CN101713768A - 猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法 - Google Patents
猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN101713768A CN101713768A CN200910153262A CN200910153262A CN101713768A CN 101713768 A CN101713768 A CN 101713768A CN 200910153262 A CN200910153262 A CN 200910153262A CN 200910153262 A CN200910153262 A CN 200910153262A CN 101713768 A CN101713768 A CN 101713768A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- blood
- biological sample
- early warning
- urine
- pig
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Images
Landscapes
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
本发明提供了猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，包括以下步骤：步骤一将生猪饲喂盐酸克伦特罗，同时采集生猪的尿液和血液；步骤二取步骤一中生猪的尿液和血液的样品并加入无水碳酸钠溶液后进行有机溶剂提取，提取后加入稀盐酸反萃取，反萃取液直接阳离子小柱后，用氨化甲醇洗脱，洗脱液吹干后经硅烷化试剂衍生，最后进行气相色谱质谱分析；步骤三把步骤二所得的尿液和血液中的克伦特罗含量进行相关性分析，并建立线性方程。本发明的优点在于利用血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，克服现有监控生猪中违禁使用克伦特罗生物样品的不足，样品易得，覆盖面广，同时血液样品杂质相对较少，分析相对简单，具有准确效果较好等优点。
Description
技术领域
本发明属于分析化学和农业技术领域，涉及动物食品中药物残留的方法，尤其涉及猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法。
背景技术
克伦特罗(clenbuterol)是一种人工合成β-肾上腺素受体激动剂类药物，商品名称为平喘素，俗称瘦肉精，本用于治疗哮喘等疾病，在发现它能显著具有促进生长和提高动物瘦肉率的作用之后，曾一度作为饲料添加剂广泛应用畜牧业。但克伦特罗毒性大，易在动物组织中蓄积，从而引发了一系列的中毒事件。因此，为确保畜禽产品安全，我国于1997年禁止克伦特罗在动物生产中使用。但是受经济利益的驱使，克伦特罗的使用屡禁不止，一个很重要的原因就是监管手段落后。目前，监控克伦特罗用的靶组织主要有动物可食组织和动物尿液等。由于血液相对尿液中克伦特罗含量相对较低的原因，血液中克伦特罗的监控一直未能引起重视，而实际上猪血液样品对于兽医部门来说是最容易获得的样品，也是覆盖面最全的样品。
中国专利申请[申请号为：CN02131321]，名称为“一种免疫层析一步法检测β-肾上腺素激动剂类药物的方法及试纸的制备”，其关键技术主要包括待检样品的预处理方法、硝酸纤维素膜的制备方法、胶体金结合物的制备方法、胶体金结合物垫的制备及试纸条的组装方法等。其检测原理是样品中β-兴奋剂类药物和胶体金结合垫上的限量的胶体金标记抗β-兴奋剂类药物抗体结合，多余的胶体金标记抗β-兴奋剂类药物抗体再和硝酸纤维素膜上的β-兴奋剂类药物反应，达到简便、快速、单份筛查β-兴奋剂类药的一种或多种之目的。但该技术仍采用的是传统的胶体金免疫层析技术，检测时间长，可达20多分钟，检测限还不能达到0.3ppb(μg/L)，且检测的特异性不够强。当前已申请的专利中用胶体金免疫试纸条检测盐酸克伦特罗的最低检测下限一般在0.09ppb(ng/ml)以上，因而还不能达到快速、超微量检测的需要，并且结果的判定较为困难。
随着分析技术的发展，对于血液中低含量的克伦特罗分析已成为可能。目前筛选方法中酶联免疫分析技术(ELISA)的灵敏度通常均能达到0.1μg/L；确证方法中气相色谱质谱联用(GC/MS)技术和液相色谱串联质谱技术(HPLC/MS/MS)的灵敏度通常也能达到0.5μg/L以下。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，而提供为了更好地监控克伦特罗在生猪生产中的使用，利用猪血液作为生物样品分析克伦特罗含量，同时根据猪尿液和血液中两者的相关性从而推出尿液中的克伦特罗含量，使其不仅覆盖面最广，又容易获得的生物样品用于监控克伦特罗的违禁使用，克服现有监控生猪中违禁使用克伦特罗生物样品的不足的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，步骤一是将生猪饲喂盐酸克伦特罗，同时采集生猪的尿液和血液；步骤二是取步骤一中一定量生猪的尿液和血液的样品并加入无水碳酸钠溶液后进行有机溶剂提取，在提取后加入稀盐酸反萃取，反萃取液直接阳离子小柱后，用氨化甲醇洗脱，洗脱液吹干后经硅烷化试剂衍生，最后进行气相色谱质谱分析；步骤三是把步骤二所得的尿液和血液中的克伦特罗含量进行相关性分析，并建立线性方程。
采取的措施还包括：
在上述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法中，所述的步骤一为在给生猪喂盐酸克伦特罗后并距初次喂药时间为0d、0.25d、1d、1.25d、2d、5d、7d、10d、15d时分别同时采集血液和尿液。
在上述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法中，所述的步骤一为在给生猪喂盐酸克伦特罗距停药时间为0d、0.25d、1d、1.25d、2d、4d、8d、13d、19d时分别同时采集血液和尿液。
