CN101757640A - 一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备，包括：将鹰嘴豆磨成粉末并干燥，加入石油醚，于70℃水浴中回流1.5小时后抽滤，烘干；加入65％乙醇，置于85℃水浴中回流1.5小时，回流两次，抽滤；加入蒸馏水，倒入大孔吸附柱，调节流量为1ml/min，用烧杯接过柱样品；在大孔吸附柱中加入70％的乙醇溶液，调节流速为0.5ml/min，收集流液，蒸馏，得异黄酮精品；将环糊精与异黄酮精品以质量比4～6∶1投料，常温下加入2～4倍量的水，研磨成糊状，真空干燥，用乙醇洗涤，干燥，即得。本发明的制备方法简单，成本低，选用的微胶囊壁材毒性小，包合后能够增加植物药的溶解度，提高异黄酮的生物利用度，具有良好的应用前景。

Description

一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备

技术领域

本发明属天然植物药包合物的制备领域，特别是涉及一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备。

背景技术

鹰嘴豆是世界上种植面积最大的食用豆类之一，是世界第二大消费豆类，是贫瘠、干旱地区的主要食物之一。

鹰嘴豆富含异黄酮如鹰嘴豆芽素A和芒柄花黄素，染料木素、毛蕊异黄酮、芒柄花苷和印度黄檀苷等能降低脑内和外周血管主力，降低血压，改善脑循环与冠状循环，促进缺血心肌的侧枝循环等，还可降低缺血心肌乳酸产生，减小心肌缺血性损伤，并具有雌激素样作用，可用于治疗乳腺癌和子宫癌等。但其水溶性差，不能被人体很好的吸收。

β-CD和HP-β-CD是毒性低的辅料，能够增加药物的溶解度，提高异黄酮的生物利用度。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备，本发明的制备方法简单，成本低，选用的微胶囊壁材毒性小，可以掩盖异黄酮类物质苦涩味，包合后能够增加药物的溶解度，易于人体吸收，提高异黄酮的耐候性和生物利用度，具有良好的应用前景。

本发明的一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备，包括：

(1)将鹰嘴豆磨成粉末并干燥，取50g豆粉加入400ml石油醚，于70℃水浴中回流1.5小时，再将产物进行抽滤，烘干，回流滤液进行蒸馏以回收石油醚；

(2)在干燥好的脱脂豆粉中加入300ml质量分数65％乙醇，置于85℃水浴中回流1.5小时，回流两次，然后将产物进行抽滤，同时合并两次回流滤液进行蒸馏，回收乙醇；

(3)在异黄酮粗品中加入50ml蒸馏水，倒入大孔吸附柱，调节流量为1ml/min，用烧杯接过柱样品，当液面下降至高于树脂面0.4～0.6ml处时，关闭阀门，用蒸馏水冲洗树脂至液滴为无色；

(4)配制70％体积分数乙醇溶液200ml，倒入大孔吸附柱，调节流速为0.5ml/min，收集流液，蒸馏回收乙醇，得异黄酮精品；

(5)将环糊精与上述异黄酮精品以质量比4～6∶1投料，常温下加入2～4倍量的水，研磨20～40min成糊状，于50℃真空干燥6小时，用10ml乙醇洗涤，干燥，即得包合物。

所述步骤(5)中的环糊精为β-环糊精或HP-β-环糊精；

所述步骤(5)中的环糊精与异黄酮精品的质量比为4∶1、5∶1或6∶1；

所述步骤(5)中的加水量为环糊精与异黄酮精品总质量的2倍、3倍或4倍；

所述步骤(5)中的研磨时间为20min，30min或40min。

本发明分别选择β-CD和HP-β-CD为包合材料，采用研磨法制备其包合物，并对两种材料制备的包合物加以比较，以薄层色谱、差示扫描量热(DSC)法和红外光谱对包合物进行鉴定，同时还考察了最佳包合工艺。

本发明选用的β-环糊精和HP-β-环糊精具是由七个葡萄糖分子通过1→4糖苷键连接而成的具有疏水内腔和亲水表面的环状低聚糖，是一种毒性低、水溶性高的辅料，能够增加药物溶解度，并且可以掩盖异黄酮类物质苦涩味，提高生物利用度和异黄酮在空气中的稳定性。

