CN101732442B - 含有荭草的组合物在制备治疗脑血管及相关疾病药物中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含有荭草的组合物在制备治疗脑血管及相关疾病的药物中的应用，所述脑血管疾病包括中风、中风后遗症、局部缺血、再灌注损伤、血栓、血管收缩、梗塞和阿尔茨海默氏病，还包括各种原因引起的眩晕。其中，含有荭草的组合物是由中药原料荭草、山楂叶、三七和川芎合并后提取或分别提取后合并所得的提取物组成。本发明提供含有荭草的组合物新的医药用途，为患者提供了一种新的用药选择。

Description

含有荭草的组合物在制备治疗脑血管及相关疾病药物中的应用

技术领域

本发明涉及组合物的应用，特别涉及含有荭草的组合物在制备治疗脑血管及相关疾病药物中的应用。

技术背景

脑血管病是危害人类生命与健康的常见病和多发病，具有“发病率高、死亡率高、致残率高、复发率高、并发症多”一“四高一多”的特点，是中年人致死和致残的主要疾病。由于老年人口的不断增加和生活水平的提高，脑血管病的发病率在不断上升。在全球范围内，每年使460万人死亡，其患病和死亡主要在65岁以上的人群。我国也是脑卒中死亡率高发地区，据估计居民现患脑血管病600万，每年新发生脑血管病130万人、死亡近100万人，在幸存者中约3/4的人留下偏瘫等后遗症状，部分病人丧失劳动能力和生活能力。常见的脑血管病大致可以分为缺血性脑中风和出血性脑中风两大类。缺血性脑中风包括短暂性脑缺血发作、脑血栓、脑栓塞和脑梗塞等四种，临床较多见，约占全部脑血管病人的70％~80％；出血性脑中风包括脑出血和蛛网膜下腔出血两种疾病，多由长期高血压、先天性脑血管畸形等因素所致，这类病人约占脑血管病的20％～30％左右。中药复方含多味药，单味药含有多种成分，因此中药可以通过多层次、多靶点、多环节发挥作用，随着科学的进展与研究的深入，目前一些中药制剂，如醒脑静、川芎嗪、复方丹参、银杏达莫、脉络宁等注射制剂相继在临床上使用，并获得好评。

含有荭草的组合物由荭草、三七、山楂叶、川芎四味药组成。方以荭草味辛，性凉，活血、散瘀、止痛为君药；辅以三七、山楂叶宣畅心阳，疏通心脉，蠲除瘀阻，散瘀止痛；川芎则辛散温通，为血中之气药，有通达气血之功，助气血运行，用之为佐使。全方以辛、甘为主，温、凉并行。辛能散瘀化滞，温可通行血脉、促进血行；甘缓温通，苦降下泄，散瘀和血，瘀散则血自归经，具有活血化瘀、通脉止痛功能。主要用于冠心病心绞痛心血瘀阻证，症见胸闷、胸部刺痛，固定不移，心悸不宁，唇舌暗紫，脉细涩等冠心病心绞痛见上述证候者，用药至今未见利用上述组合物对脑血管及相关疾病防治作用的临床药理研究方面的报道。

中国专利申请200610200023.2中提出的发明是含有荭草、三七、山楂叶和川芎的组合物制剂及其制备方法，主要用于治疗冠心病心绞痛的用途。但本申请人经过进一步的试验研究后，还意外地发现，上述含有荭草的组合物在治疗其他疾病方面也具有明显的治疗效果。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种含有荭草的组合物的第二医药用途，即其在制备治疗脑血管及相关疾病药物中的应用。

本发明所述的脑血管疾病具体包括中风、中风后遗症、局部缺血、再灌注损伤、血栓、血管收缩、梗塞和阿尔茨海默氏病；本发明所述的脑血管相关疾病包括各种原因引起的眩晕，如脑动脉供血不足、梅尼埃病、高血压脑病、冠心病、椎-基底动脉供血不足等造成的眩晕。

