CN103405751A - 一种具有细胞修复功能的组合物及其制备方法和应用 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种具有细胞修复功能的组合物，它每毫升中含有以下成分：（1）生长因子群，包括：血小板源性生长因子PDGF≥600pg、血管内皮生长因子VEGF≥3300pg、干细胞因子受体SCF R≥75pg；（2）具有修复功能的蛋白质群，以含氮量计，为0.3～0.8mg；（3）多肽、氨基酸类，以含氮量计，为0.5～1.0mg。本发明的组合物具有优异的细胞修复功能，对一系列由于细胞损伤导致的疾病或创伤具有良好的防治和修复作用。本发明还提供所述的组合物的制备方法和应用。

Description

一种具有细胞修复功能的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及一种医用组合物，具体涉及一种具有细胞修复功能的组合物，及其制备方法和应用。

背景技术

现有技术研究发现，几乎所有的疾病都存在着相应脏器或组织的细胞损伤。因此，对损伤细胞的修复成为了预防和治疗各种疾病的重要思路。

细胞对自身的损伤修复是一个不断进行的非常复杂的过程，基于一个复杂的修复系统。虽然细胞修复系统非常复杂，但作为系统，通常由结构、机制、功能三部分组成。

结构是系统的物质基础。是系统运行和功能发挥的基础和必须条件。综合相关的研究成果可知，细胞修复系统的物质基础至少包括以下三类：

（1）生长因子群。目前已经发现的如表皮生长因子（EGF）、血小板衍生的生长因子（PDGF）、成纤维细胞生长因子（FGF）、肝细胞生长因子（HGF）、胰岛素样生长因子-I（IGF-1）、IGF-Ⅱ、白血病抑制因子（LIF）、神经生长因子（NGF）、抑瘤素M（OSM）、血小板衍生的内皮细胞生长因子（PDECGF）、转化生长因子-α（TGF-α）、血管内皮细胞生长因子（VEGF）、神经生长因子（NGF）、脑源性神经营养因子（PDGF）等四十余种。

（2）具有修复功能的蛋白质群。综合相关的研究发现，根据不同细胞以及细胞中损伤的部位的不同，由不同的专门的修复蛋白质负责修复。目前，已发现并报道的修复蛋白质有罗彻斯特大学的研究者发现的促使DNA的高效修复的蛋白质SIRT6，美国北卡罗来纳大学研究人员研究发现的称为Ku的蛋白质等。

（3）其它供给合成修复功能蛋白质的基础物质，如氨基酸、肽、核酸等。

关于细胞修复系统具体的修复机制，人类正对此进行深入研究。同时，随着研究的深入，更多的修复蛋白质将被发现。

关于细胞修复系统的功能研究发现：

（1）细胞具有自我修复的功能，有整套自我修复的功能系统。细胞损伤的修复受基因控制。在大部分细胞中都包含有可以进行快速损伤修复的基因。

（2）直接行使修复损伤的物质是各种具有修复功能的蛋白质，其合成受专门的损伤修复基因控制。

（3）细胞会随着自身的老化而不断丧失修复自身的能力，细胞的老化使其自身的修复系统最终失去功能，导致组织功能的下降以及肿瘤发生率的增加。

（4）从细胞水平来看，细胞损伤的修复主要是细胞的再生性修复。其中起关键作用的是生长因子。

（5）随着细胞老化，其修复DNA的能力下降与修复过程中所涉及的蛋白质的水平的降低同时发生。

（6）同样，细胞的再生性修复能力随着其老化也逐渐减退直至消失。比如人在儿童和青少年组织再生能力强，创伤愈合快；老年人组织再生能力弱，愈合慢。

总之，总结现有技术的研究进展得到的结论是：大多数细胞中都存在专门负责修复损伤的基因，细胞的损伤修复受修复基因控制。细胞修复系统发挥功能的物质基础不是一种成分，也不只是一类物质，是多种多类物质的综合作用。对损伤的修复是由具有修复功能的蛋白质来完成的，而这些具有修复功能的蛋白质是由修复基因控制合成的，其合成的物质基础是氨基酸、肽等。生长因子肽类物质，是促进细胞再生性修复的关键物质。细胞修复的过程可以大致模拟如下：