有益效果

本发明的制备方法简单，成本低，选用的微胶囊壁材毒性小，可以掩盖异黄酮类物质苦涩味，包合后能够增加药物的溶解度，易于人体吸收，提高异黄酮的生物利用度，具有良好的应用前景。

附图说明

图1为鹰嘴豆异黄酮和精品鹰嘴豆芽素A薄层色谱(A.鹰嘴豆异黄酮提取物，B.鹰嘴豆芽素A)；

图2为包合物的薄层色谱(1.包合物的乙酸乙酯溶液，2.包合物的无水乙醇溶液)；

图3为差示扫描量热图(A.鹰嘴豆异黄酮，B.β-CD，C.HP-β-CD，D.鹰嘴豆异黄酮和β-CD的混合物，E.鹰嘴豆异黄酮-β-CD包合物，F.鹰嘴豆异黄酮-HP-β-CD包合物，G.鹰嘴豆异黄酮和HP-β-CD的混合物)；

图4为样品的红外光谱(1.鹰嘴豆异黄酮，2.β-CD，3.鹰嘴豆异黄酮-β-CD包合物，4.鹰嘴豆异黄酮和β-CD混合物)；

图5为样品的红外光谱(1.鹰嘴豆异黄酮，5.HP-β-CD，6.鹰嘴豆异黄酮-HP-β-CD包合物，7.鹰嘴豆异黄酮和HP-β-CD混合物)。

具体实施方式

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

实施例1

(1)鹰嘴豆异黄酮样品的制备

将鹰嘴豆磨成粉末并干燥，取50g豆粉放入500ml三颈瓶中，加入400ml石油醚，置于70℃水浴中回流1.5小时。回流完毕后将产物抽滤，将得到的脱脂豆粉置于烘箱中烘干，将滤液置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收石油醚。将干燥好的脱脂豆粉放入500ml三颈瓶中，加入300ml质量分数65％乙醇，置于85℃水浴中回流1.5小时，回流两次。回流完毕后将产物进行抽滤，合并两次回流滤液，置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收乙醇。在异黄酮粗品中加入50ml蒸馏水，倒入大孔吸附柱，调节流量为1ml/min，用250ml烧杯接过柱样品。当液面下降至高于树脂面约0.5ml处时，关闭阀门，用平底烧瓶收集。再用蒸馏水冲洗树脂至液滴为无色，当液面下降至高于树脂面约0.5ml时，关闭阀门。配制70％体积分数乙醇溶液200ml，倒入大孔吸附柱，调节流速为0.5ml/min，收集流液。并置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收乙醇，得异黄酮精品。

(2)包合方法

将β-环糊精和鹰嘴豆异黄酮样品以质量比4∶1投料，常温下加两者质量和两倍质量的蒸馏水，研磨20min成糊状，于50℃干燥6小时，用10mL乙醇洗涤再干燥即得包合物。

(3)测试

包合物得率(％)＝W_包合物/(W_β-CD+W_异黄酮)×100％＝56.40％

包合物异黄酮含量(％)的计算：精确称取一定质量包合物于50ml容量瓶中，加入2ml乙醇，加蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀溶解。紫外分光测得其吸光度A，代入标准曲线回归方程C＝5.7471A+0.0747，相关系数r＝0.9899，得到异黄酮的含量，包合物异黄酮含量(％)＝异黄酮的含量/包合物所取质量×100％＝0.935％

实施例2

(1)鹰嘴豆异黄酮样品的制备

将鹰嘴豆磨成粉末并干燥，取50g豆粉放入500ml三颈瓶中，加入400ml石油醚，置于70℃水浴中回流1.5小时。回流完毕后将产物抽滤，将得到的脱脂豆粉置于烘箱中烘干，将滤液置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收石油醚。将干燥好的脱脂豆粉放入500ml三颈瓶中，加入300ml质量分数65％乙醇，置于85℃水浴中回流1.5小时，回流两次。回流完毕后将产物进行抽滤，合并两次回流滤液，置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收乙醇。在异黄酮粗品中加入50ml蒸馏水，倒入大孔吸附柱，调节流量为1ml/min，用250ml烧杯接过柱样品。当液面下降至高于树脂面约0.5ml处时，关闭阀门，用平底烧瓶收集。再用蒸馏水冲洗树脂至液滴为无色，当液面下降至高于树脂面约0.5ml时，关闭阀门。配制70％体积分数乙醇溶液200ml，倒入大孔吸附柱，调节流速为0.5ml/min，收集流液。并置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收乙醇，得异黄酮精品。

