CN101685084A

CN101685084A - 一种采用液相色谱法测定溴甲纳曲酮及其杂质的方法

Info

Publication number: CN101685084A
Application number: CN200810070344A
Authority: CN
Inventors: 刘泽荣; 廖薇; 付晓泰; 张道林; 孙化富; 樊斌
Original assignee: Chongqing Pharmaceutical Research Institute Co Ltd
Current assignee: Chongqing Pharmaceutical Research Institute Co Ltd
Priority date: 2008-09-22
Filing date: 2008-09-22
Publication date: 2010-03-31
Anticipated expiration: 2028-09-22
Also published as: CN101685084B

Abstract

本发明提供了一种溴甲纳曲酮及其制剂中杂质和含量测定的方法，属分析化学领域。所述的检测方法是用液相色谱法，非极性的固定相，在以缓冲溶液为流动相A，水与有机溶剂的混合溶剂为流动相B的流动相体系下，采用梯度洗脱，分离测定溴甲纳曲酮及其制剂的杂质和含量。采用该方法可以很好的将甲基纳曲酮与其它已知中间体杂质和未知杂质进行有效分离和测定。本法还可以用于溴甲纳曲酮及其中间体的质量控制。本发明方法专属性强，准确度高，操作简便。

Description

一种采用液相色谱法测定溴甲纳曲酮及其杂质的方法

技术领域

本发明属于分析化学领域，具体涉及用液相色谱法(HPLC)分离测定溴甲纳曲酮及其制剂的杂质和含量的方法。

背景技术

溴甲纳曲酮(Methylnaltrexone Bromide)是一种外周阿片受体拮抗剂，其分子式为C₂₁H₂₆O₄NBr，其结构式见下(I)。

溴甲纳曲酮的化学名为：溴化17-(环丙甲基)-4，5α-环氧-3，14-二羟-17-甲基-6-氧代-吗啡喃。在合成该化合物的过程中，有几步重要的中间体和未知杂质可能会由于去除不完全而影响药物的纯度和质量，这几个已知中间体和未知杂质以及产生的降解产物即药物质量控制中通常所说的有关物质(即杂质)。对于溴化(R)-N-甲基纳曲酮的合成主要控制的已知杂质有四个，分别是起始原料纳曲酮盐酸盐，其结构式见下式(II)，中间体1{17-(环丙甲基)-4，5α-环氧-3，14-二羟-6-(1，3-二氧戊环-2-基)吗啡喃，其结构式见下式(III)}，中间体2{3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-17-(环丙甲基)-4，5α-环氧-14-羟基-6-(1，3-二氧戊环-2-基)吗啡喃，其结构式见下式(IV)}和中间体3{碘化3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-17-(环丙甲基)-4，5α-环氧-14-羟基-6-(1，3-二氧戊环-2-基)-N-甲基吗啡喃，其结构式见下式(V)}。

上述测定方法的难度在于溴甲纳曲酮与起始原料只是N原子上多了一个甲基，二者的保留行为几乎一致，给分离带来难度，而且与中间体2和中间体3比较，极性相差很大，在满足其与起始原料分离的前提下，同时检测中间体2和中间体3，再加上中间体2和中间体3在一般色谱条件系统下，峰形很差，柱效很低，增大了检测难度。

对于合成溴甲纳曲酮中引入的杂质及其降解产物，不论是在原料药还是在制剂中都需要进行质量控制。因此，实现溴甲纳曲酮及其制剂中杂质的分离测定对溴甲纳曲酮原料药以及制剂的质量控制中具有重要的意义。