细胞修复系统发挥细胞损伤修复功能的物质基础，是多种多类物质的综合作用。根据已有的研究结果，细胞修复系统功能物质是包括生长因子群，具有修复功能的蛋白质群以及其它合成修复功能蛋白质的必需基础物质，如氨基酸、肽、核酸等的综合体，我们把这些能够修复细胞损伤的物质组合物整体定义为“细胞修复因子群”。随着细胞的老化，细胞中的修复因子群水平会逐渐降低，最终导致细胞的死亡或变异，引起系列疾病。由此，我们推断认为通过从体外向细胞不断补充细胞组织修复因子群，提高细胞中的修复因子群水平，应该可以提高细胞修复系统的功能。那么，基于上述推断，外源的细胞修复因子群的构成和来源质量就显得至关重要。

本发明正是基于上述背景技术，提出一种药物制剂，能够通过外源性补充细胞修复因子群的方式促进细胞损伤的修复，从而防治疾病。

发明内容

本发明的目的在于：根据细胞修复系统修复细胞损伤的必须功能物质及其构成，提供一种具有细胞修复功能的组合物，有效防治因多种因细胞损伤引起的疾病或创伤。

本发明的另一个目的在于：提供所述的具有细胞修复功能的组合物的制备方法。

本发明的再一个目的在于：提供所述的具有细胞修复功能的组合物在制备预防和治疗多种细胞损伤所致疾病的药物中的应用。

本发明的上述目的是通过以下技术方案实现的：

提供一种具有细胞修复功能的组合物，它每毫升中含有以下成分：

（1）生长因子群，包括：

血小板源性生长因子PDGF≥600pg、血管内皮生长因子VEGF≥3300pg、干细胞因子受体SCF R≥75pg；

（2）具有修复功能的蛋白质群，以含氮量计，为0.3～0.8mg；

（3）多肽、氨基酸类，以含氮量计，为0.5～1.0mg。

本发明优选的具有细胞修复功能的组合物，每毫升中含有以下成分：

（1）生长因子群，包括：

血小板源性生长因子PDGF≥600pg、血管内皮生长因子VEGF≥3300pg、干细胞因子受体SCF R≥75pg；

（2）具有修复功能的蛋白质群，以含氮量计，为0.5～0.8mg；

（3）多肽、氨基酸类，以含氮量计，为0.8～1.0mg。

本发明优选的具有细胞修复功能的组合物，每毫升中进一步含有以下含量的生长因子：

本发明更优选的具有细胞修复功能的组合物，每毫升中再进一步含有以下含量的生长因子：

本发明一种最优选的具有细胞修复功能的组合物，每毫升中含有以下含量的成分：

（1）生长因子群，包括：

（2）具有修复功能的蛋白质群，以含氮量计，为0.51mg；

（3）多肽、氨基酸类，以含氮量计，为0.84mg。

本发明另一种最优选的具有细胞修复功能的组合物，每毫升中含有以下含量的成分：

（1）生长因子群，包括：

（2）具有修复功能的蛋白质群，以含氮量计，为0.51mg；

（3）多肽、氨基酸类，以含氮量计，为0.84mg。

本发明还提供所述的具有细胞修复功能的组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）取未成年哺乳动物整体，解剖分离出内脏，得到内脏和非内脏组织，并将得到的非内脏组织去除脂肪组织；

2）用无菌、无热源水对步骤1）得到的内脏和非内脏组织分别进行冲洗；

3）分别将步骤2）得到的内脏和非内脏组织依次进行组织绞碎和细胞破碎，直至物料的颗粒粒径不大于2μm，得到内脏匀浆和非内脏匀浆；

4）将步骤3）得到的非内脏匀浆与注射用水按1:2～5的重量比混合匀浆；然后在得到的匀浆中按酶底物浓度0.5～5%w/w加入胰酶或胰蛋白酶，于40℃～60℃下水解1～6小时，再经灭酶后得到非内脏酶解液；

5）将步骤3）得到的内脏匀浆加入步骤4）得到的非内脏酶解液中，混合均匀，得到混合酶解液；

6）在步骤5）得到的混合酶解液中按0.09～0.15mol/L加入氯化钠，恒温25℃～50℃保持0.5～3小时；得到盐溶混合物；

7）将步骤6）得到的盐溶混合物进行病毒灭活后冷冻离心，取中间液；中间液再经超滤、除菌处理，得到本发明所述的具有细胞修复功能的组合物。

步骤1）所述的未成年哺乳动物优选哺乳动物胚胎或初生哺乳动物。

步骤1）所述的哺乳动物优选猪、牛或羊。

步骤3）所述的组织绞碎优选使用绞碎机将内脏和非内脏组织进行初步机械破碎。

步骤3）所述的细胞破碎优选将组织绞碎得到的组织碎块在-20℃～-10℃进行速冻，然后对速冻后的组织碎块在20～25℃进行解冻，冻融物再经胶体磨机械破碎，如此冻融和机械破碎的过程反复进行2-5次。

