CN101732382A - 杏香兔耳风提取物的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明属于药品领域，具体涉及杏香兔耳风提取物的新用途。该新用途为杏香兔耳风提取物在制备治疗咽喉炎的药物中的用途，所述杏香兔耳风提取物是将杏香兔耳风加水煎煮后，煎液醇沉、过滤所得的滤液，该提取物对急、慢性咽喉炎有明确的治疗作用。
Description
技术领域
本发明属于药品领域，具体涉及杏香兔耳风提取物的新用途。
背景技术
杏香兔耳风是菊科兔耳风属植物Ainsliaea fragrans Champ.，以全草入药。夏秋采收，洗净，鲜用或晒干备用。清热解毒，消积散结，止咳，止血。用于上呼吸道感染，肺脓疡，肺结核咯血，黄疸，小儿疳积，消化不良，乳腺炎；外用治中耳炎，毒蛇咬伤。
中国专利申请CN1742767A(申请号200510023922.5)一种利用兔耳风治疗咽喉炎的新用途。该专利申请公开了兔耳风具有治疗咽喉炎的新用途，并公开了可利用兔耳风制成多种制剂，采用胃肠道给药、注射给药、呼吸道给药、皮肤给药、粘膜给药等多种给药方式给药。但专利文献中仅描述为将兔耳风的提取物或药材粉末制成相应的剂型。根据《中国药典》(2005年版)中明确规定：药材标准中未注明用法的，均是指水煎液，所以本领域技术人员认为该文献中所指提取物为水煎液，且该文献中未提供任何实验数据证明其确实具有治疗咽喉炎的作用。
由于不同的提取方法，不同提取部位得到的提取物成分不同，其药效也不相同，目前尚无相关报道显示兔耳风水提取物经过乙醇沉淀后的浸膏具有治疗咽喉炎的作用，更没有相关报道说明兔耳风水提物及经过乙醇沉淀后的浸膏是通过再生、修复咽喉被覆上皮细胞和抑制粘膜和血管上皮增生、炎细胞浸润、粘液性分泌物增多来达到治疗咽喉炎的目的。
发明内容
本发明所解决的技术问题是提供杏香兔耳风提取物的新用途。
具体地，是杏香兔耳风提取物在制备治疗咽喉炎的药物中的用途，其中，杏香兔耳风提取物是将杏香兔耳风加水煎煮后，煎液醇沉、过滤所得的滤液。
通过实验证明，上述杏香兔耳风的水煎醇沉液具有明确的治疗急、慢性咽喉炎的作用。
杏香兔耳风加水煎煮，煎液滤过后浓缩为相对密度为1.1～1.2(60℃)的清膏，冷却后，加入乙醇使含醇量达70％，静置，滤过，将沉淀用70％乙醇洗涤，合并洗液与滤液，回收乙醇，浓缩成稠膏即可。
为了便于患者服用，可将上述水煎醇沉液或稠膏加入药学上可接受的辅料，按照常规方法制备成的制剂。通过长期留样实验考察发现：水煎工艺制备成的液体和采用水提醇沉工艺制备的口服液放置相同时间后，前者析出大量的沉淀，不适合做成口服液；而后者沉淀很少或几乎没有沉淀，非常适合做成口服液。所以水煎醇沉后的滤液可制成口服液，既符合制剂要求又符合患者要求
发明人通过杏香兔耳风药材粉末、水煎液及水提醇沉后制备的杏香兔耳风口服液(以下简称杏香兔耳风口服液)三者对咽喉炎治疗作用的考察发现：杏香兔耳风水煎液和杏香兔耳风口服液可以明显促进氨水所致的急性咽炎大鼠咽喉被覆上皮细胞的再生、修复，减轻被覆上皮炎细胞浸润程度；对氨水和松节油制造家兔慢性咽炎模型的粘膜和血管上皮增生、炎细胞浸润、粘液性分泌物增多有明显的抑制作用；药材粉末效果不明显。
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
以下通过杏香兔耳风口服液对咽喉炎的治疗作用的临床前研究来说明本发明的有益效果。
杏香兔耳风口服液的制备方法：取杏香兔耳风加水煎煮三次，每次2小时，煎液滤过后浓缩为相对密度为1.1～1.2(60℃)的清膏，冷却后，加入乙醇使含醇量达70％，静置过夜，滤过，将沉淀用70％乙醇洗涤，合并洗液与滤液，回收乙醇，浓缩成稠膏，绸膏加入药学上可以接受的辅料，即得。