根据文献(Joachim Osinski，Anbao Wang等，Journal of Chromatography B Volume 780，Issue 2，25November 2002，Page 251-259)报道，用Phenomenex Prodigy ODS-2(5um，150×3.2mm)色谱柱为分离柱，以0.05mol/L醋酸钾溶液-甲醇(89∶11)(pH＝4.5)为流动相，流速为0.5ml/min，测定血样中的甲基纳曲酮，我们参照试验，发现此条件下，甲基纳曲酮峰形不好，色谱峰前倾严重；根据专利(PCT/US2006/020233)报道，方法一：用Luna C18(2)(5um，150×4.6mm)色谱柱为分离柱，以0.1％三氟乙酸溶液为流动相A，以0.1％三氟乙酸甲醇溶液为流动相B，进行梯度洗脱，流速为1ml/min，波长为230nm；方法二：用PhenomenexInertsil ODS-3(5um，150×4.6mm)色谱柱为分离柱，柱温为50℃，以水-甲醇-三氟乙酸(95∶5∶0.1％；V/V/V)为流动相A，以水-甲醇-三氟乙酸(35∶65∶0.1％；V/V/V)为流动相B，梯度洗脱，流速为1.5ml/min，检测波长为280nm；测定(R)-N-甲基纳曲酮和(S)-N-甲基纳曲酮；我们参照试验，发现，此两种条件下中间体1峰形很差，柱效很低，用于检测可能引入溴甲纳曲酮的杂质中间体1时，检测限达不到要求，即不能有效控制溴甲纳曲酮的质量，故没有采用。

为了准确地控制溴甲纳曲酮的质量，有必要寻找一种能简单、快速、准确地分离检测出溴甲纳曲酮的有关物质的方法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种用液相色谱法(HPLC)分离测定溴甲纳曲酮或其制剂中甲纳曲酮及其杂质的方法，从而实现对溴甲纳曲酮及其制剂质量的有效控制。

这里所说的杂质是指从合成过程中引入的杂质或产品或其制剂降解产生的杂质，包括起始原料。所述的测定方法包括溴甲纳曲酮及其制剂的定性分析和定量分析(含量的测定)。

本发明所说的一种采用液相色谱法(HPLC)测定溴甲纳曲酮及其制剂中杂质的方法，其特征在于：

a采用烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱为分离柱；

b以缓冲溶液为流动相A，水与有机溶剂的混合溶剂为流动相B；

c流动相采用梯度方式，流速为0.5ml/min～1.5ml/min，用紫外检测器进行检测；

其中，缓冲溶液选自烷基磺酸盐溶液、高氯酸及高氯酸盐溶液、磷酸及磷酸盐溶液中的一种或几种，有机溶剂为低级醇和/或乙腈。本方法实现对溴甲纳曲酮(Methylnaltrexone bromide)及其制剂中杂质的分离测定和对溴甲纳曲酮中间体的分析检测。

本发明所述的方法，在流动相B中，水、低级醇和乙腈的体积百分比分别为：2％～8％、70％～90％和28％～2％。

本发明所述的方法，所说的低级醇为甲醇、乙醇或丙醇，优选甲醇。

本发明所述的方法，在流动相A中，所说的缓冲溶液的pH为1.5至6.0；缓冲溶液的浓度为：0.0005mol/L至0.1mol/L，优选0.001mol/L至0.02mol/L，最优0.0025mol/L。所说的缓冲溶液选自烷基磺酸盐缓冲溶液、高氯酸及高氯酸盐缓冲溶液、磷酸及磷酸盐缓冲溶液或它们的混合物，其中，所说的烷基磺酸盐为戊烷磺酸盐、己烷磺酸盐、庚烷磺酸盐、辛烷磺酸盐或癸烷磺酸盐，优选庚烷磺酸钠或辛烷磺酸钠，更优选辛烷磺酸钠；所说的高氯酸及高氯酸盐，其中，高氯酸盐优选高氯酸钠或高氯酸钾，更优选高氯酸钠；所说的磷酸及磷酸盐，其中磷酸盐优选磷酸二氢钾、磷酸二氢钠，更优选磷酸二氢钾。

上述所说的缓冲溶液中优选烷基磺酸盐缓冲溶液，其浓度为0.0005mol/L至0.1mol/L，优选0.001mol/L至0.02mol/L，最优0.0025mol/L；其pH选择范围为1.5至6.0，优选pH2.0至3.0，最优pH2.5。

本发明所述的方法，其中，烷基硅烷键合硅胶为十八烷基硅烷基键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶，也就是说本发明所说的色谱柱选自十八烷基硅烷基键合硅胶柱或辛烷基硅烷键合硅胶柱。