步骤4）所述的灭酶方法优选升温至90℃，保持10分钟。

步骤7）所述的病毒灭活方法优选升温至60℃～70℃，保持0.5～2小时。

步骤7）所述的除菌优选使用0.22um的膜过滤除菌。

本发明还提供所述的具有细胞修复功能的组合物在制备预防和治疗多种细胞损伤所致疾病的药物制剂中的应用。

所述的细胞损伤所致疾病包括：

I.组织创伤；

II.因细胞损伤的积累导致的疾病，具体包括器官萎缩、器官功能衰退、器官衰竭、衰老或者老年退行性疾病；

III.自身免疫性疾病，具体包括系统性红斑狼疮、重症肌无力、甲状腺功能亢进、原发性胆汁性肝硬变等；

IV.肿瘤；

V.进行性神经肌肉营养不良；

除此之外，本发明所述的组合物在皮肤美容领域也具有良好的效果。

所述的药物制剂优选注射液、外用水凝胶或外用冲洗液等剂型。这样就为细胞修复因子群到达靶细胞提供了两种途径：一是直接到达，如将外用冲洗液或外用水凝胶喷涂于损伤的创面，直接促进创面伤口的愈合；二是静脉滴注注射液，通过血液循环达到靶细胞。

所述的注射液、外用水凝胶或外用冲洗液都可以用本发明所述的组合物按照常规方法制备得到。例如，本发明所述的组合物原液经过无菌灌装，可得静脉注射液；在本发明所述的组合物中加入1～3mg/mL的羧化壳聚糖，可以制备得到上述的外用洗液；加入10～20mg/mL的羧化壳聚糖可以制备得到所述的水凝胶；本发明所得的组合物原液与壳聚糖、甘油磷酸钠等联合应用，可制成温度敏感性水凝胶，用于子宫糜烂等难愈性妇科疾病的治疗；本发明所得的组合物原液按一定比例稀释后，可得美容液，进而可制成美容霜、膏等。

本发明所述的具有细胞修复功能的组合物，对于上述疾病的防治和创伤的修复具有良好的效果。为了观察本发明所述的含有细胞修复功能的组合物的修复功能的有效性，我们选择本发明实施例4-6制备的三个剂型的产品作为试验药品，分别选择了不同类型的具有代表性的细胞损伤性疾病，通过初步的临床治疗试验，根据相应的疗效结果来验证。其中，实施例4制备的注射液针对进行性神经肌肉营养不良症进行治疗，实施例5制备的外用冲洗液用于子宫全切除术中的冲洗治疗，实施例6制备的外用水凝胶用于已感染的陈旧难愈性外伤治疗。结果显示，本发明的组合物的不同剂型制剂对上述几种具有代表性的细胞损伤性疾病或创伤均有显著的治疗和修复效果。详细的疗效报告见本发明具体实施方式部分。

本发明所述的具有细胞修复功能的组合物，之所以具有丰富的生长因子群、具有修复功能的蛋白质群、多肽、氨基酸类物质和优异的细胞修复效果，主要取决于其特定的制取方法。

与现有技术相比，本发明的提取方法和组合物主要具有以下几方面的有益效果：

1.本发明的提取方法选择了更加合适的提取原料

从哺乳动物生命的源头或者个体发育的初期来获得细胞修复因子群是至佳选择。哺乳动物在这个时期，细胞组织处于生命的最旺盛时期，相应的其细胞修复因子群的水平也处于巅峰时期；生命的源头或者个体发育的初期即胚胎或者幼体，我们选择了对其进行整体提取，最大限度地做到了保持细胞修复因子群的天然构成比例。这也是本发明所述的组合物能够充分实现细胞修复功能的关键之一。

2.本发明的提取方法开创性地采用了整体二次提取方法

将初生哺乳动物整体解剖成内脏和其它剩余的两部分，首先对内脏以外的部分采用酶解提取，再对内脏和酶解液采用盐溶提取，这种酶解和盐溶两种手段相结合的二次提取方式，最大限度地提取到了组织细胞中具有细胞修复功能的活性物质。同时，也最大程度地保证了最终提取获得液中胞修复因子群的浓度和天然构成比例。

人体是一个复杂的整体大系统，而细胞修复功能的实现是细胞修复系统各种功能物质整体作用的结果。本发明就是依据这一科学的整体系统理论，对动物胚胎或者幼体整体提取出系统功能物质。