在上述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法中，所述的步骤二具体为准确吸取一定量生猪的尿液和血液于离心管中，加入15mL的乙酸乙酯，再加入10.0％无水碳酸钠溶液，涡旋混合1min后以4500～5500r/min的速度离心2min，吸取上层有机溶剂于离心管中，再加入10mL的乙酸乙酯在旋涡混合器上混合1min，离心后吸取有机溶剂并合并提取液。
在上述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法中，所述的步骤二具体为在收集的有机溶剂中加入5mL的0.10mol/L的盐酸溶液进行反萃取，旋涡混合30s，以4500～5500r/min的速度离心2min，吸取下层溶液，同样步骤重复萃取一次，合并两次萃取液。
在上述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法中，所述的步骤二具体萃取液阳离子小柱后依次用5mL的甲醇、5mL的水和5mL的30mmol/L盐酸活化，然后将萃取液上样至固相萃取小柱中，依次用5mL的水和5mL甲醇淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，抽干小柱，再用5mL的4％氨化甲醇溶液洗脱。
在上述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法中，所述的步骤二具体为在50℃水浴中用氮气吹干上述洗脱液，加入100μL甲苯和100μLBSTFA，在80℃的烘箱中加热衍生1h，待冷却后进行气相色谱质谱分析。
在上述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法中，所述的有机溶剂为乙酸乙酯。
与现有技术相比，本发明的优点在于利用血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，克服现有监控生猪中违禁使用克伦特罗生物样品的不足，具有样品易得，覆盖面广的特点；同时血液样品由于杂质相对较少，于是分析相对简单，具有确证效果较好的优点。
附图说明
图1是饲喂期间猪尿中克伦特罗含量的示意图；
图2是饲喂期间猪血液中克伦特罗含量的示意图；
图3是休药期间猪尿中克伦特罗含量的示意图；
图4是休药期间猪血液中克伦特罗含量的示意图；
图5是本发明的检测步骤示意图。
具体实施方式
以下是本发明的具体实施例并结合附图，对本发明的技术方案作进一步的描述，但本发明并不限于这些实施例。
实施例一：饲喂期间的猪血液和尿液相关性
如图1、图2和图5所示，首先进行生猪的尿液和血液采样：在距初次喂药时间为0d、0.25d、1d、1.25d、2d、5d、7d、10d、15d时分别同时采集血液和尿液。其中d是英文单词字母day的简写，中文意思为时间“天”。
然后进行分析：准确吸取一定量样品于离心管中，加入15mL乙酸乙酯，再加入10％无水碳酸钠溶液，涡旋混合1min后以5000r/min的速度离心2min，吸取上层有机溶剂于离心管中，再加入10mL的乙酸乙酯在旋涡混合器上混合1min，离心后吸取有机溶剂并合并提取液。在收集的有机溶剂中加入5mL的0.10mol/L的盐酸溶液进行反萃取，旋涡混合30s，以5000r/min的速度离心2min，吸取下层溶液，同样步骤重复萃取一次，合并两次萃取液，其中所述的有机溶剂为乙酸乙酯；萃取液阳离子小柱后依次用5mL的甲醇、5mL的水和5mL的30mmol/L盐酸活化，然后将萃取液上样至固相萃取小柱中，依次用5mL的水和5mL的甲醇淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，抽干小柱，再用5mL的4％氨化甲醇溶液洗脱，在50℃水浴中用氮气吹干上述洗脱液，加入100μL甲苯和100μLBSTFA，在80℃的烘箱中加热衍生1h，待冷却后进行气相色谱质谱分析；最后是把所得的尿液和血液中的克伦特罗含量进行相关性分析，并建立线性方程。
实施例二：休药期猪血液和尿液相关性
如图3、图4和图5所示，首先进行生猪的尿液和血液采样：在距停药时间为0d、0.25d、1d、1.25d、2d、4d、8d、13d、19d时分别同时采集血液和尿液。其中d是英文字母day的简写，中文意思为天。
然后进行分析：准确吸取一定量样品于离心管中，加入15mL的乙酸乙酯，再加入10％无水碳酸钠溶液，涡旋混合1min后以5000r/min的速度离心2min，吸取上层有机溶剂于离心管中，再加入10mL乙酸乙酯在旋涡混合器上混合1min，离心后吸取有机溶剂并合并提取液，在收集的有机溶剂中加入5mL的0.10mol/L的盐酸溶液进行反萃取，旋涡混合30s，以5000r/min的速度离心2min，吸取下层溶液，同样步骤重复萃取一次，合并两次萃取液，其中所述的有机溶剂为乙酸乙酯。萃取液阳离子小柱后依次用5mL的甲醇、5mL的水和5mL的30mmol/L盐酸活化，然后将萃取液上样至固相萃取小柱中，依次用5mL的水和5mL的甲醇淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，抽干小柱，再用5mL的4％氨化甲醇溶液洗脱；在50℃水浴中用氮气吹干上述洗脱液，加入100μL甲苯和100μLBSTFA，在80℃的烘箱中加热衍生1h，待冷却后气相色谱质谱分析；最后是把所得的尿液和血液中的克伦特罗含量进行相关性分析，并建立线性方程。
相关性研究在整个休药期间，尿液中克伦特罗含量和血液中克伦特罗含量也呈现正相关关系，Y＝61.162X-22.242，r＝0.9402。
本发明的优点在于利用猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，同时根据猪尿液和血液中两者的相关性从而推出尿液中的克伦特罗含量，克服现有监控生猪中违禁使用克伦特罗生物样品的不足，具有样品易得，覆盖面广的特点；同时血液样品由于杂质相对较少，于是分析相对简单，具有确证效果较好等优点。
本文中所描述的具体实施例仅仅是对本发明精神作举例说明。本发明所属技术领域的技术人员可以对所描述的具体实施例做各种各样的修改或补充或采用类似的方式替代，但并不会偏离本发明的精神所定义的范围。
Claims (8)
