,d,J＝6.6Hz,H-2″b)，2.10(1H,o,H-3″)，0.97(3H,d,J＝6.6Hz,H-4″)，0.97(3H,d,J＝6.6Hz,H-5″)。13C NMR(CD3OD,150MHz)δ25.4(C-1)，31.9(C-2)，217.4(C-3)，80.3(C-4)，79.0(C-5)，80.3(C-6)，39.2(C-7)，67.1(C-8)，79.5(C-9)，29.3(C-10)，40.2(C-11)，176.9(C-12)，69.8(C-13)，20.0(C-14)，23.7(C-15)，58.0(C-16)，173.4(C-1′)，43.1(C-2′)，25.3(C-3′)，21.4(C-4′)，21.4(C-5′)，172.3(C-1″)，42.8(C-2″)，25.3(C-3″)，21.4(C-4″)，21.5(C-5″)。
实施例7：
化合物金挖耳内酯T(Cardivins T)的制备：
实施例2所得总内酯再分别采用prepHPLC(70％CH3OH)和semi-prepHPLC(60％-90％CH3OH-H2O 0～35min梯度洗脱)制备，得到化合物金挖耳内酯T。
金挖耳内酯T(Cardivins T)的理化数据如下：白色粉末，(c 0.125,MeOH)；UV(MeOH)λmax:201nm,IR(KBr)vmax:3470,1740,1718cm-1；HRESI-MS(pos.):m/z537.2689[M+Na]+(calcd for C26H42O10Na,537.2676)；
以核磁共振法确认该化合物结构：1H NMR(CD3OD,600MHz)δ1.82(1H,m,H-1a)，1.51(1H,o,H-1b)，3.87(1H,dd,J＝12.6,3.6Hz,H-2a)，2.09(1H,o,H-2b)，5.44(1H,dd,J＝9.6,1.8Hz,H-5)，4.54(1H,dd,J＝9.0,9.0Hz,H-6)，2.57(1H,dd,J＝9.0,8.4Hz,H-7)，4.48(1H,br d,J＝10.8Hz,H-8)，4.85(1H,o,H-9)，2.12(1H,m,H-10)，3.25(1H,ddd,J＝9.0,7.8,3.6Hz,H-11)，3.66(1H,dd,J＝10.2,4.2Hz,H-13a)，3.40(1H,dd,J＝9.6,3.6Hz,H-13b)，0.87(3H,d,J＝7.2Hz,H-14)，1.18(3H,s,H-15)，3.34(3H,s,H-16)，2.28(1H,d,J＝7.2Hz,H-2′a)，2.27(1H,d,J＝7.2Hz,H-2′b)，2.09(1H,o,H-3′)，0.97(3H,d,J＝7.2Hz,H-4′)，0.97(3H,d,J＝6.6Hz,H-5′)，2.47(1H,m,H-2″)，1.73(1H,m,H-3″a)，1.51(1H,o,H-3″b)，1.17(3H,d,J＝7.2Hz,H-4″)，0.94(3H,t,J＝7.2Hz,H-5″)。13C NMR(CD3OD,150MHz)δ25.3(C-1)，31.5(C-2)，217.4(C-3)，80.3(C-4)，78.9(C-5)，80.3(C-6)，39.2(C-7)，67.1(C-8)，79.5(C-9)，29.3(C-10)，40.2(C-11)，176.8(C-12)，69.8(C-13)，20.0(C-14)，23.6(C-15)，58.0(C-16)，173.4(C-1′)，43.1(C-2′)，25.4(C-3′)，21.4(C-4′)，21.5(C-5′)，176.0(C-1″)，41.1(C-2″)，26.5(C-3″)，15.7(C-4″)，10.8(C-5″)。
实施例8：
化合物金挖耳内酯U(Cardivins U)的制备：
实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(60％CH3OH)和semi-prepHPLC(40％-80％CH3CN-H2O 0～40min梯度洗脱)制备，得到化合物金挖耳内酯U。
金挖耳内酯U(Cardivins U)的理化数据如下：白色粉末，(c 0.165,MeOH)；UV(MeOH)λmax:261nm,IR(KBr)vmax:3462,1744,1718cm-1；HRESI-MS(pos.):m/z523.2537[M+Na]+(calcd for C25H40O10Na,523.2519)；
