CN101766655A - 利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法。本发明的具体步骤为：一、建立对照品显微图谱及其细胞组织的数据库；二、对被试品的显微制片进行显微图谱的抓拍、测量细胞组织大小，然后通过图像分析软件完成被试品和对照品的显微图谱和细胞组织大小的对比，并自动显示和打印分析结果。本发明的有益效果是能够提高中药质量检测准确率、使质量检测工作高效、快捷。
Description
技术领域
本发明涉及一种利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法。
背景技术
中国专利公开了“栀子药材和栀子半成品指纹图谱检测的质量控制方法”(专利号：03146034.8)，具体涉及到中药栀子的指纹图谱，该指纹图谱标准是以栀子苷为对照品，用甲醇制成溶液作为对照品溶液，以栀子苷的色谱峰(S峰)的保留时间和峰面积为1计算相对保留时间和峰面积比值。
中药指纹图谱是借鉴法医学指纹的概念，包括中药DNA指纹图谱、蛋白质指纹图谱和化学指纹图谱等；通常所说的指纹图谱是指化学指纹图谱；中药指纹图谱指中药经适当处理后，采用一定的分析手段，利用高效液相色谱仪等仪器得到能够标示该中药特征的共有峰图谱，通过把握中药指纹的特征，有效地鉴别中药的质量，确保中药材及中成药质量相对稳定。
上述质量控制方法的缺点是对中药材的品种和中药剂型都有局观性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种能够提高中药质量检测准确率、使质量检测工作高效、快捷的利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法。
本发明采用如下技术方案：
本发的具体步骤如下：
一、建立对照品显微图谱及其细胞组织的数据库：
(1)建立对照品中药材料显微图谱及其细胞组织数据库：
a、制作对照品中药材显微制片：
所述中药材显微制片包括有中药材切片显微制片和中药材粉末显微制片；
b、抓拍显微图谱、测量细胞组织的大小：
首先把所述中药材显微制片置于显微镜的载物台上，对观察到的细胞结构进行显微图谱抓拍，并存入相应的数据库中；
其次测量所述中药材细胞组织的尺寸，将所述中药材显微制片置于显微镜的载物台上，通过目镜测微尺和载物台测微尺，测量细胞组织尺寸的最大值和最小值，并存入相应的数据库中；
(2)建立对照品饮片显微图谱及其细胞组织的数据库：
具体步骤与上述步骤(1)相同；
(3)建立对照品中成药显微图谱及其细胞组织的数据库：
a、将所述中成药制成粉末显微制片；
b、分别抓拍所述中成药的各有效成份的显图谱、测量细胞组织的大小：
具体方法与上述步骤(1)中的b步相同；
二、对被试品的显微制片进行显微图谱的抓拍、测量细胞组织大小，然后通过图像分析软件完成被试品和对照品的显微图谱和细胞组织颜色、形态、纹理的对比，并自动显示和打印分析结果。
所述中药材切片显微制片的制作方法为：将经软化处理后的中药材切成横切片或纵切片，片厚为10-20um，选取平整的切片置载玻片上，滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，盖上盖玻片。
所述中药材粉末显微制片的制作方法为：将中药材粉碎后过65目筛，取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液或水合氯醛试液，盖上盖玻片。
所述中成药的粉末显微制片的制作方法为：
对于散剂、胶囊剂直接取其粉末，若胶囊剂内容物为颗粒状，先研成粉末；
对于片剂、水丸、糊丸、水蜜丸、锭剂，分别研成粉末；
将上述粉末过65目筛后取少许量于载玻片上，盖上盖玻片。
所述目镜测微尺为放在目镜筒内的一种标尺，为一个直径为18-22mm的圆形玻璃片，中央刻有等距离的50格或100格的刻度线；
所述载物台测微尺是在载玻片中央粘贴一刻有刻度线的圆形玻片；所述刻度为将长1mm等分别分成100个小格或将长2mm等分别分成200个小格，每1小格长为10um，用以标定目镜测微尺。
所述标定目镜测微尺是指用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜和镜筒长度时，目镜测微尺上每一格所代表的长度；标定目镜测微尺的具体方法如下：
