CN101698851A

CN101698851A - 一种二酰甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质

Info

Publication number: CN101698851A
Application number: CN200910233688A
Authority: CN
Inventors: 管荣展; 张红生; 唐三元; 陈健美; 田琳琳; 郑秀
Original assignee: Nanjing Agricultural University
Current assignee: Nanjing Agricultural University
Priority date: 2009-10-28
Filing date: 2009-10-28
Publication date: 2010-04-28

Abstract

本发明公开了一种二酰基甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质，属于基因工程领域。播娘蒿二酰基甘油酰基转移酶基因DsDGAT的cDNA序列SEQ ID NO.1及其编码的氨基酸序列SEQ ID NO.2。本发明基因为双子叶植物播娘蒿的首次报道，参与播娘蒿种子贮藏油脂的生物合成，mRNA表达分析表明该基因受伤害和低温诱导。转基因实验证明该基因的超量表达能够显著提高油菜籽的含油量和粒重。DsDGAT可作为目的基因导入植物，提高植物种子产量和产油量。

Description

一种二酰甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质

技术领域

本发明公开了一种二酰甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质，属于基因工程领域，具体地涉及植物中油脂合成的关键酶及其编码基因。

技术背景

油料作物种子含油量的提高对于提高其产油量具有至关重要的作用，对于提高油料作物的经济效益具有重要的意义。分离和克隆油脂合成积累的关键基因，通过生物工程的方法提高油料作物的含油量成为科学家追求的目标。

植物油脂合成经过脂肪酸合成和脂肪酸组装2个主要阶段。油脂(TAG)组装过程是通过Kennedy途径完成的，参与该途径主要包括4个酶，其中二脂酰甘油酰基转移酶是催化三脂酰甘油生物合成最后一步，该步骤的酶具有限速作用。二脂酰甘油酰基转移酶活性高，则脂肪酸能够迅速与甘油结合，形成贮藏脂，从而提高油脂积累速率，进一步提高含油量。目前，已经从拟南芥、油菜(GenBank accessionno.AF251794)、烟草(Pierrette Bouvier-Navelet al.2000)、大豆(GenBank accession no.AAS78662)、水稻(GenBank accession no.BAD53762)等物种中分离出来了二脂酰甘油酰基转移酶(DGAT)。

我们首次报道了双子叶植物播娘蒿的二酰甘油酰基转移酶基因。

发明内容

技术问题

本发明的目的在于公开一种二酰甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质，该基因来自播娘蒿，可作为目的基因导入植物，提高植物种子含油量和产量，进行植物品种改良。