本发明提供了含有荭草的组合物在制备以下方面作用的药物中的应用：

(1)脑中风及后遗症；

(2)脑缺血、NMDA受体诱导脑神经细胞损伤；

(3)脑缺血/再灌注损伤；

(4)脑血栓、脑梗塞；

本发明提供了含有荭草的组合物在制备治疗阿尔茨海默氏病，改善大鼠记忆的药物中的应用。

本发明还提供了含有荭草的组合物在制备治疗各种原因引起的眩晕，如脑动脉供血不足、梅尼埃病、高血压脑病、冠心病、椎-基底动脉供血不足等造成的眩晕的药物中的应用。

本发明所述含有荭草的组合物是由中药原料荭草、三七、山楂叶和川芎合并后提取所得的提取物或分别提取后合并所得的提取物组成。

按照生药的重量配比：荭草1～10份、山楂叶1～10份、三七1～10份和川芎1～10份；优选的配比为：荭草5份、山楂叶4份、三七3份和川芎3份。

本发明的含有荭草的组合物，其中荭草具有散血、消积、止痛的功能，主要含黄酮类荭草素、荭草甙、叶绿醌等成分，可用于风湿性关节炎、心肌缺血、降血压、脚气疮肿的治疗，为主药；三七、山楂叶具有宣畅心阳，疏通心脉，蠲除瘀阻，散瘀止痛的功能，川芎具有散瘀化滞的功能，为辅药。

本发明提供的含有荭草的组合物中，其荭草、山楂叶、三七和川芎的有效成分提取物可以按照专利号为200610200023.2中的煎煮、醇沉、树脂分离以及超临界二氧化碳萃取的方法进行提取，也可以采用药材单独提取分离的方法进行提取，还可以用常规的方法进行提取。

本发明含有荭草的组合物可以根据需要加入一种或多种药学上可以接受的载体，如稀释剂、赋形剂、填充剂、崩解剂、湿润剂、粘合剂、表面活性剂、吸收促进剂、润滑剂等等，按照药学领域的常规方法，制备需要的剂型。

本发明所述含有荭草的组合物制成的制剂包括软胶囊剂、滴丸、丸剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液。优选为软胶囊剂。

本发明所述含有荭草的组合物制剂的有效剂量根据病人的情况而定，如：1.5-6g生药/kg体重/天，优选为3g生药/kg体重/天。

通过动物试验证实本发明含有荭草的组合物可以治疗脑血管病以及由脑部缺血等相关疾病引起的眩晕等，确切地说，本发明提供的含有荭草的组合物具有治疗脑中风、中风后遗症、局部缺血、出血、再灌注损伤、血栓、血管收缩、梗塞和阿尔茨海默氏病的作用，还具有治疗各种原因引起的眩晕，如脑动脉供血不足、梅尼埃病、高血压脑病、冠心病、椎-基底动脉供血不足等造成的眩晕的作用。

为了使本领域普通技术人员更好的理解本发明，以下通过实验及实施例来进一步阐述本发明荭叶心通制剂的组成、其制备方法及用途：

实验用药物：含有荭草的组合物制剂——荭叶心通软胶囊，是根据实施例1和2的方法制备的。

试验内容：

试验1  含有荭草的组合物对不完全性脑缺血的影响

1.1  实验材料

动物：Wistar大鼠，体重220-250g，贵阳中医学院实验动物中心提供。药物：荭叶心通软胶囊，按照实施例方法制得；血塞通注射液，昆明制药股份有限公司生产。

1.2  试验方法与结果

1.2.1  对血管通透性的影响

取40只健康大鼠，随机分为4组：空白对照组，缺血模型组，血塞通注射液57.0mg/kg剂量给药组，荭叶心通3g生药/kg剂量给药组，血塞通静脉给药，荭叶心通灌胃给药，每天一次，给药三天。末次给药前，先将动物腹腔注射水合氯醛300mg/kg麻醉，分离双侧颈总动脉，穿线以被结扎。药后15min于动物舌下静脉注射伊文思蓝50mg/kg，5min后结扎，逐层缝合皮肤。空白对照组只将颈总动脉分离后不结扎。4小时后处死大鼠，取同样重量脑组织，置于3ml0.5％Na₂SO₃生理盐水溶液—丙酮(3：7)溶液中，捣碎，充分浸泡24小时，离心，上清液于650nm处比色，计算其中伊文思蓝含量。结果见下表1：