一、实验材料
1、受试药物
杏香兔耳风口服液(水提醇沉物)，深棕色，9.1g生药/g稠膏；由成都力思特制药股份有限公司提供。根据临床用量，临用前将杏香兔耳风口服液(稠膏)用蒸馏水配成2.4生药/ml、1.2生药/ml与0.6g生药/ml的药液供试验用。
2、对照药物
杏香兔耳风水提物，深棕色，5g生药/g清膏；杏香兔耳风生药粉末。由成都力思特制药股份有限公司提供。用蒸馏水配成1.2g生药/ml的药液供试验用。
3、试剂：氨水，分析纯，成都市科龙化工试剂厂生产；松节油：分析纯，天津塘沽鹏达化工厂生产。
4、试验动物：SD大鼠，成都中医药大学实验动物研究中心提供。日本大耳白兔，四川省实验动物专委会养殖场提供。
5、仪器
(1)Sartorius电子分析天平，西德，d＝0.01mg。
(2)T-1000型电子天平，d＝0.1g，美国双杰兄弟(集团)有限公司。
(3)喉头喷雾器，上海市嘉定区医疗设备厂生产，沪药器械监(准)字(91)第205149号。
(4)CC-180型电子血球计数仪(日本制造)、光学显微镜(Olympus BX50)、JY601型电子天平(上海良平仪器仪表有限公司)。
(5)自制家兔开口器、导尿管、扁桃体注射针等。
二、杏香兔耳风对大鼠急性咽炎模型的影响
1、方法
大鼠70只，雌雄各半，体重200-240g，按性别体重随机分为7组，每组10只(雌雄各半)。除正常对照组外，其余各组动物于第1～3天上、下午分别用粗约2mm镀锌铁丝自制的蝶形开口器撑开口腔并压住舌头，充分暴露咽部，以盛有25％氨水溶液的喉头喷雾器喷嘴对准咽部方向喷3揿。第4天起各组动物按表1所列剂量灌胃给药(杏香兔耳风口服液24.0、12.0、6.0g生药/kg分别为拟用于临床一日量的24、12、6倍；杏香兔耳风水提物12.0g生药/kg相当临床成人用剂量的12倍)；杏香兔耳风生药粉末12.0g生药/kg相当临床成人用剂量的12倍)。灌胃容量均为1ml/100g，正常对照组、模型组灌胃等容量的蒸馏水，每天给药1次，连续给药7天。末次给药后45分钟，股动脉放血处死动物后立即取下咽部组织于FAA液中固定，进行病理组织学检查。结果采用SPSS11.0软件统计，计量资料用One-Way ANOVA检验，等级资料用Nonparametric Tests检验。
2、结果
显微镜下可见各组大鼠咽喉部被覆上皮部分是鳞状上皮、部分是假复层纤毛状上皮。正常对照组大鼠咽喉部被覆上皮层次清晰、排列有序，上皮细胞无变性、坏死及炎细胞浸润，基底膜清楚。模型组大鼠咽喉部被覆上皮有不同程度的排列紊乱，部分大鼠上皮细胞有明显的变性、坏死脱落伴明显的中性白细胞浸润，基底膜也不完整，部分大鼠上皮细胞变性、坏死程度较轻，中性白细胞浸润也较少，基底膜完整。杏香兔耳风口服液高、中、低剂量组和杏香兔耳风水提物组大鼠被覆上皮排列较整齐，高剂量组有2只、中、低剂量组和水提物组各有1只大鼠咽喉被覆上皮细胞无变性、坏死及中性白细胞浸润，其余大鼠咽喉被覆上皮细胞变性、坏死及中性白细胞浸润比模型组有不同程度减轻，结果见表1、2。
表1 杏香兔耳风口服液对急性咽炎模型大鼠咽喉被覆上皮细胞变性、坏死及中性白细胞浸润的影响
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
由表1结果可见，杏香兔耳风口服液高、中、低剂量组、杏香兔耳风水提物组对急性咽炎模型大鼠咽喉被覆上皮细胞变性、坏死及中性白细胞浸润程度与模型组比较有明显减轻(与模型组比较P＜0.05)，杏香兔耳风生药粉末对急性咽炎模型大鼠被覆上皮细胞变性、坏死及中性白细胞浸润程度与模型组比较无明显差异。
表2杏香兔耳风口服液对急性咽炎模型大鼠咽喉被覆上皮炎细胞积分光密度的影响
