CN101705274A - 一种提高法夫酵母细胞内虾青素含量的法夫酵母培养方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种提高法夫酵母虾青素含量的法夫酵母培养方法。该方法包括法夫酵母野生菌株JCM9042菌种固体种子制备、一级种子培养、二级种子培养与发酵培养以及发酵液的虾青素含量测定。本发明的培养方法使用麦角甾醇合成抑制剂，可明显地促进法夫酵母中虾青素的积累，与不使用麦角甾醇合成抑制剂相比，本发明的培养方法能够提高虾青素的含量高达3-8倍以上。本发明的方法简单易行，麦角甾醇合成抑制剂及培养基成本低廉，有效地降低虾青素的生产成本，有利于工业化培养。
Description
【技术领域】
本发明属于微生物生物技术领域。更具体地，本发明涉及提高法夫酵母细胞内虾青素含量的法夫酵母培养方法。
【背景技术】
虾青素是一种广泛存在自然界的橘红色类胡萝卜素，具有极强的抗氧化活性，其抗氧化活性是维生素E的500倍。动物实验表明，虾青素有抑制肿瘤发生、增强免疫功能等多方面的生理作用；可以防治神经性疾病，如早老性痴呆症和帕金森症等，可以作为抗衰老和预防动脉硬化等疾病的药物或保健品；可以用于防治眼科疾病，尤其对糖尿病眼疾的发病率有明显降低效果。
美国食品和药物管理局(FDA)和欧盟已允许天然虾青素作为人类的膳食添加成分进入市场。目前，国际上利用天然虾青素开发人类的高级营养保健食品和药品，其产品定位主要在强化免疫系统功能、保护视网膜和中枢神经系统免受氧化破坏、抗炎、抗紫外辐射、缓解压力、减缓肌肉疲劳等方面，国外已开发了含虾青素的口服抗感染和消炎制剂，配合阿司匹林服用可加强其药效。在日本，虾青素已经在化妆品工业上广泛应用。
虾青素是全球类胡萝卜素中销售额第二大的品种，还广范用于大马哈鱼与鲑鱼的养殖业。虾青素不仅仅做为水产养殖动物的着色剂，越来越多的证据表明，虾青素是水产动物必需的“维生素“，对它们的正常生长、提高存活率和繁殖率具有极为重要的作用将法夫酵母细胞添加到鲑鱼和鳟鱼的饵料中，虾青素沉积在皮肤和肌肉中使其呈红色。研究表明，虾青素是大马哈鱼和虹鳟鱼饲料中的首选色素。
虾青素用作饲料添加剂能提高动物的免疫力和存活力，且能大量的沉积在动物的皮肤和肌肉等组织中，增色的同时增加其营养价值。在商业化的鱼类和甲壳类动物(如鲑鱼、虾、蟹、虹鳟鱼等)的饲料中添加虾青素可极大提高产品的市场价值。
因此，虾青素在保健品、医药、饲料、食品和日用化妆品等领域具有广阔的应用前景。
法夫酵母属于担子菌门，杂担子菌纲，红法夫酵母属，是生产虾青素的主要微生物之一。体细胞呈椭圆形，单个、成对，偶尔成短串，不存在真正的菌丝体，但可能存在退化的假菌丝体，产厚垣孢子，液体培养基上形成菌膜。与其他酵母相似，红法夫酵母能够利用多种碳源进行发酵，如葡萄糖、纤维二糖、麦芽糖、木糖、乳糖和甘油等。红法夫酵母发酵所需要的温度相对较低，适宜的生长温度为18～22℃。最适pH在5.0～6.9之间。红法夫酵母在好氧发酵过程中产酸，释放CO2并同时合成虾青素。
发酵液中的氧含量对其生长和虾青素的合成有显著的促进作用。
麦角甾醇是真核细胞膜结构的必要组分，该合成通路中的其他固醇类物质同时还具有其他重要功能。
法夫酵母中，虾青素、麦角甾醇来自共同前体乙酰CoA，虾青素和麦角甾醇的合成都经由甲羟戊酸途径，乙酰CoA在乙酰乙酰CoA转酰基酶的作用下生成乙酰乙酰CoA，再经两步反应生成的甲羟戊酸是萜类化合物的共同前体，由HMG-CoA合成酶和HMG-CoA还原酶的催化，甲羟戊酸在甲羟戊酸激酶，磷酸甲羟戊酸异构酶等酶的作用下生成法尼酯焦磷酸，法尼酯焦磷酸则是虾青素与麦角甾醇的分支节点.其中HMG-CoA还原酶是二者代谢的关键基因，受麦角甾醇的反馈抑制.另外HMG-CoA合成酶也受到高浓度的麦角甾醇的抑制.
