CN101750413B

CN101750413B - 一种食品中蛋白质含量快速检测方法

Info

Publication number: CN101750413B
Application number: CN2009101725163A
Authority: CN
Inventors: 何保山; 王金水; 李小艳; 韩小贤; 薛运侠
Original assignee: Henan University of Technology
Current assignee: Henan University of Technology
Priority date: 2009-11-09
Filing date: 2009-11-09
Publication date: 2011-05-04
Anticipated expiration: 2029-11-09
Also published as: CN101750413A

Abstract

本发明提供一种食品中蛋白质含量快速检测方法，其特征在于：样品经前处理后，取100μL检测试样与2400μL自制的蛋白质光学检测试剂混合，样品中蛋白质与检测试剂起显色反应，反应产物在610nm处有最大吸收峰，通过比较不同浓度蛋白质标准样品的Abs₆₁₀(吸光度)值，制定标准曲线，根据待测样品的Abs₆₁₀值，获取待测物中蛋白质的含量。该检测方法具有检测方便、测量速度快、灵敏度高、且检测成本较低等优点，可以满足快速检测蛋白质的需要。

Description

一种食品中蛋白质含量快速检测方法

技术领域

本发明涉及一种快速测定食品中蛋白质含量的检测技术，属于食品安全检测领域。

背景技术

蛋白质在生物体内占有特殊的地位，它和核酸是构成原生质的主要成分，是生命现象的物质基础，在催化生命体内各种反应进行、调节代谢、抵御外来物质入侵及控制遗传信息等方面都起着至关重要的作用，具有糖类和脂肪不可替代的作用。

“民以食为天”，食品是人们生活的最基本必需品，而食物中的蛋白质是人体中氮的唯一来源。因此，食品中蛋白质含量的多少，不仅表示食品的质量，而且也关系着人体的健康。国家食品卫生标准也对部分食品中蛋白质的含量作了相应规定，其中，动物乳和动物乳制品中蛋白质的测定是食物营养成分分析的必测项目。当前，日常消费者和质检部门现场采用的奶粉品质判断方法主要依靠感官观察(手感、颜色、气味、味道等)，然后质检部门抽查取样送交至技术中心检测，蛋白质的测定多采用国家标准方法——凯氏定氮法。然而感官观察虽然易于操作，但主观性强、准确度低，只是一种初步的检测手段；而传统的凯氏定氮法其基本原理是将食品与硫酸和催化剂一同加热消化，使蛋白质分解，分解的氨与硫酸结合生成硫酸铵。然后碱化蒸馏使氨游离，用硼酸吸收后再以硫酸或盐酸标准溶液滴定，根据酸的消耗量乘以换算系数，即为蛋白质含量。很明显，利用凯氏定氮法测得的结果不完全是蛋白质，还包括一些非蛋白质类的含氮物质，如尿素氮、游离氨氮、无机氨盐等，致使不法分子有机可乘，在原料中掺入大量蛋白精——三聚氰胺以提高奶粉蛋白质含量，以非法牟取暴利，从而导致震惊全国的“三鹿奶粉”事件的爆发，给国家和人民造成了不可挽回的损失。可见，传统方法难以解决牛奶中蛋白质的掺伪检验难题，同时也存在操作流程繁琐、耗时费力等缺点，且在操作过程中会产生大量有害气体而污染环境，影响操作人员健康，不能满足快速测定的需要。

发明内容

本发明的目的，就是针对上述测试方法的不足，向食品安全检测部门提供一种只对食品中蛋白质特异性响应、反应速度快、显色稳定、干扰因素小、优于常规凯氏定氮法的检测技术，从而建立一种快速简便的食品蛋白质快速检测方法，可解决大量的食品公共安全问题。

为了达到上述目的，本发明是这样实现的：样品经前处理后，取100μL检测试样与2400μL自制的蛋白质光学检测试剂混合，样品中蛋白质与检测试剂起显色反应，反应产物在610nm处有最大吸收峰，通过比较不同浓度蛋白质标准样品的Abs₆₁₀值，制定标准曲线，根据待测样品的Abs₆₁₀值，获取待测物中蛋白质的含量，从而得到本发明。

自制的蛋白质光学检测试剂由直链醇、多环磺酞染料、十二烷基盐组合而成。

直链醇由乙醇、丙醇、丁醇、戊醇和己醇中的至少一种或一种以上组成。乙醇、丙醇、丁醇和戊醇是直链醇的优选，乙醇和丙醇为最优选。直链醇试剂，其待加入量的优选为0.5～10mM。

多环磺酞染料由四溴苯酚磺酞、酸性蓝90、苯酚红、甲酚红、二氯苯酚磺酰酞、溴酚红和甲酚紫中一种或一种以上组成。四溴苯酚磺酞、酸性蓝90、二氯苯酚磺酰酞、溴酚红和甲酚紫是多环磺酞染料的优选，四溴苯酚磺酞、酸性蓝90和溴酚红是多环磺酞染料的最优选。多环磺酞染料，其待加入量的优选为100～200mM。