技术方案

本发明二酰甘油酰基转移酶基因(DsDGAT)，其核苷酸序列SEQ ID NO.1为：

GCGGATCCTTCTGATTCTCTTTTCGGCATCTTTTTCTTCTTGAAACCTTTTTCCA

AATTCAATTTTTCTTCTGCATGTGTCCGTGACGCTTTTCCTTCTGACGTTCTGA

AGGACTCTTTGAAGCTGTTTCGTTGAACGCTTCGAAATGGCGATTTTGGATTC

TGGAGACGTTACTTTGACCACCACGACGGAGAACGTTGCCGGAGAGTTTATG

GATCTCGATAGGCTTCGTCGACGGAAATCTAGATCGGATTCTAATGGACTTCTT

TCTGATTCTTCATCCGGTATCGATAATTCACCGTCGGATGATGTTGGAGCTCCG

ACCGACGTGAGGAGGGATCGGATTGATTCCGTTGTCAACGAGGGAACAGCCA

ATTTGGCCGGAGATAACGTCGGTGCTGCTGAAATTAGGGAAAACGATGGAGG

AAGAGACGGCGGCGGAGAAAGAAGAGTTAACACCGAGGCTACGTTTACGTAT

CGACCGTCGGTTCCAGCTCATCGGAGGGTGAGGGAGAGTCCACTCAGCTCTG

ACGCAATCTTCAAACAGAGCCATGCCGGATTATTTAACCTCTGTGTAGTAGTTC

TTGTTGCTGTGAACAGTAGACTCATCATTGAAAATCTCATGAAGTACGGTTGG

TTGATCAGAACGGATTTCTGGTTTAGTTCAAGATCTCTGCGAGATTGGCCGCTT

TTCATGTGTTGTCTTTCCCTTTCGATCTTTCCTTTGGCTGCCTTTACTGTAGAGA

AATTGGTACTTCAGAGATACATATCTGAACCTGTTGTCATCATTCTTCATATTATT

ATCTCTACGACAGAGGTTTTGTATCCAGTTTATGTCACACTGAGGTGTGATTCC

GCCTTCTTATCAGGTGTCACATTGATGCTCCTCACTTGCATTGTGTGGCTAAAG

TTGGTTTCTTACGCTCATACTAGCTACGACATAAGATCTCTAGCCAATTCAGCT

GATAAGGCCAATCCTGAAGTCTCTTACTACGTTAGCTTTAAGAGCTTGGCATAT

TTCATGGTTGCTCCCACATTGTGTTATCAGCCGAGCTATCCACGTTCTCCATGTA

TCCGGAAGGGTTGGGTGGCTCGTCAATTTGCAAAACTGGTCATATTCACTGGA

TTCATGGGATTTATCATAGAACAATATATAAATCCTATTGTTAGGAACTCAAAGC

ATCCTTTGAAAGGGGACCTTCTATACGCTATTGAAAGAGTGTTGAAACTTTCT

GTTCCAAATTTATACGTGTGGCTCTGCATGTTCTACTGCTTCTTCCACCTTTGGT

TAAACATATTGGCCGAGCTCCTCTGTTTCGGGGATCGTGAATTCTACAAAGATT

GGTGGAATGCAAAAAGTGTGGGAGATTATTGGAGAATGTGGAATATGCCTGTC

CATAAATGGATGGTTCGACATATATACTTCCCATGCCTACGCAGCAAGATACCG

AAGACCGCCGCCATTATCATTGCTTTCTTAGTCTCTGCAGTCTTTCATGAGCTAT

GCATCGCAGTCCCTTGTCGTCTCTTCAAGCTATGGGCTTTTATGGGGATTATGT

TTCAGGTGCCTTTGGTTTTTATCACAAACTATCTACAAGAAAGGTTTGGCTCAA

TGGTGGGGAACATGATCTTCTGGTTCATCTTCTGCATTTTCGGACAACCGATGT

GTACACTTCTTTATTACCACGACCTGATGAACCGCAAAGGATCGATGTCATGA

AACAACTGTTCGAAATCGACGTTCTTCAGACATCTATGACCTTGTTGGATCTCC

ATTGATGTTGTAGTGGTC。

上述的二酰甘油酰基转移酶基因(DsDGAT)基因来自播娘蒿，其编码的蛋白质，来自播娘蒿(Descurainia sophia)，它具有如下所示的氨基酸序列SEQ ID NO.2：

MAILDSGDVTLTTTTENVAGEFMDLDRLRRRKSRSDSNGLLSDSSSGIDNSPSDD

VGAPTDVRRDRIDSVVNEGTANLAGDNVGAAEIRENDGGRDGGGERRVNTEAT

FTYRPSVPAHRRVRESPLSSDAIFKQSHAGLFNLCVVVLVAVNSRLIIENLMKYGW

LIRTDFWFSSRSLRDWPLFMCCLSLSIFPLAAFTVEKLVLQRYISEPVVIILHIIISTT

EVLYPVYVTLRCDSAFLSGVTLMLLTCIVWLKLVSYAHTSYDIRSLANSADKANP

EVSYYVSFKSLAYFMVAPTLCYQPSYPRSPCIRKGWVARQFAKLVIFTGFMGFIIE

QYINPIVRNSKHPLKGDLLYAIERVLKLSVPNLYVWLCMFYCFFHLWLNILAELLC

FGDREFYKDWWNAKSVGDYWRMWNMPVHKWMVRHIYFPCLRSKIPKTAAIII

AFLVSAVFHELCIAVPCRLFKLWAFMGIMFQVPLVFITNYLQERFGS MVGNMIFW

FIFCIFGQPMCTLLYYHDLMNRKGSMS。

有益效果

1、本发明公开了一种二酰甘油酰基转移酶基因(DsDGAT基因)及其所编码的蛋白质。二酰甘油酰基转移酶基因是双子叶植物播娘蒿中的首次报道，可应用于双子叶植物的遗传改良。该基因来自播娘蒿(Descurainia sophia)，可作为目的基因导入植物，提高植物种子含油量和产量，以进行植物品种改良。所编码的蛋白质具有二酰甘油酰基转移酶功能。