表1  对不完全性脑缺血大鼠脑组织中伊文思蓝含量的影响(x±s)

 

组别	动物数(只)	伊文思蓝含量(mg)
			空白对照组	10	27.4±9.25
缺血模型组	10	29.7±4.71
			血塞通注射液组	10	23.2±5.06**
荭叶心通组	10	24.1±6.24**

由上表可知，荭叶心通组和血塞通注射液组可明显降低脑中伊文思蓝含量，且组间无显著差异，表明两者治疗效果相当。

1.2.2  对脑组织超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量的影响

同样取40只大鼠，随机分为4组：空白对照组，缺血模型组，血塞通注射液57.0mg/kg剂量给药组，荭叶心通3g生药/kg剂量给药组，血塞通静脉给药，荭叶心通灌胃给药，每天一次，给药三天。末次给药后15min，同样进行双侧颈总动脉结扎，造成大鼠不完全性脑缺血。4小时后断头处死大鼠，立即取脑，在4下匀浆、离心，提取SOD，并测定其活性；同时测定MDA含量。结果见下表2：

表2 对不完全性脑缺血大鼠脑组织中MDA含量及SOD活性的影响(x±s)

 

组别	动物数(只)	MDAnmol/g组织	SODU/g组织
				空白对照组	10	3.5±0.75	23.3±3.68
缺血模型组	10	6.4±1.63△	15.5±4.72△
				血塞通注射液组	10	3.1±0.88*	24.2±2.59*
荭叶心通组	10	2.8±1.17*	24.0±3.62*

由上表可知，大鼠脑缺血后，其中MDA含量明显升高，SOD活性显著降低，与空白对照组比P<0.01；而血塞通和荭叶心通组的动物脑组织中MDA含量明显较模型组降低，同时SOD活性明显升高。

试验2  含有荭草的组合物对局灶性脑缺血的影响

2.1  试验药物：荭叶心通软胶囊，按照实施例方法制得；血塞通胶囊，云南白药集团文山七花有限公司生产。

2.2  试验动物：Wistar大鼠，体重220-260g，贵阳中医学院实验动物中心提供。

2.3  试验方法：健康成年大鼠随机分为三组，每组10只，其中缺血对照组用生理盐水灌胃；荭叶心通组3g生药/kg剂量给药；血塞通组42.0mg/kg剂量给药。

动物模型的建立：采用两血管闭塞合并放血法，造成急性脑缺血。实验动物先麻醉后固定在手术台上。经颈正中切口，钝性分离两侧颈总动脉，丝线结扎悬挂30min，同时断尾放血0.8ml，然后松开丝带结扎线10min，再结扎两侧颈总动脉30min后松开。术后给予进食进水。

观测指标：(1)凝血系统凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶时间(APTT)、纤维蛋白原测定(FBG)。

(2)脑梗死面积的测定术后一定时间采血后处死，取一定量大鼠大脑，去掉小脑和脑干，冠状切为0.3cm的脑片，观察有无出血灶。将脑片浸入TTC中，恒温后甲醛固定，利用图像病理分析系统测定梗死面积。

病理学检测：脑片经染色后，在光镜下观察脑组织病理变化。

2.4  结果

(1)凝血纤溶系统的检测结果：如下表3

表3  凝血纤溶系统的检测结果(x±s)

结论：荭叶心通组和血塞通组给药后可以看到TT、APTT、FBG含量较对照组高，当双侧颈总动脉结扎造成前脑缺血性损伤后，可使TT、APTT延长，且FBG的降低与对照组相比均有显著差异性，但两治疗组相比无显著差异性。表明荭叶心通治疗作用与血塞通相当。

(2)大鼠局灶性脑缺血一定时间后脑梗死面积及药物的影响结果：如下表4

表4  脑梗死范围(x±s)

 

