CN117250288A - 一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明属于血浆检测技术领域,尤其涉及一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法和应用。本发明提供的检测方法首先对待测血浆进行去蛋白和衍生化处理,然后用高效液相色谱串联质谱法对血浆中的儿茶酚胺代谢物进行检测,通过特定的色谱条件,在4分钟内即可实现目标儿茶酚胺代谢物之间及其与其他成分之间的分离,检测过程简单而快速,且该检测方法具有较高的准确度、精密度和灵敏度,线性范围覆盖临床检测所需要的定量范围,检测结果可用于辅助诊断患者的PPGL和PH,对于临床应用具有重要意义,还可用于研究药代动力学以及药物的组织分布情况等非诊断目的的研究。
Description
技术领域
本发明属于血浆检测技术领域,尤其涉及一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法和应用。
背景技术
嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma,PCC)和副神经节瘤(paraganglioma,PGL)是具有激素分泌功能的神经内分泌肿瘤,主要合成、分泌和释放大量儿茶酚胺(CA),如肾上腺素、去甲肾上腺素、多巴胺,引起患者血压升高和代谢性改变等一系列临床症,并造成心、脑、肾血管等严重并发症甚至成为患者死亡的主要原因,在普通高血压门诊中患病率为0.2%~0.6%,在儿童高血压患者中为1.7%。PCC和PGL合称为嗜铬细胞瘤和副神经节瘤(PPGL)。PPGL患者的主要临床表现为儿茶酚胺(catecholamine,CA)类物质分泌增多,CA是一类含有儿茶酚和胺基的神经类物质,是人体内重要的神经递质和激素,包括肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)和多巴胺(DA)。CA在儿茶酚-O-甲基转移酶(COMT)的作用下生成变肾上腺素类物质(metanephrines,MNs),主要包括变肾上腺素(MN)、去甲变肾上腺素(NMN)和3-甲氧酪胺(3-MT)。《嗜铬细胞瘤和副神经节瘤诊断治疗的专家共识(2020)》中推荐:诊断PPGL的实验室检查首选血浆游离或尿液甲氧基肾上腺素(MN)、变肾上腺素浓度测定;建议:可同时检测血或尿NE、E、DA及其他代谢产物3-MT等浓度以帮助诊断。
但是儿茶酚胺及其代谢物的极性较大、结构相近,而且在血浆中含量较低、干扰较大,传统的免疫法不能准确定量,而常用化学发光法、荧光法和高效液相色谱法等存在血浆样品前处理过程复杂,所需起始样品量较大,检测过程时间长,实验误差较大,通量低,特异性较差,无法准确区分结构相似的肾上腺素和去甲变肾上腺素等问题。
发明内容
针对以上技术问题,本发明提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,该检测方法能够快速而准确地检测出血浆中的3种儿茶酚胺代谢物MN、NMN和3-MT,操作简便且结果可靠。
为达到上述发明目的,本发明采用了如下技术方案:
本发明第一方面提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法:对待测血浆进行去蛋白和衍生化处理后,用高效液相色谱串联质谱法检测其中的儿茶酚胺代谢物,所述高效液相色谱的色谱条件为:
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;
流动相A为含有0.05%~0.15%v/v甲酸的1~3mmol/L乙酸铵水溶液,流动相B为含有0.05%~0.15%v/v甲酸的乙腈,进行线性梯度洗脱,所述线性梯度洗脱的程序如下:
流速:0.4~0.5mL/min;
柱温:35~45℃。
相对于现有技术而言,本发明采用液质联用分析方法中的色谱条件在4分钟内即可实现目标儿茶酚胺代谢物之间及其与其他成分之间的分离,使该检测方法的实施过程简单而快速,且上述液相色谱条件具有较高的准确度、精密度和灵敏度,线性范围覆盖临床检测所需要的定量范围。该检测方法的检测结果可用于辅助诊断患者的PPGL和PH,对于临床应用具有重要意义,还可用于研究药代动力学以及药物的组织分布情况等非诊断目的的研究。
结合第一方面,所述儿茶酚胺代谢物包括变肾上腺素、去甲变肾上腺素和3-甲氧基酪胺。
结合第一方面,所述色谱柱优选采用Waters ACQUITYBEH C18色谱柱,规格为2.1×50mm,1.7μm。