| 组别 | 剂量(生药/kg) | 动物数(只) | 炎细胞积分光密度(×106) |
| 模型组 | - | 10 | 9.46±4.27 |
| 杏香兔耳风口服液 | 24.0 | 10 | 3.74±2.69** |
| 杏香兔耳风口服液 | 12.0 | 10 | 5.94±2.74* |
| 杏香兔耳风口服液 | 6.0 | 10 | 5.96±2.37* |
| 杏香兔耳风水煎液 | 12.0 | 10 | 5.87±2.83* |
| 杏香兔耳风生药粉末 | 12.0 | 10 | 8.55±3.78 |
与模型组比较：*P＜0.05，**P＜0.01
由表2结果可见，杏香兔耳风口服液高、中、低剂量组、杏香兔耳风水提物组对急性咽炎模型大鼠咽喉被覆上皮炎细胞积分光密度有明显降低作用(与对模型组比较P＜0.01，P＜0.05)。杏香兔耳风生药粉末与模型组比较无明显差异。
3、结论
24.0、12.0、6.0g生药/kg的杏香兔耳风口服液和12.0g生药/kg的杏香兔耳风水提物灌胃给药，可以明显促进氨水所致的急性咽炎大鼠咽喉被覆上皮细胞的再生、修复，减轻被覆上皮炎细胞浸润程度，对该模型具有明显治疗作用。
三、杏香兔耳风对兔慢性咽炎模型的影响
将80只家兔随机分为空白对照组、模型对照组、造模后自然恢复组(下简称自然恢复组)、杏香兔耳风口服液低剂量组(3.0g生药/kg)、杏香兔耳风口服液中剂量组(6.0g生药/kg)、杏香兔耳风口服液高剂量组(12.0g生药/kg)、杏香兔耳风水提物组(6.0g生药/kg)和杏香兔耳风生药粉末组(6.0g生药/kg)共8组，各组均为10只家兔。杏香兔耳风口服液用蒸馏水配制成4.0、2.0、1.0 g生药/ml的药液，杏香兔耳风水提物和生药生药粉末用蒸馏水配制成2.0g生药/ml的药液供试验用。具体操作如下：
1、空白对照组
10只家兔。第1～15天咽部喷蒸馏水，第8日咽部不注射松节油。第16～25日灌胃与供试药等量的温开水，第16、26日取耳缘静脉血涂片；第26日股动脉放血处死后立即取下咽部粘膜及其下组织作切片以供观察。
2、模型对照组
10只家兔。第1～15天上、下午各用2.5％氨水喷其咽部1次，每次用喷雾器喷3揿。第8日，用扁桃体注射针将0.5ml松节油注射于家兔咽部粘膜下。第16日取耳缘静脉血涂片，股动脉放血处死动物后立即取下咽部粘膜及其下组织作切片以供观察。
3、自然恢复组
10只家兔。第1～15天咽部喷氨水及松节油注射同模型对照组。第16～25日让其自然恢复。第16、26日取耳缘静脉血涂片；第26日股动脉放血处死后立即取下咽部粘膜及其下组织作切片以供观察。
4、供试品组
分为杏香兔耳风口服液低、中、高3个剂量组，每组10只家兔。第1～15天咽部喷氨水及松节油注射同模型对照组。第16～25日给家兔按3ml/kg灌胃给予相应次数的杏香兔耳风口服液。第16、26日取耳缘静脉血涂片；第26日股动脉放血处死后立即取下咽部粘膜及其下组织作切片以供观察。
5、对照药物组
分为杏香兔耳风水提物组和杏香兔耳风生药粉末组，处理方法同供试品组。
6、观察指标
6.1一般情况
实验每天观察记录各组家兔外观状态、体重、活动度，每两天观察一次家兔咽部情况(包括粘膜形态、色泽及分泌物等)。
结果：模型组和杏香兔耳风生药粉末组家兔出现抓搔口腔且分泌物增多，饮水次数增加但量不多，咽部充血呈暗红色、微肿胀等症状。空白对照组、杏香兔耳风口服液三个剂量组、杏香兔耳风水提物组的家兔的上述症状不明显或减轻。
各组之间以及造模前后，家兔的体重没有明显差异。
6.2血液学
各组家兔在规定时间内以耳缘静脉血涂片测定血液学。
