CN101721422B - 治疗关节炎的药物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种用于治疗关节炎的药物，其特征在于：所述药物为膏药贴片制剂，应用在治疗关节炎上；该药物主要由透明质酸和硫酸氨基葡萄糖制备而成；其中透明质酸与硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：1～3∶300～1200。其不仅克服了以往单独利用使用透明质酸或硫酸氨基葡萄糖的时候存在的弊端，解决了以往的贴膏制剂中中药成分复杂、作用机理不清楚、重复性不好、只对轻微的关节炎管用和整体效果不好的问题；还充分的发挥了透明质酸和硫酸氨基葡萄糖在治疗关节炎方面的作用。

Description

治疗关节炎的药物及其制备方法

技术领域：本发明属于生物制药的领域，尤其涉及一种治疗关节炎的膏药贴片制剂及其制备方法。 

背景技术：当前骨性关节炎(Osteoarthritis OA)是严重影响中老年生活质量的常病、多发病，以关节软骨退变为主，伴关节内滑膜及关节周围软组织病变为特征，其病因及发病机制目前不明，一般认为与年龄、损伤、肥胖相关，生物酶、自由基等多种因素在其发病中起重要作用，由于病机不明，目前尚缺乏根治性疗法。在我国，50岁以上OA的发病率为5％，膝关节OA发病率达9.56％；60岁以上的发病率为20％，膝关节OA的发病率达78.5％。 

氨基葡萄糖(葡萄糖胺，Glucosamine)：氨基葡萄糖是一种氨基单糖。机体利用它来合成聚氨基葡萄糖和蛋白多糖。硫酸氨基葡萄糖是一种氨基葡萄糖盐，硫酸氨基葡萄糖选择性阻断骨关节炎的病理过程，被广泛用于关节炎疾病的治疗，尤其是膝关节炎。天然葡萄糖胺是用来制造和修理关节软骨，同时葡萄糖作为营养补充，葡萄糖胺是一种氨基单糖。机体利用它来合成聚氨基葡萄糖和蛋白多糖。可以帮助修复受损的软骨、增加人体的葡萄糖供应。 

透明质酸及其盐(hyaluronan，HA)是构成关节软骨和滑液的主要成分，对关节生理功能的发挥起着至关重要的作用。当发生骨性关节炎(osteoarthritis，OA)、类风湿性关节炎(RA)以及其他感染性和非感染性关节疾病时，HA在关节内的产生和代谢发生异常，滑液中HA的浓度和相对分子质量(Mr)明显降低，软骨发生降解和破坏，从而导致关节生理功能障碍。是关节腔内注射透明质，可使滑液质量正常化，诱导内源性透明质酸的产生，并激活关节软骨的组织修复过程，改善关节功能。 

透明质酸和葡萄糖胺这两种物质作的治疗机理经多年研究和临床试验已经非常明确，已经被广泛应用于关节炎疾病的治疗当中。 

但透明质酸和葡萄糖胺这两种物质在以往都是单独用来制备药物，但透明 质酸和葡萄糖胺单独的应用于治疗关节炎的时候存在以下弊端： 

透明质酸注射液：这种治疗方法是直接将透明质酸注射液注射到关节受损部位来起作用，其缺点在于操作过程比较复杂，而且还会给病人带来痛苦，影响其在这一领域的广泛应用。 

透明质酸注射液治疗膝关节骨性关节炎具体存在如下的问题： 

1、透明质酸治疗膝关节骨性关节炎需多次关节穿刺，易于发生关节感染，应注意严格无菌操作。 

2、有文献报道在治疗后可发生关节肿胀和关节内钙结晶形成，本研究发生4例关节肿胀，于2～3天后好转，所以应注意。 

3、透明质酸治疗骨性关节炎的最适宜剂量、治疗次数未获得公认。 

葡萄糖胺口服制剂存在如下弊端：它虽然可以口服使用，操作简单，但是病人平均每天摄入计量多达1.5克，大剂量药物长期使用会给病人带来很多副作用，包括：困倦、头痛、失眠、轻度和暂时的消化不良腹痛、食欲不振、恶心、胃灼热、便秘、腹泻、呕吐等。 

