CN101693731A - 从结石草中提取纯化车前醚苷的方法及其产品和应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种从结石草中提取纯化车前醚苷的方法及其产品和应用，所述方法为：取结石草药材的干燥或新鲜的全草、地上部分或地下部分，按常规工艺提取，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，上大孔树脂，用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。采用本发明方法提纯得到的车前醚苷不仅纯度高，而且药理活性强，可在药品检测中作为结石草药材或其提取物的化学标准品、对照品使用，也可作为制剂原料药应用。本发明方法还具有成本低，适于规模化生产的优点。

Description

从结石草中提取纯化车前醚苷的方法及其产品和应用

技术领域：

本发明涉及一种从中药结石草中提取纯化车前醚苷的方法及其产品和应用，属于中药技术领域。

背景技术：

结石草Incarvillea argute(Royle)Royle又名毛子草，为紫威科角蒿属Incarvillea L植物，别名炮仗花、马桶花、炮仗筒、金鸡豆、两头毛、麻叶子、羊胡子草、羊奶子、燕山红、岩喇叭花；多年生草本，高达1.5m。根茎木质，粗壮，生于干热河谷、山坡灌丛中。结石草的干燥或新鲜全草供药用，药性味苦、微辛、性平(国家中医药管理局编委会，中华本草[M]，上海科技出版社，1997，(7)：425)。彝族民间称结石草为“瓦布友”，变称“肝炎草”，主要用于治疗肝炎、腹泻、牙痛、菌痢、痛肿、骨折血肿、风湿劳伤等症(李耕冬，彝药“瓦布友”的研究，中草药，1986，17(6)：32-33)，临床也作为治疗肝炎和菌痢的药物。有学者报道，结石草中主要化学成分有三十一烷、熊果酸、氯化钾、马桶花酮，毛子草碱甲(argutine A)、毛子草碱乙(argutine B)、boschniakinic acid等(吉腾飞，冯孝章，毛子草化学成分研究，中草药，2002，33(11)：967-969)。现代药理实验表明：马桶花酮具有抑菌和镇静作用，还具有降低血清转氨酶作用。毛子草氯仿提取物对醋酸、二甲苯和组织胺所致的小鼠腹腔和皮肤毛细血管通透性增高有明显的抑制作用；对巴豆油所致的小鼠耳部炎症及蛋清所致小鼠足肿胀也有明显的抑制作用；对伤寒、副伤寒甲乙三联菌苗致热家兔的体温升高有降低作用，可能是毛子草抗炎和解热作用的有效部分(黄良月等，中药通报，1987，12(2)：54)。毛子草水提物对醋酸诱发的小鼠腹痛和热板引起的小鼠足痛均有抑制作用(刘洋等，中医药信息，1999，14(2))。单萜生物碱具有抗感受伤害活性。

在贵州，结石草苗语为Jab vib diangl(佳唉菪)，为苗族常用草药，具有消炎镇痛、溶石和排石的功效，用于治疗胆囊炎、胆结石、肾结石、肾盂积水、膀胱结石等病(包骏，冉懋雄，贵州苗药研究与开发，贵州科技出版社，2002 342)。本发明人在对其进行系统的化学成分研究时发现，贵州产的结石草(毛子草)的主要化学成分为车前醚苷、5-羟基-4′，7-二甲氧基黄酮、齐墩果酸等17个化合物，并发现了其中的车前醚苷具有一定的神经营养活性，与文献吉腾飞等人报道的成分相差很大(如前所述)。

结石草为《贵州省中药材、民族药材质量标准》2003年版收载药材，其中的药材质量标准较简单，无定性、定量检测方法，目前尚无质量检测用标准物质。为了确保临床用药的安全、有效和质量稳定可控，本发明人采用现代植物化学分离纯化技术对结石草的化学成分进行了研究，并结合药效学实验，首次从结石草中分离得到了含量相对较高的有效成分，并对其化学结构进行鉴定，确定了标准物质的制备工艺。

经活性研究发现，该物质具有好的体外溶石效果和体内抗炎镇痛活性，优于阳性对照药物胆乐。车前醚苷可以作为药材或提取物的化学标准品、对照品使用，作为针对胆结石、胆囊炎等症的制剂原料药应用。

