CN101697710A - 蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基。以MS培养基为基础添加了0.1～1g/L的高吸水性树脂和1～5mg/L的抗菌剂纳米Ag2O，还添加了蔗糖、琼脂、香蕉汁、细胞分裂素6-苄基嘌呤。本发明采用高吸水性树脂部分代替琼脂，既能培养基达到合适的凝固性，对培养物有适宜的支持作用，又能使得营养物质在吸水性树脂中容易扩散，提高养分的吸收效率；培养物在培养过程中产生的代谢物容易透过高吸水性树脂渗透、扩散，降低培养物接触面的毒素浓度；添加的纳米Ag2O颗粒，帮助分解培养物的代谢产物，并有效抑制外植体内生菌类造成的污染。
Description
技术领域
本发明涉及组织培养基，尤其涉及一种蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基。
背景技术
蝴蝶兰是世界上栽培范围最广泛的洋兰品种之一，有“洋兰皇后”的美称，蝴蝶兰花型大，花期长，色彩艳丽，变化无穷，是最为普及的观赏性洋兰品种。
蝴蝶兰单株性比较强，在栽培过程中很少会产生分株。目前用组织培养无性繁殖是当今蝴蝶兰工厂化生产常用的方法之一，即所谓克隆繁殖，具有繁殖快、数量大和小苗品种纯的优点。可以说，当今花卉市场上出售的蝴蝶兰基本都是用组织培养繁殖的组培苗培育的。利用蝴蝶兰花梗侧芽、叶片、茎尖等外植体，经消毒处理后接种到培养基上，可诱导出营养芽或原球茎。再进一步于培养基中进行大量增殖、分化培养，这样就可培养出大量的植株。通过克隆繁殖的蝴蝶兰苗生长、开花比较整齐一致，可完全保存母株的花色性状。
一般蝴蝶兰工厂均采用常规MS培养基，其特点是无机盐含量较高，特别是硝酸盐和铵盐含量大，可满足植物组织生长发育对营养元素的需要。此外还要添加琼脂作为凝固剂，防止组织沉没缺氧死亡，同时操作简便，不像液体培养基需要振荡培养。固体培养基中琼脂的使用量一般在6～10g/L，过高则培养基太硬，不利于营养物质的扩散、吸收；过低则凝固效果不好，不能支持培养物。但是用量适当的琼脂也有一定缺点，最显著的就是培养物与培养基的接触面小，营养物质扩散速度慢，影响了养分的吸收利用；而且培养物排出的代谢产物容易富集再接触面，扩散慢，对培养物产生了一定的毒害作用。本发明使用高保水性高吸水性树脂SAR部分代替琼脂，再配以适量的纳米Ag2O颗粒，可以减少固体培养基的上述消极作用。这些内容尚未见诸于报道。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基。
蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基，包括MS培养基：
NH4NO3：1650mg/L KNO3：1900mg/L
CaCl2·H2O：440mg/L MgSO4·7H2O：370mg/L
KH2PO4：170mg/L KI：0.83mg/L
H3BO3：6.2mg/L MnSO4·4H2O：22.3mg/L
ZnSO4·7H2O：8.6mg/L Na2MoO4·5H2O：0.25mg/L
CuSO4·5H2O：0.025mg/L CoCl2·6H2O：0.025mg/L
FeSO4·H2O：27.8mg/L Na2EDTA·2H2O：37.3mg/L
肌醇：100.0mg/L 烟酸：0.5mg/L
盐酸吡哆醇：0.5mg/L 盐酸硫胺素：0.1mg/L
甘氨酸：2.0mg/L
还包括：
高吸水性树脂：0.1～1g/L和纳米Ag2O：1～5mg/L。
还包括以下辅助剂：
蔗糖：3％ 琼脂：5～10g/L
香蕉汁：150g/L 6-苄基嘌呤：3mg/L
活性炭：0.5g/L。
所述的高吸水性树脂包括：接枝淀粉、聚丙烯酸盐、聚丙烯酰胺或聚乙烯醇。
本发明与常规MS培养基相比，具有的有益效果：
1)采用高吸水性树脂SAR部分代替琼脂，既能培养基达到合适的凝固性，对培养物有适宜的支持作用，又能使得营养物质在吸水性树脂中容易扩散，提高养分的吸收效率；
2)培养物在培养过程中产生的代谢物容易透过高吸水性树脂渗透、扩散，降低培养物接触面的毒素浓度，利于成活；
3)添加纳米Ag2O颗粒，帮助分解培养物的代谢产物，并有效抑制外植体内生菌类造成的污染。
具体实施方式：
下面结合具体实施例对本发明作更详细的描述，本发明的范围不受这些实施例的限制，所有在不偏离本发明核心内容的基础上所做的修改和改进，均属于本发明要求保护的范围。本发明的范围在权利要求书中详细提出。
实施例1
蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基成分如下：
NH4NO3：1650mg/L KNO3：1900mg/L
CaCl2·H2O：440mg/L MgSO4·7H2O：370mg/L
KH2PO4：170mg/L KI：0.83mg/L
H3BO3：6.2mg/L MnSO4·4H2O：22.3mg/L
ZnSO4·7H2O：8.6mg/L Na2MoO4·5H2O：0.25mg/L