而目前存在一些其他治疗关节炎的膏药贴片，但都存在如下弊端：1.中药成分复杂；2.作用机理不清楚；3.重复性不好；4.只对轻微的关节炎管用，整体效果不好。 

而目前为止我们还没有发现用透明质酸和硫酸氨基葡萄糖结合起来制成复合膏药贴片来治疗关节炎的先例和报道。 

发明内容：

发明目的：本发明提供一种治疗关节炎的药物及其制备方法，其目的是解决以下技术问题： 

1、单纯的使用透明质酸治疗关节炎的时候操作过程比较复杂，用量不易确定，而且还会给病人带来痛苦，影响其在这一领域的广泛应用； 

2、葡萄糖胺口服制剂中存在操作简单，病人每天所需的药量很大，长期使用会给病人带来很多副作用； 

3、以往治疗关节炎的膏药贴片的中药成分复杂、作用机理不清楚、重复性不好、只对轻微的关节炎管用以及整体效果不好。 

为了克服以上透明质酸注射液和葡萄糖胺口服制剂的在治疗关节炎疾病上的弊端，我们研发了一种主要利用透明质酸和葡糖胺制备的新药。透明质 

酸葡萄糖胺贴片制剂是一种疗效好，使用方便简单，具有软保护作用的有效治疗药剂。 

技术方案：本发明是通过以下技术方案实现的： 

一种用于治疗关节炎的药物，其特征在于：所述药物为膏药贴片，应用在治疗关节炎上；该药物主要由透明质酸和硫酸氨基葡萄糖制备而成；其中透明质酸与硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：1～3∶300～1200。 

所述用于治疗关节炎的药物中还含有其他的非药性成分，非药性成分与透明质酸和硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：600～2400∶1～3∶300～1200，而非药性成分包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，它们占整个非药性成分的质量比分别为2∶3∶47∶6∶5。 

透明质酸与硫酸氨基葡萄糖的质量比例为1∶1200。 

根据以上所述的用于治疗关节炎的药物的制备方法，其特征在于：该方法的具体步骤如下：按照权利要求1的比例备料； 

a、用50mM的氯化钠制备浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后按照权利要求1的比例加入硫酸氨基葡萄糖； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液与丙烯酸异辛酯和乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

a步骤中还可以同时加入其他非药性成分，非药性成分与透明质酸和硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：600～2400∶1～3∶300～1200，而非药性成分包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们占整个非药性成分的质量比分别为2∶3∶47∶6∶5。 

优点效果：本发明提供一种用于治疗关节炎的药物，所述药物为膏药贴片制剂，应用在治疗关节炎上；该药物主要由透明质酸和硫酸氨基葡萄糖制备而成；其中透明质酸与硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：1～3∶300～1200。 

所述用于治疗关节炎的药物中还含有其他的非药性成分，非药性成分与透明质酸和硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：600～2400∶1～3∶300～1200，而非药性成分包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们占整个非药性成分的质量比分别为2∶3∶47∶6∶5。 

该发明更加充分的利用了透明质酸与葡萄糖胺在治疗关节炎的时候的药效作用，其中透明质酸具有软骨保护作用，透明质酸是一种线形黏多糖，由N-乙酰葡萄糖胺和葡萄糖醛酸二糖单位反复交连组成。在关节内由滑膜的A细胞分泌，是关节滑液和软骨基质内的重要成分。透明质酸具有亲水性和粘弹性，近年来，随着分离方法、测试技术、检测手段等改进和研究的深入，它在临床医疗和诊断以及化妆品生产等方面，得到了越来越广泛的应用。 