利用本发明中的提取方法得到的组合物中，生长因子种类全面，含量高，它们与具有修复功能的蛋白质，以及氨基酸和多肽相结合，共同组成本发明所述的具有细胞修复功能的组合物。这样的组合物作为外源的细胞修复因子群具有普遍适用性。其不单针对某一细胞或者某类细胞，而是针对机体所有的细胞组织。它们能随着血液循环到达机体的各部位，哪里有损伤就到达哪里。

3、本发明所得的具有细胞修复功能的组合物原液具有更广泛的应用范围，几乎包括所有因细胞损伤所致的疾病和衰老，以及组织创伤。。

4、本发明所得的具有细胞修复功能的组合物原液可制成多种剂型的药物或者美容品，安全、实用。壳聚糖具有高度的生物相容性，微生物降解性，无毒，安全性高，是一种天然的优良载体，与本发明所述的组合物原液的联合应用，可促进创面组织细胞对细胞修复因子群的吸收利用，同时还可在创面形成无菌、极少渗出物、湿润的半密封环境，更利于创面组织的修复。另外，经毒性试验和热原质试验，本发明组合物的各种制剂均具有很高的安全性。

具体实施方式

实施例1：

一种具有细胞修复功能的组合物，每毫升中含有以下含量的成分：

（1）生长因子群，包括：

（2）具有修复功能的蛋白质群，以含氮量计，为0.51mg；

（3）多肽、氨基酸类，以含氮量计，为0.84mg。

该组合物制备方法如下：

（1）取初生牛整体，分成两部分，一部分为内脏，另一部分为去掉内脏的其他非内脏组织。

（2）将非内脏组织去脂肪组织。

（3）分别用无菌、无热源水对内脏和非内脏组织进行冲洗。

（4）用绞碎机分别对内脏和非内脏组织部分进行机械绞碎。

（5）细胞破碎

在-20℃分别对内脏和非内脏组织进行速冻，然后分别对速冻后的内脏和非内脏组织在20℃进行解冻，冻融物再经胶体磨机械破碎。如此冻融、机械破碎过程反复三次。

（6）非内脏组织冻融物匀浆

取步骤（5）得到的非内脏组织冻融物，与无菌、无热源注射用水按1:5重量比例混合匀浆；

（7）非内脏组织冻融物酶解

按酶底物浓度2.5%的比例在步骤（6）得到的匀浆中加入胰蛋白酶，40℃下水解6小时。

（8）灭酶

升温至90℃，保持10分钟。

（9）将步骤（5）得到的内脏冻融物加入步骤（8）灭酶后的非内脏组织酶解液中，搅拌混匀。

（10）混合物盐溶

在步骤（9）得到的混合物中按0.15mol/L加入氯化钠，恒温50℃保持0.5小时。

（11）病毒灭活

将步骤（10）得到的盐溶物升温至60℃，保持2小时。

（12）将步骤（11）病毒灭活处理后的物料冷冻离心，取中间液；

（13）将步骤（12）处理后的液体超滤，截取透过液

（14）除菌

将步骤（13）得到的透过液以0.22um膜过滤除菌，得本发明所述的一种具有细胞修复功能的组合物原液。

实施例2：

一种具有细胞修复功能的组合物，每毫升中含有以下含量的成分：

（1）生长因子群，包括：

（2）具有修复功能的蛋白质群含量，以含氮量计，为0.3mg/mL；

（3）多肽、氨基酸类含量，以含氮量计，为1.0mg/mL。

其制备方法如下：

（1）取初生猪整体，分成两部分，一部分为内脏，另一部分为去掉内脏的其他非内脏组织。

（2）将非内脏组织去脂肪组织。

（3）分别用无菌、无热源水对内脏和非内脏组织进行冲洗。

（4）用绞碎机分别对内脏和非内脏组织部分进行机械绞碎。

（5）细胞破碎

在-10℃分别对内脏和非内脏组织进行速冻，然后分别对速冻后的内脏和非内脏组织在25℃进行解冻，冻融物再经胶体磨机械破碎。如此冻融、机械破碎过程反复三次。

（6）非内脏组织冻融物匀浆

取步骤（5）得到的非内脏组织冻融物，与无菌、无热源注射用水按1:2重量比例混合匀浆；

（7）非内脏组织冻融物酶解

按酶底物浓度0.5%的比例在步骤（6）得到的匀浆中加入胰蛋白酶，60℃下水解6小时。

（8）灭酶

升温至90℃，保持10分钟。

（9）将步骤（5）得到的内脏冻融物加入步骤（8）灭酶后的非内脏组织酶解液中，搅拌混匀。

（10）混合物盐溶

在步骤（9）得到的混合物中按0.10mol/L加入氯化钠，恒温25℃保持3小时。

（11）病毒灭活

将步骤（10）得到的盐溶物升温至70℃，保持0.5小时。

（12）将步骤（11）病毒灭活处理后的物料冷冻离心，取中间液；

（13）将步骤（12）处理后的液体超滤，截取透过液

（14）除菌

将步骤（13）得到的透过液以0.22um膜过滤除菌，得本发明所述的一种具有细胞修复功能的组合物原液。

实施例3：

一种具有细胞修复功能的组合物，与实施例1的有效成分含量大体相同，不同之处在于：具有修复功能的蛋白质群含量，以含氮量计，为0.8mg/mL，多肽、氨基酸类含量，以含氮量计，为0.5mg/mL。

