CN102743469B - 牛白藤治疗疾病的新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了牛白藤Hedyotishedyotidea(DC.)Merr.治疗造血系统肿瘤白血病、淋巴瘤、呼吸系统肿瘤肺癌、鼻咽癌、消化系统肿瘤食道癌、胃癌、肠癌、肝癌、神经系统肿瘤脑癌、泌尿系统肿瘤肾癌、生殖系统肿瘤卵巢癌的新用途。以牛白藤为原料，组合药用辅料，制备成临床应用的煎液、汤剂、针剂、片剂、胶囊、控释药丸多种剂型的药剂。
Description
技术领域
本发明属于制药领域，特别涉及牛白藤用于制备杀灭肿瘤细胞药物的应用。
背景技术
牛白藤Hedyotis hedyotidea(DC.)Merr.属茜草科耳草属植物。在我国主要分布在广东、广西、云南、贵州、福建和台湾，生于海拔60～700m的低海拔至中海拔沟谷灌丛或丘陵坡地。牛白藤民间又名广花耳草、土五加皮、涂藤头、土藤头、土加藤、狗头藤、杜藤、大叶亚婆巢、牛奶藤、毛鸡屎藤、白花鸡屎藤、甜茶、脓见消、排骨连、接骨丹、大叶龙胆草、甜白碎玉、大叶鲫鱼、滇一匹绸，一匹绸、个吉芸、东京银背藤、癍痧藤。牛白藤作为民间习用药材,以全草入药,味微甘、性凉,可以治疗中暑高热、肺炎、感冒咳嗽、乳腺炎、湿热泄泻、痔疮出血、痈疮肿毒、皮肤湿疹、带状疱疹。
以上说明牛白藤是已经在临床使用的药物，无毒，但还未见治疗肿瘤的报告。本发明人在抗肿瘤中药研究和实验过程中发现了牛白藤对肿瘤的治疗效用。
发明内容
本发明的目的是提供牛白藤在制备用于杀灭肿瘤细胞药物的用途。
本发明的目的是这样实现的：牛白藤在制备杀灭白血病K562细胞、 HL-60细胞、淋巴瘤U937细胞、肺癌A549细胞、鼻咽癌CNE细胞、食管癌EC109细胞、胃癌SCG7901细胞、肠癌HT29细胞、肝癌HepG2细胞、脑癌U87细胞、肾癌786-0细胞、卵巢癌HO8910细胞药物中的应用。
本发明用于杀灭肿瘤细胞是指以牛白藤为原料，组合临床药用辅料，制备成临床应用的煎液、汤剂、针剂、片剂、胶囊、控释药丸剂型的药剂。
本发明牛白藤与六角英、粉藤头、鼠乳根按各一份质量份的比例组成的制剂用于杀灭白血病K562细胞、HL-60细胞、淋巴瘤U937细胞、肺癌A549细胞、鼻咽癌CNE细胞、食管癌EC109细胞、胃癌SCG7901细胞、肠癌HT29细胞、肝癌HepG2细胞、脑癌U87细胞、肾癌786-0细胞、卵巢癌HO8910细胞。
本发明的有益效果：发明人以已用于临床治疗造血系统肿瘤白血病、淋巴瘤、呼吸系统肿瘤肺癌、鼻咽癌、消化系统肿瘤食道癌、胃癌、肠癌、肝癌、神经系统肿瘤脑癌、泌尿系统肿瘤肾癌、生殖系统肿瘤卵巢癌用途的中草药白花蛇舌草和苦参为对照进行实验比较，结果发现牛白藤药效作用与白花蛇舌草一致，优于苦参。
附图说明
图1为苦参作用K562、U937细胞；
图2为白花蛇舌草作用K562、U937细胞；
图3为牛白藤作用K562、U937细胞。
具体实施方式
实施例
为了直观显示药物对肿瘤细胞杀伤致死的效果，以药物作用白血病K562细胞和淋巴瘤U937细胞72小时为例，在显微镜下观察结果并用照 片形式给予展示。牛白藤作用效果同白花蛇舌草类似，10mg/mL牛白藤作用人白血病K562细胞或淋巴瘤U937细胞即可引起细胞形态学改变，20mg/mL时已导致细胞死亡。苦参10mg/mL作用细胞后无明显变化，20mg/mL致细胞数明显减少，部分细胞死亡。结果显示牛白藤具有明显杀伤肿瘤细胞的药效作用。