透明质酸的具体的效果为： 

(1).具有优异的保湿功能，是一种理想的天然保湿因子。 

(2).透明质酸能改善皮肤生理条件，为真皮胶原蛋白和弹性纤维的合成提供优越的外部环境，加强营养物质的供给，起到护肤养颜的效果。 

(3).透明质酸是关节滑液的重要组成成分，因此可用于治疗骨关节疾病，对减轻滑膜炎症、缓解关节疼痛、改善关节功能具有良好疗效。 

而葡萄糖胺(Glucosamine)，可以刺激受伤的软骨组织开始进行重建的工作，亦能促进软骨组织的新陈代谢以预防退化的发生。藉由重建僵硬与耗损的关节组织，可以减轻关节的疼痛、肿胀，使关节变得更柔软、更有弹性。葡萄糖胺可促使液体流向软骨组织，带给软骨组织营养素，使关节软骨保有水分、维持正常的弹性。 

葡萄糖胺的具体效果为： 

(1)促进骨骼关节的新城代谢； 

(2)提供骨关节所需的营养； 

(3)帮助钙质的吸收； 

(4)具润滑作用，减少骨头间的摩擦受损。 

(5)减轻疼痛； 

(6)抑制骨关节退化。 

通过以上透明质酸和葡萄糖胺在治疗关节炎上的效果及弊端，本发明通过实验后将两者有机的结合起来，制备而成本发明的治疗关节炎的膏药贴片制剂，在克服以往的单独使用透明质酸或葡萄糖胺过程中存在的弊端的同时，也更加充分的发挥了透明质酸和葡萄糖胺在治疗关节炎上的效果，例如：1.预防和治疗骨质疏松；2.提供骨关节所需的营养，预防关节炎；3.具有润滑作用，成少骨头间的摩擦受损；4.促进皮肤组织再生等。 

另外，本发明中透明质酸和葡萄糖胺复合物对关节炎的症状具有很大的改善作用，同时与单独服用葡萄糖胺口服制剂相比，因为加入了透明质酸及其他非药性成分，所以葡萄糖胺的用量将减少，从而减少葡萄糖胺在治疗过程中给患者带来的副作用。并且从根本上解决了以往的贴膏制剂中中药成分复杂、作用机理不清楚、重复性不好、只对轻微的关节炎管用和整体效果不好的问题。 

具体实施方式：下面结合实施例及实验方法对本发明做进一步的说明： 

本发明提供一种用于治疗关节炎的药物，所述药物为膏药贴片制剂，应用在治疗关节炎上；该药物主要由透明质酸和硫酸氨基葡萄糖制备而成；其中透明质酸与硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：1～3∶300～1200。 

另外，在制备的过程中还可以加入其他的非药性成分，非药性成分与透明质酸和硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：600～2400∶1～3∶300～1200，而非药性成分包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们占整个非药性成分的质量比分别为2∶3∶47∶6∶5。 

实施例1： 

a、用50mM的氯化钠将50份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将60000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

另外，在a步骤中还可以加入其他非药性成分30000份，所述其他非药性成分，包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们在非药性成份中的比例分别为2∶3∶47∶6∶5。 

实施例2： 

a、用50mM的氯化钠将50份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将30000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

另外，在a步骤中还可以加入其他非药性成分50000份，所述其他非药性成分，包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们在非药性成份中的 比例分别为2∶3∶47∶6∶5。 

实施例3： 

a、用50mM的氯化钠将50份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将15000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

另外，在a步骤中还可以加入其他非药性成分120000份，所述其他非药性成分，包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们在非药性成份中的比例分别为2∶3∶47∶6∶5。 

实施例4： 

a、用50mM的氯化钠将150份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将60000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

另外，在a步骤中还可以加入其他非药性成分90000份，所述其他非药性成分，包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们在非药性成份中的比例分别为2∶3∶47∶6∶5。 

实施例5： 

a、用50mM的氯化钠将150份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将30000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