发明内容：

本发明的目的在于：提供一种从结石草中提取纯化车前醚苷的方法及其产品和应用。本发明所提供的工艺方法解决了结石草中车前醚苷的提取纯化问题，所得产品纯度高，活性强，具有明显的抗炎镇痛活性和体外溶石效果，既可作为药品检测中的化学标准品或对照品使用，又可作为制剂原料药应用。

本发明是这样实现的：从结石草中提取纯化车前醚苷的方法为：取结石草药材的干燥或新鲜的全草、地上部分或地下部分，按常规工艺提取，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，上大孔树脂，用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

具体地说，可将结石草按常规水煎煮提取，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，上大孔树脂，先用水洗，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

也可将结石草药材用30％～95％的乙醇按常规回流、浸渍方法提取，减压回收乙醇，上大孔树脂，用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

更具体的提取纯化车前醚苷的方法为：将结石草药材粉碎，加水煎煮2～4次，每次0.5～2小时，加水量为药材重量的6～20倍，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至30～80℃相对密度为1.05～1.25的浸膏，上大孔树脂柱，树脂用量∶生药量＝1～3∶1，先用1～3倍柱体积水洗，继用2～6倍柱体积30～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，洗脱剂采用氯仿∶甲醇∶水系统(5～10∶0.5～1.5∶0.05～0.2)，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

或者将结石草药材用30％～95％的乙醇回流提取2～4次，每次0.5～2小时，加醇量为药材重量的6～20倍，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，所得浸膏用适量水稀释，上大孔树脂柱，树脂用量∶生药量＝1～3∶1，先用1～3倍柱体积水洗，继用2～6倍柱体积20～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析，洗脱剂采用氯仿∶甲醇∶水系统(5～10∶0.5～1.5∶0.05～0.2)，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

以上所述的大孔树脂型号为D101、AB-8、HPD-100、HPD-400或HPD-600。

所述的硅胶为200～300目，上柱硅胶为浸膏重量的20～150倍。

所述的干燥方法为微波真空干燥、减压真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。

如上所述从结石草中提取纯化车前醚苷的方法提纯得到的车前醚苷。

本发明所述的车前醚苷可用于药品检测中作为结石草药材或其提取物的化学标准品、对照品。

本发明所述的车前醚苷也可用于制备抗炎镇痛的药物；具体地说，可用于制备预防或治疗胆结石、胆囊炎的药物。如：取车前醚苷，加入适当辅料制备成颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、软胶囊剂、滴丸剂或其它药剂学上可以接受的剂型；或者将车前醚苷与其它原料药复配，加入适当辅料制备成颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、软胶囊剂、滴丸剂或其它药剂学上可以接受的剂型。

为了确证本发明所得产品为车前醚苷，发明人对提取纯化后的物质进行了结构鉴定和纯度检测：

1.结构鉴定：

化合物：无色粉末(易吸潮)，易溶于甲醇。

¹HNMR(400MHz，CD₃OD)δppm：9.24(1H，s，CHO)，7.41(1H，s，C＝CH)，5.85(1H，br.s)，4.60(1H，d，J＝7.6Hz)，3.90(1H，d，J＝12.0Hz)，3.67(1H，m)，3.10-3.40(m，4H)，2.20-2.50(2H，m)，2.28(1H，m)，1.80-2.0(2H，m)，1.10(1H，m)，0.93(3H，d＝6.4Hz).

13CNMR(100.6MHz，CD3OD)δ：192.7，164.4，126.2，99.8，96.8，78.4，77.3，74.3，73.3，71.6，62.8，52.5，38.8，35.1，32.9，16.4ppm.

FAB^--MS(m/z)：359[M-H]⁺，197；EI-MS(m/z)：198，181[M-Glu.]⁺，163，115，84，73.