(2)包合方法

将β-环糊精和鹰嘴豆异黄酮样品以质量比5∶1投料，常温下加两者质量和三倍质量的蒸馏水，研磨20min成糊状，于50℃干燥6小时，用10mL乙醇洗涤再干燥即得包合物。

(3)测试

包合物得率(％)＝W_包合物/(W_β-CD+W_异黄酮)×100％＝77.09％

包合物异黄酮含量(％)的计算：精确称取一定质量包合物于50ml容量瓶中，加入2ml乙醇，加蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀溶解。紫外分光测得其吸光度A，代入标准曲线回归方程C＝5.7471A+0.0747，相关系数r＝0.9899，得到异黄酮的含量，包合物异黄酮含量(％)＝异黄酮的含量/包合物所取质量×100％＝0.789％

实施例3

(1)鹰嘴豆异黄酮样品的制备

将鹰嘴豆磨成粉末并干燥，取50g豆粉放入500ml三颈瓶中，加入400ml石油醚，置于70℃水浴中回流1.5小时。回流完毕后将产物抽滤，将得到的脱脂豆粉置于烘箱中烘干，将滤液置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收石油醚。将干燥好的脱脂豆粉放入500ml三颈瓶中，加入300ml质量分数65％乙醇，置于85℃水浴中回流1.5小时，回流两次。回流完毕后将产物进行抽滤，合并两次回流滤液，置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收乙醇。在异黄酮粗品中加入50ml蒸馏水，倒入大孔吸附柱，调节流量为1ml/min，用250ml烧杯接过柱样品。当液面下降至高于树脂面约0.5ml处时，关闭阀门，用平底烧瓶收集。再用蒸馏水冲洗树脂至液滴为无色，当液面下降至高于树脂面约0.5ml时，关闭阀门。配制70％体积分数乙醇溶液200ml，倒入大孔吸附柱，调节流速为0.5ml/min，收集流液。并置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收乙醇，得异黄酮精品。

(2)包合方法

将β-环糊精和鹰嘴豆异黄酮样品以质量比5∶1投料，常温下加两者质量和两倍质量的蒸馏水，研磨40min成糊状，于50℃干燥6小时，用10mL乙醇洗涤再干燥即得包合物。

(3)测试

包合物得率(％)＝W_包合物/(W_β-CD+W_异黄酮)×100％＝77.10％

包合物异黄酮含量(％)的计算：精确称取一定质量包合物于50ml容量瓶中，加入2ml乙醇，加蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀溶解。紫外分光测得其吸光度A，代入标准曲线回归方程C＝5.7471A+0.0747，相关系数r＝0.9899，得到异黄酮的含量，包合物异黄酮含量(％)＝异黄酮的含量/包合物所取质量×100％＝0.969％

实施例4

(1)鹰嘴豆异黄酮样品的制备

将鹰嘴豆磨成粉末并干燥，取50g豆粉放入500ml三颈瓶中，加入400ml石油醚，置于70℃水浴中回流1.5小时。回流完毕后将产物抽滤，将得到的脱脂豆粉置于烘箱中烘干，将滤液置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收石油醚。将干燥好的脱脂豆粉放入500ml三颈瓶中，加入300ml质量分数65％乙醇，置于85℃水浴中回流1.5小时，回流两次。回流完毕后将产物进行抽滤，合并两次回流滤液，置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收乙醇。在异黄酮粗品中加入50ml蒸馏水，倒入大孔吸附柱，调节流量为1ml/min，用250ml烧杯接过柱样品。当液面下降至高于树脂面约0.5ml处时，关闭阀门，用平底烧瓶收集。再用蒸馏水冲洗树脂至液滴为无色，当液面下降至高于树脂面约0.5ml时，关闭阀门。配制70％体积分数乙醇溶液200ml，倒入大孔吸附柱，调节流速为0.5ml/min，收集流液。并置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收乙醇，得异黄酮精品。

(2)包合方法

将β-环糊精和鹰嘴豆异黄酮样品以质量比6∶1投料，常温下加两者质量和两倍质量的蒸馏水，研磨30min成糊状，于50℃干燥6小时，用10mL乙醇洗涤再干燥即得包合物。