本发明人发现，目前由法夫酵母培养获得虾青素的产率还不高，不适应工业化的要求，迫切需要研究提高法夫酵母虾青素含量的方法，因此，本发明人通过大量的实验与分析研究，终于完成了本发明。
【发明内容】
[要解决的技术问题]
本发明的目的是提供一种提高法夫酵母细胞内虾青素含量的法夫酵母培养方法。
[技术方案]
本发明是通过下述技术方案实现的。
本发明涉及一种使用抑制剂提高法夫酵母细胞内虾青素含量的法夫酵母培养方法。
该方法的步骤如下：
A、PDA固体斜面培养基配制如下：200g马铃薯经洗净去皮切碎后，加水1000ml煮沸半个小时，用纱布过滤，其滤液再加20g葡萄糖，混匀后用去离子水补充液体体积至1000ml，在温度115℃下灭菌15分钟，得到PDA液体培养基，往该PDA液体培养基中加入15g琼脂，待琼脂溶解、凝固后得到PDA固体培养基；
B、配制种子培养基：将36-44g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、2.0-2.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氢钾、0.4-0.6g硫酸镁七水合物溶解于蒸馏水，定溶至1000ml，调节pH至5.8-6.2；
C、配制发酵培养基：将100-120g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、0.4-0.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氢钾、0.4-0.6g硫酸镁七水合物溶解于蒸馏水，定溶至1000ml，调节pH至5.8-6.2；
D、培养条件与方法
(1)种子制备：将含有法夫酵母野生菌株JCM9042的菌液涂布在步骤(A)制备的PDA固体培养基平板上，在温度20-23℃下进行斜面培养70-80小时，然后置于温度3-5℃下保存；
(2)一级种子培养：从上述(1)得到的法夫酵母野生菌株JCM9042固体斜面上挑取菌苔接种到所述种子培养基中，在温度20-23℃及摇床振荡速度180-220rpm下培养3-4天；
(3)二级种子培养：上述(2)得到的一级种子以种子培养基体积计按照8-12％接种量加到所述的种子培养基中，在温度20-23℃与振荡速度180-220rpm下培养34-40小时；采用紫外分光光度计测定波长600nm处的吸光值，测定该培养液的细胞密度OD600。
(4)发酵培养：上述(3)得到的二级种子以发酵培养基体积计按照4-8％接种量加到所述的发酵培养基中，在20-23℃与振荡速度180-200rpm下培养14-18小时，加入麦角甾醇合成抑制剂，再接着培养88-112小时，得到法夫酵母野生菌株JCM9042的发酵液。
根据本发明的一种实施方式，所述的种子培养基是将40g葡萄糖、4.0g酵母粉、2.4g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中，并定容至1000ml制备得到的.
