CN101731101A - 一种利用高产富硒杂交红米发酵废糟培养桑黄的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及高产富硒杂交红米611A/R319发酵后的废糟培养桑黄的方法。高产富硒杂交红米611A/R319是四川大学与四川农业大学水稻研究所共同研究的高产杂交富硒红米，该杂交稻富含硒、锗等有益微量元素；该杂交红米加工成红米酿后会产生发酵废糟，发酵废糟中仍含有较高含量的未被微生物转化的微量元素以及糖类和蛋白质，所以可通过培养桑黄菌丝体得到营养丰富的菌丝体混合液。本发明主要包括菌种的培养、液体种子培养、深层液体发酵培养、固体发酵物收集、干燥、粉碎。用本发明方法培养桑黄，其产量高，且生长速度快。该菌丝体粉也可以作为一种食品添加剂，与适当的食品配比，制成功能型食品。
Description
一、技术领域
一种利用高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟培养桑黄的方法，属于生物工程技术领域。涉及发酵法培养桑黄菌丝体，是将桑黄子实体接种至新鲜的固体斜面上进行培养，待斜面长好后接种至含较低浓度的高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟的液体培养基中进行种子的培养，即对菌种加以驯化；再接入添加了足量高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟的液体培养基中进行深层液体发酵培养。高产富硒杂交红米611A/R319是四川大学与四川农业大学水稻研究所共同研究的高产杂交富硒红米，该杂交稻富含硒、锗等有益微量元素；该杂交红米加工成红米酿后会产生发酵废糟，发酵废糟中仍含有较高含量的未被微生物转化的微量元素以及糖类和蛋白质，所以可通过培养桑黄菌丝体得到营养丰富的菌丝体混合液。发酵结束后，通过对混合发酵液进行过滤、烘干、粉碎，得到营养物质含量丰富的桑黄菌丝体粉。
二、背景技术
桑黄(Phellinus igniarius)是我国珍稀的一种天然药物，属担子菌纲，多孔菌目，多孔菌科。子实体无柄，菌盖扁半球形或马蹄形，木质，浅肝褐色至暗灰色或黑色。味微苦，性寒。《本草纲目》记载桑黄能“利五脏，宣肠胃气，排毒气”；现代研究证实桑黄具有很高的药用价值，可以强化免疫力，诱导癌细胞自行死亡，抑制癌细胞的转移，减轻化疗和放疗的副作用，预防和避免癌症的复发；还具有护肝作用；通过降低和调整血糖浓度，有效预防及改善糖尿病；降低血脂，防止动脉硬化，防止心脑血管病的发生；预防和治疗类风湿性关节炎；桑黄提取物能够完全抑制尿酸，对通风有良好的效果；抗过敏，对过敏性鼻炎，久治不愈的湿疹疗效很好。
富硒红米，是在水稻生长发育过程中通过以微量元素富积技术为核心而培育出的具有高含量的微量元素营养功能稻米，以其果皮具有红色色素沉淀而得名。高产富硒杂交红米611A/R319是四川大学与四川农业大学水稻研究所共同研究的高产杂交红米，该杂交红米同普通红米一样，含有众多对人体健康有益的活性功能单元，如花青素、黄酮、生物碱、甾醇、强心甙等，在抗炎、抗过敏、改变体内酶活性、改善微循环、增加冠状动物血流量、提高机体免疫功能、抗氧化和延缓衰老等方面意义重大。此外，还含有较高的蛋白质和硒、铁、锌等微量元素。经检测，高产富硒杂交红米611A/R319的发酵废糟中也含有较高含量的未被微生物转化的微量元素以及糖和蛋白质。
三、发明内容
本发明的目的是提供一种利用高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟培养桑黄的方法。
本发明的技术方案：将桑黄子实体接种至新鲜的固体斜面上进行培养，待斜面长好后接种至含较低浓度的高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟的液体培养基中进行种子的培养，即对菌种加以驯化；再接入添加了足量高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟的液体培养基中进行深层液体发酵培养。由于高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟中含有丰富的硒、铁和锌等微量元素以及糖类和蛋白质，所以该混合发酵液中营养物质丰富。发酵结束后，通过对混合发酵液进行过滤、烘干、粉碎，得到营养物质含量丰富的桑黄菌丝体粉。
步骤为：
1)待用菌种的培养：
出发菌株为桑黄(Phellinus igniarius)；
①斜面培养：
培养基配方以g/L计：马铃薯200、琼脂20、葡萄糖5、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0，pH自然；
培养方法：取桑黄子实体中心部分接种于新鲜的斜面上，在25℃下培养7天左右；
②500mL一级摇瓶种子培养，装液量150mL/500mL：