结合第一方面,流动相A为含有0.1%v/v甲酸的2mmol/L乙酸铵水溶液,流动相B为含有0.1%v/v甲酸的乙腈,利用该流动相能够获得更好的峰形,且响应最强。
结合第一方面,流速为0.5ml/min。在本发明的色谱条件下,当流速为0.5ml/min时,出峰时间较早,峰形较好,响应更强。
结合第一方面,柱温为40℃。在本发明的色谱条件下,柱温为40℃时响应更强。
结合第一方面,所述高效液相色谱串联质谱法中,质谱条件为:
电离模式:ESI+;
雾化器流速:3L/min;
加热器流速:10L/min;
干燥器流速:10L/min;
加热模块温度:400℃;
DL管温度:250℃;
离子源温度:300℃;
扫描模式:MRM。
结合第一方面,对血浆进行衍生化处理的操作包括:
将待测血浆去除蛋白后,加入丹磺酰氯溶液和pH为9~11的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液,混合后在30~70℃衍生化5~30min,然后加入4%~6%v/v甲酸水溶液,混合后离心,取上清液。
经丹磺酰氯衍生化后,待测成分的极性和离子化效率得以改善,在反相色谱柱上能与干扰物很好分离,且检测灵敏度能很好地满足要求,仅需要200μl血浆作为起始材料即可满足上述检测,与传统检测方法相比,大大减少了所需的血液量。
优选地,所述碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液的pH为9.5~11。使用该pH的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液能够在检测时获得更高的响应强度。最优选的pH为9.5。
优选地,所述衍生化的时间为15min。在该衍生化时间下,能够获得更高的响应强度。
优选地,所述衍生化的温度为60℃。
结合第一方面,采用溶剂标准曲线定量法计算血浆中儿茶酚胺代谢物的含量。儿茶酚胺及其代谢物是内源性化合物,目前没有儿茶酚胺及其代谢物的空白血浆可以购买,而常用的替代基质牛血清蛋白中也能检测到儿茶酚胺代谢物,所以本方案优选采用溶剂标准曲线定量法。
优选地,用于生成所述溶剂标准曲线的溶液为所述儿茶酚胺代谢物溶液,其溶剂为含维生素C的甲醇水溶液。进一步优选地,维生素C的浓度为5mg/ml,甲醇水溶液的浓度为50%~90%v/v。
第二方面,本发明提供了上述检测方法在儿茶酚胺药代动力学研究中的应用。
第三方面,本发明提供了上述检测方法在儿茶酚胺组织分布情况研究中的应用。
附图说明
图1为实施例1中NMN、MN、3-MT标准品及其氘代同位素内标以及分解成不同离子后的液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白,以下结合具体实施例,对本发明进行进一步详细说明。应当理解,此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明,并不用于限定本发明。
儿茶酚胺(包括肾上腺素E、去甲肾上腺素NE和多巴胺DA)及其代谢物(变肾上腺素MN、去甲变肾上腺素NMN和3-甲氧基酪胺3-MT)在血浆中的浓度变化与许多病理过程息息相关,含量超标会引发高血压与心肌梗塞,含量过低会导致低血压,临床上可以用于辅助诊断高血压、甲亢、嗜铬细胞瘤、神经母细胞瘤等内分泌相关的疾病。现MNs已作为PPGL特异性的定性诊断标志物。对血浆中儿茶酚胺代谢物的检测还可以非诊断目的的用于研究药代动力学以及药物的组织分布情况。
目前常用的儿茶酚胺及代谢物的检测方法有电化学分析法、荧光分析法和液质联用法等,但存在血浆样品前处理过程复杂且需要起始样品量较大,过程时间长,实验误差较大,通量低,特异性较差,无法用常规检测方法区分结构非常类似的肾上腺素和甲氧基去甲肾上腺素等问题。儿茶酚胺及其氧甲基化代谢物的检测难点还在于它们特别容易受到血浆内源性干扰物的干扰。并且由于极性大,导致分析物在反相色谱柱上无法很好地保留,而色谱保留是基于色谱的干扰分离的基础。如果运用亲水色谱柱,分析物能得到较好的保留,然而亲水柱的分离度有限,对于极其相似的干扰物仍无法很好的分离,无限延长色谱分析时间或更换柱效更好的分析柱或许可以增加干扰的分离,但灵敏度也会降低。检测的灵敏度和抗干扰的特异性是方法的主要指标,而实现高通量检测则是方法能在临床广泛应用的基础。