组别	例数	梗死面积/％
			荭叶心通组	10	5.85±1.71*
血塞通组	10	5.73±1.56*
			缺血对照组	10	11.08±2.19

注：治疗组与对照组比较*P<0.05

结论：两个治疗组的脑梗死面积明显低于对照组，且组间无显著差异性。证明荭叶心通能减少脑缺血动物的脑梗死面积。

(3)病理学改变：对照组光镜下观察，发现组织间隙增宽，水肿，有空泡形成，神经元细胞核缩小，甚至溶解消失。而治疗组可以看到组织间隙水肿较对照组轻，细胞间隙改变不明显，神经元细胞核大小基本正常，核较深染，病灶中心区有少许空泡形成。

试验3含有荭草的组合物对体内血小板血栓形成的影响

3.1试验药物：荭叶心通软胶囊，按照实施例方法制得。

3.2试验动物：Wistar大鼠，体重220-250g，贵阳中医学院实验动物中心提供。

3.3试验方法：将大鼠随机分为两组，每组10只，给予荭叶心通软胶囊3g生药/kg。最后一次给药1小时后麻醉，固定，分离气管插入气管导管，分离右颈总动脉和左颈外静脉。在聚乙烯管仲放入一根已称重的丝线，用含肝素的生理盐水充满聚乙烯管，将管的一端插入右颈总动脉，另一端插入左颈外静脉。打开血流15min后中断，取出丝线称重，计算血栓重量。

3.4试验结果：对照组血栓重37.5±7.34mg，荭叶心通治疗组血栓中21.2±6.63mg(P<0.05)。说明荭叶心通可抑制体内血栓的形成。

试验4 对大鼠局部脑缺血导致神经细胞损伤的影响

4.1实验材料

动物：雄性Wistar大鼠，体重260-330g，贵阳中医学院实验动物中心提供。

药物：荭叶心通软胶囊，按照实施例方法制得；红四氮唑：美国Sigma公司产品，临用前用生理盐水配成4％溶液。

4.2试验方法与结果

动物随机分为假手术组(等容量溶剂)，模型对照组(等容量溶剂)，尼莫地平组1.5mg/kg，荭叶心通6g生药/kg组，荭叶心通3g生药/kg组，荭叶心通1.5g生药/kg组，每组10只。禁食12小时后，水合氯醛(350mg/kg，静注)麻醉，分离右侧颈总动脉，夹闭颈内、颈总动脉，颈外动脉近心端及远心端结扎，中间剪断。将颈外动脉游离端拉至与颈内动脉成一条直线，将栓线由颈外动脉插入至颅内，遇轻微阻力时停止，插入深度约为2厘米。结扎颈外动脉开口，并打开颈总动脉动脉夹，消毒缝合伤口，造成左侧大脑动脉缺血模型；假手术组仅进行右侧颈总动脉、颈内动脉、颈外动脉的分离，术后各组动物静脉注射相应药物(给药体积1ml/200g)。

24小时后观察并记录大鼠行为障碍：(A)提鼠尾观察前肢屈曲情况，0分：双前肢对称伸向地面，1分：手术对侧前肢出现腕屈曲，2分：肘屈曲，3分：肩内旋，4分：腕屈曲和/或肘屈曲、肩内旋。(B)将动物置于平地上，分别推双肩向对侧移动，检查阻力。0分：双侧阻力对等且有力，如向手术对侧推动时，根据阻力下降程度不同分为轻、中、重度，计为1、2和3分。(C)将动物双前肢置一金属网上，观察双前肢的肌张力。0分：张力对等且有力，同样根据手术对侧肌张力下降程度不同计为1、2和3分。(D)动物有不停向一侧转圈者，计为1分。满分11分，分数越高，表示行为障碍越严重。

行为评分后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切为5片，脑片用红四氮唑(TTC)染色，正常组织经染色后呈红色，梗塞组织呈白色，求梗塞面积比，进行统计学处理。结果如下表5：

表5  荭叶心通对大鼠局部脑缺血损伤的影响(x±s)

与模型对照组比较**P<0.01；与60mg/kg组比较，△P<0.05，#P>0.05。

结果如上表所示，缺血24小时后，大鼠表现出明显的行为障碍，大鼠脑组织也明显出现灶状缺血区，达到全脑的25％左右；给予不同剂量的荭叶心通软胶囊，动物行为障碍不同程度的减轻，大脑缺血区也有明显好转。其50mg/kg作用强于30mg/kg(P<0.05)，但是与70mg/kg比较无明显差别(P>0.05)。提示当剂量再增加时，药效没有继续增加。

