CN101717765A - 一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂 - Google Patents

一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂 Download PDF

Info

Publication number
CN101717765A
CN101717765A CN200910260985A CN200910260985A CN101717765A CN 101717765 A CN101717765 A CN 101717765A CN 200910260985 A CN200910260985 A CN 200910260985A CN 200910260985 A CN200910260985 A CN 200910260985A CN 101717765 A CN101717765 A CN 101717765A
Authority
CN
China
Prior art keywords
concentration
cyclomaltodextrin glucanotransferase
cyclodextrin
enzyme preparation
enzyme
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN200910260985A
Other languages
English (en)
Other versions
CN101717765B (zh
Inventor
吴敬
吴丹
郑贤良
陈坚
陈晟
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shandong Yellow Triangle Biotechnology Industry Research Institute Co.,Ltd.
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN2009102609850A priority Critical patent/CN101717765B/zh
Publication of CN101717765A publication Critical patent/CN101717765A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN101717765B publication Critical patent/CN101717765B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Landscapes

  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

本发明公开了一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂，具有极其优异的储存稳定性，在40℃保存60天，其酶活保留率仍高达95％以上，解决了由于产品运送或储存时间较长导致产品应用性能下降的问题。本发明提供的液体酶制剂复配方法简单，原料来源丰富并且成本低，特别适合在工业上推广。