将载物台测微尺置显微镜载物台上，在高倍物镜或低倍物镜下，将载物台测微尺刻度移至视野中央；将目镜测微尺的正面向上放入目镜镜筒内，旋转目镜，并移动载物台测微尺，使目镜测微尺的“0”刻度线与载物台测微尺的某刻度相重合，然后再找第二条重合刻度线，根据两条重合线间两种测微尺的小格数，计算出目镜测微尺每一小格在该物镜条件下相当的长度，单位为um。举例说明如下：目镜测微尺77小格(0-77)与载物台测微尺的30小格(0.7-1.0)相当，已知载物台测微尺每一小格的长度为10um，目镜测微尺每一小格长度为：10um*30/77＝3.8um。
所述细胞组织测量方法如下：
将需测量的显微制片置显微镜载物台上，用目镜测微尺测量被测细胞组织的小格数，乘以上述标定的每个小格的微米数，通常是在高倍镜下测量；若测量较长的细胞组织，如纤维、导管、非腺毛的长度时，在低倍镜下测量；记录最大值与最小值，单位为um，充许有±0.1um的误差。
本发明的有益效果：
1、用显微镜鉴别的方法可以对中成药的原材料、成品的组方中的细胞组织特征逐一检测出来。能够快速、精确分析中成药中的中药材品种，准确率达100％。
2、显微图像谱及其细胞组织的数据库的建立，能够有效快速的对被试品做出鉴定，使质量检测工作高效、快捷。对检测结果按日期电子存档，批批检测结果存档，可以对已放行的成品进行质量跟踪。
3、中成药的剂型的很多的，能进行显微镜鉴定的成方制剂主要有散剂、丸剂、片剂、丹剂，其次是投入有药材细粉的浸膏剂、浓缩丸剂、颗粒剂和冲剂等，因为它们含有药材的细胞、组织碎片及后含物和其他微细特征。
4、操作简单，成本低。
附图说明
图1为中药材自然铜对照品的显微图谱。
图2为饮片煅自然铜对照品的显微图谱。
图3-1——图3-10为中成药艾附暖宫丸对照品中各有效成份的显微图谱。
其中，
图3-1为艾叶T形毛的显微图谱；
图3-2为香附分泌细胞的显微图谱；
图3-3为吴茱萸非腺毛的显微图谱；
图3-4为肉桂石细胞的显微图谱；
图3-5为当归薄壁细胞的显微图谱；
图3-6为川芎木栓细胞的显微图谱；
图3-7为白芍纤维的显微图谱；
图3-8为地黄薄壁细胞的显微图谱；
图3-9为黄芪纤维的显微图谱；
图3-10为续继簇晶的显微图谱。
具体实施方式
实施例1(参见图1)：对中药材自然铜进行显微图谱检测；
具体操作步骤按上述发明内容部分中有关中药材的内容进行即可。
图1为中药材自然铜对照品的显微图谱，在《药典》中对自然铜有如下描述：
自然铜：晶体多为立方体，集合体呈致密块状，表面亮淡黄色，有金属光泽，有的黄棕色或棕褐色，无金属光泽，具条纹，条痕绿黑或棕红色，体重，质坚硬或稍脆，易砸碎，断面黄白色，有金属光泽，或断面棕褐色，可见银白色亮星。
显微图谱能够更直观、更精确的分辨是否是自然铜。
实施例2(参见图2)：对饮片煅自然铜进行显微图谱检测；
具体操作步骤按上述发明内容部分中有关饮片的内容进行即可。
图2为饮片煅自然铜对照品的显微图谱，在《药典》中对煅自然铜有如下描述：
煅自然铜：取净自然铜，煅至醋淬至表面呈黑褐色，光泽消失并酥松。
对自然铜是否煅至成熟，只从性状上观察并不好把握，用显微图谱分析煅后的自然铜，根据显微图谱即可明确定性。
实施例3(参见图3-1——图3-10)：对中成药艾附暖宫丸进行显微图谱检测；
具体操作步骤按上述发明内容部分中有关中成药的内容进行即可。
艾附暖宫丸的处方为：
艾叶(炭)120g 香附(醋制)240g 吴茱萸(制)80g 肉桂20g 当归120g 川芎80g 白芍(酒炒)80g 地黄40g炙黄芪80g 续断60g。
上述各味药的显微图谱说明如下：
将艾附暖宫丸的粉末显微制片置显微镜下观察：
艾叶：T字形毛棕色或焦黑色，弯曲，柄2～4细胞(见图3-1)。
香附：分泌细胞类圆形，含淡黄棕色至红棕色分泌物，其周围细胞作放射状排列(见图3-2)。
吴茱萸：非腺毛2～6细胞，胞腔有的充满红棕色物；腺毛头部多细胞，椭圆形，含棕黄色至棕红色物，柄2～5细胞(见图3-3)。
肉桂：石细胞类方形或类圆形，壁一面菲薄(见图3-4)。
当归：薄壁细胞仿锤形，壁略厚，有极微细的斜向交错纹理(见图3-5)。
川芎：木栓细胞黄棕色壁薄，微波状弯曲，多层重叠(见图3-6)。
白芍：纤维直径15～35um，壁厚，微木化，有大的圆形纹孔(见图3-7)。
地黄：薄壁细胞仿锤形，壁略厚，有极细微的斜向交错纹理(见图3-8)。
黄芪：纤维成束或散离，壁厚，表面有纵裂纹，两端断裂成帚状或较平截(见图3-9)。
续断：草酸钙簇晶直径约45um，存在于淡棕黄色皱缩的薄壁细胞中，常数个排列成行(见图3-10)。