试验5 对N-甲基-D-门冬氨酸所致大鼠神经细胞损伤的保护作用

5.1  实验材料

动物：雄性SD大鼠，体重240-280g，贵阳医学院实验动物中心提供。

药物：荭叶心通软胶囊，按照实施例方法制得。

5.2  试验方法

5.2.1  神经细胞原代培养

怀孕15天大鼠水合氯醛麻醉，75％乙醇消毒胸腹，无菌条件下取出胎鼠，剥出后分离两侧皮层组织，用手术刀切成糜状，移入含0.125％胰蛋白酶的磷酸缓冲液中消化30min(37℃)后弃去消化液，加入含10％胎牛血清，10％马血清，100μ/ml青霉素，100μ/ml链霉素的DMED培养液，用小口径吸管反复吹打分散，200目细胞筛过滤后，以DMEM调整细胞浓度至10⁶个/ml，接种至预先涂有0.01％多赖聚氨酸的35mm培养皿中，每皿2ml，置CO₂培养箱中37℃孵育，于培养第3天在培养液中加入细胞分裂抑制剂阿糖胞普储备液(6mm/皿)以抑制非神经元细胞的过度增殖，左右48小时后换新鲜培养液，以后每周换液2次，每次半量。

5.2.2  NMDA诱导神经细胞损伤

细胞培养到14天后，随机分为正常对照组，NMDA50μ mol/L组，荭叶心通30μ mol/L、70μ mol/L组；各组换以含不同药物的低血清DMEM(5％胎牛血清，5％马血清，30mmol/LHEPES)继续培养6小时，再加50mmol/L NMDA，孵育12小时后观察细胞形态，计算细胞死亡率。进行统计学处理。

5.3  结果

5.3.1  对培养神经细胞形态变化的影响

正常对照组细胞生成良好，胞体呈锥形、梭形或三角形，突触粗而长，呈树根状交织成网；50μ mol/L NMDA组培养12小时后，细胞出现肿胀、轮廓模糊，神经元突触断裂、消失、甚至细胞崩解；荭叶心通组细胞损伤程度明显减轻，形态基本保持完整，但细胞密度有所降低，仍可见突触断裂等现象。表明荭草、山楂叶、三七和川芎的组合物对NMDA诱导的大鼠神经细胞损伤有较好的保护作用。

5.3.2  对培养细胞死亡率的影响

NMDA50μ mol/L组孵育12小时后，苔酚蓝染色着色细胞明显增多(NMDA组81％；正常对照组12％，P<0.001)，提示细胞死亡率增加；荭叶心通30μ mol/L、70μ mol/L组分别为44％、25％，可明显降低细胞死亡率，与NMDA 50μ mol/L组比较有显著差异。

试验6对大鼠脑缺血/再灌注导致神经细胞损伤的影响

6.1  实验材料

动物：雄性Wistar大鼠，体重280-350g，贵阳中医学院实验动物中心提供。

药物：荭叶心通软胶囊，按照实施例方法制得。

6.2  试验方法与结果

动物随机分为假手术组(等容量溶剂)，模型对照组(等容量溶剂)，尼莫地平组1.5mg/kg，荭叶心通6g生药/kg组，荭叶心通3g生药/kg组，荭叶心通1.5g生药/kg组，每组10只。禁食12小时后，按试验4方法造成左侧大脑中动脉缺血；术后10min各组动物静脉注射相应药物(给药体积1ml/200g)。缺血2小时后，抽出尼龙线，造成大鼠脑缺血/再灌注损伤，再灌24小时后处死大鼠，取脑，去掉嗅球、小脑和低位脑干，冠状切为5片，脑片置10％福尔马林中固定，经脱水、浸腊、包埋、切片等步骤后，制成8μm厚的组织切片，甲苯胺蓝染色，以相同切面的脑片半影区进行细胞计数，细胞核消失、细胞体暗染作为神经元坏死的指标，计算坏死神经元占总神经元数的百分比。结果如下：