以核磁共振法确认该化合物结构：1H NMR(CD3OD,600MHz)δ1.81(1H,m,H-1a)，1.54(1H,m,H-1b)，3.87(1H,dd,J＝12.6,3.6Hz,H-2a)，2.09(1H,o,H-2b)，5.43(1H,dd,J＝9.0,1.8Hz,H-5)，4.52(1H,dd,J＝9.0,9.0Hz,H-6)，2.56(1H,dd,J＝9.0,9.0Hz,H-7)，4.47(1H,br d,J＝10.8Hz,H-8)，4.85(1H,o,H-9)，2.12(1H,m,H-10)，3.26(1H,ddd,J＝10.8,7.8,4.2Hz,H-11)，3.65(1H,dd,J＝9.6,4.2Hz,H-13a)，3.40(1H,dd,J＝9.6,4.2Hz,H-13b)，0.87(3H,d,J＝7.2Hz,H-14)，1.17(3H,s,H-15)，3.34(3H,s,H-16)，2.28(1H,d,J＝7.2Hz,H-2′a)，2.27(1H,d,J＝6.6Hz,H-2′b)，2.09(1H,o,H-3′)，0.98(3H,d,J＝6.6Hz,H-4′)，0.97(3H,d,J＝6.6Hz,H-5′)，2.64(1H,m,H-2″)，1.20(3H,d,J＝7.2Hz,H-3″)，1.19(3H,d,J＝7.2Hz,H-4″)。13C NMR(CD3OD,150MHz)δ25.3(C-1)，31.6(C-2)，217.5(C-3)，80.4(C-4)，79.0(C-5)，80.3(C-6)，39.2(C-7)，67.1(C-8)，79.5(C-9)，29.2(C-10)，40.2(C-11)，177.0(C-12)，69.7(C-13)，20.0(C-14)，23.6(C-15)，57.9(C-16)，173.4(C-1′)，43.1(C-2′)，25.4(C-3′)，21.4(C-4′)，21.4(C-5′)，176.3(C-1″)，33.9(C-2″)，18.0(C-3″)，17.9(C-4″)。
实施例9：
化合物金挖耳内酯V(Cardivins V)的制备：
实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(40％CH3CN)和semi-prepHPLC(40％-85％CH3CN-H2O 0～40min梯度洗脱)制备，得到化合物金挖耳内酯V。
金挖耳内酯V(Cardivins V)的理化数据如下：白色粉末，[α]2D0–79.2(c 0.105,MeOH)；UV(MeOH)λmax:210nm,IR(KBr)vmax:3473,1743,1716cm-1；HRESI-MS(pos.):m/z521.2366[M+Na]+(calcd for C25H38O10Na,521.2363)；
以核磁共振法确认该化合物结构：1H NMR(CD3OD,600MHz)δ1.86(1H,m,H-1a)，1.55(1H,m,H-1b)，3.89(1H,br d,J＝8.4Hz,H-2a)，2.00(1H,o,H-2b)，5.44(1H,dd,J＝9.0,1.8Hz,H-5)，4.52(1H,dd,J＝9.0,9.0Hz,H-6)，2.60(1H,dd,J＝9.0,9.0Hz,H-7)，4.53(1H,o,H-8)，4.94(1H,d,J＝10.2Hz,H-9)，2.15(1H,m,H-10)，3.31(1H,ddd,J＝9.0,6.0,3.6Hz,H-11)，3.67(1H,dd,J＝9.6,4.2Hz,H-13a)，3.43(1H,dd,J＝9.6,3.6Hz,H-13b)，0.88(3H,d,J＝6.6Hz,H-14)，1.18(3H,s,H-15)，3.35(3H,s,H-16)，6.12(1H,q,J＝7.2Hz,H-3′)，1.93(3H,s,H-4′)，1.98(3H,br d,J＝7.2Hz,H-5′)，2.65(1H,m,H-2″)，1.20(3H,d,J＝7.2Hz,H-3″)，1.19(3H,d,J＝7.2Hz,H-4″)。13C NMR(CD3OD,150MHz)δ25.3(C-1)，31.6(C-2)，217.4(C-3)，80.4(C-4)，79.0(C-5)，80.3(C-6)，39.3(C-7)，67.3(C-8)，79.3(C-9)，29.4(C-10)，40.2(C-11)，177.0(C-12)，69.7(C-13)，20.0(C-14)，23.5(C-15)，58.0(C-16)，168.0(C-1′)，128.0(C-2′)，137.4(C-3′)，19.5(C-4′)，14.6(C-5′)，176.3(C-1″)，33.9(C-2″)，18.0(C-3″)，17.9(C-4″)。
实施例10：
化合物金挖耳内酯W(Cardivins W)的制备：
实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(65％CH3OH)和semi-prepHPLC(35％-75％CH3CN-H2O 0～40min梯度洗脱)制备，得到化合物金挖耳内酯W。