结果：与空白对照组比较，模型对照组以及各用药组的红细胞、白细胞及其各类细胞均没有明显的变化(P＞0.05)。结果见表3和表4氨水和松节油致家兔慢性咽炎模型血液学(
n＝10)。
与自然恢复组比较，各组的红细胞、白细胞及其各类细胞均没有明显的变化(P＞0.05)。结果见表表5和表6对氨水和松节油致家兔慢性咽炎模型血液学的影响(
n＝10)。
表3氨水和松节油致家兔慢性咽炎模型血液学的变化(
n＝10)
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(g/kg·d) | 红细胞(×1012/L) | 白细胞总数(×109/L) |
| 空白对照组 | 10 | -- | 7.20±0.54 | 8.54±3.12 |
| 模型对照组 | 10 | -- | 7.17±2.05 | 9.04±5.32 |
| 自然恢复组 | 10 | -- | 7.48±1.45 | 9.24±2.15 |
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(g/kg·d) | 红细胞(×1012/L) | 白细胞总数(×109/L) |
| 低剂量组 | 10 | 3.0 | 7.78±1.57 | 8.79±4.21 |
| 中剂量组 | 10 | 6.0 | 7.24±1.75 | 9.29±3.47 |
| 高剂量组 | 10 | 12.0 | 7.20±3.14 | 9.14±4.27 |
| 水提物组 | 10 | 6.0 | 7.35±2.20 | 9.28±4.53 |
| 生药粉末组 | 10 | 6.0 | 7.47±1.56 | 9.17±4.02 |
表5杏香兔耳风口服液对氨水和松节油致家兔慢性咽炎模型血液学的影响(
n＝10)
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(g/kg·d) | 红细胞(×1012/L) | 白细胞总数(×109/L) |
| 空白对照组 | 10 | -- | 7.18±0.58 | 8.53±2.02 |
| 自然恢复组 | 10 | -- | 7.19±2.17 | 9.59±5.72 |
| 低剂量组 | 10 | 3.0 | 7.04±0.74 | 8.73±2.73 |
| 组别 | 动物数(只) | 剂量(g/kg·d) | 红细胞(×1012/L) | 白细胞总数(×109/L) |
| 中剂量组 | 10 | 6.0 | 7.89±1.70 | 8.68±3.28 |
| 高剂量组 | 10 | 12.0 | 7.51±1.81 | 9.98±2.33 |
| 水提物组 | 10 | 6.0 | 7.22±1.60 | 9.38±5.25 |
| 生药粉末组 | 10 | 6.0 | 7.07±1.23 | 9.98±4.45 |
6.3病理形态学
将家兔咽部粘膜及其下组织切片作病理形态学观察。
结果：与空白对照组比较，模型组家兔咽部呈慢性充血状态，暗红色，光泽度欠佳，粘液性分泌物增多。粘膜上皮呈钉突状增生，固有膜不同程度肿胀，血管增生、数量增多，可见明显炎细胞浸润，以淋巴细胞和单核细胞为主，粘膜下层淋巴细胞、组织细胞和纤维母细胞增生，浆液腺粘液化等改变，与空白对照组比较有统计学意义(P＜0.05)。
与自然恢复组比较，杏香兔耳风口服液高、中、低剂量组、杏香兔耳风水提物组对粘膜和血管上皮增生、炎细胞浸润、粘液性分泌物增多有明显的抑制作用(P＜0.05)，杏香兔耳风生药粉末与自然恢复组比较无明显差异。结果见表7。
表7对氨水和松节油致家兔慢性咽炎模型咽部病理形态学的影响(只，n＝10)
与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与自然恢复组比较，▲P＜0.05。