Description

一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂
技术领域
本发明涉及一种复配酶制剂，特别是一种用于环糊精生产的环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂。
背景技术
环糊精葡萄糖基转移酶(CGTase，EC 2.4.1.19)是一种多功能酶，能够催化三种转糖基反应(歧化反应，环化反应，耦合反应)和一种水解反应。通过分子内转糖基反应CGTase能将淀粉及淀粉类似物转化为环糊精，常见的有6、7和8个葡萄糖单元的分子，分别称为α-、β-和γ-环糊精。。环糊精能与客体分子形成包含复合物，从而改变客体分子的物理和化学性质，因此能广泛应用于分析化学、农业、生物技术、医药、食品和化妆品等领域。
生产环糊精的方法主要有化学法和生物法。由于环糊精溶解度较大，化学法制备比较困难，而且会对环境造成较大污染，因此生物法目前被认为是极具应用潜力的方法，目前，环糊精的工业化生产均采用酶法合成，即在环糊精葡萄糖基转移酶催化作用下，通过环化反应转化淀粉及相关基质合成环糊精。另外，通过偶合和歧化反应，CGTase先将淀粉或糊精转化为单糖、双糖或低聚糖，然后将这些糖分子作为供体转移到各种受体分子上，从而改善受体分子的性质，如CGTase可催化低聚糖转移到蔗糖或果糖上制备具有难蚀性的偶合糖，还可催化甜菊苷、L-抗坏血酸、鼠李糖等进行糖基化，显著提高这些物质的使用性能。
酶法的反应温度主要在50-100℃之间，当CGTase在50℃时，其半衰期为0.5h，在60℃保温0.5h后则导致酶基本失活；另外保存于37℃的CGTase发酵液7天后就几乎完全丧失酶活，严重影响了CGTase的工业化应用。
目前国内还没有关于CGTase酶制剂贮存稳定性的相关报道。工业应用中由于固体粉末酶制剂成本高，且处理过程中，酶活力有一定损失，因此工业用酶制剂倾向于把液体发酵液直接作为酶制剂，但其贮存稳定性不如粉末状酶制剂高。因此CGTase液体酶制剂需要一种有效地复配方法来提高其贮存稳定性。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是提供一种具有良好储藏稳定性的环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂，用于环糊精工业化生产。
为解决上述问题，本发明的技术方案是：
一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂，由环糊精葡萄糖基转移酶、甘油、CaCl2、PEG400以及明胶组成。
所述复配酶制剂，含有3g/L-5g/L蛋白质含量的环糊精葡萄糖基转移酶，优选4g/L蛋白质含量的环糊精葡萄糖基转移酶；含有体积分数为10-20％的甘油、5-10％PEG400和质量分数0.5-1％明胶，优选体积比为20％的甘油、10％的PEG400和质量分数1％的明胶；含有0.1g/L-0.2g/L的CaCl2，优选0.1g/L的CaCl2。
所述组分中，环糊精葡萄糖基转移酶来源于软化芽胞杆菌(Paenibacillus macerans，中国典型微生物保藏中心，CCTCC M 208063)以及利用软化芽胞杆菌(CCTCCM 208063)来源的环糊精葡萄糖基转移酶基因构建的工程菌(有高产α-环糊精能力的环糊精葡萄糖基转移酶的突变体及突变方法，申请号200910029154；具有高产β-环糊精能力的环糊精葡萄糖基转移酶的突变体及突变方法，申请号200910029153；一种α-环糊精葡萄糖基转移酶基因的克隆与表达，申请号200810024162.3)。
环糊精葡萄糖基转移酶制备方法为，微生物液体深层发酵，并将发酵液离心去除菌体后进行超滤浓缩。
环糊精葡萄糖基转移酶在复配酶制剂中蛋白质含量的测定采用考马斯亮蓝法。
环糊精葡萄糖基转移酶的测定方法为：取10μL样品(对照不加样品)，加入0.2mL pH9.0的0.2M甘氨酸-氢氧化钠缓冲溶液，0.2mL 0.2％马铃薯淀粉溶液(空白不加马铃薯淀粉溶液)，40℃反应10min后加入0.5mL 0.5M醋酸终止反应，加入3mL 0.005％碘液显色，在700nm处测定吸光值(A)，以吸光值下降10％的酶量为1个单位(张树政.酶制剂工业[M].北京：科学出版社，1984.549)。
本发明提供的环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂具有极其优异的储存稳定性，在40℃保存60天，其酶活保留率仍高达95％以上，解决了由于产品运送或储存时间较长导致产品应用性能下降的问题；本发明提供的液体酶制剂复配方法简单，原料来源丰富并且成本低，特别适合在工业上推广。
具体实施方式：
实施例1环糊精葡萄糖基转移酶的制备
软化芽胞杆菌(Paenibacillus macerans，CCTCC M 208063)的发酵培养基(1L)：
甘油：10g；蛋白胨：18g；酵母膏：20g；NH4Cl：12g；KH2PO4：2.31g；K2HPO4-3H2O：16.43；MgCl2：5mmol。
软化芽胞杆菌(Paenibacillus macerans，CCTCC M 208063)的发酵培养条件：
3L发酵罐，培养基装液量为1.5L，接入菌体在37℃条件下培养72h后下罐，将发酵液12000rpm离心15min除去菌体，得到上清液，即为所需发酵液。
实施例2
调发酵液pH为6.5，选用截留分子量为3万道尔顿的醋酸纤维滤膜进行超滤浓缩至蛋白含量为8-10g/L。
复配液体酶制剂各组分的含量如下：
环糊精葡萄糖基转移酶    蛋白含量3g/L
甘油                            10％
CaCl2                           0.1g/L
PEG400                          5％
明胶                            0.5％
复配后的液体酶制剂放置于40℃保存60天，其酶活保留率分别为95％，见表1。
实施例3
调发酵液pH为6.5，选用截留分子量为3万道尔顿的醋酸纤维滤膜进行超滤浓缩至蛋白含量为8-10g/L。
复配液体酶制剂各组分的含量如下：
环糊精葡萄糖基转移酶    蛋白含量5g/L
甘油                            20％
CaCl2                           0.2g/L
PEG400                          5％
明胶                            0.5％
复配后的液体酶制剂放置于40℃保存60天，其酶活保留率分别为96％，见表1。
实施例4
调发酵液pH为6.5，选用截留分子量为3万道尔顿的醋酸纤维滤膜进行超滤浓缩至蛋白含量为8-10g/L。
复配液体酶制剂各组分的含量如下：
环糊精葡萄糖基转移酶    蛋白含量4g/L
甘油                            20％
CaCl2                           0.1g/L
PEG400                          10％
明胶                            1％
复配后的液体酶制剂放置于40℃保存60天，其酶活保留率分别为100％，见表1。
表1复配酶制剂的保存效果
  实施例   酶活保留率(40℃保存60天)
  1   95％
  2   96％
  3   100％
对比例1
调发酵液pH为8.8，将其置于40℃保存1天和3天，其酶活保留率分别为30.4％和0。
对比例2
调发酵液pH为6.5，置于40℃保存1天和3天，其酶活保留率分别为50.8％和35.9％。
对比例3
调发酵液pH为6.5，选用截留分子量为3万道尔顿的醋酸纤维滤膜进行超滤浓缩至蛋白含量为8-10g/L，调节成蛋白含量4g/L的酶液，置于40℃保存1天和3天，其酶活保留率分别为75.4％和50.8％。
以上所述为优选实施例，不能据此限定本发明之权利范围，根据本发明所做的同等替换均属于发明所覆盖的范围。