另外，在a步骤中还可以加入其他非药性成分90000份，所述其他非药性成分，包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们在非药性成份中的比例分别为2∶3∶47∶6∶5。 

实施例6： 

a、用50mM的氯化钠将150份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将15000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶ 乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

另外，在a步骤中还可以加入其他非药性成分90000份，所述其他非药性成分，包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们在非药性成份中的比例分别为2∶3∶47∶6∶5。 

根据以上方法，用相同数量的蔗糖取代HA和硫酸氨基葡萄糖，来制成无药品对照组胶囊。 

实施例7： 

a、用50mM的氯化钠将80份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将15000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

另外，在a步骤中还可以加入其他非药性成分24000份，所述其他非药性成分，包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们在非药性成份中的比例分别为2∶3∶47∶6∶5。 

根据以上方法，用相同数量的蔗糖取代HA和硫酸氨基葡萄糖，来制成无药品对照组胶囊。 

实施例8： 

a、用50mM的氯化钠将80份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将30000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

另外，在a步骤中还可以加入其他非药性成分48000份，所述其他非药性成分，包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们在非药性成份中的比例分别为2∶3∶47∶6∶5。 

根据以上方法，用相同数量的蔗糖取代HA和硫酸氨基葡萄糖，来制成无药品对照组胶囊。 

实施例9： 

a、用50mM的氯化钠将80份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将60000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

另外，在a步骤中还可以加入其他非药性成分48000份，所述其他非药性成分，包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们在非药性成份中的比例分别为2∶3∶47∶6∶5。 

根据以上方法，用相同数量的蔗糖取代HA和硫酸氨基葡萄糖，来制成无药品对照组胶囊。 

实施例10： 

a、用50mM的氯化钠将50份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将60000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

根据以上方法，用相同数量的蔗糖取代HA和硫酸氨基葡萄糖，来制成无药品对照组胶囊。 

实施例11： 

a、用50mM的氯化钠将50份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将30000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

根据以上方法，用相同数量的蔗糖取代HA和硫酸氨基葡萄糖，来制成无 药品对照组胶囊。 

实施例12： 

a、用50mM的氯化钠将50份透明质酸制备成浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后将15000份的硫酸氨基葡萄糖加入透明质酸溶液中制备成混合溶液； 

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时； 

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1； 

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液∶丙烯酸异辛酯∶乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2； 

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层； 

f、风干胶药膏胶，密封备用。 

根据以上方法，用相同数量的蔗糖取代HA和硫酸氨基葡萄糖，来制成无药品对照组胶囊。 

下面结合实验来证明本发明的效果： 

本发明的对比试验采用ELASA实验方法： 

1、实验材料和方法： 

实验材料：骨性关节炎(OA)动物实验模型：用新西兰大白兔(3.7-4.2Kg)按Hulth改良法建立；硫酸氨基葡萄糖，丙烯酸异辛酯，丙烯酸，乙烯-10-单丙烯酸酯，甘油，乳糖，柠檬酸钠 醋酸钠，月桂醇和其它常用生化试剂(PBS，Tween20，BSA等)均来自美国Sigma Chemical公司；透明质酸来自美国Sanofi-Synthelabo公司；白细胞介素-1(IL-1)/IL-1酶联免疫(ELASA)试剂盒来自美国R & D System公司；；微型结构粘合贴片来自美国3M公司。 