十二烷基盐由十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基三甲基氯化铵和十二烷基三甲基溴化铵中一种或一种以上组成，十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠和十二烷基三甲基氯化铵是十二烷基盐的优选，十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠是十二烷基盐的最优选。十二烷基盐，其待加入量的优选为1～50mM。

该检测方法具有检测方便、测量速度快、灵敏度高、且检测成本较低等优点，很适合进行食品中蛋白质含量的快速检测，准确度高，为食品检验检疫部门的检测工作提高了工作效率，同时也为人们的食品安全保障提升了一个台阶。

具体实施方式

本发明提供一种食品中蛋白质含量快速检测方法，具体实施过程是：样品经前处理后，取100μL检测试样与2400μL自制的蛋白质光学检测试剂混合，样品中蛋白质与检测试剂起显色反应，反应产物在610nm处有最大吸收峰，通过比较不同浓度蛋白质标准样品的Abs₆₁₀值，制定标准曲线，根据待测样品的Abs₆₁₀值，获取待测物中蛋白质的含量。

在本发明的自制蛋白质光学检测试剂中，所述检测试剂是由直链醇、多环磺酞染料、十二烷基盐组合而成。

所述直链醇由乙醇、丙醇、丁醇、戊醇和己醇中一种或一种以上组成，其中乙醇、丙醇、丁醇和戊醇是直链醇的优选，乙醇和丙醇是最优选的。待加入直链醇的量为0.5～100mM，优选为0.5～10mM。

所述多环磺酞染料从四溴苯酚磺酞、酸性蓝90、苯酚红、甲酚红、二氯苯酚磺酰酞、溴酚红和甲酚紫中至少选取一种组成，其中四溴苯酚磺酞、酸性蓝90、二氯苯酚磺酰酞、溴酚红和甲酚紫是优选的，并且四溴苯酚磺酞、酸性蓝90和溴酚红是最优选的。待加入多环磺酞染料的量为100～500mM，优选为100～200mM。

所述十二烷基盐是由十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基三甲基氯化铵和十二烷基三甲基溴化铵中一种或一种以上组成，其中十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠和十二烷基三甲基氯化铵是十二烷基盐的优选，十二烷基硫酸钠和十二烷基苯磺酸钠是最优选的。待加入十二烷基盐的量为1～100mM，优选为1～50mM。

下面结合具体实施例对本发明进行描述：

实施例1：蛋白质标准样品Abs₆₁₀值——浓度标准曲线

1、取石英比色皿；

2、用移液器准确移取100μL标准蛋白质样品至比色皿中；

3、用移液器准确移取2400μL自制的蛋白质光学检测试剂至比色皿中，混合均匀，室温下反应2分钟；

4、在紫外分光光度计下测定610nm下的吸光值(Abs值)；

5、绘制蛋白质标准样品Abs₆₁₀值——浓度标准曲线(图1)。

实施例2：奶粉样品的快速检测方法

1、准确称取100mg奶粉样品，溶于1000μL pH7.8的磷酸盐缓冲液中，离心，用移液器准确移取100μL上清液至比色皿中；

2、用移液器准确移取2400μL自制的蛋白质光学检测试剂至比色皿中，混合均匀，室温下反应2分钟；

3、在紫外分光光度计下测定610nm下的吸光值(Abs值)；

4、与标准曲线比较，判断奶粉样品中蛋白质的含量。

以上实施例只是为了说明本发明，而不是对本发明的限制。在上述说明的基础上，可以对本发明作许多改进和改变。在所附权利要求书的范围内，本发明可以有不同于上述的其它实现方式，选用其它试剂、改变试剂浓度等方法均在本发明专利要求范围之内。

Claims

1.一种食品中蛋白质含量快速检测方法，其特征在于：样品经前处理后，取100μL检测试样与2400μL由直链醇、多环磺酞染料和十二烷基盐组合而成的蛋白质光学检测试剂混合，样品中蛋白质与检测试剂起显色反应，反应产物在610nm处有最大吸收峰，通过比较不同浓度蛋白质标准样品的Abs₆₁₀值，制定标准曲线，根据待测样品的Abs₆₁₀值，获取待测物中蛋白质的含量。

2.根据权利要求1所述的一种食品中蛋白质含量快速检测方法，其特征在于：组成蛋白质光学检测试剂中的直链醇由乙醇、丙醇、丁醇、戊醇和己醇中的一种以上组成，直链醇待加入量的优选为0.5～10mM。

3.根据权利要求1所述的一种食品中蛋白质含量快速检测方法，其特征在于：组成蛋白质光学检测试剂中的多环磺酞染料由四溴苯酚磺酞、酸性蓝90、苯酚红、甲酚红、二氯苯酚磺酰酞、溴酚红和甲酚紫中的一种以上组成，多环磺酞染料待加入量的优选为100～200mM。

4.根据权利要求1所述的一种食品中蛋白质含量快速检测方法，其特征在于：组成蛋白质光学检测试剂中的十二烷基盐由十二烷基硫酸钠、十二烷基苯磺酸钠、十二烷基三甲基氯化铵和十二烷基三甲基溴化铵中的一种以上组成，十二烷基盐待加入量的优选为1～50mM。