Claims (3)

1.一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂，其特征在于该酶制剂是一种液体酶制剂；其组成为：环糊精葡萄糖基转移酶、甘油、CaCl2、PEG400以及明胶；所述环糊精葡萄糖基转移酶为蛋白质含量为3g/L-5g/L的发酵液，甘油浓度为10％-20％(体积分数)，CaCl2浓度为0.1g/L-0.2g/L，PEG400浓度为5％-10％(体积分数)，明胶浓度为0.5％-1％(质量分数)。
2.权利要求1或2所述复配酶制剂，其特征在于所述环糊精葡萄糖基转移酶来源于软化芽孢杆菌(Paenibacillus macerans，中国典型微生物保藏中心，CCTCC M 208063)以及利用软化芽胞杆菌(CCTCC M 208063)来源的环糊精葡萄糖基转移酶基因构建的工程菌。
3.权利要求1所述复配酶制剂，其特征在于各组分含量为：蛋白质浓度为4g/L的环糊精葡萄糖基转移酶、体积分数20％的甘油、10％的PEG400和质量分数1％的明胶，含量为0.1g/L的CaCl2。
CN2009102609850A 2009-12-18 2009-12-18 一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂 Active CN101717765B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2009102609850A CN101717765B (zh) 2009-12-18 2009-12-18 一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN2009102609850A CN101717765B (zh) 2009-12-18 2009-12-18 一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN101717765A true CN101717765A (zh) 2010-06-02
CN101717765B CN101717765B (zh) 2012-05-30

Family

ID=42432404

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2009102609850A Active CN101717765B (zh) 2009-12-18 2009-12-18 一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN101717765B (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103667102A (zh) * 2013-09-23 2014-03-26 江南大学 一种环糊精葡萄糖基转移酶生产菌株及其应用
CN104099312A (zh) * 2014-07-18 2014-10-15 湖南新鸿鹰生物工程有限公司 一种用于啤酒酿造的液体复配酶及其制备方法
CN104099315A (zh) * 2014-07-18 2014-10-15 天津天绿健科技有限公司 一种啤酒液体复配酶的制备方法
CN104099314A (zh) * 2014-07-18 2014-10-15 绍兴上虞宏晟技术转让服务有限公司 一种稳定的液体复配酶
CN104099313A (zh) * 2014-07-18 2014-10-15 天津天绿健科技有限公司 一种啤酒液体复配酶
CN104560933A (zh) * 2014-12-25 2015-04-29 江南大学 一种液态脯氨酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR920006397B1 (ko) * 1990-08-30 1992-08-06 한국식품개발연구원 내열성 사이클로말토덱스트린 글루카노트란스퍼라제의 제조방법
CN100372925C (zh) * 2004-12-27 2008-03-05 郑州大学 一种生产环糊精葡萄糖基转移酶的方法及其专用菌株