2、本发明人提供的DsDGAT基因功能是参与Kennedy途径的脂肪酸组装。mRNA表达分析表明DsDGAT基因属于组成型表达，但是在播娘蒿角果上的表达量大。

3、本发明的DsDGAT基因来自播娘蒿，具有适合于播娘蒿等双子叶植物表达的优化密码子，其基因工程受体植物除了单子叶植物，如小麦、玉米、水稻等之外更加适合于拟南芥、油菜、烟草、棉花等双子叶植物。

4、利用本发明DsDGAT基因作为目的基因构建植物表达载体，以种子特异性启动子，遗传转化油菜等双子叶植物，使种子变大，含油量显著提高。转化可经农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法或其它方法转化植物。

具体实施方式

实施例1

根据GenBank中拟南芥和其它物种DGAT序列设计了播娘蒿中DsDGAT引物DGATP1和DGATP2。以播娘蒿角果总RNA为起始材料，经反转录得到的cDNA作为PCR扩增的模板，运用引物组合DGATP1和DGATP2，进行PCR扩增，得到一条明亮的条带，测序。利用RACE试剂盒的反转录体系，将播娘蒿角果总RNA反转录为cDNA作为模板，运用基因特异性引物GST和锚定引物，进行PCR扩增，DsDGAT的特异性引物为5′DGATGST和3′DGATGST，分别得到一条明亮的条带。测序后序列比对显示，它们都含有引物设计时保守区域重复的一段序列，Blast搜索显示这些序列都很可能是这些基因所缺少的那一部分。根据上面的信息在DsDGAT非编码区设计了它的全长引物DsDGAT.1和DsDGAT.2，上述所用引物如下：

DGATP1：5′-AGTTGGTTTCTTACGCTCATA-3′

DGATP2：5′-CAATAATCTCCCACGCTTT-3′

5′DGATGST：5′-ATTGACGAGCCACCCAACCCTTC-3′

3′DGATGST：5′-CTGCATGTTCTACTGCTTCTTCCAC-3′

DsDGAT.1：5′-GATTCTGATTCTCTTTTCGGC-3′

DsDGAT.2：5′-TATCAGGACCACTACAACATC-3′

并以全长引物DsDGAT.1、DsDGAT.2进行PCR扩增得到特异性条带，获得播娘蒿二酰甘油酰基转移酶基因的全长序列。以总RNA为模板，经反转录合成cDNA第一条链后，用高保真Taq酶(购自大连宝生物工程有限公司)进行PCR扩增。PCR程序如下：94℃预变性3min，94℃变性60s，55℃复性90s，72℃延伸2min，32个循环后，72℃再延伸10min，最后4℃保存。PCR回收产物连接到pMD19-T克隆载体上(购自大连宝生物工程有限公司)，转化到大肠杆菌TOP10(北京天为时代生物工程有限公司)，以来自目的片段上的引物序列为引物，进行PCR扩增，鉴定阳性克隆；序列的测定委托上海Invitrogen生物技术有限公司完成。(见SEQID NO.1)。

BLAST的结果及分子建模结果证明从播娘蒿中新得到的基因确为一个编码二酰甘油酰基转移酶基因(Diacylglycerol Acyltransferase，DGAT，EC 2.3.1.20)，该基因编码产物为油脂合成关键酶，具有催化合成三酰甘油(TAG，triacylglycerol)的功能。

实施例2

上述获得播娘蒿二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT的cDNA序列SEQ ID NO.1，其编码的蛋白质，来自播娘蒿(Descurainia sophia)，它的氨基酸序列为SEQ ID NO.2，

DsDGATcDNA全长1792bp，ORF1575bp编码524个氨基酸，根据软件预测它编码蛋白的分子量为60.03KD，等电点PI为8.78。根据氨基酸序列比对的结果显示，DsDGAT与其他作物中DGAT的一致性为80％-43％，其中它和拟南芥的相似性最高为80％，与油菜、芥菜、白菜、埃色俄比亚芥和甘蓝的相似性都在70％及以上。进一步序列分析显示：DsDGAT氨基酸序列N端存在带有正电荷的氨基酸(RRRR)/(RRRK)，序列中有一个高保守的丝氨酸残基，它被认为参与植物碳代谢的整个调控过程。和在油菜中DGAT一样，DsDGAT基因中存在5个亮氨酸，它们都是有规律的被6个可变的氨基酸隔开，形成一典型的亮氨酸链。这个序列拥有一个典型的组氨酸残基中心，在C端拥有高保守的自由脂肪酸结合位点(FGDREFYRPDWWNA)，这个酶展示了一个完整膜蛋白的特性。根据生物信息学软件分析，预测到9个跨膜区，在N端预测到一个细胞质内膜信号。DsDGAT也像其它物种中DGAT一样没有发现内质网信号肽。这些区域将促进DGAT和那些可能的亚单位相互结合，起到调节蛋白的结合位点或在TAG生物合成途径中促进DGAT和其它酶相互作用。