实施例
牛白藤药剂的制备
1，取牛白藤10g生药粉碎，加10倍注射用水（100ml）浸泡2小时，95-100℃煎煮二次，合并煎液浓缩至100ml，中速滤纸减压过滤，加活性碳0.5克，加热微沸20分钟，放冷，滤过。再次减压浓缩药液至8ml，用20％氢氧化钠调pH值为7.0，加注射用水至10ml，0.2μ超微滤膜滤过，2ml/支灌封、灭菌。按规定做热原检查，检查结果符合要求。
2，取牛白藤10g生药清水洗净粉碎，加10倍70-95%乙醇浸泡24小时，回流3次，过滤药渣备用。合并醇提取液，减压浓缩，喷雾干燥。将喷雾干燥的药粉用8ml注射用水溶解，加活性碳0.2克，加热微沸20分钟，放冷，0.2μ超微滤膜滤过，补足注射用水至10ml，2ml/支灌封、灭菌。按规定做热原检查，检查结果符合要求。
3，取10倍乙酸乙酯分10次提取药渣，合并乙酸乙酯提取液过滤浓缩，喷雾干燥。药渣保留备用。将喷雾干燥的药粉用8ml注射用水溶解，加活性碳0.2克，加热微沸20分钟，放冷，0.2μ超微滤膜滤过，补足注射用水至10ml，2ml/支灌封、灭菌。按规定做热原检查，检查结果符合要求。
在药渣中继续加10倍注射用水，浸泡2小时，95-100℃煎煮二次，合并煎液浓缩至100ml，中速滤纸减压过滤，喷雾干燥。将喷雾干燥的药粉用8ml注射用水溶解，加活性碳0.2克，加热微沸20分钟，放冷，0.2μ超微滤膜滤过，补足注射用水至10ml，2ml/支灌封、灭菌。按规定做热原检查，检查结果符合要求。
或将上述三次喷雾干燥的药粉混合，用8ml注射用水溶解，加活性碳0.2克，加热微沸20分钟，放冷，0.2μ超微滤膜滤过，补足注射用水至10ml，2ml/支灌封、灭菌。按规定做热原检查，检查结果符合要求。
4，取牛白藤10g生药清水洗净粉碎，加药用辅料混合，压制成片剂，每片含牛白藤50毫克。
5，取牛白藤10g生药清水洗净粉碎，加药用辅料混合，装入胶囊，每胶囊含牛白藤50毫克。
6，取牛白藤10g生药加10倍蒸馏水（100ml），浸泡2小时，95-100℃水煎1小时,倒至烧杯，再加100ml水，95-100℃水煎1小时，收集两次至烧杯，作为水煎液供服用。
牛白藤对肿瘤细胞系药效作用（以常用的药效报道方法中药水煎液为例，抗肿瘤中药白花蛇舌草或苦参水煎液为阳性对照药物）：
分别取常规培养的对数生长期的上述肿瘤细胞，稀释为0.5-2×105/ml，置于96孔板中，100μL/孔。将牛白藤制剂稀释成实验浓度，分别加入细胞中，每一实验组设置3个重复孔，阴性空白对照孔不加药物，阳性药物对照孔为与牛白藤同等浓度的白花蛇舌草或苦参水煎液，作用72小时，在倒置显微镜下观察杀伤肿瘤细胞的药效效果。并在室温避光下每孔于加入 10μl MTT（-20℃保存的5mg/ml MTT溶液），混匀，放置细胞培养箱4小时。在96孔板孔中加入100μl由SDS、异丙醇和盐酸配制的三联试剂，37℃过夜。利用酶标仪570nm检测各孔OD值，计算致死率（致死率=加药组OD值/阴性空白对照组OD值），获取致死率为50%的药物浓度，即半数致死率LD50。半数致死率LD50表示药物杀死肿瘤细胞50%的药物浓度，可反映药物治疗的效果。
一、牛白藤对肿瘤细胞杀伤致死的形态学改变（以白血病K562细胞和淋巴瘤U937细胞为例）：