以上光谱数据(¹H and ¹³C NMR)与文献(EMILIA ANDRZEJEWSKA-GOLEC，SILKEOFTERDINGER-DAEGEL and IHSAN CALIS etal.Chemotaxonomic aspects of iridoidsoccurring in Plantago subg.Psylhium(Plantaginaceae).Plant Systematics andEvolution，1993，185：85-89)报道的车前醚苷的光谱数据一致，故确认其为车前醚苷，结构式为C₁₆H₂₄O₉，分子式如下：

2.纯度检查：

2.1薄层色谱法：取提纯得到的车前醚苷加甲醇制成1mg/mL溶液，作为供试品溶液。分别取供试品溶液10μl、20μl，条带状点于硅胶GF₂₅₄薄层板上。采取上行展开方式，以氯仿-甲醇(5∶1)、氯仿-丙酮(1∶1)、乙酸乙酯-丙酮(5∶1)为展开剂分别展开。随后，硅胶GF₂₅₄薄层板在紫外光灯(254nm)下检视后碘显色后置日光下检查。结果表明：经3种展开系统多种显色方式检视均呈单一斑点，点样量为所适用检验方法点样量的10倍量时，色谱中并未见明显杂质斑点。故经薄层色谱法检查车前醚苷为纯品。

2.2高效液相色谱法：照《中国药典》2005年版一部附录VI D高效液相色谱法测定。

色谱条件与系统适用性试验  用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测车前醚苷，甲醇-水(30∶70)为流动相，流速：1ml/min，检测波长为242nm，柱温35℃。理论板数以车前醚苷峰计算应不低于3000。

样品溶液的制备  取车前醚苷适量，加甲醇溶解，制成每1ml含车前醚苷0.8mg的溶液，即得。

测定法  吸取样品溶液10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图的时间为车前醚苷峰出峰时间的2倍以上，用峰面积归一化法计算结果，纯度在98％以上。

为了验证本发明所得车前醚苷的药理活性，申请人进行了一系列药理活性实验：

一、抗炎镇痛活性实验

受试药物：胆乐胶囊：浙江永宁制药厂。

车前醚苷：申请人自制。将车前醚苷用生理盐水溶解，配制成30mg/ml的溶液。

实验仪器：耳片打孔器；METTLER AE-240电子分析天平，瑞士。

实验动物：

1、来源及种属：KM小鼠，雌雄兼用，体重18～22g。由贵阳医学院实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK(黔)2002-0001。

2、饲养条件：KM小鼠，雌雄分笼饲养于洁净动物饲养柜中，小鼠每笼10只。动物室光照充足，通风和空调设备良好，室温18～25℃，相对湿度50～70％。

数据分析与处理：

数据以均数标准差(x±s)表示，采用Excel 2000作统计学处理，计量资料采用Student-t检验。

实验方法及结果：

1、镇痛实验：对醋酸所致小鼠扭体反应保护作用：

取KM小鼠30只，雌雄各半，体重18～22g，随机分为3组：模型组，胆乐组，车前醚苷组，每组10只。给药容积20ml/kg，每天2次，连续给药3天。各组末次给药后1h，各鼠腹腔注射0.6％醋酸0.1ml/10g致痛，观察小鼠出现扭体反应潜伏期以及10min内各鼠出现扭体反应(腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部抬高)的次数，结果见表1。

实验结果与分析：

表1对小鼠的镇痛作用(扭体法，x±s)

组别	剂量mg/10g	n	扭体次数(10min)	潜伏期(min)
					模型组	NS	10	10.8±4.8	405.0±123.2
胆乐	6	10	6.0±3.2*	381.8±137.5
					车前醚苷	6	10	4.5±4.5*	441.8±147.6

与模型组比较，*P＜0.05。

实验结果显示，车前醚苷能明显减少小鼠扭体次数，与模型组比较有显著性差异(P＜0.05)，对小鼠扭体反应潜伏期有延长趋势，说明车前醚苷具有明显的镇痛作用。

2、抗炎作用实验：对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制作用

取KM小鼠30只，雌雄各半，体重18～22g，随机分为3组：模型组，胆乐组，车前醚苷组，每组10只。给药容积20ml/kg，每天2次，连续给药3天。各组末次给药后40min，将0.03ml二甲苯涂于小鼠右耳耳廓致炎，左耳为对照组，致炎20分钟后处死小鼠，沿耳廓基线剪下两耳，于同一部位用直径8mm的打孔器打下左右耳片，及时称重，以左右耳片重量之差作为肿胀度，计算抑制率。结果见表2。