实施例3

用DsDGAT转基因引物P1、P2进行半定量RT-PCR分析播娘蒿根、茎、叶、花蕾、花和角果的表达，结果表明，播娘蒿DsDGAT在伤害和冷胁迫下是上调的。基因引物如下：

P1：5′-GCGGATCCTTCTGATTCTCTTTTCGGC-3′

P2：5′-GCCCGGGTTCAGGACCACTACAACATC-3′

实施例4

利用全长引物进行PCR扩增，将PCR所得产物用BamHI和SmaI进行双酶切，回收酶切产物并将其插入植物转化载体PBI121，构建重组转基因载体PBI121-DsDGAT，将转基因载体PBI121-DsDGAT转化大肠杆菌JM109，提PCR阳性菌落的质粒进行酶切鉴定。双酶切载体PBI121-DsDGAT，酶切后分别得到了预期大小目的片段，对克隆到载体PBI121的DsDGAT进行测序，测序结果与基因的序列进行比对分析，发现DNA序列完全相同。将验证正确的转基因载体PBI121-DsDGAT转化农杆菌LBA4404，对转化后的抗性单菌落进行PCR检测挑选阳性单克隆测序，将测序结果与DsDGAT基因序列比对，序列比对结果表明序列完全相同，表明转基因载体已经转入农杆菌LBA4404。采用根癌农杆菌介导法，将播娘蒿二酰甘油酰基转移酶基因转化甘蓝型油菜NJ6292。对获得的转基因植株进行PCR，RT-PCR及Southern杂交验证。

对转基因后代种子的脂肪酸含量进行测定，DsDGAT转基因油菜种子含油量从40.6％提高到49.0％，平均提高了8.4％；千粒重从4.0g提高到5.1g，平均提高了27.5％；说明转基因DsDGAT种子在含油量、粒重有很大的提高，DsDGAT基因的导入提高了含油量，同时也提高了油菜的产量。

上述实施例1、2表明本发明中来源于播娘蒿的二酰甘油酰基转移酶基因DsDGAT。实施例3、4表明该基因有提高种子含油量的功能。此类基因由于来源于双子叶植物，具有双子叶植物优化的密码子，与单子叶植物来源的二酰甘油酰基转移酶基因相比，更加适合于拟南芥、油菜、烟草、棉花等双子叶作物的抗逆性遗传改良。

本发明人从双子叶植物播娘蒿(Descurainia sophia)中克隆了一个cDNA，编码二酰甘油酰基转移酶基因，命名为DsDGAT。经在数据库中比较发现，DsDGAT与其他作物中DGAT的一致性为80％-43％，其中它和拟南芥的相似性最高为80％，与油菜、芥菜、白菜、埃塞俄比亚芥和甘蓝的相似性都在70％及以上。DsDGAT cDNA全长1792bp，ORF1575bp编码524个氨基酸，根据软件预测它编码蛋白的分子量为60.03KD，等电点PI为8.78。进一步序列分析显示：DsDGAT氨基酸序列N端存在带有正电荷的氨基酸(RRRR)/(RRRK)，序列中有一个高保守的丝氨酸残基，它被认为参与植物碳代谢的整个调控过程。和在油菜中DGAT一样，DsDGAT基因中存在5个亮氨酸，它们都是有规律的被6个可变的氨基酸隔开，形成一典型的亮氨酸链。这个序列拥有一个典型的组氨酸残基中心，在C端拥有高保守的自由脂肪酸结合位点(FGDREFYRPDWWNA)，这个酶展示了一个完整膜蛋白的特性。根据生物信息学软件分析，预测到9个跨膜区，在N端预测到一个细胞质内膜信号。DsDGAT也像其它物种中DGAT一样没有发现内质网信号肽。

mRNA表达分析表明播娘蒿DsDGAT在伤害和冷胁迫下呈现上调表达。转基因研究表明，将DsDGAT基因转入甘蓝型油菜，发现转基因DsDGAT种子在含油量、粒重上有很大提高，说明DsDGAT基因的导入提高了含油量，同时也提高了油菜的产量。