为了实现准确而高效地检测血浆中的儿茶酚胺代谢物变肾上腺素MN、去甲变肾上腺素NMN和3-甲氧基酪胺3-MT,本发明实施例提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,该检测方法基于高效液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)和柱前衍生化,可在5分钟内分离、检测血浆中的上述3种儿茶酚胺代谢物,操作快速、简单且结果可靠。
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;
流动相A为含有0.05%~0.15%v/v甲酸的1~3mmol/L乙酸铵水溶液,流动相B为含有0.05%~0.15%v/v甲酸的乙腈,进行线性梯度洗脱,所述线性梯度洗脱的程序如下:
流速:0.4~0.5mL/min;
柱温:35~45℃。
本申请实施例中,对血浆进行衍生化处理的操作包括:将待测血浆去除蛋白后,加入丹磺酰氯溶液和pH为9~11的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液,混合后在30~70℃衍生化5~30min,然后加入4%~6%v/v甲酸水溶液,混合后离心,取上清液。
本申请实施例中,质谱条件为:电离模式:ESI+;雾化器流速:3L/min;加热器流速:10L/min;干燥器流速:10L/min;加热模块温度:400℃;DL管温度:250℃;离子源温度:300℃;扫描模式:MRM。
下面分多个实施例对本发明实施例进行进一步的说明。
以下实施例中的主要仪器和试剂:
LCMSMS8050CL系统(岛津,日本),真空离心浓缩仪(北京吉艾姆科技有限公司,中国),梅特勒分析天平(可读性:0.0001克;德国);甲酸(上海阿拉丁生化科技有限公司,中国),HPLC级乙腈(安谱),分析纯碳酸氢钠和分析纯碳酸钠(上海阿拉丁生化科技有限公司,中国),丹磺酰氯(DNS-Cl)(Sigma,MO,美国)儿茶酚胺及其代谢物的标准品和氘代同位素内标(IsoSciences)。
以下实施例中的样本信息如表1所示:
表1样本信息
实施例1
本实施例提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,儿茶酚胺代谢物为去甲变肾上腺素、变肾上腺素和3-甲氧酪胺。
1、溶液的配制
1.1标准曲线溶液的配制
标准曲线溶液的配制:精确量取3-甲氧酪胺、变肾上腺素、去甲变肾上腺素的标准品,分别用含5mg/ml维生素C的50%v/v甲醇水溶液稀释,配制标准品储备液;使用50%v/v甲醇水溶液稀释标准品储备液并混合,配制混合标准曲线溶液,使其浓度范围分别为:3-甲氧酪胺20-2000pg/mL、变肾上腺素20-2000pg/mL、去甲变肾上腺素20-2000pg/mL。
1.2内标溶液配制
用分析天平精确称取3-甲氧酪胺(d4)、变肾上腺素(d3)、去甲变肾上腺素(d3),分别用含5mg/ml维生素C的50%v/v甲醇水溶液溶解,配制内标储备液;使用50%v/v甲醇水溶液稀释内标储备液并混合,配制混合内标工作液,使其浓度分别为:2~10ng/mL 3-甲氧酪胺(d4)、2~10ng/mL变肾上腺素(d3)、2~10ng/mL去甲变肾上腺素(d3)。
1.3质控品配制
用分析天平精确称取3-甲氧酪胺、变肾上腺素、去甲变肾上腺素标准品,分别用含5mg/ml维生素C 50%v/v甲醇水溶液溶解,配制质控品储备液;使用50%v/v甲醇水溶液稀释质控品储备液并混合,分别配制低浓度、高浓度三个浓度混合质控品工作液,储存于-80℃冰箱中备用。浓度如表2所示。
表2混合质控品工作液浓度
2、前处理的流程
2.1待测血浆样本处理
血液的离心:取待检血液至少2mL,在3000rpm下离心15min,分离得到上清液血浆,作为待测血浆样本,置于-80℃保存备用。
待测血浆样本处理:取0.2ml待测血浆样本至1.5ml离心管中,加入低温保存含有已知浓度儿茶酚胺及代谢产物的氘代同位素内标工作液600μL(进行蛋白沉淀),用旋涡混合器涡旋振荡5min,然后在4℃13000rpm离心10min;在避光条件下取上清液550μL于另一个离心管中,置于真空浓缩仪2.5h除溶剂(浓缩样本);然后向离心管中迅速加入浓度为0.5mg/ml的丹磺酰氯乙腈溶液40μL和0.05M Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液(pH=9.5)40μL(衍生化反应),涡旋10s后,在60℃800rpm恒温衍生15min,加入浓度为5%甲酸水溶液10μL,涡旋10s;然后在4℃、13000rpm离心10min,取上层液进行检测。
2.2混合标准曲线溶液/混合质控品工作液处理