根据本发明的另一种实施方式，所述的发酵培养基是将110g葡萄糖、4.0g酵母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中，并定容至1000ml，制备得到的。
根据本发明的另一种实施方式，所述的麦角甾醇合成抑制剂是一种或多种选自氟康唑，酮康唑或特比奈芬的麦角甾醇合成抑制剂。
优选地，所述的麦角甾醇合成抑制剂是一种或多种选自氟康唑或特比奈芬的麦角甾醇合成抑制剂。
根据本发明的另一种实施方式，所述的麦角甾醇合成抑制剂加入量达到在发酵培养基中的浓度为10-100mg/L。
根据本发明，所述法夫酵母野生菌株JCM9042中虾青素的含量达到490.0μg/g以上。
优选地，所述的虾青素含量是采用高压液相色谱法检测的。
下面将更详细地描述本发明。
根据本发明，使用从日本理化研究所购买的野生型法夫酵母菌株(Phaffia rhodozyma JCM9042)作为起始菌株。
本发明涉及一种提高法夫酵母细胞中虾青素含量的法夫酵母培养方法。
该方法的步骤如下：
(1)种子制备：将含有法夫酵母野生菌株JCM9042的菌液涂布在步骤(A)制备的PDA固体培养基平板上，在温度20-23℃下进行斜面培养70-80小时，然后置于温度3-5℃下保存；
所述PDA固体斜面培养基配制如下：200g马铃薯经洗净去皮切碎后，加水1000ml煮沸半个小时，用纱布过滤，其滤液再加20g葡萄糖，混匀后用去离子水补充液体体积至1000ml，在温度115℃下灭菌15分钟，得到PDA液体培养基，往该PDA液体培养基中加入15g琼脂，待琼脂溶解、凝固后得到PDA固体培养基。
所述斜面培养使用的设备是本技术领域的技术人员熟知的仪器，如试管和茄子瓶。
(2)一级种子培养：从上述(1)得到的法夫酵母野生菌株JCM9042固体斜面上挑取菌苔接种到所述种子培养基中，在温度20-23℃及摇床振荡速度180-220rpm下培养3-4天。
所述的种子培养基配制方法如下：将36-44g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、2.0-2.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氢钾、0.4-0.6g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中并定溶于100ml，调节pH至5.8-6.2。
优选地，所述的液体种子培养基是将36-44g葡萄糖、4.0g酵母粉、2.4g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中，并定容至1000ml制备得到的。
(3)二级种子培养：上述(2)得到的一级种子以种子培养基体积计按照8-12％接种量加到所述的种子培养基中，在温度20-23℃与振荡速度180-220rpm下培养34-40小时。采用紫外分光光度计测定波长600nm处的吸光值，测定该培养液的细胞密度OD600。
二级种子培养使用的种子培养基与一级种子培养使用的种子培养基完全相同。
(4)发酵培养：上述(3)得到的二级种子以发酵培养基体积计按照4-8％接种量加到所述的发酵培养基中，在温度20-23℃与振荡速度180-200rpm下培养14-18小时，加入麦角甾醇合成抑制剂，再接着培养88-112小时，得到法夫酵母野生菌株JCM9042的发酵液。
麦角甾醇合成(在动物细胞中对应胆固醇的合成)一直是开发抗真菌药物及动物高血脂等相关疾病药物所针对的代谢途径。HMG-CoA还原酶受真菌来源的它汀类药物的抑制。此类药物在临床广泛使用，但抑制HNG-CoA还原酶同时会抑制非固醇类萜类化合物如虾青素，各种维生素等，这些萜类化合物在细胞信号转导及其他生命活动有重要作用。特比奈芬、氟康唑、酮康唑等抑制剂则是针对麦角甾醇合成后期的酶类。其中特比奈芬抑制鲨烯氧环酶(erg1)，氟康唑和酮康唑抑制羊毛甾醇C-14脱甲基酶(erg11)。通过添加抑制剂抑制麦角甾醇的合成可以有效地减少麦角甾醇的含量，为虾青素的合成积累前体，同时打破麦角甾醇对萜类化合物合成关键酶HMG-CoA还原酶的反馈抑制，增加虾青素合成的代谢流。
在本发明中，所述的麦角甾醇合成抑制剂是一种或多种选自氟康唑，酮康唑或特比奈芬的麦角甾醇合成抑制剂。
优选地，所述的麦角甾醇合成抑制剂是一种或多种选自氟康唑或特比奈芬的麦角甾醇合成抑制剂。
在发酵培养基中，所述的麦角甾醇合成抑制剂加入量达到在该二级种子发酵培养基中的浓度为10-100mg/L。
本发明使用的麦角甾醇合成抑制剂氟康唑，酮康唑、特比奈芬都是目前在市场上可以获得的产品。
所述的发酵培养基配制方法如下：