结论：采用氨水和松节油制造家兔慢性咽炎模型，再用杏香兔耳风口服液(剂量为3.0g/kg·d～12.0g/kg·d)、杏香兔耳风水提物、杏香兔耳风生药粉末灌胃给药10天，结果表明：上述药物对红细胞、白细胞及其各类细胞均没有明显影响，但杏香兔耳风口服液、杏香兔耳风水提物对粘膜和血管上皮增生、炎细胞浸润、粘液性分泌物增多有明显的抑制作用，杏香兔耳风生药粉末对粘膜和血管上皮增生、炎细胞浸润、粘液性分泌物抑制作用不明显。
四、体外抑菌作用
取琼脂培养基皿，用L型玻璃棒将大肠杆菌(1x107CFU)、金黄色葡萄球菌(1x107CFU)分别均匀涂抹在整个平皿，再将平皿分成四个区域，用打孔器(直径6mm)在每个区域中心打一小孔，孔内分别加入待试药液0.1ml后，置37℃恒温培养箱内培养24h。同法将稀释过的青霉素钠药液加入对照培养基皿，置37℃恒温培养箱内培养20h，测定结果见表8。
表8杏香兔耳风抑菌圈测定(mm)
| 药物 | 杏香兔耳风口服液低剂量组 | 杏香兔耳风口服液中剂量组 | 杏香兔耳风口服液高剂量组 | 杏香兔耳风水提物组 | 青霉素钠组 |
| 金黄色葡萄球菌 | 18 | 19 | 22 | 19 | 51 |
| 药物 | 杏香兔耳风口服液低剂量组 | 杏香兔耳风口服液中剂量组 | 杏香兔耳风口服液高剂量组 | 杏香兔耳风水提物组 | 青霉素钠组 |
| 大肠杆菌 | 7 | 9 | 9 | 8 | 11 |
结果表明：杏香兔耳风口服液低、中、高剂量组和杏香兔耳风水提物组均有不同程度的抑菌作用，且对金黄色葡萄球菌的作用强于大肠杆菌。
Claims (10)
1.杏香兔耳风提取物在制备治疗咽喉炎的药物中的用途，其特征在于：所述杏香兔耳风提取物是将杏香兔耳风加水煎煮后，煎液醇沉、过滤所得的滤液。
2.根据权利要求1所述的杏香兔耳风提取物在制备治疗咽喉炎的药物中的用途，其特征在于：所述杏香兔耳风加水煎煮的条件为加水煎煮三次，每次2小时。
3.根据权利要求1或2所述的杏香兔耳风提取物在制备治疗咽喉炎的药物中的用途，其特征在于：将杏香兔耳风提取物加入药学上可接受的辅料，按照常规方法制备成的制剂。
4.根据权利要求3所述的杏香兔耳风提取物在制备治疗咽喉炎的药物中的用途，其特征在于：所述制剂为口服液。
5.根据权利要求1或2所述的杏香兔耳风提取物在制备治疗咽喉炎的药物中的用途，其特征在于：将所述煎液浓缩为60℃时，相对密度为1.1～1.2的清膏，冷却后，加入乙醇使含醇量达70％，静置，滤过，将沉淀用70％乙醇洗涤，合并洗液与滤液，回收乙醇，浓缩成稠膏即可。
6.根据权利要求1所述的兔耳风提取物在制备治疗咽喉炎的药物中的用途，其特征在于：所述咽喉炎为急性咽喉炎或慢性咽喉炎。
7.杏香兔耳风提取物在制备用于再生、修复咽喉被覆上皮细胞的药物中的用途，其特征在于：所述杏香兔耳风提取物是将杏香兔耳风加水煎煮，即得煎液。
8.根据权利要求7所述的杏香兔耳风提取物在制备用于再生、修复咽喉被覆上皮细胞的药物中的用途，其特征在于：所述杏香兔耳风提取物是将杏香兔耳风加水煎煮后，煎液醇沉、过滤所得的滤液。
9.杏香兔耳风提取物在制备用于抑制粘膜和血管上皮增生、炎细胞浸润、粘液性分泌物增多的药物中的用途，其特征在于：所述杏香兔耳风提取物是将杏香兔耳风加水煎煮，即得煎液。
10.根据权利要求9所述的杏香兔耳风提取物在制备用于抑制粘膜和血管上皮增生、炎细胞浸润、粘液性分泌物增多的药物中的用途，其特征在于：所述杏香兔耳风提取物是将杏香兔耳风加水煎煮后，煎液醇沉、过滤所得的滤液。
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