上述所说的色谱柱选择牌号为Zorbax SB-C18、Zorbax XDB-C18、Zorbax XDB-C18、AichromBond-AQ C18和Venusil MP C18的色谱柱。

本发明所说的梯度洗脱方法为：0分钟至5分钟，流动相A为50％～70％(V/V)，流动相B为50％～30％(V/V)；5分钟至25分钟，流动相A线性减少至10％～30％(V/V)，流动相B线性增加至90％～70％(V/V)；25分钟至50分钟，流动相A为10％～30％(V/V)，流动相B为90％～70％(V/V)；50.1分钟至60分钟，流动相A为50％～70％(V/V)，流动相B为50％～30％(V/V)，即50.1分钟后为平衡色谱柱。

本发明所说的梯度洗脱方法优选为：0分钟至5分钟，流动相A为60％(V/V)，流动相B为40％(V/V)；5分钟至25分钟，流动相A线性减少至20％(V/V)，流动相B线性增加至80％(V/V)；25分钟至50分钟，流动相A为20％(V/V)，流动相B为80％(V/V)；50.1分钟至60分钟，流动相A为60％(V/V)，流动相B为40％(V/V)，即50.1分钟后为平衡色谱柱。

本发明所说的梯度洗脱方法，具体实施方案为：0分钟至5分钟，烷基磺酸盐溶液为60％(V/V)，水/有机溶剂为40％(V/V)；5分钟至25分钟，烷基磺酸盐溶液线性减少至20％(V/V)，水/有机溶剂线性增加至80％(V/V)；25分钟至50分钟，烷基磺酸盐溶液为20％(V/V)，水/有机溶剂80％(V/V)；50.1分钟至60分钟，烷基磺酸盐溶液为60％(V/V)，水/有机溶剂为40％(V/V)，即50.1分钟后为平衡色谱柱。这里所说的烷基磺酸盐为0.0025mol/L辛烷磺酸钠溶液(pH为2.5)，为流动相A，所说的水/有机溶剂为流动相B，即为水、低级醇和乙腈的混合物。

在一具体实施方案中，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(如：Zorbax SB-C18(5μm，250×4.6mm))的色谱柱，以0.0025mol/L辛烷磺酸钠溶液(用10％磷酸溶液调节pH值至2.5)为流动相A，水-甲醇-乙腈(50∶800∶150；V/V/V)为流动相B，进行梯度洗脱：0分钟至5分钟，流动相A为60％(V/V)，流动相B为40％(V/V)；5分钟至25分钟，流动相A线性减少至20％(V/V)，流动相B线性增加至80％(V/V)；25分钟至50分钟，流动相A为20％(V/V)，流动相B为80％(V/V)；50.1分钟至60分钟，流动相A为60％(V/V)，流动相B为40％(V/V)，即50.1分钟后为平衡色谱柱。流速为1.0ml/min，柱温为40℃，检测波长为230nm。

本发明所说的测定方法，在一具体实施方案中，还包括以下步骤：

a)供试品溶液的配制：取溴甲纳曲酮或含溴甲纳曲酮的制剂适量，加稀释剂溶解样品，并配制成每1ml含溴甲纳曲酮0.1至10mg的样品溶液作为供试品溶液。

b)对照溶液的配制：精密量取供试品溶液适量，加稀释剂制成浓度为供试品溶液浓度0.1％～2.0％的溶液，作为对照溶液。其中，稀释剂为流动相A与流动相B的混合溶液，其比例为50∶50～70∶30，优选：60∶40。

c)设置流动相的流速为0.5～1.5ml/min，优选1.0ml/min；设置检测波长为200nm至250nm或者270至300nm，优选230nm；设置色谱柱的柱温为15℃至60℃，优选40℃；设置进样量为5μl至100μl，优选20μl。分别精密量取等体积供试品溶液与对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，完成供试品溶液有关物质的分离测定。

其中：

液相色谱仪：Agilent 1100型高效液相色谱仪

色谱柱：Zorbax SB-C18(5μm，250×4.6mm)

柱温：40℃

流动相A：0.0025mol/L辛烷磺酸钠溶液(用10％磷酸溶液调节pH值至2.5)

流动相B：水-甲醇-乙腈(50∶800∶150；V/V/V)