CuSO4·5H2O：0.025mg/L CoCl2·6H2O：0.025mg/L
FeSO4·H2O：27.8mg/L Na2EDTA·2H2O：37.3mg/L
肌醇：100.0mg/L 烟酸：0.5mg/L
盐酸吡哆醇：0.5mg/L 盐酸硫胺素：0.1mg/L
甘氨酸：2.0mg/L
在上述MS培养基基础上还添加了：淀粉接枝丙烯腈高吸水性树脂：0.5g/L和纳米Ag2O：1mg/L。
辅助剂如下：蔗糖：3％；琼脂：6.5g/L；香蕉汁：150g/L；6-苄基嘌呤：3mg/L；活性炭：0.5g/L。
实施例2
蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基成分如下：
NH4NO3：1650mg/L KNO3：1900mg/L
CaCl2·H2O：440mg/L MgSO4·7H2O：370mg/L
KH2PO4：170mg/L KI：0.83mg/L
H3BO3：6.2mg/L MnSO4·4H2O：22.3mg/L
ZnSO4·7H2O：8.6mg/L Na2MoO4·5H2O：0.25mg/L
CuSO4·5H2O：0.025mg/L CoCl2·6H2O：0.025mg/L
FeSO4·H2O：27.8mg/L Na2EDTA·2H2O：37.3mg/L
肌醇：100.0mg/L 烟酸：0.5mg/L
盐酸吡哆醇：0.5mg/L 盐酸硫胺素：0.1mg/L
甘氨酸：2.0mg/L
在上述MS培养基基础上还添加了：聚丙烯酸钠：1.0g/L和纳米Ag2O：1mg/L。
辅助剂如下：蔗糖：3％；琼脂：6.0g/L；香蕉汁：150g/L；6-苄基嘌呤：3mg/L；活性炭：0.5g/L。
实施例3
蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基成分如下：
NH4NO3：1650mg/L KNO3：1900mg/L
CaCl2·H2O：440mg/L MgSO4·7H2O：370mg/L
KH2PO4：170mg/L KI：0.83mg/L
H3BO3：6.2mg/L MnSO4·4H2O：22.3mg/L
ZnSO4·7H2O：8.6mg/L Na2MoO4·5H2O：0.25mg/L
CuSO4·5H2O：0.025mg/L CoCl2·6H2O：0.025mg/L
FeSO4·H2O：27.8mg/L Na2EDTA·2H2O：37.3mg/L
肌醇：100.0mg/L 烟酸：0.5mg/L
盐酸吡哆醇：0.5mg/L 盐酸硫胺素：0.1mg/L
甘氨酸：2.0mg/L
在上述MS培养基基础上还添加了：聚丙烯酰胺：0.8g/L和纳米Ag2O：1mg/L。
辅助剂如下：蔗糖：3％；琼脂：6.2g/L；香蕉汁：150g/L；6-苄基嘌呤：3mg/L；活性炭：0.5g/L。
实施例4
蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基成分如下：
NH4NO3：1650mg/L KNO3：1900mg/L
CaCl2·H2O：440mg/L MgSO4·7H2O：370mg/L
KH2PO4：170mg/L KI：0.83mg/L
H3BO3：6.2mg/L MnSO4·4H2O：22.3mg/L
ZnSO4·7H2O：8.6mg/L Na2MoO4·5H2O：0.25mg/L
CuSO4·5H2O：0.025mg/L CoCl2·6H2O：0.025mg/L
FeSO4·H2O：27.8mg/L Na2EDTA·2H2O：37.3mg/L
肌醇：100.0mg/L 烟酸：0.5mg/L
盐酸吡哆醇：0.5mg/L 盐酸硫胺素：0.1mg/L
甘氨酸：2.0mg/L
在上述MS培养基基础上还添加了：聚丙烯酰胺：0.8g/L和纳米Ag2O：5mg/L。
辅助剂如下：蔗糖：3％；琼脂：6.2g/L；香蕉汁：150g/L；6-苄基嘌呤：3mg/L；活性炭：0.5g/L。
实施例5
蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基成分如下：
NH4NO3：1650mg/L KNO3：1900mg/L
CaCl2·H2O：440mg/L MgSO4·7H2O：370mg/L
KH2PO4：170mg/L KI：0.83mg/L
H3BO3：6.2mg/L MnSO4·4H2O：22.3mg/L
ZnSO4·7H2O：8.6mg/L Na2MoO4·5H2O：0.25mg/L
CuSO4·5H2O：0.025mg/L CoCl2·6H2O：0.025mg/L
FeSO4·H2O：27.8mg/L Na2EDTA·2H2O：37.3mg/L
肌醇：100.0mg/L 烟酸：0.5mg/L
盐酸吡哆醇：0.5mg/L 盐酸硫胺素：0.1mg/L
甘氨酸：2.0mg/L
在上述MS培养基基础上还添加了：聚乙烯醇：0.5g/L和纳米Ag2O：1mg/L。
辅助剂如下：蔗糖：3％；琼脂：6.5g/L；香蕉汁：150g/L；6-苄基嘌呤：3mg/L；活性炭：0.5g/L。
对比例1
蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基成分如下：
NH4NO3：1650mg/L KNO3：1900mg/L
CaCl2·H2O：440mg/L MgSO4·7H2O：370mg/L
KH2PO4：170mg/L KI：0.83mg/L
H3BO3：6.2mg/L MnSO4·4H2O：22.3mg/L
ZnSO4·7H2O：8.6mg/L Na2MoO4·5H2O：0.25mg/L
CuSO4·5H2O：0.025mg/L CoCl2·6H2O：0.025mg/L
FeSO4·H2O：27.8mg/L Na2EDTA·2H2O：37.3mg/L
肌醇：100.0mg/L 烟酸：0.5mg/L
盐酸吡哆醇：0.5mg/L 盐酸硫胺素：0.1mg/L
甘氨酸：2.0mg/L
在上述MS培养基基础上还添加了辅助剂：蔗糖：3％；琼脂：7g/L；香蕉汁：150g/L；6-苄基嘌呤：3mg/L；活性炭：0.5g/L。
对比例2
蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基成分如下：
NH4NO3：1650mg/L KNO3：1900mg/L
CaCl2·H2O：440mg/L MgSO4·7H2O：370mg/L
KH2PO4：170mg/L KI：0.83mg/L
H3BO3：6.2mg/L MnSO4·4H2O：22.3mg/L
ZnSO4·7H2O：8.6mg/L Na2MoO4·5H2O：0.25mg/L
CuSO4·5H2O：0.025mg/L CoCl2·6H2O：0.025mg/L
FeSO4·H2O：27.8mg/L Na2EDTA·2H2O：37.3mg/L
肌醇：100.0mg/L 烟酸：0.5mg/L
盐酸吡哆醇：0.5mg/L 盐酸硫胺素：0.1mg/L
甘氨酸：2.0mg/L
在上述MS培养基基础上还添加了：聚丙烯酰胺：0.8g/L和纳米Ag2O：10mg/L。
辅助剂如下：蔗糖：3％；琼脂：6.2g/L；香蕉汁：150g/L；6-苄基嘌呤：3mg/L；活性炭：0.5g/L。
利用上述实施例和对比例制成的培养基，按以下步骤对蝴蝶兰进行组织培养。
1：将花梗剪下，选取基部4～5节，每节带芽切成约5厘米小段，除去节间苞片，以0.5％次氯酸钠溶液消毒15分钟，捞起再用灭菌水充分清洗，放在培养皿中，以解剖刀将二端各切去0.5厘米后，立即将其芽体朝上插入培养基中，培养出一定数量的母瓶，建立快繁体系。光照：500Lux，温度：25度。
2：将母瓶按照45天为一个周期进行不断的转接工作，每次转接都会有平均2倍的增殖，这样循环就起到了繁殖的作用。光照：2000Lux，温度：25度。
3：将母瓶内的苗分成单株，将其接种到另一个培养瓶内，平铺于配制好的培养基上，封口消毒即可。使其长高长大。光照：2000Lux，温度：25度。
4：将经过壮苗后的单株苗接种到生根培养基中，使其进一步长高长大，同时长出发达的根系，最终培养成为一棵有根有叶的完整植株。光照：2000Lux，温度：25度。
选择成活率、染菌率作为考察培养基指标。从表1的结果可以看出，实施例1～5中采用高吸水性树脂和Ag2O的培养基种苗的成活率普遍比普通培养基高1～3个百分点，并且染菌率也有很明显的下降，其中Ag2O的用量以1～5mg/L为宜，当其用量太大达到为10mg/L(对比例2)会对成活率有负面影响。
表1
Claims (3)
1.一种蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基，包括MS培养基：
NH4NO3：1650mg/L KNO3：1900mg/L
CaCl2·H2O：440mg/L MgSO4·7H2O：370mg/L
KH2PO4：170mg/L KI：0.83mg/L
H3BO3：6.2mg/L MnSO4·4H2O：22.3mg/L
ZnSO4·7H2O：8.6mg/L Na2MoO4·5H2O：0.25mg/L
CuSO4·5H2O：0.025mg/L CoCl2·6H2O：0.025mg/L
FeSO4·H2O：27.8mg/L Na2EDTA·2H2O：37.3mg/L
肌醇：100.0mg/L 烟酸：0.5mg/L
盐酸吡哆醇：0.5mg/L 盐酸硫胺素：0.1mg/L
甘氨酸：2.0mg/L
其特征在于还包括：
高吸水性树脂：0.1～1g/L和纳米Ag2O：1～5mg/L。
2.根据权利要求1所述的一种蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基，其特征在于还包括以下辅助剂：
蔗糖：3％ 琼脂：5～10g/L
香蕉汁：150g/L 6-苄基嘌呤：3mg/L
活性炭：0.5g/L。
3.根据权利要求1所述的一种蝴蝶兰无性繁殖组织培养培养基，其特征在于所述的高吸水性树脂包括：接枝淀粉、聚丙烯酸盐、聚丙烯酰胺或聚乙烯醇。
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