分别取0.2ml 6个不同浓度标准品溶液至1.5ml离心管中,加入低温保存含有已知浓度儿茶酚胺及代谢产物的氘代同位素内标的乙腈溶液600μL,用旋涡混合器涡旋振荡5min,然后在4℃13000rpm离心10min;在避光条件下取上清液550μL于另一个离心管中,置于真空浓缩仪2.5h除溶剂(浓缩样本);然后向离心管中迅速加入浓度为0.5mg/ml丹磺酰氯溶液40μL和0.05M Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液(pH=9.5)40μL,涡旋10s后,在60℃800rpm恒温衍生5min,加入浓度为5%甲酸水溶液10μL,涡旋10s;然后在4℃13000rpm离心10min,取上层液进行检测。
3、LC-MS/MS检测
用高效液相色谱串联质谱法检测血浆中的儿茶酚胺代谢物,高效液相色谱的色谱条件为:
色谱柱:Waters ACQUITYBEH C18色谱柱,规格为2.1×50mm,1.7μm;
流动相A为含有0.1%v/v甲酸和2mmol/l乙酸铵的水溶液,流动相B为含有0.1%v/v甲酸的乙腈,进行线性梯度洗脱,线性梯度洗脱的程序如下:
时间/min | 流动相B/% |
0→1 | 30 |
1→2 | 30→70 |
2→3 | 70 |
3→4 | 70→30 |
流速:0.5mL/min;
柱温:40℃;
进样体积:10μL。
进而进行质谱分析,质谱条件为:
电离模式:ESI+;
雾化器流速:3L/min;
加热器流速:10L/min;
干燥器流速:10L/min;
加热模块温度:400℃;
DL管温度:250℃;
离子源温度:300℃;
扫描模式:MRM。
MRM参数如表3所示。
表3 MRM参数
按上述色谱条件进行检测,NMN、MN、3-MT标准品及其氘代同位素内标以及分解成不同离子后的液相色谱图如图1所示。由图可见,各代谢物之间能够良好分离,并说明该方法能够准确区分结构相似的MN和NMN、3-MT。
4、方法学验证
4.1线性关系
按浓度由低到高对标准曲线溶液进行测定,以定量色谱峰面积-浓度作图,得到标准曲线。结果表明:3种分析物的线性相关系数r均在0.99以上,线性范围、检测限(LOD)和定量限(LOQ)如表4所示。
表4线性关系
4.2准确度
取经过前处理的同一份血浆,平行制备6份血浆样品,并使用上述LC-MS/MS检测方法对这6份血浆样品进行检测,根据4.1中的线性方程计算血浆样品中各儿茶酚胺代谢物的实际含量;接着,向已知浓度的6份血浆样品中加入已知含量的标准品溶液,并使用上述LC-MS/MS检测方法进行检测,根据4.1中的线性方程计算6份加样样品中各儿茶酚胺代谢物的实测含量,并计算加样回收率。结果如表5所示。
表5准确度考察结果
目标物 | LQC(理论值) | LQC(回收率) | HQC(理论值) | HQC(回收率) |
NMN | 100 | 109.683 | 1000 | 109.8429 |
MN | 100 | 116.605 | 1000 | 106.1528 |
3-MT | 100 | 105.576 | 1000 | 90.1046 |
4.3精密度
取同一份按2.1的方法处理得到的待测血浆样本溶液,使用上述LC-MS/MS检测方法连续进样分析6次,根据每个儿茶酚胺代谢物的峰面积数据结果计算RSD值,结果如表6所示。
表6精密度考察结果
目标物 | 峰面积(RSD/%) |
NMN | 11.3 |
MN | 7.8 |
3-MT | 4.2 |
实施例2~5
实施例2~5分别提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法。
1、溶液的配制:同实施例1。
2、前处理的流程:基本同实施例1,区别在于Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液的pH不同,具体如表7所示。
3、LC-MS/MS检测:同实施例1。
表7实施例2~5中Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液的pH
实施例6~10
实施例6~10分别提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法。
1、溶液的配制:同实施例1。
2、前处理的流程:基本同实施例1,区别在于在60℃800rpm恒温衍生时间不同,具体如表8所示。
3、LC-MS/MS检测:同实施例1。
表8实施例6~10中衍生化时间
组别 | 实施例6 | 实施例7 | 实施例8 | 实施例9 | 实施例10 |