梯度洗脱程序：0分钟至5分钟，流动相A为60％(V/V)，流动相B为40％(V/V)；5分钟至25分钟，流动相A线性减少至20％(V/V)，流动相B线性增加至80％(V/V)；25分钟至50分钟，流动相A为20％(V/V)，流动相B为80％(V/V)；50.1分钟至60分钟，流动相A为60％(V/V)，流动相B为40％(V/V)，即50.1分钟后为平衡色谱柱。

稀释剂：流动相A-流动相B(60∶40)

流速：1.0ml/min；检测波长：230nm；进样体积：20μl。

上述步骤中，所说的稀释剂，由流动相A与流动相B的体积比为50∶50至70∶30组成。

本发明所述的杂质包括已知结构的杂质和其它未知结构的杂质(包括降解产物)。所述的已知结构的杂质至少包括以下四种中的一种：纳曲酮盐酸盐、17-(环丙甲基)-4，5α-环氧-3，14-二羟-6-(1，3-二氧戊环-2-基)吗啡喃、3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-17-(环丙甲基)-4，5α-环氧-14-羟基-6-(1，3-二氧戊环-2-基)吗啡喃、碘化3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-17-(环丙甲基)-4，5α-环氧-14-羟基-6-(1，3-二氧戊环-2-基)-N-甲基吗啡喃。

本发明采用Zorbax SB-C18色谱柱，能够有效的分离检测溴甲纳曲酮及其制剂的杂质和含量。选用梯度0至5分钟等度段比例流动相作为稀释剂溶解样品，排除了溶剂峰的干扰，酸性缓冲液和近40％有机相，确保溶解完全极性稍小的中间体2和中间体3；柱温为40℃，让分离度达到最佳，采用梯度洗脱，确保能够检测到极性稍小的中间体2和中间体3，配合辛烷磺酸钠，可以增强保留，改善分离度，确保色谱峰的良好对称性和较高的柱效。有机相中加入适量的水和乙腈，一方面，增大了分离度；另一方面，避免了用纯甲醇时产生系统峰干扰测定。

本发明的方法可以将甲基纳曲酮与相邻的杂质峰、降解产物以及起始原料、中间体1、中间体2和中间体3有效分离，能准确测定杂质，而且峰形对称，柱效较高，从而解决了溴甲纳曲酮及其制剂杂质(包括起始原料、中间体和降解产物)分离和测定较困难的问题，尤其解决了溴甲纳曲酮与纳曲酮难以分离的问题，从而保证了溴甲纳曲酮及其制剂的质量可控。