1.猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，其特征是：包括以下步骤：
步骤一是将生猪饲喂盐酸克伦特罗，同时采集生猪的尿液和血液；
步骤二是取步骤一中一定量生猪的尿液和血液的样品并加入无水碳酸钠溶液后进行有机溶剂提取，在提取后加入稀盐酸反萃取，反萃取液直接阳离子小柱后，用氨化甲醇洗脱，洗脱液吹干后经硅烷化试剂衍生，最后进行气相色谱质谱分析；
步骤三是把步骤二所得的尿液和血液中的克伦特罗含量进行相关性分析，并建立线性方程。
2.根据权利要求1所述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，其特征是：所述的步骤一为在给生猪喂盐酸克伦特罗后并距初次喂药时间为0d、0.25d、1d、1.25d、2d、5d、7d、10d、15d时分别同时采集血液和尿液。
3.根据权利要求1所述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，其特征是：所述的步骤一为在给生猪喂盐酸克伦特罗距停药时间为0d、0.25d、1d、1.25d、2d、4d、8d、13d、19d时分别同时采集血液和尿液。
4.根据权利要求1所述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，其特征是：所述的步骤二具体为准确吸取一定量生猪的尿液和血液于离心管中，加入15mL的乙酸乙酯，再加入10.0％的无水碳酸钠溶液，涡旋混合1min后以4500～5500r/min的速度离心2min，吸取上层有机溶剂于离心管中，再加入10mL的乙酸乙酯在旋涡混合器上混合1min，离心后吸取有机溶剂并合并提取液。
5.根据权利要求4所述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，其特征是：所述的步骤二具体为在收集的有机溶剂中加入5mL的0.10mol/L的盐酸溶液进行反萃取，旋涡混合30s，以4500～5500r/min的速度离心2min，吸取下层溶液，同样步骤重复萃取一次，合并两次萃取液。
6.根据权利要求5所述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，其特征是：所述的步骤二具体萃取液阳离子小柱后依次用5mL的甲醇、5mL的水和5mL的30mmol/L盐酸活化，然后将萃取液上样至固相萃取小柱中，依次用5mL的水和5mL甲醇淋洗柱子，在溶剂流过固相萃取柱后，抽干小柱，再用5mL的4％氨化甲醇溶液洗脱。
7.根据权利要求6所述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，其特征是：所述的步骤二具体为在50℃水浴中用氮气吹干上述洗脱液，加入100μL甲苯和100μLBSTFA，在80℃的烘箱中加热衍生1h，待冷却后进行气相色谱质谱分析。
8.根据权利要求7所述的猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法，其特征是：所述的有机溶剂为乙酸乙酯。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200910153262A CN101713768B (zh) | 2009-10-29 | 2009-10-29 | 猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN200910153262A CN101713768B (zh) | 2009-10-29 | 2009-10-29 | 猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN101713768A true CN101713768A (zh) | 2010-05-26 |
| CN101713768B CN101713768B (zh) | 2012-09-26 |
Family
ID=42417585
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN200910153262A Expired - Fee Related CN101713768B (zh) | 2009-10-29 | 2009-10-29 | 猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN101713768B (zh) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102798560A (zh) * | 2011-08-26 | 2012-11-28 | 上海市计量测试技术研究院 | 克伦特罗基体标准物质及其制备方法 |
| CN103823007A (zh) * | 2014-03-12 | 2014-05-28 | 中山大学 | 固相微萃取与气相色谱质谱联用技术快速检测盐酸克伦特罗的方法 |
| CN113759041A (zh) * | 2021-08-30 | 2021-12-07 | 浙江省检验检疫科学技术研究院 | 超高效合相色谱拆分及检测猪尿中的克伦特罗对映体残留的方法 |
-
2009
- 2009-10-29 CN CN200910153262A patent/CN101713768B/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102798560A (zh) * | 2011-08-26 | 2012-11-28 | 上海市计量测试技术研究院 | 克伦特罗基体标准物质及其制备方法 |
| CN103823007A (zh) * | 2014-03-12 | 2014-05-28 | 中山大学 | 固相微萃取与气相色谱质谱联用技术快速检测盐酸克伦特罗的方法 |
| CN103823007B (zh) * | 2014-03-12 | 2015-12-09 | 中山大学 | 固相微萃取与气相色谱质谱联用技术快速检测盐酸克伦特罗的方法 |