金挖耳内酯W(Cardivins W)的理化数据如下：白色粉末，(c 0.135,MeOH)；UV(MeOH)λmax:210nm,IR(KBr)vmax:3480,1750,1720cm-1；HRESI-MS(pos.):m/z509.2371[M+Na]+(calcd for C24H38O10Na,509.2363)；
以核磁共振法确认该化合物结构：1H NMR(CD3OD,600MHz)δ1.82(1H,m,H-1a)，1.57(1H,m,H-1b)，3.89(1H,br d,J＝8.4Hz,H-2a)，2.10(1H,o,H-2b)，5.43(1H,br d,J＝9.6Hz,H-5)，4.50(1H,dd,J＝9.0,8.4Hz,H-6)，2.57(1H,dd,J＝9.0,9.0Hz,H-7)，4.55(1H,dd,J＝8.4,8.4Hz,H-8)，4.82(1H,o,H-9)，2.12(1H,m,H-10)，3.25(1H,ddd,J＝9.0,5.4,4.2Hz,H-11)，3.66(1H,dd,J＝9.6,4.2Hz,H-13a)，3.43(1H,dd,J＝9.6,4.2Hz,H-13b)，0.86(3H,d,J＝7.2Hz,H-14)，1.18(3H,s,H-15)，3.34(3H,s,H-16)，2.64(1H,o,H-2′)，1.20(3H,d,J＝7.2Hz,H-3′)，1.16(3H,d,J＝7.2Hz,H-4′)，2.64(1H,o,H-2″)，1.19(3H,d,J＝6.6Hz,H-3″)，1.18(3H,d,J＝6.6Hz,H-4″)。13C NMR(CD3OD,150MHz)δ25.3(C-1)，31.7(C-2)，217.5(C-3)，80.4(C-4)，79.0(C-5)，80.3(C-6)，39.2(C-7)，67.1(C-8)，79.3(C-9)，29.4(C-10)，40.1(C-11)，177.0(C-12)，69.7(C-13)，19.9(C-14)，23.6(C-15)，57.9(C-16)，177.4(C-1′)，34.1(C-2′)，18.5(C-3′)，17.8(C-4′)，176.3(C-1″)，33.9(C-2″)，18.0(C-3″)，17.9(C-4″)。
实施例11：
化合物金挖耳内酯X(Cardivins X)的制备：
实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(65％CH3OH)和semi-prepHPLC(40％-80％CH3OH-H2O 0～35min梯度洗脱)制备，得到化合物金挖耳内酯X。
金挖耳内酯X(Cardivins X)的理化数据如下：白色粉末，(c 0.150,MeOH)；UV(MeOH)λmax:200nm,IR(KBr)vmax:3475,1746,1719cm-1；HRESI-MS(pos.):m/z533.2372[M+Na]+(calcd for C24H38O10Na,533.2363)；
以核磁共振法确认该化合物结构：1H NMR(CD3OD,600MHz)δ1.87(1H,m,H-1a)，1.55(1H,m,H-1b)，3.92(1H,dd,J＝12.6,3.6Hz,H-2a)，1.97(1H,o,H-2b)，5.54(1H,dd,J＝9.0,1.8Hz,H-5)，4.58(1H,dd,J＝9.0,9.0Hz,H-6)，2.62(1H,dd,J＝9.0,9.0Hz,H-7)，4.55(1H,br d,J＝9.6Hz,H-8)，4.95(1H,d,J＝10.8Hz,H-9)，2.16(1H,m,H-10)，3.33(1H,ddd,J＝9.0,7.8,3.0Hz,H-11)，3.70(1H,dd,J＝10.2,4.2Hz,H-13a)，3.45(1H,dd,J＝10.2,4.2Hz,H-13b)，0.89(3H,d,J＝6.6Hz,H-14)，1.19(3H,s,H-15)，3.36(3H,s,H-16)，6.13(1H,o,H-3′)，1.92(3H,s,H-4′)，1.97(3H,d,J＝9.0Hz,H-5′)，6.13(1H,o,H-3″)，1.92(3H,s,H-4″)，1.97(3H,d,J＝9.0Hz,H-5″)。13C NMR(CD3OD,150MHz)δ25.6(C-1)，31.6(C-2)，217.7(C-3)，80.4(C-4)，78.9(C-5)，80.4(C-6)，39.3(C-7)，67.3(C-8)，79.3(C-9)，29.4(C-10)，40.2(C-11)，177.1(C-12)，69.7(C-13)，20.0(C-14)，23.6(C-15)，58.0(C-16)，168.0(C-1′)，128.0(C-2′)，137.4(C-3′)，19.2(C-4′)，14.6(C-5′)，167.1(C-1″)，127.5(C-2″)，138.0(C-3″)，19.5(C-4″)，14.6(C-5″)。