附图说明

图1稀释剂的液相色谱图

图2溴甲纳曲酮对照的液相色谱图

图3纳曲酮盐酸盐(起始原料)对照溶液的液相色谱图

图4中间体1对照溶液的液相色谱图

图5中间体2对照溶液的液相色谱图

图6中间体3对照溶液的液相色谱图

图7溴甲纳曲酮+起始原料+中间体1+中间体2+中间体3的液相色谱图

图8梯度基线的液相色谱图

图9溴甲纳曲酮有关物质供试品溶液的液相色谱图

图10溴甲纳曲酮有关物质0.5％对照溶液的液相色谱图

图11以0.01mol/L辛烷磺酸钠溶液(pH＝2.0)为流动相A，水-甲醇-乙腈(20∶700∶280)为流动相B，柱温为20℃时的液相色谱图

图12溴甲纳曲酮含量测定对照溶液的液相色谱图

图13溴甲纳曲酮含量测定供试品溶液的液相色谱图

图14溴甲纳曲酮注射液杂质测定供试品溶液的液相色谱图

图15溴甲纳曲酮注射液杂质测定0.5％对照溶液的液相色谱图

图16溴甲纳曲酮注射液杂质测定空白辅料供试液的液相色谱图

图17对比实施例测定溴甲纳曲酮杂质的液相色谱图

具体实施方式

实施例1

仪器与条件

Agilent 1100型液相色谱仪及化学工作站；自动进样；以Zorbax SB-C18柱(5μm，250×4.6mm)为分离色谱柱；紫外检测器波长：230nm；流动相：以0.0025mol/L辛烷磺酸钠溶液(用10％磷酸溶液调节pH值至2.5)为流动相A，以水-甲醇-乙腈(50∶800∶150；V/V/V)为流动相B，梯度洗脱；0分钟至5分钟，流动相A为60％(V/V)，流动相B为40％(V/V)；5分钟至25分钟，流动相A线性减少至20％(V/V)，流动相B线性增加至80％(V/V)；25分钟至50分钟，流动相A为20％(V/V)，流动相B为80％(V/V)；50.1分钟至60分钟，流动相A为60％(V/V)，流动相B为40％(V/V)，即50.1分钟后为平衡色谱柱。柱温为40℃，流速：1.0ml/min，进样体积为20μl。

实验步骤

取溴甲纳曲酮约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加稀释剂(流动相A-流动相B(60∶40))溶解并稀释至刻度，摇匀，作为溴甲纳曲酮对照溶液；取纳曲酮盐酸盐约5mg，精密称定，置10ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，摇匀，作为纳曲酮盐酸盐贮备液，精密量取贮备液0.5ml，置25ml量瓶中，加稀释剂(流动相A-流动相B(60∶40))溶解并稀释至刻度，摇匀，作为纳曲酮盐酸盐对照溶液；另取中间体1、中间体2与中间体3各约5mg，精密称定，各置10ml量瓶中，加乙腈溶解并稀释至刻度，摇匀，作为中间体1、中间体2与中间体3贮备液；分别精密量取中间体1、中间体2与中间体3贮备液0.5ml，各置25ml量瓶中，加稀释剂(流动相A-流动相B(60∶40))溶解并稀释至刻度，摇匀，作为中间体1、中间体2与中间体3对照溶液；取溴甲纳曲酮约25mg，精密称定，置25ml量瓶中，精密加入纳曲酮盐酸盐贮备液、中间体1、中间体2与中间体3贮备液各0.5ml，加稀释剂(流动相A-流动相B(60∶40))溶解并稀释至刻度，摇匀，作为混合对照溶液。

分别取稀释剂、溴甲纳曲酮对照溶液、纳曲酮盐酸盐对照溶液、中间体1对照溶液、中间体2对照溶液与中间体3对照溶液以及混合对照溶液，按上述色谱条件进行液相色谱分析，记录色谱图，结果见图1、图2、图3、图4、图5、图6、图7；另外，不进样，按上述色谱条件采集梯度基线色谱图，见图8。

图7中保留时间为1.979min的色谱峰为Br-或I-的色谱峰，10.440min的色谱峰为甲基纳曲酮的色谱峰，11.604min的色谱峰为纳曲酮盐酸盐的色谱峰，14.319min的色谱峰为中间体1的色谱峰，32.500min的色谱峰为中间体2和中间体3的色谱峰，其它峰为未知杂质。

图1证明，稀释剂不干扰测定；图8证明，色谱系统无干扰；图7证明，本法可以有效分离溴甲纳曲酮中可能存在的未知杂质和已知杂质，即本方法可以用于溴甲纳曲酮及其制剂的杂质和含量的测定；同时，本方法还可以用于甲基纳曲酮的其它卤化物以及由这些卤化物所制成的制剂的杂质和含量的测定。

实施例2

溴甲纳曲酮杂质的测定。

取溴甲纳曲酮约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加稀释剂(流动相A-流动相B(60∶40))超声处理使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取0.5ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；照实施例1的色谱条件进行液相色谱分析，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰(除主峰相对保留时间约0.19处溴离子峰外)，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积(0.5％)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(1.0％)。结果见图9、图10。

实施例3

仪器与条件

Agilent 1100型液相色谱仪及化学工作站；自动进样；以AichromBond-AQ C18(5μm，250×4.6mm)为分离色谱柱；紫外检测器波长：230nm；流动相：以0.01mol/L辛烷磺酸钠溶液(用10％磷酸溶液调节pH值至2.0)为流动相A，以水-甲醇-乙腈(20∶700∶280；V/V/V)为流动相B，梯度洗脱；0分钟至5分钟，流动相A为50％(V/V)，流动相B为50％(V/V)；5分钟至25分钟，流动相A线性减少至10％(V/V)，流动相B线性增加至90％(V/V)；25分钟至50分钟，流动相A为10％(V/V)，流动相B为90％(V/V)；50.1分钟至60分钟，流动相A为50％(V/V)，流动相B为50％(V/V)，即50.1分钟后为平衡色谱柱。柱温为20℃，流速：1.2ml/min，进样体积为20μl。