ELASA实验方法： 

1)包被兔抗IL-1血清用包被液稀释后加入聚乙烯酶标扳，每孔100μl，置湿盒内，37℃，2小时。 

2)洗涤用PBS-Tween20洗各孔，共3-5次。 

3)封闭用1％BSA加入酶标板，每孔200μl，4℃过夜，洗涤。 

4)加样加待测样品和标准重组IL-1，每孔100μl。各样品需先进行稀释后加入，同时设无IL-1的阴性对照，置湿盒，37℃，2小时，洗涤。 

5)加兔抗人IL-1单克隆抗体。100μl/孔湿盒，37℃，2小时，洗涤。 

6)加酶标抗体：此为辣根过氧化物酶HRP标记的兔抗人Ig的抗体，100μl/孔，湿盒，37℃，1小时，洗涤。 

7)加底物显色；OPD底物溶液，100μl/孔，37℃，30分钟。 

8)终止反应：加2mol/L硫酸，30μ1/孔。 

9)用酶标仪检测吸光度OD值，波长490nm。 

10)阴性对照，阳性对照成立后，绘制标准曲线，从标准曲线上查出待测样品中IL-1的含量。 

2、统计方法： 

本研究的数据以±s表示。采用SPSS 11.0 for Windows统计软件进行数据录入和统计处理。 

3、实验方法步骤一：利用膝关节液IL-1浓度确定治疗关节炎效果。 

IL-1也是一个检测关节炎水平的一个重要生化指标，实验动物关节液IL-1水平上升证明他的关节炎程度高，相反IL-1水平下降实验动物的关节炎发病程度也随之下降。 

由于样品取自于动物的膝关节液，他所代表的关节炎生化指标可能更正确的反映出动物机体局部的变化，动物的血清生化指标(IL-6)除了受动物关节炎影响以外，也有可能受动物其他部位炎症的影响，这样血清IL-6生化指标的变化与关节炎症的相关性就有可能受到干扰。所以，利用测量膝关节液里的生化指标IL-1则可以避免这种干扰，从而所得出IL-1浓度变化与关节炎症的相关性要比血清指标更加可靠。 

具体步骤如下： 

(I)确定以下动物每组各十只，A组为正常对照组：无OA动物；B1，B2组为硫酸氨基葡萄糖组；C1、C2、C3、组为硫酸氨基葡萄糖和HA复合贴膏剂 量组，其中的硫酸氨基葡萄糖和HA的量为制备过程所需的量；D组为OA动物模型组(没有给药)；OA即骨性关节炎；具体情况如下表： 

(II)硫酸氨基葡萄糖和HA复合制剂用量表1： 

注：mg.kg.和ug.kg为单位动物重量给药量 

(III)根据步骤(II)用量表，根据动物的体重，确定药物剂量制成药膏贴片。把贴片直接贴在实验动物的膝关节正面，每周换一次贴片，连续帖片时间为六周。对照组A组和D组所用的贴片内无任何药物成分，仅含糖份。 

(IV)给药六周以后取膝关节滑液：动物经麻醉后，在侧膝关节髌韧带附着点外上方或内上方约0.5cm处，备皮消毒，以30ml医用注射器穿刺入关节腔内，先注入生理盐水2ml在反复活动关节20余次后，在膝关节屈曲位下，抽取关节滑液，并置入EP管中。样本离心后用ELASA方法测定血清IL-1浓度。 

(V)根据膝关节滑液IL-1含量高低来推断各组实验动物组关节炎病理情况的变化。 

实验方法步骤二：利用测量动物膝关节活动度确定贴片治疗关节炎效果。 

虽然IL-1是关节炎的重要生物化学指标，但是IL-1关节滑液浓度的高低只能间接反映实验动物模型关节炎的程度，只有用更直接的生理观察才能反映关节炎病理程度，在以下的方法中我们利用测量动物膝关节活动度来直接证明我们制剂的效果。实验动物关节活动度小，关节炎程度高，相反实验动物关节活动度上升，实验动物的关节炎发病程度也随之下降. 