其制备方法如下：

（15）取初生羊整体，分成两部分，一部分为内脏，另一部分为去掉内脏的其他非内脏组织。

（16）将非内脏组织去脂肪组织。

（17）分别用无菌、无热源水对内脏和非内脏组织进行冲洗。

（18）用绞碎机分别对内脏和非内脏组织部分进行机械绞碎。

（19）细胞破碎

在-10℃分别对内脏和非内脏组织进行速冻，然后分别对速冻后的内脏和非内脏组织在25℃进行解冻，冻融物再经胶体磨机械破碎。如此冻融、机械破碎过程反复三次。

（20）非内脏组织冻融物匀浆

取步骤（5）得到的非内脏组织冻融物，与无菌、无热源注射用水按1:4重量比例混合匀浆；

（21）非内脏组织冻融物酶解

按酶底物浓度5%的比例在步骤（6）得到的匀浆中加入胰蛋白酶，40℃下水解1小时。

（22）灭酶

升温至90℃，保持10分钟。

（23）将步骤（5）得到的内脏冻融物加入步骤（8）灭酶后的非内脏组织酶解液中，搅拌混匀。

（24）混合物盐溶

在步骤（9）得到的混合物中按0.10mol/L加入氯化钠，恒温35℃保持1小时。

（25）病毒灭活

将步骤（10）得到的盐溶物升温至70℃，保持0.5小时。

（26）将步骤（11）病毒灭活处理后的物料冷冻离心，取中间液；

（27）将步骤（12）处理后的液体超滤，截取透过液

（28）除菌

将步骤（13）得到的透过液以0.22um膜过滤除菌，得本发明所述的一种具有细胞修复功能的组合物原液。

实施例4：

取实施例1制备的原液，按照常规方法在百级洁净车间除菌灌装后制备成注射液。

实施例5：

取实施例2制备的原液，加入3mg/mL的羧化壳聚糖，按照常规方法制备得到外用洗液。

实施例6：

取实施例3制备的原液，加入20mg/mL的羧化壳聚糖，按照常规方法制备得到外用水凝胶。

临床治疗试验疗效报告

（一）本发明实施例4制备的注射液对进行性神经肌肉营养不良症的治疗疗效报告

引言：进行性神经肌肉营养不良（DMD），又称杜氏进行性肌营养不良，是一种遗传性的肌肉组织退化疾病。它是由于人体最大的基因——抗肌肉萎缩蛋白基因的突变缺陷造成的，一般是DMD基因中缺失某几个片段。这种基因片段的缺失，直接导致抗肌肉萎缩蛋白合成障碍，肌组织细胞营养不断缺失，造成肌肉细胞不断损伤、萎缩、死亡。患者一般在8岁左右加重，12岁左右行走能力完全丧失，20岁左右死亡。

对于此病症，目前尚没有有效的治疗办法。常见的小剂量激素的应用治疗只是暂时的症状缓解，没有根本的治疗作用，停药后反而加重病情，患者运动功能加速丧失。

我们的细胞修复治疗，就是将细胞修复因子，通过静脉滴注的方式，随着血液循环将细胞修复因子送达损伤、萎缩细胞处，提高受损细胞的修复因子群水平，增加损伤细胞的修复蛋白质浓度，以期达到增强细胞自我修复系统功能，以促进肌肉组织细胞的增殖、再生、修复，提高患者运动能力和生存质量。

1、受试人群选择，符合以下条件

1.1，DMD分子诊断确诊DMD基因exon片段缺失

1.2年龄：8～10岁

1.3病情：处于病情快速发展阶段，运动功能急剧下降，运动功能接近丧失；

1.4患儿及家属自愿接受。

2、受试人群分组

2.1采取随机、对照的原则，对募集的患儿进行分组，分为治疗组和对照组

2.2治疗组采用实施例4制备的注射液治疗，对照组采用常规物理康复治疗。

2.3治疗组10人，对照组10人

3.治疗方法

3.1治疗及观察期共6个月

3.2治疗组分别于第1个月及第四个月的前三周分别静脉滴注，每日1次，连续6日停1日，即第1个月和第4个月分别静脉滴注18次。每次50mL实施例4制备的注射液，以0.9%氯化钠注射液按1:2稀释。