表6  荭叶心通对局部脑缺血大鼠神经元坏死百分比的影响(x±s)

与模型对照组比较*P<0.05，**P<0.01；与60mg/kg组比较，△P<0.05，#P>0.05。

结果显示，模型对照组大鼠神经元周围间隙扩大，出现散在的暗染神经元，神经细胞出现不同程度的皱缩。给予荭叶心通组动物有不同程度的减轻，不同剂量荭叶心通治疗组皮层、纹状体神经元坏死百分比明显减少，与模型对照组比较差异显著。荭叶心通50mg/kg作用强于30mg/kg(P<0.05)，但是与70mg/kg比较无明显差别(P>0.05)。提示当剂量再增加时，药效没有继续增加。

试验7对眩晕患者的治疗作用

7.1入组与试验

71例病人随机分成2组，治疗组35例，其中脑动脉供血不足26例，梅尼埃病9例，合并高血压性脑病8例，冠心病3例，椎—基底动脉供血不足4例；对照组36例，其中脑动脉供血不足25例，梅尼埃病11例，合并高血压性脑病7例，冠心病6例，椎—基底动脉供血不足5例。治疗组给予荭叶心通软胶囊2粒口服，每日三次，连用3-7天。对照组给予利多卡因50mg静注，每日一次，连用3-7天。

疗效标准：

(1)显效：眩晕及伴随症状完全消失，观察12小时未复发。

(2)有效：眩晕及主要症状体征明显减轻。

(3)无效：症状无改善。

7.2  结果

治疗组总有效率85.7％，对照组为86.1％，差别无显著性，说明二者对治疗眩晕都有较好疗效，因此，荭草、山楂叶、三七和川芎组合物可以应用于脑动脉供血不足等引起的眩晕。

表7 治疗眩晕疗效比较

注：经X²检验，P>0.05

试验8  含有荭草的组合物对AD大鼠学习记忆的影响

8.1  材料和方法

8.1.1  动物及分组：雄性SD大鼠，体重160-220g，2月-3月大，贵阳医学院实验动物中心提供。随机分为A对照组、B模型组、C模型加荭叶心通1.5g生药/kg组、D模型加荭叶心通3g生药/kg组、E模型加荭叶心通6g生药/kg组。治疗组每天灌胃给予荭叶心通软胶囊，模型组和对照组大鼠为正常喂养，连续给药20d后测定学习记忆行为。

8.1.2  试剂及仪器：荭叶心通软胶囊，将按照实施例方法制备而成。鹅膏蕈氨酸(IBO)：瑞士Alexis公司生产，批号LO5308；大鼠脑立体定位仪(张家港市教学实验器械厂生产)；Y型迷宫、MG-3迷宫刺激器(张家港市教学实验器材厂)。

8.1.3  AD动物模型制备

大鼠用10％水合氯醛(0.4g/kg)腹腔麻醉后，固定于脑立体定位仪上。常规备皮消毒，于头顶正中做一个1.5cm的矢状切口，参照大鼠脑立体定位图谱，Meynert核定位坐标为(Ap：1.6mm Lat±2.8mm Dv.8.2mm)，于双侧颅骨各对应点分别钻一个直径1mm的孔洞，用玻璃微量进样器进行垂直注射。模型组和治疗组双侧Meynert核每侧一次性注射BO5μg(以1μl生理盐水溶解)。每针注射时间5min，留针10min，使BO充分扩散。对照组同样方法注入等容积的生理盐水。术后肌注青霉素预防感染。

8.1.4  跳台试验

自制跳台实验箱，箱底铺有铜栅作为刺激电极，箱内右后侧放置一个橡皮垫作为大鼠逃避电击的安全区。先放入大鼠适应5min，随后通入70V，0.5A～0.7A电流，大鼠遭到电击后正常反应是跳上平台以躲避伤害性刺激。记录大鼠从开始通电到完全上台所用的时间。24h后重测验一次以测记忆能力。