将100-120g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、0.4-0.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氢钾、0.4-0.6g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中并定溶于1000ml，调节pH至5.8-6.2。
优选地，所述的液体高糖种子培养基是将100g葡萄糖、4.0g酵母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中并定溶于1000ml制备得到的。
在这个步骤中，发酵培养通常使用的设备例如是本技术领域的技术人员熟知的恒温摇床，也可以使用类似的设备，例如发酵罐。
在本发明中，pH调节通常使用无机酸或无机碱进行，无机酸例如是盐酸、硫酸或磷酸，无机碱例如是氢氧化钠、碳酸钠等。一般使用无机酸或无机碱水溶液进行调节，它们的浓度不应该太高，例如0.1-0.5mol/L。
根据本发明，所述的法夫酵母野生菌株JCM9042中虾青素的含量达到490.0μg/g以上。
优选地，所述的虾青素含量是采用高压液相色谱法检测的。
虾青素含量测定方法如下。
1、制作虾青素的分析标准曲线：
采用本技术领域的技术人员熟知的标准曲线制作方法进行.选择的虾青素浓度范围是0.2～25mg/L；高压液相色谱仪(北京创新通恒科技有限公司)，P3000型高压输液泵，UV3000型紫外检测器，液相色谱柱使用迪马钻石二代(北京迪科马科技有限公司)：填料C-18，dp5μm，柱长25cm，内径4mm；流动相：以体积计，甲醇∶水＝97∶3，流速1.0ml/min，检测虾青素的波长为476nm.
根据实验获得的数据绘制出虾青素的分析标准曲线。
2、虾青素的提取：
取1ml采用本发明的法夫酵母野生菌株JCM9042的培养方法得到的发酵液，在转速12000rpm与室温下进行离心分离，除去上清液，收集菌体，然后用去离子水洗两次，把洗涤的菌体加到预热到60℃的二甲亚砜中，再剧烈震荡混匀，在温度60℃水浴中保温20分钟，加入1ml甲醇与二氯甲烷按照体积比3∶1混合得到的提取液，然后静止几分钟，在转速2000rpm与室温下离心一分钟，将离心得到的上清液转移至另一个离心管中，在其同样条件下进行离心分离，其菌体沉淀物重复用预热到60℃的二甲亚砜进行破壁提取，直到菌体为白色为止，汇集提取液。
3、高压液相色谱法检测虾青素的含量：
上述提取液样品在转速12000rpm与室温下进行离心分离，得到的上清液进行HPLC检测，(北京创新通恒科技有限公司)，P3000型高压输液泵，UV3000型紫外检测器，P3000型高压输液泵，UV3000型紫外检测器，使用ZY1104型液相色谱柱(北京迪科马科技有限公司)：填料C-18，dp5μm，柱长25cm，内径4mm；流动相：以体积计，甲醇∶水＝97∶3，流速1.0ml/min.检测波长为476nm，检测物的浓度根据标准品的标准曲线确定。
采用本发明方法培养法夫酵母96小时，再采用高压液相色谱法检测虾青素的含量，这些结果表明，使用所述的麦角甾醇合成抑制剂可以非常明显提高法夫酵母野生菌株JCM9042中虾青素的含量。例如不添加氟康唑时，法夫酵母野生菌株JCM9042中虾青素的含量是57.9μg/g，而根据本发明添加氟康唑时，氟康唑量从10mg/L增加到100mg/L时，法夫酵母野生菌株JCM9042中虾青素的含量从84.7μg/g增加到490.3μg/g。由此可见，添加氟康唑可以使法夫酵母野生菌株JCM9042中虾青素的含量提高八倍。
[有益效果]
本发明提供通过抑制麦角甾醇合成途径，促进法夫酵母中虾青素的生物合成的方法。本发明的培养方法使用麦角甾醇合成抑制剂，可以非常明显地促进法夫酵母中虾青素的积累，与不使用麦角甾醇合成抑制剂相比，本发明的培养方法能够提高虾青素的含量高达3-8倍以上。本发明的方法简单易行，麦角甾醇合成抑制剂及培养基成本低廉，有效地降低虾青素的生产成本，有利于工业化培养。
【具体实施方式】
实施例1：本发明的法夫酵母野生菌株JCM9042的培养
PDA固体斜面培养基配制如下：200g马铃薯经洗净去皮切碎后，加水1000ml煮沸半个小时，用纱布过滤，其滤液再加20g葡萄糖，混匀后用去离子水补充液体体积至1000ml，在温度115℃下灭菌15分钟，得到PDA液体培养基，向该PDA液体培养基中加入15g琼脂，待琼脂溶解、凝固后得到PDA固体培养基。
配制种子培养基：将36-44g葡萄糖、4.0g酵母粉、2.4g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中并定容于1000ml，调节pH至6.0。
配制发酵培养基：将110g葡萄糖、4.0g酵母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中并定容于1000ml，调节pH至6.0.