衍生化时间(min) | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 |
实施例11~14
实施例11~14分别提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法。
1、溶液的配制:同实施例1。
2、前处理的流程:基本同实施例1,区别在于恒温衍生的温度不同,具体如表9所示。
3、LC-MS/MS检测:同实施例1。
表9实施例11~14中衍生化温度
组别 | 实施例11 | 实施例12 | 实施例13 | 实施例14 |
衍生化温度(℃) | 30 | 40 | 50 | 70 |
实施例15
本实施例提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法。
1、溶液的配制:同实施例1。
2、前处理的流程:同实施例1。
3、LC-MS/MS检测:基本同实施例1,区别在于流速为0.4ml/min。
实施例16~17
本实施例提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法。
1、溶液的配制:同实施例1。
2、前处理的流程:同实施例1。
3、LC-MS/MS检测:基本同实施例1,区别在于柱温不同,具体如表10所示。
表10实施例16、17中的柱温
组别 | 实施例16 | 实施例17 |
柱温(℃) | 35 | 45 |
实施例18~25
本实施例提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法。
1、溶液的配制:同实施例1。
2、前处理的流程:同实施例1。
3、LC-MS/MS检测:基本同实施例1,区别在于乙酸铵浓度和甲酸浓度,具体如表11所示。
表11实施例18~25中的柱温
组别 | 乙酸铵浓度(mmol/l) | 甲酸浓度(wt%) |
实施例18 | 1 | 0.05 |
实施例19 | 1 | 0.1 |
实施例20 | 1 | 0.15 |
实施例21 | 2 | 0.05 |
实施例22 | 2 | 0.15 |
实施例23 | 3 | 0.05 |
实施例24 | 3 | 0.1 |
实施例25 | 3 | 0.15 |
对比例1
本实施例提供了一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法。
1、溶液的配制:同实施例1。
2、前处理的流程:基本同实施例1,区别在于Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液的pH为11.5。
3、LC-MS/MS检测:同实施例1。
检验例1
本检验例考察了实施例1~5和对比例1中NMN标准品的质谱响应强度(进样体积5μL,测试的溶度为600pg/ml),结果如表12所示。
表12实施例1~5和对比例1的响应强度
PH | 9 | 9.5 | 10 | 10.5 | 11 | 11.5 |
响应强度 | 29693 | 62692 | 47270 | 46029 | 45962 | 0 |
检验例2
本检验例考察了实施例1、6~10中NMN标准品的响应强度(进样体积5μL,测试的溶度为600pg/ml),结果如表13所示。
表13实施例1、6~10的响应强度
衍生化时间(min) | 5 | 10 | 15 | 20 | 25 | 30 |
响应强度 | 14528 | 42587 | 65473 | 64327 | 63458 | 61428 |
检验例3
本检验例考察了实施例1、11~14中NMN标准品的响应强度(进样体积5μL,测试的溶度为600pg/ml),结果如表14所示。
表14实施例1、11~14的响应强度
衍生化温度(℃) | 30 | 40 | 50 | 60 | 70 |
响应强度 | 12568 | 38657 | 43875 | 65752 | 23856 |
检验例4
本检验例考察了实施例1、15中NMN标准品的响应强度(进样体积5μL,测试的溶度为600pg/ml),结果如表15所示。
表15实施例1、15的响应强度
流速 | 0.5ml/min | 0.4ml/min |
响应强度 | 145197 | 102807 |
检验例5
本检验例考察了实施例1、16、17中NMN标准品的响应强度(进样体积5μL,测试的溶度为600pg/ml),结果如表16所示。
表16实施例1、16、17的响应强度
柱温(℃) | 35 | 40 | 45 |