8.1.5  Y迷宫试验

将大鼠放入Y型迷宫中适应3min后开始实验，有灯光的支臂为不通电安全区，安全区灯亮10s后，另两臂底部铝栅同时通入70V，0.5A～0.7A电流，大鼠受电击后跑到有灯光的安全区后停止，灯光继续作用30s，以大鼠所在的支臂作为下一次测试的起点，无规则随机变换安全区。以大鼠一次性跑向安全区为正确反应，否则为错误反应。连续测试30次，记录正确反应次数作为学习成绩。次日重做进行记忆能力测试。

8.1.6  统计学处理

所有数据以(x±s)表示，以P<0.05为差异有统计学意义。

8.2  结果

各组大鼠跳台实验及迷宫实验学习、记忆能力的比较，见表8、表9。与对照组相比模型组学习记忆能力有显著性下降(P<0.01)，说明模型建立成功；各治疗组与模型组相比，学习能力均有显著性差异，说明治疗有效。

表8 跳台实验学习记忆能力的比较(x±s)

注：**P<0.01；*P<0.05

表9  迷宫实验学习记忆能力的比较(x±s)

注：**P<0.01；*P<0.05

8.3  结论

阿尔茨海默病(Alzheimer′s Disease，AD)在临床上首先表现为近期记忆力降低，继而呈现持续性智能衰退，其中认知功能障碍为其核心症状。通过回避性跳台和Y迷宫试验，观察荭叶心通软胶囊对BO损伤双侧NBM造成的拟AD大鼠学习记忆等认知功能的影响，结果表明荭草、山楂叶、三七和川芎的组合物可提高AD大鼠的学习记忆能力，改善血管性痴呆患者的智能障碍。

具体实施方式：

需要说明的是，本制备实施例仅仅是介绍一种制备提取物的方法，是为了阐释本发明，而不是限制本发明。

实施例1：

荭草5份、山楂叶4份、三七3份和川芎3份(份为重量份，以下实施例均为重量份)

荭草、山楂叶、三七加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.10，加乙醇使含醇量达65％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.07，加适量水稀释，上径高比1∶10的大孔吸附树脂柱，吸附流速2BV·h^-1，弃去穿透液，用1BV水洗，流速2BV·h^-1，弃去水洗液，继用3BV70％乙醇洗脱，流速2BV·h^-1，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，残留物进行微波真空干燥，粉碎成细粉，得荭草、山楂叶、三七提取混合物；

川芎药材粉碎成粉末，过3号筛，用超临界二氧化碳萃取，以压力为30MP、温度为50℃、流量为20L/h的条件萃取4h，解析压力10MP，温度40℃，收集，得川芎萃取物。

实施例2：

将实施例1得到的川芎萃取物加入荭草、山楂叶、三七提取混合物中，再加入适量含2％蜂蜡的大豆油，混合均匀，备用；以明胶∶甘油∶蒸馏水∶防腐剂(泥泊金甲酯)＝1∶0.4∶1∶0.002制备囊材，压制即得软胶囊剂。

实施例3：

荭草6份、山楂叶5份、三七4份和川芎3份

荭草、山楂叶加10倍量水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至相对密度1.10，加乙醇使含醇量达65％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇并浓缩至相对密度1.07，加适量水稀释，上径高比1∶10的大孔吸附树脂柱，吸附流速2BV·h^-1，弃去穿透液，用1BV水洗，流速2BV·h^-1，弃去水洗液，继用3BV70％乙醇洗脱，流速2BV·h^-1，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，残留物进行喷雾干燥，粉碎成细粉，得荭草、山楂叶提取物；

三七加10倍量水煎煮3次，每次2小时，滤过，合并滤液，减压浓缩至50℃相对密度1.10，加乙醇使含醇量达65％，搅拌均匀，静置12小时，抽滤，滤液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度1.07，加适量水稀释，上径高比1∶10的大孔吸附树脂柱，吸附流速2BV·h^-1，弃去穿透液，用1BV水洗，流速2BV·h^-1，弃去水洗液，继用3BV70％乙醇洗脱，流速2BV·h^-1，收集洗脱液，回收乙醇，浓缩成稠膏，残留物进行喷雾干燥，粉碎成细粉，得三七提取物；