具体步骤如下： 

(1)确定以下动物每组各十只，A组为正常对照组：无OA动物；B1，B2 组为硫酸氨基葡萄糖组；C1、C2、C3、组为硫酸氨基葡萄糖和HA复合贴片剂量组，其中的硫酸氨基葡萄糖和HA的量为制备过程所需的量；D组为OA动物模型组(没有给药)；具体情况如下表： 

(2)硫酸氨基葡萄糖和HA复合制剂用量表2： 

注：mg.kg.和ug.kg为单位动物重量给药量 

(3)根据步骤(2)的用量表，根据动物的体重，确定药物剂量制成药膏贴片。把贴片直接贴在实验动物的膝关节正面，每周换一次贴片，连续帖片时间为六周。对照组A组和D组所用的贴片内无任何药物成分，仅含糖份。 

(4)六周以后，每组动物行关节活动度测量：固定动物右大腿近段于台上，于膝关节下10cm处用500g拉力牵拉关节屈曲5min，用长柄关节活动度测量器测量出膝关节屈曲角度，即为关节活动度。在同样的条件下重复该实验3次，取其平均活动度； 

(5)根据动物平均关节活动度高低来推断各组实验动物组关节炎病理情况的变化，以确定最合适的给药用量。 

4、试验结果和结论： 

(1)利用关节液IL-1浓度确定治疗关节炎效果的结论：如下表： 

利用方法一所测定的动物关节液IL-1含量(N＝10)： 

组名称	关节液IL-1含量  (单位pg/ml)
		A	7.92±0.34

[0194] 

B1	17.78±0.15
		B2	18.21±0.12
C1	10.05.±0.15
		C2	12.27±0.21
C3	13.11±0.34
		D	20.4±0.37

由上述结果可以得出以下结论： 

(I)OA模型动物D组(无给药组)与A组(无OA模型正常对照)相比有非常显著性差异(p＜0.01)，IL-1含量明显升高，证明OA模型是成功的； 

(II)B1、B2组硫酸氨基葡萄糖单独使用时与OA模型动物D组(无给药组)相比，IL-1含量有所下降，但无显著性差异(p＞0.05)，证明药膏单独使用葡萄糖酸铵的计量为30-60mg.kg不会明显降低OA症状； 

由此得出本申请的创新点在于： 

『一』、在药膏复合剂中当HA用量固定时(50ug.kg)，C3、C2、C1的比较中发现，当硫酸氨基葡萄糖用量逐渐增加时，IL-1含量在逐渐降低，IL-1降低似乎和硫酸氨基葡萄糖成反比，所以，我们的结论是：硫酸氨基葡萄糖与HA做成复合制剂治疗关节炎时，硫酸氨基葡萄糖的用量可以在无副作用的情况下选取较高的剂量以提高治疗效果； 

『二』、比较B1组和C1组，硫酸氨基葡萄糖的浓度相同(60mg.kg)，C1组含有HA(50ug.kg)，C1组与B1组相比，IL-1含量明显降低，有非常显著性差异(p＜0.01)；比较B2组和C2组，硫酸氨基葡萄糖的浓度相同(30mg.kg)，C2组含有HA(50ug.kg)，C2组与B2组相比，IL-1含量明显降低，有非常显著性差异(p＜0.01)。因此我们的结论是：一定数量的HA可以明显提高硫酸氨基葡萄糖对关节炎的治疗效果；由此可以说明本发明的贴膏制剂是具有显著效果的。 

利用测量动物膝关节活动度得出结论：如下表： 

在方法一的基础上我们又测量动物的关节活动度，得出以下结果： 

实验动物膝关节活动度表(N＝10) 

组名称	膝关节活动度
		A	138.2±4.8
B1	53.2±4.3
		B2	49.6±5.2
C1	96.5±5.1
		C2	92.2±4.3
C3	86.8±3.5
		D	45.5±9.2

根据以上结果我们得出如下结论： 

(I)OA模型的动物(D组)相比无OA的对照组(A组)有非常显著性差异(p＜0.01)，关节活动度明显变小，因为OA一个比较明显的生理特征是减小动物的关节活动能力，所以本实验用的动物模型是可以体现OA的生理特征的，加上之前所述(关节液IL-1的数据)证明本动物OA模型是成功的。 

(II)B1、B2组硫酸氨基葡萄糖单独使用时与OA模型动物D组(无给药组)相比，动物关节活动度有所上升，但是无显著性差异(p＞0.05)，证明药膏单独用葡萄糖酸铵在剂量为30-60mg.kg时，不会明显降低OA症状； 