培养基配方以g/L计：马铃薯200、葡萄糖5、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0、维生素B10.01，pH自然；
培养方法：将培养好的斜面接种至事先灭菌的摇瓶中，在25±1℃下，转速110rpm下培养7天；
③1000mL二级摇瓶种子培养，装液量400mL/1000mL：
培养基配方：与一级摇瓶种子培养基配方相同；
培养方法：将培养好的一级种子以10％的接种量接种至事先灭菌的摇瓶中，在25℃下，转速110rpm下培养2天，即成待用菌种；
2)50L一级液体种子培养，装液量25-30L：
①一级液体种子培养基配方以g/L计：葡萄糖5、麸皮50，麸皮水珠后取水溶性麸皮汁、酵母膏3.0、维生素B10.01、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0、高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟5，pH自然；
②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量5％-10％接入待用菌种，温度25±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；
③转罐标准：发酵时间30-35小时，菌丝球上浮三分之一，镜检有锁状联合，无杂菌；
3)500L二级液体种子培养，装液量250-300L：
①培养基配方与一级液体种子配方相同；
②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量10％-15％接入一级种子，温度25±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；
③转罐标准：发酵时间30-35小时，菌丝球上浮三分之一，镜检有锁状联合，无杂菌；
4)3000L深层液体发酵培养，装液量1800L：
①发酵培养基配方以g/L计：葡萄糖5、麸皮50，麸皮水煮后取水溶性麸皮汁、酵母膏3.0、维生素B10.01、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0、高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟10，pH自然；
②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量10％-15％接入二级种子，温度25±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；
③放罐标准：发酵时间30-35小时，菌丝球上浮二分之一，镜检有锁状联合，菌丝球不能自溶；
5)固体发酵物的收集：将培养好的发酵液用5000-6000rpm的离心机处理，收集菌丝体；
6)菌丝体的烘干：将收集的菌丝体用真空干燥箱在50-60℃下烘干；
7)菌丝体的粉碎：用带冷冻的粉碎机将烘干的菌丝体粉碎至80目以上既得产品。
8)检验：检验标准如下：
①多糖含量≥4％
②蛋白质含量≥4％
③微量元素含量≥0.15μg/g，≤0.3μg/g
④水分≤8％
⑤菌落总数≤1000cfu/g，大肠杆菌≤40npn/100g，酵母≤25cfu/g，霉菌≤25cfu/g，致病菌不得检出。LD50为阴性。
⑥铅≤1.5mg/kg，砷≤1.0mg/kg。
产品均由卫生防疫部门检测合格后方可销售。包装：检验合格后用铝膜包装袋包装后即得产品桑黄粗菌体粉。
本发明的有益效果：本发明利用高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟进行纯种液体深层发酵培养桑黄菌体，大大缩短了生产周期，提高了产量。本发明主要采用富硒大米发酵废糟，污染小、成本低、工艺简便、科技含量高、不易被仿冒、有效成分含量高、附加值高，适宜工业化生产。
四、具体实施方式
1、待用菌种的培养：将桑黄子实体接种至事先灭好菌的用上述斜面配方配制的一只空白斜面上，在25℃培养6-10天后将斜面上的菌体刮入事先灭好菌的装有适量无菌水和玻璃珠的三角瓶中，振荡10分钟，制成菌悬液。吸4ml该菌悬液于事先灭好菌的一级种子液体培养基中(装液量150mL/500mL)，在25℃，转速110rpm下培养7天得一级摇瓶种子；无菌条件下，将培养好的一级摇瓶种子一瓶倒入事先灭好菌的用上述二级摇瓶种子配方配制的液体培养基中(装液量400mL/1000mL)，在25℃，转速110rpm下培养2天，长好后将两瓶种子液合并即成待用菌种。
2、一级液体种子培养：按上述一级液体中资培养基配方，在0.1Mpa下灭菌30分钟冷却后接入摇瓶种子。按上述一级液体种子培养参数培养。采用50L全自动发酵罐，装液量为25-30L。