对于上述白芍、续继两味中药分别涉及到纤维直径和草酸钙晶直复杂劳动，所以除了抓拍显微图谱外，还要进行纤维直径和晶体直径的测量(即细胞组织的测量)。
Claims (7)
1.一种利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法，其特征在于具体步骤如下：
一、建立对照品显微图谱及其细胞组织的数据库：
(1)建立对照品中药材料显微图谱及其细胞组织数据库：
a、制作对照品中药材显微制片：
所述中药材显微制片包括有中药材切片显微制片和中药材粉末显微制片；
b、抓拍显微图谱、测量细胞组织的大小：
首先把所述中药材显微制片置于显微镜的载物台上，对观察到的细胞结构进行显微图谱抓拍，并存入相应的数据库中；
其次测量所述中药材细胞组织的尺寸，将所述中药材显微制片置于显微镜的载物台上，通过目镜测微尺和载物台测微尺，测量细胞组织尺寸的最大值和最小值，并存入相应的数据库中；
(2)建立对照品饮片显微图谱及其细胞组织的数据库：具体步骤与上述步骤(1)相同；
(3)建立对照品中成药显微图谱及其细胞组织的数据库：
a、将所述中成药制成粉末显微制片；
b、分别抓拍所述中成药的各有效成份的显图谱、测量细胞组织的大小：
具体方法与上述步骤(1)中的b步相同；
二、对被试品的显微制片进行显微图谱的抓拍、测量细胞组织大小，然后通过图像分析软件完成被试品和对照品的显微图谱和细胞组织颜色、形态、纹理的对比，并自动显示和打印分析结果。
2.根据权利要求1所述的利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法，其特征在于所述中药材切片显微制片的制作方法为：将经软化处理后的中药材切成横切片或纵切片，片厚为10-20um，选取平整的切片置载玻片上，滴加水合氯醛试液后，在酒精灯上加热透化，盖上盖玻片。
3.根据权利要求1所述的利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法，其特征在于所述中药材粉末显微制片的制作方法为：将中药材粉碎后过65目筛，取少许置载玻片上，滴加甘油醋酸试液或水合氯醛试液，盖上盖玻片。
4.根据权利要求1所述的利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法，其特征在于所述中成药的粉末显微制片的制作方法为：
对于散剂、胶囊剂直接取其粉末，若胶囊剂内容物为颗粒状，先研成粉末；
对于片剂、水丸、糊丸、水蜜丸、锭剂，分别研成粉末；
将上述粉末过65目筛后取少许量于载玻片上，盖上盖玻片。
5.根据权利要求1所述的利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法，其特征在于所述目镜测微尺为放在目镜筒内的一种标尺，为一个直径为18-22mm的圆形玻璃片，中央刻有等距离的50格或100格的刻度线；
所述载物台测微尺是在载玻片中央粘贴一刻有刻度线的圆形玻片；所述刻度为将长1mm等分别分成100个小格或将长2mm等分别分成200个小格，每1小格长为10um，用以标定目镜测微尺。
6.根据权利要求5所述的利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法，其特征在于所述标定目镜测微尺是指用以确定使用同一显微镜及特定倍数的物镜和镜筒长度时，目镜测微尺上每一格所代表的长度；标定目镜测微尺的具体方法如下：
将载物台测微尺置显微镜载物台上，在高倍物镜或低倍物镜下，将载物台测微尺刻度移至视野中央；将目镜测微尺的正面向上放入目镜镜筒内，旋转目镜，并移动载物台测微尺，使目镜测微尺的“0”刻度线与载物台测微尺的某刻度相重合，然后再找第二条重合刻度线，根据两条重合线间两种测微尺的小格数，计算出目镜测微尺每一小格在该物镜条件下相当的长度，单位为um。
7.根据权利要求6所述的利用显微图谱分析中药材、饮片、中成药质量的方法，其特征在于所述细胞组织测量方法如下：
将需测量的显微制片置显微镜载物台上，用目镜测微尺测量被测细胞组织的小格数，乘以上述标定的每个小格的微米数，通常是在高倍镜下测量；若测量较长的细胞组织，如纤维、导管、非腺毛的长度时，在低倍镜下测量；记录最大值与最小值，单位为um。
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