3.3对照组常规物理康复治疗，每月3次。

4、疗效判断指标与方法

4.1疗效判断指标分为肌力检查、肺功能测定、行走9米时间以及一次连续行走距离四项指标。

4.1.1肌力评分标准：

10，病危，或临近死亡

20，病重，需住院积极支持治疗生活严重不能自理；

30，生活严重不能自理

40，生活不能自理，需要特别照顾

50，常需人照顾

60，有时需人扶助，大大多数时间可自理

70，生活可自理，但不能维持正常生活和工作

80，勉强可进行正常活动，有一定症状或体征

90，能进行正常活动，有轻微症状和体征

100，正常，无症状和体征

4.1.2肺功能测定，采用FVC指标，即用力肺活量。

4.2治疗前检测一次指标。治疗后的第2、4、6月末分别检测一次指标。

5、治疗结果指标及疗效分析

5.1对照组治疗前后疗效指标变化及疗效分析

5.1.1对照组治疗前后疗效指标变化情况统计表1

表1

5.1.2从上表1可以看出，患儿治疗前后每两个月的指标退化明显，具有显著地差异性。因此提升患儿在此阶段的运动能力急剧减退。从治疗前后的指标来看，物理治疗没有起到减缓患儿运动功能衰退的作用。

5.2治疗组治疗前后疗效指标变化及疗效分析

5.2.1治疗组治疗前后疗效指标变化情况统计表2：

表2

注：治疗组用药前后，四项指标均有显著改变，P<0.01

5.2.2上表2的治疗组治疗前后的指标统计情况看，每相近两次检测的肌力评分差值、FVC差值，行走9米时间差值，一次连续行走距离差值非常显著，P<0.01;同时，对治疗组和对照组进行独立样本t检验，统计结果显示用药前后治疗组与对照组患儿的以上各数据差值间存在显著差异性，P<0.01。

5.2.3因此，临床试验结果表明，使用本发明实施例4制备的注射液后，患儿的行走能力、肌力，用力肺活量等均显著提高；同时，四项指标明显均优于对照组。

5.3治疗组用药前后患儿体征变化情况

在6个月的治疗观察中，患儿的体征均逐渐向正常方向发展。

体重增加。半年普遍增加1～3公斤；

自主起身。治疗前，患儿普遍不能自主从凳子起身站立，治疗6个月后，均能自主轻松起身站立。

鸭步跛行姿态一定程度减轻，行走稳定性、协调性增强；

普遍自觉行走没有以前累。

6、试验结论

试验结果表明，通过血液循环，细胞修复因子能直接到达损伤、萎缩细胞，

提高损伤、萎缩细胞的修复因子群水平以及修复蛋白质浓度，增强细胞自我修复系统功能，促进肌肉组织细胞的增殖、再生、修复，提高患者运动能力和生存质量。

（二）本发明实施例5制备的冲洗液在腹腔镜全子宫切除手术中应用疗效报告

引言：腹腔镜下全子宫切除术，是指经过腹腔镜将子宫周围的韧带、血管、阴道壁切断，将子宫切除后自阴道取出，然后经腹腔镜下再次缝合阴道断端。

手术中需切断子宫周围的韧带、血管、阴道壁，因此阴道断端创面较大，彻底愈合时间一般需要3个月以上。在手术中应用本发明实施例5制备的冲洗液，直接作用于手术创面和创面环境，提高创面损伤组织细胞的修复因子群水平，以促进创面组织细胞的增殖、再生，加快创面愈合，减少甚至避免并发症。

1、受试人群选择，符合以下条件

1.1，子宫肌瘤大，采用腹腔镜下全子宫切除术的患者

1.2年龄：45岁以上

1.3病情：子宫肌瘤在5cm×5cm以上，需要采取全子宫切除；

1.4患者及家属自愿接受。

2、受试人群分组

2.1采取随机、对照的原则，对募集的患者进行分组，分为治疗组和对照组

2.2治疗组在手中中采用实施例5制备的外用冲洗液，对照组按常规。

2.3治疗组20例，对照组20例子。

3、治疗方法

3.1治疗组在手术中切除子宫并对创面消毒后，使用实施例5制备的外用冲洗液50mL左右冲洗，创面缝合后再适量冲洗，并留10～15mL实施例5制备的外用冲洗液于腹腔中。