综上所述，本发明人提供的DsDGAT基因是首次在双子叶植物中分离的新基因，其能催化三酰甘油的生物合成。本发明所述的一种植物二酰基甘油酰基转移酶基因已经在很多植物中发现。可利用本发明DsDGAT基因作为目的基因构建植物表达载体，使用种子特异性的NAPIN启动子，使该基因特异的在种子中表达。所用的表达载体可为Ti质粒，Ri质粒，植物病毒载体等。转化方法可用农杆菌介导法、基因枪法、花粉管通道法或其它方法转化植物。

本发明的DsDGAT基因来自播娘蒿，具有适合于播娘蒿等双子叶植物表达的优化密码子，其基因工程受体植物除了单子叶植物，如小麦、玉米、水稻等之外更加适合于拟南芥、油菜、烟草、棉花等双子叶植物。

本发明涉及的序列及记号分列如下：

(1)SEQ ID NO.1的信息

(i)序列特征：

(A)长度：1792bp

(B)类型：核苷酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：核苷酸

(iii)序列描述：SEQ ID NO.1

(2)SEQ ID NO.2的信息

(i)序列特征：

(A)长度：524a.a

(B)类型：氨基酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：蛋白质

(iii)序列描述：SEQ ID NO.2

(3)SEQ ID NO.3的信息

(i)序列特征：

(A)长度：21b

(B)类型：核苷酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：核苷酸

(iii)序列描述：SEQ ID NO.3

(4)SEQ ID NO.4的信息

(i)序列特征：

(A)长度：19b

(B)类型：核苷酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：核苷酸

(iii)序列描述：SEQ ID NO.4

(5)SEQ ID NO.5的信息

(i)序列特征：

(A)长度：23b

(B)类型：核苷酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：核苷酸

(iii)序列描述：SEQ ID NO.5

(6)SEQ ID NO.6的信息

(i)序列特征：

(A)长度：25b

(B)类型：核苷酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：核苷酸

(iii)序列描述：SEQ ID NO.6

(7)SEQ ID NO.7的信息

(i)序列特征：

(A)长度：21b

(B)类型：核苷酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：核苷酸

(iii)序列描述：SEQ ID NO.7

(8)SEQ ID NO.8的信息

(i)序列特征：

(A)长度：21b

(B)类型：核苷酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：核苷酸

(iii)序列描述：SEQ ID NO.8

(9)SEQ ID NO.9的信息

(i)序列特征：

(A)长度：27b

(B)类型：核苷酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：核苷酸

(iii)序列描述：SEQ ID NO.9

(10)SEQ ID NO.10的信息

(i)序列特征：

(A)长度：27b

(B)类型：核苷酸

(C)链性：单链

(D)拓扑结构：线性

(ii)分子类型：核苷酸

(iii)序列描述：SEQ ID NO.10

SEQUENCE LISTING

<110>南京农业大学

<120>一种二酰甘油酰基转移酶基因及其所编码的蛋白质

<130>DsDGAT

<140>2009-10-26

<141>2009-10-26

<150>2009-10-20

<151>2009-10-20

<160>10

<170>PatentIn version 3.5

<210>1

<211>1792

<212>DNA

<213>Descurainia sophia

<400>1

gcggatcctt ctgattctct tttcggcatc tttttcttct tgaaaccttt ttccaaattc 60

aatttttctt ctgcatgtgt ccgtgacgct tttccttctg acgttctgaa ggactctttg 120

aagctgtttc gttgaacgct tcgaaatggc gattttggat tctggagacg ttactttgac 180

caccacgacg gagaacgttg ccggagagtt tatggatctc gataggcttc gtcgacggaa 240

atctagatcg gattctaatg gacttctttc tgattcttca tccggtatcg ataattcacc 300

gtcggatgat gttggagctc cgaccgacgt gaggagggat cggattgatt ccgttgtcaa 360

cgagggaaca gccaatttgg ccggagataa cgtcggtgct gctgaaatta gggaaaacga 420

tggaggaaga gacggcggcg gagaaagaag agttaacacc gaggctacgt ttacgtatcg 480

accgtcggtt ccagctcatc ggagggtgag ggagagtcca ctcagctctg acgcaatctt 540