抑制率＝(模型组肿胀度-给药组肿胀度)/模型组肿胀度×100％

实验结果与分析：

表2  对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的抑制作用(x±s)

组别	剂量(mg/10g)	n	肿胀度(mg)	抑制率(％)
					模型组	NS	10	11.2±2.1	-
胆乐	6	10	8.8±1.2**	21.4
					车前醚苷	6	10	7.8±2.9**	30.4

与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。

阳性药与车前醚苷均对二甲苯致小鼠耳廓肿胀有明显的抑制作用，与模型组比较有极显著性差异(P＜0.01)，说明车前醚苷具有显著的抗炎镇痛作用。

生物活性实验结果显示车前醚苷具有较强的抗炎镇痛药理活性，为结石草的有效成分，可以作为结石草药材或其提取物的化学标准品、对照品或作为制剂原料药使用。

二、体外溶石实验

受试药物：胆乐胶囊：浙江永宁制药厂；蔗糖：广西生物技术有限责任公司；胆酸：北京市庆盛达化工技术有限公司；纤维素：广州市盛晖贸易有限公司；酪蛋白：北京拜尔迪生物技术有限公司；胆固醇：郑州利伟生物实业有限公司。车前醚苷纯度大于98％(申请人自制)。

实验方法：取大小及形状相似、表面完整的同一病人的多发性结石数颗，先将胆石标本用蒸馏水清洗以去除残留胆汁及胆石碎片，然后将胆石烤至恒重后，记录其重量。采用试管溶石法，将胆石分别植入细孔尼龙网袋，浸入盛有溶石液的磨口带塞试管中，室温静置，隔日更换一次溶石液，更换的液体用棕色瓶保存，记录溶液有无碎石，以结石的消失时间、棕色瓶内溶液成分的浓度、结石重量变化等为指标。实验包含对照组、胆乐组和供试样品组，每组各5管，每管3ml(药液浓度50mg/mL)。调节上述管的pH值，使其均为7.0，溶石时间为20d。实验结束后，将结石分别取出烤至恒重，比较实验前后的重量，计算溶石率，结果见表3。检测棕色瓶内钙离子、总胆固醇、总胆色素的含量，结果见表4。

溶石率＝(试验前结石的重量-试验后结石的重量)/试验前结石的重量×100％

表3对结石重量的影响

组别	结石数(颗)	浸泡前(g)	浸泡后(g)	溶石率
					空白对照	8	0.0628±0.11	0.0596±1.49	5.10％±0.33
车前醚苷	8	0.0570±0.12	0.0482±1.53	15.44％±0.56***△△△
					胆乐(阳)	8	0.0671±0.13	0.0627±1.26	6.56％±0.29**

与对照组比较**p＜0.01，***p＜0.001；与胆乐组比较△△p＜0.01，△△△p＜0.001。

表4对钙离子、总胆色素、总胆固醇的影响

组别	排除药物影响后总[Ca2+](mmol/l)	排除药物影响后总胆红素(mmol/l)	总胆固醇(吸光度)
				空白对照	0	0	0
车前醚苷	2.46±0.35***△△△	2.80±0.59***△△△	0.014±0.11**
				胆乐(阳)	0.110±0.21**	0	0.029±0.23***

与对照组比较**p＜0.01，***p＜0.001；与胆乐组比较△△p＜0.01，△△△p＜0.001。

实验结果及分析：

通过计算溶石率，给药组具有较强的溶石作用，与模型组比较有极显著性差异(p＜0.001)，给药组溶石率比阳性药胆乐都高，与阳性药物组相比较有极显著性差异(p＜0.001)。

通过对体外实验所得溶石溶液检测指标结果分析得：

1)[Ca²⁺]：车前醚苷所得溶石溶液的[Ca²⁺]比胆乐[Ca²⁺]高。

2)总胆红素：车前醚苷所得溶石溶液的总胆红素浓度比阳性对照胆乐中总胆红素浓度高。

3)总胆固醇：胆乐值较车前醚苷高。

通过对体外实验各指标综合分析说明结石草中的车前醚苷与空白对照组相比较，溶石效果明显，作用比阳性药物胆乐更显著。实验结果提示车前醚苷对胆红素型结石有较好的溶石作用。