| CN113759041A (zh) * | 2021-08-30 | 2021-12-07 | 浙江省检验检疫科学技术研究院 | 超高效合相色谱拆分及检测猪尿中的克伦特罗对映体残留的方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN101713768B (zh) | 2012-09-26 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Ye et al. | Quantification of the urinary concentrations of parabens in humans by on-line solid phase extraction-high performance liquid chromatography–isotope dilution tandem mass spectrometry | |
| Xiong et al. | Simple and sensitive monitoring of β2-agonist residues in meat by liquid chromatography–tandem mass spectrometry using a QuEChERS with preconcentration as the sample treatment | |
| CN102735768B (zh) | 一种畜禽粪便中雌激素及其结合体的共检测方法 | |
| CN101551362B (zh) | 一种同时检测食品中15种同化激素残留的液相色谱法 | |
| Guo et al. | Molecularly imprinted solid phase extraction method for simultaneous determination of seven nitroimidazoles from honey by HPLC-MS/MS | |
| CN105021756B (zh) | 一种禽蛋中金刚烷胺、金刚乙胺、利巴韦林、吗啉胍残留的多联检测方法 | |
| CN103616467B (zh) | 一种用于检测肉制品中多种镇定剂残留的方法 | |
| CN102507806B (zh) | 一种固相微萃取装置及测定烟叶中挥发性有机酸的方法 | |
| CN107907620A (zh) | 超声萃取‑固相萃取前处理结合液质联用技术同时检测畜禽粪便中六类24种抗生素的方法 | |
| Zou et al. | A rapid method for determination and confirmation of the thyreostats in milk and urine by matrix solid-phase dispersion and gas chromatography–mass spectrometry | |
| Van de Riet et al. | Determination of malachite green and leucomalachite green in a variety of aquacultured products by liquid chromatography with tandem mass spectrometry detection | |
| CN104237434A (zh) | 一种检测食用油中3-氯-1,2-丙二醇酯含量的方法 | |
| CN101713768B (zh) | 猪血液作为生物样品预警克伦特罗残留的方法 | |
| CN104749262A (zh) | 一种快速测定畜禽粪便中氟喹诺酮类药物的方法 | |
| Yilmaz et al. | Determination of carvedilol in human plasma by gas chromatography-mass spectrometry method | |
| CN105181839A (zh) | 一种以多拉菌素为内标物使用液质联用仪检测羊肌肉组织中伊维菌素残留量的方法 | |
| Wu et al. | Determination of ractopamine in pig hair using liquid chromatography with tandem mass spectrometric detection | |
| CN103235117A (zh) | 一种β2-受体激动剂酶联免疫试剂盒及其使用方法和应用 | |
| CN102175812B (zh) | 检测三聚氰胺残留量的薄层色谱法显色剂及其应用 | |
| Boyer et al. | Detection of testosterone propionate administration in horse hair samples | |
| CN104977367B (zh) | 一种畜类尿液中20种β‑兴奋剂类药物残留的检测方法 | |
| da Silva Goncalves et al. | Optimization of a multiresidue and multiclass analysis method for anabolic agents and β2-agonists in bovine urine by GC-MS/MS | |
| CN117250288A (zh) | 一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法和应用 | |
| CN114942297B (zh) | 用于桃红四物汤薄层鉴别方法的展开剂及薄层鉴别方法 | |
| Ahmad et al. | A review Hair tissue analysis: an analytical method for determining essential elements, toxic elements, hormones and drug use and abuse |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| C17 | Cessation of patent right | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20120926 Termination date: 20131029 |