如图所示，同白花蛇舌草类似，10mg/mL牛白藤作用人白血病K562细胞即可引起细胞形态学改变，20mg/mL时已导致所有细胞死亡。苦参10mg/mL作用细胞后无明显变化，20mg/mL致细胞数明显减少，部分细胞死亡。结果显示具有明显杀伤肿瘤细胞的药效作用。
二.牛白藤对肿瘤细胞杀伤致死作用：
同细胞形态学改变一致，作用K562细胞72小时后，牛白藤对K562细胞的半数致死率LD50为4.3±0.56mg/ml，白花蛇舌草为3.7±0.38mg/ml，二者较接近，苦参大于10mg/ml。
三者对HL-60细胞的半数致死率LD50分别为牛白藤3.46±0.48mg/ml，白花蛇舌草为2.46±0.52mg/ml，苦参为6.1±0.31mg/ml。
三者对U937细胞的半数致死率LD50分别为牛白藤1.86±0.65mg/ml，白花蛇舌草为1.97±0.43mg/ml，苦参为5.6±0.41mg/ml。
牛白藤对A549肺癌细胞、CNE鼻咽癌细胞、EC109食管癌细胞、SCG7901胃癌细胞、HT29肠癌细胞、HepG2肝癌细胞、U87脑癌细胞、786-0肾癌细胞、HO8910卵巢癌细胞的半数致死率LD50范围在5-30mg/ml。
实验还发现牛白藤与六角英、粉藤头、鼠乳根中草药按1：1：1组成的药方用于治疗白血病、淋巴瘤；肺癌、鼻咽癌、食道癌、胃癌、肠癌、肝癌、脑癌、肾癌、卵巢癌症同样有效。
LD50表示肿瘤细胞被杀死50%所需要的药物浓度，所需药物浓度越低说明药物治疗肿瘤的效果越好。
给药方式
取牛白藤10g生药加10倍蒸馏水（100ml），浸泡2小时，95-100℃水煎1小时,倒至烧杯，再加100ml水，95-100℃水煎1小时，收集两次至烧杯，作为水煎液供服用。
取牛白藤10g生药清水洗净粉碎，加药用辅料混合，压制成片剂，每片含牛白藤50毫克。
取牛白藤10g生药清水洗净粉碎，加药用辅料混合，装入胶囊，每胶囊含牛白藤50毫克。
本发明用途是可以杀伤人的肿瘤细胞和诱导凋亡，达到治疗目的。我们选择以下均从人建立的肿瘤细胞系为实验模型进行了药效观察，白血病K562细胞、HL-60细胞、淋巴瘤U937细胞、肺癌A549细胞、鼻咽癌CNE细胞、食管癌EC109细胞、胃癌SCG7901细胞、肠癌HT29细胞、肝癌HepG2细胞、脑癌U87细胞、肾癌786-0细胞、卵巢癌HO8910细胞。以抗肿瘤中草药物白花蛇舌草和苦参为对照进行实验比较。
Claims (3)
1.牛白藤在制备杀灭白血病K562细胞、HL-60细胞、淋巴瘤U937细胞、肺癌A549细胞、鼻咽癌CNE细胞、食管癌EC109细胞、胃癌SCG7901细胞、肠癌HT29细胞、肝癌HepG2细胞、脑癌U87细胞、肾癌786-0细胞、卵巢癌HO8910细胞药物中的应用。
2.根据权利要求1所述的应用，用于杀灭肿瘤细胞的药物是指以牛白藤为原料，组合临床药用辅料，制备成临床应用的煎液、汤剂、针剂、片剂、胶囊、控释药丸剂型的药剂。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于牛白藤与六角英、粉藤头、鼠乳根按各一份质量份的比例组成的制剂用于杀灭白血病K562细胞、HL-60细胞、淋巴瘤U937细胞、肺癌A549细胞、鼻咽癌CNE细胞、食管癌EC109细胞、胃癌SCG7901细胞、肠癌HT29细胞、肝癌HepG2细胞、脑癌U87细胞、肾癌786-0细胞、卵巢癌HO8910细胞。
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