与现有技术相比，采用本发明方法提纯得到的车前醚苷不仅纯度高，而且药理活性强，可在药品检测中作为结石草药材或其提取物的化学标准品、对照品使用，也可作为制剂原料药应用。本发明方法还具有成本低，适于规模化生产的优点。

具体实施方式：

本发明的实施例1：取结石草药材1kg，粉碎，加10倍重量的水煎煮3次，每次1小时，滤过，合并滤液，60℃减压浓缩至相对密度为1.15的浸膏，上AB-8大孔树脂(2kg)，用1.5倍柱体积水洗，继用4倍柱体积40％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得到车前醚苷粗品。将粗品反复进行硅胶(200～300目)柱层析，洗脱剂采用氯仿∶甲醇∶水系统(8∶1∶0.1)，减压回收溶剂，减压真空干燥，得车前醚苷纯品(纯度大于98％)。

本发明的实施例2：取结石草药材1kg，加15倍重量的水煎煮2次，每次2小时，滤过，合并滤液，80℃减压浓缩至相对密度为1.25的浸膏，上HPD-400大孔树脂(3kg)，用1倍柱体积水洗，继用3倍柱体积70％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得到车前醚苷粗品。将粗品反复进行反相柱层析，洗脱剂采用氯仿∶甲醇∶水系统(8∶1∶0.1)，减压回收溶剂，喷雾干燥，得车前醚苷纯品(纯度大于98％)。

本发明的实施例3：取结石草药材1kg，加8倍重量的水煎煮4次，每次0.5小时，滤过，合并滤液，50℃减压浓缩至相对密度为1.10的浸膏，上D101大孔树脂(1.5kg)，用2倍柱体积水洗，继用6倍柱体积80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得到车前醚苷粗品。将粗品反复进行凝胶柱层析，洗脱剂采用氯仿∶甲醇∶水系统(6∶1.5∶0.2)，减压回收溶剂，冷冻干燥，得车前醚苷纯品(纯度大于98％)。

实施例4：取结石草药材1kg，用12倍重量的50％乙醇回流提取3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，将结石草提取浸膏用适量水稀释，上AB-8大孔树脂柱(树脂用量∶生药量＝2∶1)，先用1.5倍柱体积水洗，继用4倍柱体积50％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得到车前醚苷粗品。将粗品反复进行硅胶(200～300目)柱层析，洗脱剂采用氯仿∶甲醇∶水系统(9∶0.5∶0.05)，减压回收溶剂，微波真空干燥，得车前醚苷纯品(纯度大于98％)。

实施例5：取结石草药材1kg，用16倍重量的30％乙醇回流提取4次，每次0.5小时，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，将结石草提取浸膏用适量水稀释，上D101大孔树脂柱(树脂用量∶生药量＝3∶1)，先用1倍柱体积水洗，继用2倍柱体积80％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得到车前醚苷粗品。将粗品反复进行硅胶柱层析，洗脱剂采用氯仿∶甲醇∶水系统(10∶1∶0.15)，减压回收溶剂，减压真空干燥，得车前醚苷纯品(纯度大于98％)。

实施例6：取实施例1-5所制得的车前醚苷，过80目筛，加入适量淀粉、糊精、乳糖按等量倍增法混合均匀，制粒，干燥，整粒，分装于胶囊壳中，得胶囊剂(口服，3-5粒/次，2-3次/日)；分装于铝膜袋中得颗粒剂(口服，1袋/次，2-3次/日)；将颗粒压制成片得片剂(口服，3-5片/次，2-3次/日)。所得制剂用于预防或治疗胆结石、胆囊炎。

实施例7：在实施例1-5所制得的车前醚苷中加入适量含10％蜂蜡的植物油，混合均匀；以明胶∶甘油∶蒸馏水∶防腐剂＝1∶0.4∶0.8∶0.003制备囊材，压制，得软胶囊剂(口服，2-4粒/次，2-3次/日)。该制剂可用于预防或治疗胆结石、胆囊炎。