caaacagagc catgccggat tatttaacct ctgtgtagta gttcttgttg ctgtgaacag 600

tagactcatc attgaaaatc tcatgaagta cggttggttg atcagaacgg atttctggtt 660

tagttcaaga tctctgcgag attggccgct tttcatgtgt tgtctttccc tttcgatctt 720

tcctttggct gcctttactg tagagaaatt ggtacttcag agatacatat ctgaacctgt 780

tgtcatcatt cttcatatta ttatctctac gacagaggtt ttgtatccag tttatgtcac 840

actgaggtgt gattccgcct tcttatcagg tgtcacattg atgctcctca cttgcattgt 900

gtggctaaag ttggtttctt acgctcatac tagctacgac ataagatctc tagccaattc 960

agctgataag gccaatcctg aagtctctta ctacgttagc tttaagagct tggcatattt 1020

catggttgct cccacattgt gttatcagcc gagctatcca cgttctccat gtatccggaa 1080

gggttgggtg gctcgtcaat ttgcaaaact ggtcatattc actggattca tgggatttat 1140

catagaacaa tatataaatc ctattgttag gaactcaaag catcctttga aaggggacct 1200

tctatacgct attgaaagag tgttgaaact ttctgttcca aatttatacg tgtggctctg 1260

catgttctac tgcttcttcc acctttggtt aaacatattg gccgagctcc tctgtttcgg 1320

ggatcgtgaa ttctacaaag attggtggaa tgcaaaaagt gtgggagatt attggagaat 1380

gtggaatatg cctgtccata aatggatggt tcgacatata tacttcccat gcctacgcag 1440

caagataccg aagaccgccg ccattatcat tgctttctta gtctctgcag tctttcatga 1500

gctatgcatc gcagtccctt gtcgtctctt caagctatgg gcttttatgg ggattatgtt 1560

tcaggtgcct ttggttttta tcacaaacta tctacaagaa aggtttggct caatggtggg 1620

gaacatgatc ttctggttca tcttctgcat tttcggacaa ccgatgtgta cacttcttta 1680

ttaccacgac ctgatgaacc gcaaaggatc gatgtcatga aacaactgtt cgaaatcgac 1740

gttcttcaga catctatgac cttgttggat ctccattgat gttgtagtgg tc 1792

<210>2

<211>524

<212>PRT

<213>Descurainia sophia

<400>2

Met Ala Ile Leu Asp Ser Gly Asp Val Thr Leu Thr Thr Thr Thr Glu

1 5 10 15

Asn Val Ala Gly Glu Phe Met Asp Leu Asp Arg Leu Arg Arg Arg Lys

20 25 30

Ser Arg Ser Asp Ser Asn Gly Leu Leu Ser Asp Ser Ser Ser Gly Ile

35 40 45

Asp Asn Ser Pro Ser Asp Asp Val Gly Ala Pro Thr Asp Val Arg Arg

50 55 60

Asp Arg Ile Asp Ser Val Val Asn Glu Gly Thr Ala Asn Leu Ala Gly

65 70 75 80

Asp Asn Val Gly Ala Ala Glu Ile Arg Glu Asn Asp Gly Gly Arg Asp

85 90 95

Gly Gly Gly Glu Arg Arg Val Asn Thr Glu Ala Thr Phe Thr Tyr Arg

100 105 110

Pro Ser Val Pro Ala His Arg Arg Val Arg Glu Ser Pro Leu Ser Ser

115 120 125

Asp Ala Ile Phe Lys Gln Ser His Ala Gly Leu Phe Asn Leu Cys Val

130 135 140

Val Val Leu Val Ala Val Asn Ser Arg Leu Ile Ile Glu Asn Leu Met

145 150 155 160

Lys Tyr Gly Trp Leu Ile Arg Thr Asp Phe Trp Phe Ser Ser Arg Ser

165 170 175

Leu Arg Asp Trp Pro Leu Phe Met Cys Cys Leu Ser Leu Ser Ile Phe