3.2对照组按常规手术过程，不使用实施例5的外用冲洗液。

4、疗效判断指标

4.1以术后恢复情况，确定疗效判断指标。分为术后褐色出血持续时间，术后腹部疼痛持续时间（从手术开始到完全没有疼痛感的天数），术后发生并发症例数，术后恢复工作时间四项指标。

4.2术后是否发生并发症包括盆腔粘连、不全肠梗阻，手术创面脓肿等。

4.3术后随访，术后门诊随诊。

5、治疗结果指标及疗效分析

5.1治疗组、对照组治疗前后疗效指标变化情况统计表3：

表3

指标名称及单位	治疗组（20例）	对照组（20例）
			术后褐色出血持续时间（平均天数）	6.8	12.3
术后腹部疼痛感持续时间（平均天数）	48.5	89.3
			术后发生并发症（总例数）	0	3
术后恢复工作时间（平均天数）	55.6	98.7

注：治疗组与对照组，四项指标均有显著差异性，P<0.01

5.2对照组术后发生并发症3例中，一例是盆腔粘连，一例是不全肠梗阻，一例是输卵管书卵巢周围脓肿。

5.3从统计表3中的的指标统计情况看，治疗组与对照组四项指标均存在显著差异性，P<0.01。治疗组使用实施例5的外用冲洗液后，术后情况与对照组相比，术后褐色出血持续时间、疼痛持续时间明显缩短，创面愈合速度明显快于对照组，并且无并发症发生，愈合质量明显高于对照组。

6、试验结论

试验结果显示，在手术中使用实施例5的组织修复冲洗液，细胞修复因子直接作用于手术创面和创面环境，可以提高创面损伤组织细胞的修复因子群水平，促进创面组织细胞的增殖、再生、修复，促进创面快速愈合，减少甚至避免并发症的发生。

（三）本发明实施例6制备的水凝胶对难愈性小腿外伤伤口治疗疗效报告

引言：慢性难愈性伤口是指一类与创伤部位和宿主有关的创面，在预期的时间内不能正常的愈合。小腿由于软组织薄弱，血液循环差，外伤后极易形成慢性创面。常规治疗一般经2～3月后仍难以愈合。

对此类难愈性创面应用本发明实施例6制备的水凝胶，可迅速形成一层保护膜，细胞修复因直接作用于创面和创面环境，提高创面损伤组织细胞的修复因子群水平，以促进创面组织细胞的增殖、再生、修复，加快创面愈合，避免再次感染，避免形成疤痕。

1、受试人群选择，符合以下条件

1.1，小腿外伤，常规治疗45天以上仍未愈合者；

1.2进入慢性感染阶段，伤口感染并已经影响到周围组织；

1.3患者及家属自愿接受。

2、受试人群分组

2.1采取随机、对照的原则，对募集的患者进行分组，分为治疗组和对照组

2.2治疗组采用实施例6制备的外用水凝胶涂抹创面；对照组口服消炎抗菌药物，创面喷抹云南白药。

2.3治疗组20例，对照组20例

2.4创面面积最小者为0.5×3cm，最大为12×10cm，

3、治疗方法

3.1治疗组治疗方法：首次处理，常规清创，清除失活组织及不健康的肉芽组织，无菌冲洗干净脓性分泌物。然后将实施例6制备的外用水凝胶滴或喷于创面，2～3分钟后成膜即可。第二次处理创面，常规清创后将实施例6制备的外用水凝胶滴或喷于创面，2～3分钟后成膜即可。每日3次。

3.2对照组治疗方法：口服或者静脉滴注抗菌消炎药物，创面清创后喷抹云南白药，常规包扎。每日3次。

4、疗效判断指标

4.1创面完全愈合时间，从治疗开始到创面完全愈合为止的天数。

4.2创面愈合质量百分比:

优:新生皮肤柔软、光滑、无明显瘢痕

一般：新生皮肤欠柔软、不光滑、有明显瘢痕

4.3创面愈合中再感染次数

5、治疗结果指标及疗效分析

5.1治疗组、对照组治疗前后疗效指标变化情况统计表4：

表4

注：治疗组与对照组，两项指标均有显著差异性，P<0.01

5.2从统计表4中的的指标统计情况看，治疗组与对照组两项指标均存在显著差异性，P<0.01。治疗组使用实施例6制备的外用水凝胶后，创面迅速愈合，愈合过程中无一例再感染，愈合质量全为优，无明显疤痕，相对于对照组的相关指标，差异非常明显。