(3)测试

包合物得率(％)＝W_包合物/(W_β-CD+W_异黄酮)×100％＝71.13％

包合物异黄酮含量(％)的计算：精确称取一定质量包合物于50ml容量瓶中，加入2ml乙醇，加蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀溶解。紫外分光测得其吸光度A，代入标准曲线回归方程C＝5.7471A+0.0747，相关系数r＝0.9899，得到异黄酮的含量，包合物异黄酮含量(％)＝异黄酮的含量/包合物所取质量×100％＝0.749％

实施例5

(1)鹰嘴豆异黄酮样品的制备

将鹰嘴豆磨成粉末并干燥，取50g豆粉放入500ml三颈瓶中，加入400ml石油醚，置于70℃水浴中回流1.5小时。回流完毕后将产物抽滤，将得到的脱脂豆粉置于烘箱中烘干，将滤液置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收石油醚。将干燥好的脱脂豆粉放入500ml三颈瓶中，加入300ml质量分数65％乙醇，置于85℃水浴中回流1.5小时，回流两次。回流完毕后将产物进行抽滤，合并两次回流滤液，置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收乙醇。在异黄酮粗品中加入50ml蒸馏水，倒入大孔吸附柱，调节流量为1ml/min，用250ml烧杯接过柱样品。当液面下降至高于树脂面约0.5ml处时，关闭阀门，用平底烧瓶收集。再用蒸馏水冲洗树脂至液滴为无色，当液面下降至高于树脂面约0.5ml时，关闭阀门。配制70％体积分数乙醇溶液200ml，倒入大孔吸附柱，调节流速为0.5ml/min，收集流液。并置于旋转蒸发仪中蒸馏，回收乙醇，得异黄酮精品。

(2)包合方法

分别称取HP-β-环糊精和鹰嘴豆异黄酮，质量比为4∶1，以此投料，再于常温下加入此总质量两倍的蒸馏水，手工研磨20min后成糊状，再于50℃干燥6小时，用10mL乙醇洗涤再干燥即得包合物。

(3)测试

包合物得率(％)＝W_包合物/(W_HP-β-CD+W_异黄酮)×100％＝59.74％

包合物异黄酮含量(％)的计算：精确称取一定质量包合物于50ml容量瓶中，加入2ml乙醇，加蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀溶解。紫外分光测得其吸光度A，代入标准曲线回归方程C＝5.7471A+0.0747，相关系数r＝0.9899，得到异黄酮的含量，包合物异黄酮含量(％)＝异黄酮的含量/包合物所取质量×100％＝1.231％

实施例6

本发明采用了正交试验、薄层色谱、差示扫描量热法及红外光谱进行分析比较：

(1)正交试验设计确定最优工艺：根据预试验分析，选择对包合作用影响最大的因素，即鹰嘴豆异黄酮与β-CD或HP-β-CD的质量比(A)、研磨时间(B)、加水量倍数(C)，采用L₉(3³)试验方法进行试验。各因素水平设计为鹰嘴豆异黄酮与β-CD或HP-β-CD的质量比A可以设计为4∶1，5∶1，6∶1；研磨时间B可设计为20min，30min，40min；加水量倍数C可以设计为2倍，3倍，4倍。

包合物得率计算：包合物得率(％)＝W_包合物/(W_β-CD+W_异黄酮)×100％

                包合物得率(％)＝W_包合物/(W_HP-β-CD+W_异黄酮)×100％

包合物异黄酮含量(％)的计算：精确称取一定质量包合物于50ml容量瓶中，加入2ml乙醇，加蒸馏水稀释至刻度，充分摇匀溶解。紫外分光测得其吸光度A，代入标准曲线回归方程得到异黄酮的含量，包合物异黄酮含量(％)＝异黄酮的含量/包合物所取质量×100％。

(2)薄层色谱分析：将提取的鹰嘴豆异黄酮和精品鹰嘴豆芽素A分别加甲醇溶解，吸取上述溶液，以氯仿纯溶剂为展开剂分别在硅胶薄层板上展开，晾干后在254nm紫外灯下观察。另取包合物溶解于乙酸乙酯和无水乙醇中，吸取其溶液点在硅胶薄层板上，同样以氯仿纯溶剂为展开剂展开，晾干后在254nm紫外灯下观察。