Cited By (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103667102A (zh) * 2013-09-23 2014-03-26 江南大学 一种环糊精葡萄糖基转移酶生产菌株及其应用
CN103667102B (zh) * 2013-09-23 2016-05-18 江南大学 一种环糊精葡萄糖基转移酶生产菌株及其应用
CN104099312A (zh) * 2014-07-18 2014-10-15 湖南新鸿鹰生物工程有限公司 一种用于啤酒酿造的液体复配酶及其制备方法
CN104099315A (zh) * 2014-07-18 2014-10-15 天津天绿健科技有限公司 一种啤酒液体复配酶的制备方法
CN104099314A (zh) * 2014-07-18 2014-10-15 绍兴上虞宏晟技术转让服务有限公司 一种稳定的液体复配酶
CN104099313A (zh) * 2014-07-18 2014-10-15 天津天绿健科技有限公司 一种啤酒液体复配酶
CN104099315B (zh) * 2014-07-18 2016-04-06 天津天绿健科技有限公司 一种啤酒液体复配酶的制备方法
CN104099312B (zh) * 2014-07-18 2016-08-24 湖南新鸿鹰生物工程有限公司 一种用于啤酒酿造的液体复配酶及其制备方法
CN104560933A (zh) * 2014-12-25 2015-04-29 江南大学 一种液态脯氨酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂
CN104560933B (zh) * 2014-12-25 2019-06-21 江南大学 一种液态脯氨酸特异性内切蛋白酶复配酶制剂

Also Published As

Publication number Publication date
CN101717765B (zh) 2012-05-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Öner Microbial production of extracellular polysaccharides from biomass
CN101717765B (zh) 一种环糊精葡萄糖基转移酶复配酶制剂
Sitanggang et al. Aspects of glucosamine production using microorganisms.
CN101215592A (zh) 生产普鲁兰多糖的发酵方法
CN103710326B (zh) 一种β-葡萄糖苷酶及其应用
Guimarães Carbohydrates from biomass: sources and transformation by microbial enzymes
CN102234672A (zh) 一种淀粉质原料的酶解方法和一种柠檬酸的制备方法
CN103444988A (zh) 米曲霉降解秸秆生产蛋白饲料的方法
Rojas et al. Recovery of starch from cassava bagasse for cyclodextrin production by sequential treatment with α-amylase and cyclodextrin glycosyltransferase
CN102250931B (zh) 一个编码β-环糊精葡萄糖基转移酶的基因及其应用
JPH051718B2 (zh)
CN110484452B (zh) 一种能降解稻草产2-苯乙醇的草酸青霉及其应用
US5686132A (en) Glucans having a cycle structure, and processes for preparing the same
CN111154747A (zh) 一种混菌发酵提高几丁质脱乙酰基酶产量的方法
Jayalakshmi et al. Microbial enzymatic production of fructooligosaccharides from sucrose in agricultural harvest
CN105238770A (zh) 一种原位定向拆分制备内切菊粉酶的方法及其制备低聚果糖的工艺
CN115868615A (zh) 一种利用茯苓菌发酵提升松花粉抗氧化活性的工艺
Singh et al. A novel media optimized for production of pullulan in flask type fermentation system
CN102373254B (zh) 一种淀粉质原料的酶解方法和柠檬酸的制备方法
Ali et al. Nutritional optimizations for improved exo-inulinase production from Aspergillus oryzae for high fructose syrup preparations
Yu et al. Efficient conversion of cane molasses into Tremella fuciformis polysaccharides with enhanced bioactivity through repeated batch culture
CN103834708A (zh) 一种生物多糖结冷胶的高效生产方法
CN113121714B (zh) 一种具有益生活性的灵芝寡糖及制备方法和应用
CN108949612B (zh) 一株大肠埃希氏菌及其应用
CN117413924A (zh) 兼具有抑菌和促发酵作用的组合物及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CP02 Change in the address of a patent holder

Address after: No. 258 Wuxing Jiayuan, Liangxi District, Wuxi City, Jiangsu Province

Patentee after: Jiangnan University

Address before: 214122 Jiangsu province Wuxi Li Lake Road No. 1800, Jiangnan University State Key Laboratory of food science and technology

Patentee before: Jiangnan University

CP02 Change in the address of a patent holder
TR01 Transfer of patent right

Effective date of registration: 20230903

Address after: Room 301, Block F, Technical Innovation Center Auxiliary Building, Intersection of Wisdom Road and Haitang Road, Nonggao District, HuangTriangle, Dongying City, Shandong Province, 257345

Patentee after: Shandong Yellow Triangle Biotechnology Industry Research Institute Co.,Ltd.

Address before: No. 258 Wuxing Jiayuan, Liangxi District, Wuxi City, Jiangsu Province

Patentee before: Jiangnan University

TR01 Transfer of patent right