180 185 190

Pro Leu Ala Ala Phe Thr Val Glu Lys Leu Val Leu Gln Arg Tyr Ile

195 200 205

Ser Glu Pro Val Val Ile Ile Leu His Ile Ile Ile Ser Thr Thr Glu

210 215 220

Val Leu Tyr Pro Val Tyr Val Thr Leu Arg Cys Asp Ser Ala Phe Leu

225 230 235 240

Ser Gly Val Thr Leu Met Leu Leu Thr Cys Ile Val Trp Leu Lys Leu

245 250 255

Val Ser Tyr Ala His Thr Ser Tyr Asp Ile Arg Ser Leu Ala Asn Ser

260 265 270

Ala Asp Lys Ala Asn Pro Glu Val Ser Tyr Tyr Val Ser Phe Lys Ser

275 280 285

Leu Ala Tyr Phe Met Val Ala Pro Thr Leu Cys Tyr Gln Pro Ser Tyr

290 295 300

Pro Arg Ser Pro Cys Ile Arg Lys Gly Trp Val Ala Arg Gln Phe Ala

305 310 315 320

Lys Leu Val Ile Phe Thr Gly Phe Met Gly Phe Ile Ile Glu Gln Tyr

325 330 335

Ile Asn Pro Ile Val Arg Asn Ser Lys His Pro Leu Lys Gly Asp Leu

340 345 350

Leu Tyr Ala Ile Glu Arg Val Leu Lys Leu Ser Val Pro Asn Leu Tyr

355 360 365

Val Trp Leu Cys Met Phe Tyr Cys Phe Phe His Leu Trp Leu Asn Ile

370 375 380

Leu Ala Glu Leu Leu Cys Phe Gly Asp Arg Glu Phe Tyr Lys Asp Trp

385 390 395 400

Trp Asn Ala Lys Ser Val Gly Asp Tyr Trp Arg Met Trp Asn Met Pro

405 410 415

Val His Lys Trp Met Val Arg His Ile Tyr Phe Pro Cys Leu Arg Ser

420 425 430

Lys Ile Pro Lys Thr Ala Ala Ile IleIle Ala Phe Leu Val Ser Ala

435 440 445

Val Phe His Glu Leu Cys Ile Ala Val Pro Cys Arg Leu Phe Lys Leu

450 455 460

Trp Ala Phe Met Gly Ile Met Phe Gln Val Pro Leu Val Phe Ile Thr

465 470 475 480

Asn Tyr Leu Gln Glu Arg Phe Gly Ser Met Val Gly Asn Met Ile Phe

485 490 495

Trp Phe Ile Phe Cys Ile Phe Gly Gln Pro Met Cys Thr Leu Leu Tyr

500 505 510

Tyr His Asp Leu Met Asn Arg Lys Gly Ser Met Ser

515 520

<210>3

<211>21

<212>DNA

<213>Descurainia sophia

<400>3

agttggtttc ttacgctcat a 21

<210>4

<211>19

<212>DNA

<213>Descurainia sophia

<400>4

caataatctc ccacgcttt 19

<210>5

<211>23

<212>DNA

<213>Descurainia sophia

<400>5

attgacgagc cacccaaccc ttc 23

<210>6

<211>25

<212>DNA

<213>Descurainia sophia

<400>6

ctgcatgttc tactgcttct tccac 25

<210>7

<211>21

<212>DNA

<213>Descurainia sophia

<400>7

gattctgatt ctcttttcgg c 21

<210>8

<211>21

<212>DNA

<213>Descurainia sophia

<400>8

tatcaggacc actacaacat c 21

<210>9

<211>27

<212>DNA

<213>Descurainia sophia

<400>9

gcggatcctt ctgattctct tttcggc 27

<210>10

<211>27

<212>DNA

<213>Descurainia sophia

<400>10

gcccgggttc aggaccacta caacatc 27

Claims

1.一种双子叶植物二酰基甘油酰基转移酶基因(DsDGAT)，来自播娘蒿(Descurainiasophia)，命名为DsDGAT基因，其核苷酸序列SEQ ID NO.1为：