(III)由此得出本申请的创新点在于： 

『一』、在复合剂量中当HA用量固定时(50ug.kg)，C3、C2、C1的比较中发现，当硫酸氨基葡萄糖用量逐渐增加时，动物关节活动量在逐渐加大，增加的幅度似乎和硫酸氨基葡萄糖成正比。所以，我们的结论是：硫酸氨基葡萄糖与HA做成复合制剂治疗关节炎时，硫酸氨基葡萄糖的用量可以在无副作用的情况下选取较高的剂量以提高治疗效果； 

『二』、比较B1组和C1组，硫酸氨基葡萄糖的浓度相同(60mg.kg)，C1组含有HA(50ug.kg)，C1组与B1组相比，动物关节活动量明显增加，有非常显著性差异(p＜0.01)，比较B2组和C2组，硫酸氨基葡萄糖的浓度相同(30mg.kg)，C2组含有HA(50ug.kg)，C2组与B2组相比，动物关节活动量明显 增加，有非常显著性差异(p＜0.01)。因此我们的结论是：一定数量的HA会明显提高硫酸氨基葡萄糖对关节炎的治疗效果；由此可以得出本发明的主要由透明质酸或硫酸氨基葡萄糖按照一定比例制备而成的贴膏制剂是具有很好的效果的。 

综上所述，以上动物关节活动量结果和动物关节液IL-1含量的结果相吻合。 

因此，可以看出本发明的治疗关节炎的药物，不仅克服了以往单独利用使用透明质酸或硫酸氨基葡萄糖的时候存在的弊端，解决了以往的贴膏制剂中中药成分复杂、作用机理不清楚、重复性不好、只对轻微的关节炎管用和整体效果不好的问题；还充分的发挥了透明质酸和硫酸氨基葡萄糖在治疗关节炎方面的作用。 

Claims (3)

1.一种用于治疗关节炎的药物，其特征在于：所述药物为膏药贴片；该药物主要由透明质酸和硫酸氨基葡萄糖制备而成；其中透明质酸与硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：1～3∶300～1200；

所述用于治疗关节炎的药物中还含有其他的非药性成分，非药性成分与透明质酸和硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：600～2400∶1～3∶300～1200，而非药性成分包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，它们占整个非药性成分的质量比分别为2∶3∶47∶6∶5。

2.根据权利要求1所述的用于治疗关节炎的药物，其特征在于：透明质酸与硫酸氨基葡萄糖的质量比例为1∶1200。

3.一种制备权利要求1所述的用于治疗关节炎的药物的方法，其特征在于：该方法的具体步骤如下：按照权利要求1的比例备料；

a、用50mM的氯化钠制备浓度为0.075％的透明质酸溶液，然后按照权利要求1的比例加入硫酸氨基葡萄糖；该步骤中还同时加入其他非药性成分，非药性成分与透明质酸和硫酸氨基葡萄糖的质量比例为：600～2400∶1～3∶300～1200，而非药性成分包括甘油、乳糖、柠檬酸钠、醋酸钠和月桂醇，他们占整个非药性成分的质量比分别为2∶3∶47∶6∶5；

b、将a步骤中的溶液在室温下搅拌两小时；

c、将b步骤中的溶液和丙烯酸混和，室温下搅拌半小时，b步骤中的溶液和丙烯酸质量比例为2∶1；

d、将c步骤中的溶液和丙烯酸异辛酯，乙烯-10-单丙烯酸酯混合，室温下搅拌10-30分钟，形成共聚胶药膏胶，其中c步骤的溶液与丙烯酸异辛酯和乙烯-10-单丙烯酸酯的质量比例为1∶2∶2；

e、将d步骤中的共聚胶药膏胶装入微型结构粘合贴片夹层；

f、风干胶药膏胶，密封备用。