3、二级液体种子培养：按上述二级液体种子培养基配方，在0.1Mpa下灭菌30分钟冷却后接入一级种子。按上述二级液体种子培养参数培养。采用500L全自动发酵罐，装液量为250-300L。
4、深层液体发酵培养：采用3000L发酵罐，装液量为1800L。按上述发酵培养基配方，相同条件灭菌后接入二级液体种子。按上述发酵罐的培养参数培养。
5、菌丝体的提取：将培养好的发酵液用上述固体发酵物的收集方法，收集菌丝体，得到250kg湿菌体。
6、菌丝体粉的获得：按上述菌丝体粉的获得方法，得到20kg菌丝体粉。
Claims (1)
1.一种利用高产富硒杂交红米发酵废糟培养桑黄的方法，其特征是将桑黄子实体接种至新鲜的固体斜面上进行培养，待斜面长好后接种至含较低浓度的高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟的液体培养基中进行种子的培养，即对菌种加以驯化；再接入添加了足量高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟的液体培养基中进行深层液体发酵培养；由于高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟中含有丰富的硒、铁和锌等微量元素以及糖类和蛋白质，所以该混合发酵液中营养物质丰富；发酵结束后，通过对混合发酵液进行过滤、烘干、粉碎，得到营养物质含量丰富的桑黄菌丝体粉；步骤为：
1)待用菌种的培养：
出发菌株为桑黄(Phellinus igniarius)；
①斜面培养：
培养基配方以g/L计：马铃薯200、琼脂20、葡萄糖5、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0，pH自然；
培养方法：取桑黄子实体中心部分接种于新鲜的斜面上，在25℃下培养7天左右；
②500mL一级摇瓶种子培养，装液量150mL/500mL：
培养基配方以g/L计：马铃薯200、葡萄糖5、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0、维生素B10.01，pH自然；
培养方法：将培养好的斜面接种至事先灭菌的摇瓶中，在25±1℃下，转速110rpm下培养7天；
③1000mL二级摇瓶种子培养，装液量400mL/1000mL：
培养基配方：与一级摇瓶种子培养基配方相同；
培养方法：将培养好的一级种子以10％的接种量接种至事先灭菌的摇瓶中，在25℃下，转速110rpm下培养2天，即成待用菌种；
2)50L一级液体种子培养，装液量25-30L：
①一级液体种子培养基配方以g/L计：葡萄糖5、麸皮50，麸皮水珠后取水溶性麸皮汁、酵母膏3.0、维生素B10.01、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0、高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟5，pH自然；
②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量5％-10％接入待用菌种，温度25±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；
③转罐标准：发酵时间30-35小时，菌丝球上浮三分之一，镜检有锁状联合，无杂菌；
3)500L二级液体种子培养，装液量250-300L：
①培养基配方与一级液体种子配方相同；
②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量10％-15％接入一级种子，温度25±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；
③转罐标准：发酵时间30-35小时，菌丝球上浮三分之一，镜检有锁状联合，无杂菌；
4)3000L深层液体发酵培养，装液量1800L：
①发酵培养基配方以g/L计：葡萄糖5、麸皮50，麸皮水煮后取水溶性麸皮汁、酵母膏3.0、维生素B10.01、硫酸镁2.0、磷酸二氢钾3.0、高产富硒杂交红米611A/R319发酵废糟10，pH自然；
②控制工艺：在0.1Mpa下灭菌30分钟，冷却后按接种量10％-15％接入二级种子，温度25±1℃，罐压0.05Mpa，通气量1∶0.3，V/V，搅拌转速100rpm；
③放罐标准：发酵时间30-35小时，菌丝球上浮二分之一，镜检有锁状联合，菌丝球不能自溶；
5)固体发酵物的收集：将培养好的发酵液用5000-6000rpm的离心机处理，收集菌丝体；
6)菌丝体的烘干：将收集的菌丝体用真空干燥箱在50-60℃下烘干；
7)菌丝体的粉碎：用带冷冻的粉碎机将烘干的菌丝体粉碎至80目以上既得产品。
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