实施例12：
化合物金挖耳内酯R(表格1中编号JWE-21)的制备：
实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(65％CH3OH)和semi-prepHPLC(45％-85％CH3CN-H2O 0～40min梯度洗脱)制备，得到化合物金挖耳内酯R。
实施例13：
实施例5所得总内酯再分别采用prepHPLC(65％CH3OH)和semi-prepHPLC(35％-70％CH3CN-H2O 0～40min梯度洗脱)制备，得到化合物JWE-38(表格1中编号)。
实施例14：
实施例4所得总内酯再分别采用prepHPLC(60％CH3OH)和semi-prepHPLC(45％-90％CH3OH-H2O 0～35min梯度洗脱)制备，得到化合物JWE-39(表格1中编号)。
实施例15：
实施例1所得总内酯再分别采用prepHPLC(60％CH3OH)和semi-prepHPLC(40％-80％CH3CN-H2O 0～40min梯度洗脱)制备，得到化合物JWE-40(表格1中编号)。
本发明不局限于上述实施方式，任何人在本发明的启示下得出的其他任何与本发明相同或相近似的产品，均不排除在本发明的保护范围之外。

Claims (7)

1.一种结构通式为Ⅰ的化合物，为吉玛烷型倍半萜衍生物或其生理上可接受的盐，
其中，
R1为3-甲基丁酰基，R2为3-甲基丁酰基、2-甲基丁酰基或异丁酰基；或
R1为当归酰基，R2为异丁酰基或当归酰基；或
R1为异丁酰基，R2为异丁酰基或异丁烯酰基；或
R1为3,4-二甲基戊烯酰基，R2为3,4-二甲基戊烯酰基；或
R1为乙酰基，R2为3,4-二甲基戊烯酰基或乙酰基。
2.如权利要求1所述的化合物，其特征在于，所述的R1和R2均为异丁酰基。
3.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于，该方法为：用有机溶剂提取天名精属植物全草，提取物用水分散后用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯部分，回收溶剂，得到萃取物，所述萃取物首先采用硅胶柱层析分离，按照二氯甲烷-甲醇体积比为200:1,60:1,30:1,15:1进行梯度洗脱，收集15:1部分，回收溶剂至干，再采用Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行纯化，以甲醇或二氯甲烷-甲醇体积比1:1或丙酮为洗脱剂洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，得到通式(I)化合物总内酯，将总内酯经制备液相色谱柱Daisogel-C18-100A，以55～65％甲醇洗脱，再经半制备液相色谱柱YMC-Pack ODS-A，以60％-90％的CH3OH-H2O为流动相进行梯度洗脱得到通式(I)范围内的相应化合物单体，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮。
4.权利要求1所述化合物的制备方法，其特征在于，该方法为：用有机溶剂提取天名精属植物的花、根或茎叶，提取物用水分散后用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯部分，回收溶剂，得到萃取物，所述萃取物首先采用硅胶柱层析分离，按照二氯甲烷-甲醇体积比为200:1,60:1,30:1,15:1进行梯度洗脱，收集15:1部分，回收溶剂至干，再采用Sephadex LH-20凝胶柱色谱进行纯化，以甲醇或二氯甲烷-甲醇体积比为1:1或丙酮为洗脱剂洗脱，收集洗脱液，回收溶剂至干，得到通式(I)化合物总内酯，将总内酯经制备液相色谱柱Daisogel-C18-100A，以55～65％甲醇洗脱，再经半制备液相色谱柱YMC-Pack ODS-A，以60％-90％的CH3OH-H2O为流动相进行梯度洗脱得到通式(I)范围内的相应化合物单体，所述有机溶剂为甲醇、乙醇或丙酮。
5.如权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于，所述有机溶剂为浓度为50-95％的乙醇。
6.权利要求1-2中任一项所述的化合物在制备抗流感病毒药物中的应用。
7.一种抗流感病毒的药物组合物，其特征在于，该组合物由有效量的权利要求1-2任一项所述的化合物及药学上可接受的辅料制成。
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