GCGGATCCTTCTGATTCTCTTTTCGGCATCTTTTTCTTCTTGAAACCTTTTTCCAAATTCAATTTTTCTTCTGCATGTGTCCGTGACGCTTTTCCTTCTGACGTTCTGAAGGACTCTTTGAAGCTGTTTCGTTGAACGCTTCGAAATGGCGATTTTGGATTCTGGAGACGTTACTTTGACCACCACGACGGAGAACGTTGCCGGAGAGTTTATGGATCTCGATAGGCTTCGTCGACGGAAATCTAGATCGGATTCTAATGGACTTCTTTCTGATTCTTCATCCGGTATCGATAATTCACCGTCGGATGATGTTGGAGCTCCGACCGACGTGAGGAGGGATCGGATTGATTCCGTTGTCAACGAGGGAACAGCCAATTTGGCCGGAGATAACGTCGGTGCTGCTGAAATTAGGGAAAACGATGGAGGAAGAGACGGCGGCGGAGAAAGAAGAGTTAACACCGAGGCTACGTTTACGTATCGACCGTCGGTTCCAGCTCATCGGAGGGTGAGGGAGAGTCCACTCAGCTCTGACGCAATCTTCAAACAGAGCCATGCCGGATTATTTAACCTCTGTGTAGTAGTTCTTGTTGCTGTGAACAGTAGACTCATCATTGAAAATCTCATGAAGTACGGTTGGTTGATCAGAACGGATTTCTGGTTTAGTTCAAGATCTCTGCGAGATTGGCCGCTTTTCATGTGTTGTCTTTCCCTTTCGATCTTTCCTTTGGCTGCCTTTACTGTAGAGAAATTGGTACTTCAGAGATACAIATCTGAACCTGTTGTCATCATTCTTCATATTATTATCTCTACGACAGAGGTTTTGTATCCAGTTTATGTCACACTGAGGTGTGATTCCGCCTTCTTATCAGGTGTCACATTGATGCTCCTCACTTGCATTGTGTGGCTAAAGTTGGTTTCTTACGCTCAIACTAGCTACGACATAAGATCTCTAGCCAATTCAGCTGATAAGGCCAATCCTGAAGTCTCTTACTACGTTAGCTTTAAGAGCTTGGCAIATTTCATGGTTGCTCCCACATTGTGTTATCAGCCGAGCTATCCACGTTCTCCATGTATCCGGAAGGGTTGGGTGGCTCGTCAATTTGCAAAACTGGTCAIATTCACTGGATTCATGGGATTTATCATAGAACAATATATAAATCCTATTGTTAGGAACTCAAAGCATCCTTTGAAAGGGGACCTTCTATACGCTATTGAAAGAGTGTTGAAACTTTCTGTTCCAAATTTATACGTGTGGCTCTGCATGTTCTACTGCTTCTTCCACCTTTGGTTAAACATATTGGCCGAGCTCCTCTGTTTCGGGGATCGTGAATTCTACAAAGATTGGTGGAATGCAAAAAGTGTGGGAGATTATTGGAGAATGTGGAATATGCCTGTCCATAAATGGATGGTTCGACATATATACTTCCCATGCCTACGCAGCAAGATACCGAAGACCGCCGCCATTATCATTGCTTTCTTAGTCTCTGCAGTCTTTCATGAGCTATGCATCGCAGTCCCTTGTCGTCTCTTCAAGCTATGGGCTTTTATGGGGATTATGTTTCAGGTGCCTTTGGTTTTTATCACAAACTATCTACAAGAAAGGTTTGGCTCAATGGTGGGGAACATGATCTTCTGGTTCATCTTCTGCATTTTCGGACAACCGATGTGTACACTTCTTTATTACCACGACCTGATGAACCGCAAAGGATCGATGTCATGAAACAACTGTTCGAAATCGACGTTCTTCAGACATCTATGACCTTGTTGGATCTCCATTGATGTTGTAGTGGTC

2.权利要求1所述的一种双子叶植物二酰基甘油酰基转移酶基因所编码的蛋白质，来自播娘蒿(Descurainia sophia)，命名为DsDGAT蛋白质，它具有如下所示的氨基酸序列SEQ ID NO.2：

MAILDSGDVTLTTTTENVAGEFMDLDRLRRRKSRSDSNGLLSDSSSGIDNSPSDDVGAPTDVRRDRIDSVVNEGTANLAGDNVGAAEIRENDGGRDGGGERRVNTEATFTYRPSVPAHRRVRESPLS SDAIFKQSHAGLFNLCVVVLVAVNSRLIIENLMKYGWLIRTDFWFSSRSLRDWPLFMCCLSLSIFPLAAFTVEKLVLQRYISEPVVIILHIIISTTEVLyPVYVTLRCDSAFLSGVTLMLLTCIVWLKLVSYAHTSYDIRSLANSADKANPEVSYYVSFKSLAYFMVAPTLCYQPSYPRSPCIRKGWVARQFAKLVIFTGFMGFIIEQYINPIVRNSKHPLKGDLLYAIERVLKLSVPNLYVWLCMFYCFFHLWLNILAELLCFGDREFYKDWWNAKSVGDYWRMWNMPVHKWMVRHIYFPCLRSKIPKTAAIIIAFLVSAVFHELCIAVPCRLFKLWAFMGIMFQVPLVFITNYLQERFGSMVGNMIFWFIFCIFGQPMCTLLYYHDLMNRKGSMS。