响应强度 | 75976 | 96292 | 88976 |
检验例6
本检验例考察了实施例1、18~25中NMN标准品的响应强度(进样体积5μL,测试的溶度为600pg/ml),结果如表17所示。
表17实施例1、18~25的响应强度
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.一种血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,其特征在于,对待测血浆进行去蛋白和衍生化处理后,用高效液相色谱串联质谱法检测其中的儿茶酚胺代谢物,所述高效液相色谱的色谱条件为:
色谱柱:十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱;
流动相A为含有0.05%~0.15%v/v甲酸的1~3mmol/L乙酸铵水溶液,流动相B为含有0.05%~0.15%v/v甲酸的乙腈,进行线性梯度洗脱,所述线性梯度洗脱的程序如下:
流速:0.4~0.5mL/min;
柱温:35~45℃。
2.根据权利要求1所述的血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,其特征在于,所述儿茶酚胺代谢物包括变肾上腺素、去甲变肾上腺素和3-甲氧基酪胺。
3.根据权利要求2所述的血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,其特征在于,所述色谱柱为Waters ACQUITYBEH C18色谱柱,规格为2.1×50mm,1.7μm;和/或
所述流动相A为含有0.1%v/v甲酸的2mmol/L乙酸铵水溶液,所述流动相B为含有0.1%v/v甲酸的乙腈;和/或
所述流速为0.5ml/min;和/或
所述柱温为40℃。
4.根据权利要求2所述的血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,其特征在于,所述高效液相色谱串联质谱法中,质谱条件为:
电离模式:ESI+;
雾化器流速:3L/min;
加热器流速:10L/min;
干燥器流速:10L/min;
加热模块温度:400℃;
DL管温度:250℃;
离子源温度:300℃;
扫描模式:MRM。
5.根据权利要求1~4任一项所述的血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,其特征在于,对血浆进行衍生化处理的操作包括:将待测血浆去除蛋白后,加入丹磺酰氯溶液和pH为9~11的碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液,混合后在30~70℃衍生化5~30min,然后加入4%~6%v/v甲酸水溶液,混合后离心,取上清液。
6.根据权利要求5所述的血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,其特征在于,所述碳酸钠-碳酸氢钠缓冲液的pH为9.5~11;和/或
所述衍生化的时间为15min;和/或
所述衍生化的温度为60℃。
7.根据权利要求1或2所述的血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,其特征在于,采用溶剂标准曲线定量法计算血浆中儿茶酚胺代谢物的含量。
8.根据权利要求7所述的血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法,其特征在于,用于生成所述溶剂标准曲线的溶液为所述儿茶酚胺代谢物的溶液,其溶剂为含维生素C的甲醇水溶液。
9.权利要求1~8任一项所述血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法在儿茶酚胺药代动力学研究中的应用。
10.权利要求1~8任一项所述血浆中儿茶酚胺代谢物的检测方法在儿茶酚胺组织分布情况研究中的应用。
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CN117554550A (zh) * | 2023-12-29 | 2024-02-13 | 大连博源医学科技有限公司 | 血浆中儿茶酚胺代谢物的液相色谱串联质谱检测方法和组合稳定剂 |
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2023
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