实施例8：将实施例1-5所制得的车前醚苷加入熔融的聚乙二醇中，混匀，在保温条件下于植物油中滴制成丸，得滴丸剂(口服，5-10丸/次，2-3次/日)。该制剂可用于预防或治疗胆结石、胆囊炎。

实施例9：将本发明制得的车前醚苷与猪胆汁酸按2～8∶8～2的重量比例混合，加入适量制剂用辅料，制成胶囊、片剂等。该制剂可用于预防或治疗胆结石、胆囊炎。

实施例10：将本发明制得的车前醚苷与连钱草提取物按3～7∶7～3的重量比例混合，加入适量制剂用辅料，制成胶囊、片剂等。该制剂可用于预防或治疗胆结石、胆囊炎。

Claims (14)

1.从结石草中提取纯化车前醚苷的方法，其特征在于：取结石草药材的干燥或新鲜的全草、地上部分或地下部分，按常规工艺提取，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，上大孔树脂，用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

2.按照权利要求1所述从结石草中提取纯化车前醚苷的方法，其特征在于：将结石草按常规水煎煮提取，过滤，滤液减压浓缩成浸膏，上大孔树脂，先用水洗，再用乙醇洗脱，收集洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

3.按照权利要求2所述从结石草中提取纯化车前醚苷的方法，其特征在于：将结石草药材粉碎，加水煎煮2～4次，每次0.5～2小时，加水量为药材重量的6～20倍，滤过，合并滤液，滤液减压浓缩至30～80℃相对密度为1.05～1.25的浸膏，上大孔树脂柱，树脂用量∶生药量＝1～3∶1，先用1～3倍柱体积水洗，继用2～6倍柱体积30～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析、反相柱层析或凝胶柱层析，洗脱剂采用氯仿∶甲醇∶水系统，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

4.按照权利要求1所述从结石草中提取纯化车前醚苷的方法，其特征在于：将结石草药材用30％～95％的乙醇按常规回流、浸渍方法提取，减压回收乙醇，上大孔树脂，用乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，回收溶剂，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

5.按照权利要求4所述从结石草中提取纯化车前醚苷的方法，其特征在于：将结石草药材用30％～95％的乙醇回流提取2～4次，每次0.5～2小时，加醇量为药材重量的6～20倍，过滤，合并滤液，减压回收乙醇，所得浸膏用适量水稀释，上大孔树脂柱，树脂用量∶生药量＝1～3∶1，先用1～3倍柱体积水洗，继用2～6倍柱体积20～95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，得车前醚苷粗品；将粗品反复进行硅胶柱层析，洗脱剂采用氯仿∶甲醇∶水系统，减压回收溶剂，干燥，得车前醚苷纯品。

6.按照权利要求1-5中任一项所述从结石草中提取纯化车前醚苷的方法，其特征在于：所述的大孔树脂型号为D101、AB-8、HPD-100、HPD-400或HPD-600。

7.按照权利要求1-5中任一项所述从结石草中提取纯化车前醚苷的方法，其特征在于：所述的硅胶为200～300目，上柱硅胶为浸膏重量的20～150倍。

8.按照权利要求1-5中任一项所述从结石草中提取纯化车前醚苷的方法，其特征在于：所述的干燥方法为微波真空干燥、减压真空干燥、喷雾干燥或冷冻干燥。

9.如权利要求1-8中任一项所述从结石草中提取纯化车前醚苷的方法提纯得到的车前醚苷。

10.如权利要求9所述的车前醚苷在药品检测中作为化学标准品、对照品的用途。

11.如权利要求9所述的车前醚苷在制备抗炎镇痛的药物中的用途。

12.如权利要求9所述的车前醚苷在制备预防或治疗胆结石、胆囊炎的药物中的用途。

13.按照权利要求11或12所述车前醚苷的用途，其特征在于：取车前醚苷，加入适当辅料制备成颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、软胶囊剂、滴丸剂或其它药剂学上可以接受的剂型。

14.按照权利要求11或12所述车前醚苷的用途，其特征在于：将车前醚苷与其它原料药复配，加入适当辅料制备成颗粒剂、胶囊剂、片剂、口服液、软胶囊剂、滴丸剂或其它药剂学上可以接受的剂型。