6、试验结论

试验结果显示，应用本发明实施例6制备的创面修复水凝胶于难愈性创面，可迅速形成一层保护膜，通过细胞修复因子直接作用于创面和创面环境，提高创面损伤组织细胞的修复因子群水平，促进创面组织细胞的增殖、再生，修复，可使创面迅速愈合，避免再次感染，减少形成疤痕。

Claims (12)

1.一种具有细胞修复功能的组合物，其特征在于，它每毫升中含有以下成分：

（1）生长因子群，包括：

血小板源性生长因子PDGF≥600pg、血管内皮生长因子VEGF≥3300pg、干细胞因子受体SCF R≥75pg；

（2）具有修复功能的蛋白质群，以含氮量计，为0.3～0.8mg；

（3）多肽、氨基酸类，以含氮量计，为0.5～1.0mg。

2.权利要求1所述的具有细胞修复功能的组合物，每毫升中含有以下成分：

（1）生长因子群，包括：

血小板源性生长因子PDGF≥600pg、血管内皮生长因子VEGF≥3300pg、干细胞因子受体SCF R≥75pg；

（2）具有修复功能的蛋白质群，以含氮量计，为0.5～0.8mg；

（3）多肽、氨基酸类，以含氮量计，为0.8～1.0mg。

3.权利要求1或3所述的任意一种具有细胞修复功能的组合物，每毫升中进一步含有以下含量的生长因子：

4.权利要求3所述的具有细胞修复功能的组合物，每毫升中再进一步含有以下含量的生长因子：

5.权利要求1所述的具有细胞修复功能的组合物，每毫升中含有以下含量的成分：

（1）生长因子群，包括：

（2）具有修复功能的蛋白质群，以含氮量计，为0.51mg；

（3）多肽、氨基酸类，以含氮量计，为0.84mg。

6.权利要求1所述的具有细胞修复功能的组合物，每毫升中含有以下含量的成分：

（1）生长因子群，包括：

（2）具有修复功能的蛋白质群，以含氮量计，为0.51mg；

（3）多肽、氨基酸类，以含氮量计，为0.84mg。

7.权利要求1所述的具有细胞修复功能的组合物的制备方法，包括以下步骤：

1）取未成年哺乳动物整体，解剖分离出内脏，得到内脏和非内脏组织，并将得到的非内脏组织去除脂肪组织；

2）用无菌、无热源水对步骤1）得到的内脏和非内脏组织分别进行冲洗；

3）分别将步骤2）得到的内脏和非内脏组织依次进行组织绞碎和细胞破碎，直至物料的颗粒粒径不大于2μm，得到内脏匀浆和非内脏匀浆；

4）将步骤3）得到的非内脏匀浆与注射用水按1:2～5的重量比混合匀浆；然后在得到的匀浆中按酶底物浓度0.5～5%w/w加入胰酶或胰蛋白酶，于40℃～60℃下水解1～6小时，再经灭酶后得到非内脏酶解液；

5）将步骤3）得到的内脏匀浆加入步骤4）得到的非内脏酶解液中，混合均匀，得到混合酶解液；

6）在步骤5）得到的混合酶解液中按0.09～0.15mol/L加入氯化钠，恒温25℃～50℃保持0.5～3小时；得到盐溶混合物；

7）将步骤6）得到的盐溶混合物进行病毒灭活后冷冻离心，取中间液；中间液再经超滤、除菌处理，得到所述的具有细胞修复功能的组合物。

8.权利要求7所述的制备方法，其特征在于：步骤1）所述的未成年哺乳动物为哺乳动物胚胎或初生哺乳动物。

9.权利要求7所述的制备方法，其特征在于：步骤3）所述的细胞破碎是将组织绞碎得到的组织碎块在-20℃～-10℃进行速冻，然后对速冻后的组织碎块在20～25℃进行解冻，冻融物再经胶体磨机械破碎，如此冻融和机械破碎的过程反复进行2-5次。

10.权利要求1所述的具有细胞修复功能的组合物在制备预防和治疗多种细胞损伤所致疾病的药物制剂中的应用。

11.权利要求10所述的应用，其特征在于，所述的细胞损伤所致疾病包括：组织创伤、因细胞损伤的积累导致的疾病、自身免疫性疾病、肿瘤或进行性神经肌肉营养不良。

12.权利要求11所述的应用，其特征在于：所述的因细胞损伤的积累导致的疾病包括因细胞损伤的积累导致的器官萎缩、器官功能衰退、器官衰竭或衰老或者老年退行性疾病；所述的自身免疫性疾病包括系统性红斑狼疮、重症肌无力、甲状腺功能亢进或原发性胆汁性肝硬变。