培养条件与方法：
固体种子制备：将含有法夫酵母野生菌株JCM9042的菌液涂布在前面制备的PDA固体培养基平板上，在温度21℃下进行斜面培养3天，然后置于温度4℃下保存；
一级种子培养：从前面得到的法夫酵母野生菌株JCM9042菌液以种子培养基体积计按照9％接种量加到所述种子培养基中，在温度21℃及摇床振荡速度200rpm下培养3天；
二级种子培养：前面得到的一级种子以种子培养基体积计按照10％接种量加到所述的种子培养基中，在温度21℃与振荡速度200rpm下培养36小时；采用紫外分光光度计测定波长600nm处的吸光值，测得该培养液的细胞密度OD600为15。
发酵培养：前面得到的二级种子以发酵培养基体积计按照6％接种量加到所述的发酵培养基中，在温度21℃与振荡速度200rpm下培养16小时，加入麦角甾醇合成抑制剂氟康唑，达到在所述发酵培养基中的浓度为10-100mg/L，再接着培养108小时，得到法夫酵母野生菌株JCM9042的发酵液。
按照说明书公开的高压液相色谱法检测虾青素含量的方法测定了本发明法夫酵母野生菌株JCM9042发酵液的虾青素含量，其结果列于表1中。
与此同时，还进行了在不添加麦角甾醇合成抑制剂氟康唑情况下的相同试验，其结果也列于表1中。
表1.添加氟康唑对细胞虾青素含量的影响
表1的结果清楚地表明，采用本发明的方法使用麦角甾醇合成抑制剂氟康唑可以将法夫酵母野生菌株JCM9042细胞中的虾青素含量最高提高8倍以上。
实施例2：本发明的法夫酵母野生菌株JCM9042的培养
PDA固体斜面培养基配制如下：200g马铃薯经洗净去皮切碎后，加水1000ml煮沸半个小时，用纱布过滤，其滤液再加20g葡萄糖，混匀后用去离子水补充液体体积至1000ml，在温度115℃下灭菌15分钟，得到PDA液体培养基，向该PDA液体培养基中加入15g琼脂，待琼脂溶解、凝固后得到PDA固体培养基。
配制种子培养基：将40g葡萄糖、4.0g酵母粉、2.4g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中并定容于1000ml，调节pH至6.0。
配制发酵培养基：将110g葡萄糖、4.0g酵母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中并定容于1000ml，调节pH至6.0。
培养条件与方法：
固体种子活化：将含有法夫酵母野生菌株JCM9042的菌液涂布在前面制备的PDA固体培养基平板上，在温度21℃下进行斜面培养3天，然后置于温度4℃下保存；
一级种子培养：从前面得到的法夫酵母野生菌株JCM9042菌液以种子培养基体积计按照10％接种量加到所述种子培养基中，在温度21℃及摇床振荡速度200rpm下培养3天；
二级种子培养：前面得到的一级种子以种子培养基体积计按照10％接种量加到所述的种子培养基中，在温度21℃与振荡速度200rpm下培养36小时；采用紫外分光光度计测定波长600nm处的吸光值，测得该培养液的细胞密度OD600为15。
发酵培养：前面得到的二级种子以发酵培养基体积计按照6％接种量加到所述的发酵培养基中，在温度21℃与振荡速度200rpm下培养16小时，加入麦角甾醇合成抑制剂特比奈芬80mg/L，再接着培养108小时，得到法夫酵母野生菌株JCM9042的发酵液。
按照说明书公开的高压液相色谱法检测虾青素含量的方法测定了本发明法夫酵母野生菌株JCM9042发酵液的虾青素含量，其结果列于表2中。
与此同时，还进行了在不添加麦角甾醇合成抑制剂特比奈芬情况下的相同试验，其结果也列于表2中。
表2.添加特比奈芬对细胞虾青素含量的影响
表2的结果清楚地表明，采用本发明的方法使用麦角甾醇合成抑制剂特比奈芬可以将法夫酵母野生菌株JCM9042细胞中的虾青素含量提高约3倍。
Claims (8)
1.一种提高法夫酵母细胞内虾青素含量的法夫酵母培养方法，其特征在于该方法的步骤如下：