川芎药材粉碎成粉末，过3号筛，用超临界二氧化碳萃取，以压力为30MP、温度为50℃、流量为20L/h的条件萃取4h，解析压力10MP，温度40℃，收集，得川芎萃取物。

实施例4：

将实施例3得到的川芎萃取物加入荭草、山楂叶提取物和三七提取物中，混合均匀，按药粉∶基质(聚乙二醇-6000和聚乙二醇-400)＝1∶2的比例投料，先将基质熔融后，加入药粉混匀，在75℃下保温，以40滴/分钟的速度滴入冷凝液(二甲基硅油)当中，冷凝成型，收集滴丸，用滤纸吸除冷凝液，即得滴丸剂。

实施例5：将实施例1得到的荭草、山楂叶、三七提取混合物和川芎萃取物混合，用制剂学常规技术制备成滴丸剂。

实施例6：将实施例3得到的川芎萃取物加入荭草、山楂叶提取物和三七提取物中，混合均匀，用制剂学常规技术制备成软胶囊剂。

实施例7：将实施例1或实施例3得到的荭草提取物、山楂叶提取物、三七提取物和川芎萃取物混合，用制剂学常规技术制备成口服液。

实施例8：将实施例1或实施例3得到的荭草提取物、山楂叶提取物、三七提取物和川芎萃取物混合，用制剂学常规技术制备成丸剂。

实施例9：将实施例1或实施例3得到的荭草提取物、山楂叶提取物、三七提取物和川芎萃取物混合，用制剂学常规技术制备成颗粒剂。

实施例10：将实施例1或实施例3得到的荭草提取物、山楂叶提取物、三七提取物和川芎萃取物混合，用制剂学常规技术制备成胶囊剂。

实施例11：将实施例1或实施例3得到的荭草提取物、山楂叶提取物、三七提取物和川芎萃取物混合，用制剂学常规技术制备成片剂。

Claims (9)

1.荭草、三七、山楂叶和川芎的组合物在制备以下方面作用的药物中的应用：

(1)脑中风及后遗症；

(2)脑缺血、NMDA受体诱导脑神经细胞损伤；

(3)脑缺血/再灌注损伤；

(4)脑血栓、脑梗塞；按重量份计算，所述中药原料为荭草1～10份、山楂叶1～10份、三七1～10份和川芎1～10份。

2.荭草、三七、山楂叶和川芎的组合物在制备治疗阿尔茨海默氏病、改善大鼠记忆的药物中的应用；按重量份计算，所述中药原料为荭草1～10份、山楂叶1～10份、三七1～10份和川芎1～10份。。

3.荭草、三七、山楂叶和川芎的组合物在制备治疗脑动脉供血不足、梅尼埃病、高血压脑病、冠心病、椎-基底动脉供血不足造成的眩晕的药物中的应用；按重量份计算，所述中药原料为荭草1～10份、山楂叶1～10份、三七1～10份和川芎1～10份。。

4.按照权利要求1-3任一所述荭草、三七、山楂叶和川芎的组合物在制备药物中的应用，其特征在于：所述组合物，按重量份计算，由中药原料荭草1～10份、山楂叶1～10份、三七1～10份和川芎1～10份合并后提取所得的提取物或分别提取后合并所得的提取物组成。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，生药的重量配比为：

荭草5份、山楂叶4份、三七3份和川芎3份。

6.按照权利要求1-3任一所述荭草、三七、山楂叶和川芎的组合物在制备药物中的应用，其特征在于：所述药物为丸剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液。

7.按照权利要求6所述荭草、三七、山楂叶和川芎的组合物在制备药物中的应用，其特征在于：所述胶囊剂为软胶囊剂。

8.按照权利要求1-3任一所述荭草、三七、山楂叶和川芎的组合物在制备药物中的应用，其特征在于：所述含有荭草的组合物制剂的有效剂量为1.5-6g生药/kg体重/天。

9.按照权利要求8所述荭草、三七、山楂叶和川芎的组合物在制备药物中的应用，其特征在于：有效剂量为3g生药/kg体重/天。