图1结果显示，提取的异黄酮中可能含有鹰嘴豆芽素A，计算R_f值为0.241；图2结果显示，乙酸乙酯提取液没有斑点，而无水乙醇提取液则出现和鹰嘴豆异黄酮提取物相似的斑点，说明包合物中不含游离的异黄酮，即环糊精已经将异黄酮包合完全。

(3)差示扫描量热(DSC)法：鹰嘴豆异黄酮、β-CD、鹰嘴豆异黄酮-β-CD包合物、鹰嘴豆异黄酮和β-CD混合物、HP-β-CD、鹰嘴豆异黄酮-HP-β-CD包合物、鹰嘴豆异黄酮和HP-β-CD混合物进行DSC分析。测试条件：以空铝坩为参比物作基线，升温速度为10℃/min，N₂流速为20ml/min，扫描范围为30～300℃。分别记录样品的DSC升温曲线。从图3可知，鹰嘴豆异黄酮没有明显的峰，β-CD在110℃有一个明显的吸热峰，HP-β-CD在75℃处有一较宽的吸热峰，鹰嘴豆异黄酮和β-CD或HP-β-CD的混合物的DSC曲线是两者的重叠，而其两者的包合物中吸热峰消失，从而证明了包合物的形成。

(4)红外光谱分析：分别将鹰嘴豆异黄酮、β-CD、鹰嘴豆异黄酮-β-CD包合物、鹰嘴豆异黄酮和β-CD混合物、HP-β-CD、鹰嘴豆异黄酮-HP-β-CD包合物、鹰嘴豆异黄酮和HP-β-CD混合物压片，记录红外光谱。测定参数：扫描范围4000～400cm^-1。

由图4可见，包合物和混合物的IR图谱明显不同，包合物在1024.56cm^-1处的峰消失，在1155.87、1082.21、1079.00cm^-1处的三个峰吸收强度明显减小，在2923.84、1652.31、1415.30、941.28、572.95cm^-1五个峰发生紫移，1639.50、1364.06、1239.15、854.80、758.72cm^-1处五个峰发生红移，这些变化都说明鹰嘴豆异黄酮和β-CD形成了新的物相。

由图5可见，包合物和混合物的IR图谱明显不同，在1716.37、1511.39cm^-1处的峰消失在1245.55cm^-1处的峰吸收明显减弱，在1636.30、1453.74、1383.99、1034.16、941.28、548.40cm^-1的六个峰发生红移，2971.89、2927.05、1399.29、761.92、582.56cm^-1处的五个峰发生紫移，这些变化都说明鹰嘴豆异黄酮和HP-β-CD形成了新的物相。

Claims (5)

1.一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备，包括：

(1)将鹰嘴豆磨成粉末并干燥，取50g豆粉加入400ml石油醚，于70℃水浴中回流1.5小时，再将产物进行抽滤，烘干，回流滤液进行蒸馏以回收石油醚；

(2)在干燥好的脱脂豆粉中加入300ml质量分数65％乙醇，置于85℃水浴中回流1.5小时，回流两次，然后将产物进行抽滤，同时合并两次回流滤液进行蒸馏，回收乙醇；

(3)在异黄酮粗品中加入50ml蒸馏水，倒入大孔吸附柱，调节流量为1ml/min，用烧杯接过柱样品，当液面下降至高于树脂面0.4～0.6ml处时，关闭阀门，用蒸馏水冲洗树脂至液滴为无色；

(4)配制70％体积分数乙醇溶液200ml，倒入大孔吸附柱，调节流速为0.5ml/min，收集流液，蒸馏回收乙醇，得异黄酮精品；

(5)将环糊精与上述异黄酮精品以质量比4～6∶1投料，常温下加入2～4倍量的水，研磨20～40min成糊状，于50℃真空干燥6小时，用10ml乙醇洗涤，干燥，即得包合物。

2.根据权利要求1所述的一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备，其特征在于：所述步骤(5)中的环糊精为β-环糊精或羟丙基HP-β-环糊精。

3.根据权利要求1所述的一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备，其特征在于：所述步骤(5)中的环糊精与异黄酮精品的质量比为4∶1、5∶1或6∶1。

4.根据权利要求1所述的一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备，其特征在于：所述步骤(5)中的加水量为环糊精与异黄酮精品总质量的2倍、3倍或4倍。

5.根据权利要求1所述的一种鹰嘴豆异黄酮与环糊精包合物的制备，其特征在于：所述步骤(5)中的研磨时间为20min，30min或40min。

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