A、PDA固体斜面培养基配制如下：200g马铃薯经洗净去皮切碎后，加水1000ml煮沸半个小时，用纱布过滤，其滤液再加20g葡萄糖，混匀后用去离子水补充液体体积至1000ml，在温度115℃下灭菌15分钟，得到PDA液体培养基，往该PDA液体培养基中加入15g琼脂，待琼脂溶解、凝固后得到PDA固体培养基；
B、配制种子培养基：将36-44g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、2.0-2.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氢钾、0.4-0.6g硫酸镁七水合物溶解于蒸馏水，定溶至1000ml，调节pH至5.8-6.2；
C、配制发酵培养基：将100-120g葡萄糖、3.6-4.4g酵母粉、0.4-0.8g尿素、1.6-2.2g磷酸二氢钾、0.4-0.6g硫酸镁七水合物溶解于蒸馏水，定溶至1000ml，调节pH至5.8-6.2；
D、培养条件与方法
(1)种子制备：将含有法夫酵母野生菌株JCM9042的菌液涂布在步骤(A)制备的PDA固体培养基平板上，在温度20-23℃下进行斜面培养70-80小时，然后置于温度3-5℃下保存；
(2)一级种子培养：从上述(1)得到的法夫酵母野生菌株JCM9042固体斜面上挑取菌苔接种入所述种子培养基中，在温度20-23℃及摇床振荡速度180-220rpm下培养3-4天；
(3)二级种子培养：上述(2)得到的一级种子以种子培养基体积计按照8-12％接种量加到所述的种子培养基中，在温度20-23℃与振荡速度180-220rpm下培养34-40小时；
(4)发酵培养：上述(3)得到的二级种子以发酵培养基体积计按照4-8％接种量加到所述的发酵培养基中，在温度20-23℃与振荡速度180-200rpm下培养14-18小时，加入麦角甾醇合成抑制剂，再接着培养88-112小时，得到法夫酵母野生菌株JCM9042的发酵液。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于将36-44g葡萄糖、4.0g酵母粉、2.4g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中，并定容至1000ml，制备得到所述的种子培养基。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于将110g葡萄糖、4.0g酵母粉、0.6g尿素、2.0g磷酸二氢钾、0.5g硫酸镁七水合物溶于蒸馏水中，并定容至1000ml，制备得到所述的发酵培养基。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的麦角甾醇合成抑制剂是一种或多种选自氟康唑，酮康唑或特比奈芬的麦角甾醇合成抑制剂。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于所述的麦角甾醇合成抑制剂是一种或多种选自氟康唑或特比奈芬的麦角甾醇合成抑制剂。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于所述的麦角甾醇合成抑制剂加入量达到在发酵培养基中的浓度为10-100mg/L。
7.根据权利要求1-6中任一项权利要求所述的方法，其特征在于所述法夫酵母野生菌株JCM9042中虾青素的含量达到490.0μg/g以上。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于所述的虾青素含量是采用高压液相色谱法检测的。
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| CN2009102413544A CN101705274B (zh) | 2009-12-07 | 2009-12-07 | 一种提高法夫酵母细胞内虾青素含量的法夫酵母培养方法 |
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