实验步骤

取溴甲纳曲酮约10mg，精密称定，置10ml量瓶中，加稀释剂(流动相A-流动相B(50∶50))超声处理使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取20μl，注入液相色谱仪，结果见图11。

实施例4

用液相色谱法测定溴甲纳曲酮的含量。

取溴甲纳曲酮约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；另取溴甲纳曲酮对照品约10mg，精密称定，置50ml量瓶中，加水适量，超声处理使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液；照实施例1的色谱条件进行液相色谱分析，按外标法计算，即得。结果见图12、图13。

实施例5

用液相色谱法测定溴甲纳曲酮注射液的杂质。

取本品适量(约相当于溴甲纳曲酮10mg)，置10ml量瓶中，加稀释剂(流动相A-流动相B(60∶40))使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取0.5ml，置100ml量瓶中，加稀释剂稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取处方比例的空白辅料，照供试品溶液相同的方法制备空白辅料供试液；照实施例1的色谱条件进行液相色谱分析，供试品溶液的色谱图中如有杂质峰(除主峰相对保留时间约0.19处溴离子峰外)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的2倍(1.0％)。结果见图14、图15、图16。

对比实施例

用液相色谱法测定溴甲纳曲酮杂质。

仪器与条件

Agilent1100型液相色谱仪及化学工作站；以Intertsil ODS-2柱(5μm，150×4.6mm)为分离色谱柱；紫外检测器波长：230nm；流动相：水-甲醇(80∶20)。柱温为25℃，流速：1.0ml/min，进样体积为20μl。

实验步骤

取本品适量(约相当于溴甲纳曲酮10mg)，置10ml量瓶中，加流动相使溶解并稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；照上述色谱条件进行液相色谱分析。实验结果表明，在此色谱条件下溴甲基纳洛酮在色谱柱上几乎没有保留，而且色谱峰峰形很差，严重拖尾。结果见图17。

Claims

1.一种采用液相色谱法测定溴甲纳曲酮或其杂质的方法，其特征在于：

a采用烷基硅烷键合硅胶为填料的色谱柱为分离柱；

其中，缓冲溶液选自烷基磺酸盐溶液、高氯酸及高氯酸盐溶液、磷酸及磷酸盐溶液中的一种或几种，有机溶剂为低级醇和/或乙腈。

2、根据权利要求1所述的方法，流动相B中，水、低级醇和乙腈的体积百分比分别为：2％～8％、70％～90％和28％～2％。

3、根据权利要求1或2所述的方法，所说的低级醇为甲醇、乙醇或丙醇，优选甲醇。

4、根据权利要求1所述的方法，所说的烷基硅烷键合硅胶为十八烷基硅烷基键合硅胶或辛烷基硅烷键合硅胶。

5、根据权利要求1所述的方法，所说的缓冲溶液为烷基磺酸盐溶液。

6、根据权利要求5所述的方法，所说的烷基磺酸盐为戊烷磺酸盐、己烷磺酸盐、庚烷磺酸盐、辛烷磺酸盐或癸烷磺酸盐，优选庚烷磺酸钠或辛烷磺酸钠，更优选辛烷磺酸钠。

7、根据权利要求1或5或6所述的方法，所说的缓冲溶液的浓度为0.0005mol/L至0.1mol/L，优选0.001mol/L至0.02mol/L。

8、根据权利要求1所述的分离测定方法，所说的缓冲溶液用10％磷酸溶液调节pH为1.5至6.0，优选pH为2.0至3.0。

9、根据权利要求1所述的方法，所说的梯度方法为：0分钟至5分钟，流动相A为50％～70％(V/V)，流动相B为50％～30％(V/V)；5分钟至25分钟，流动相A线性减少至10％～30％(V/V)，流动相B线性增加至90％～70％(V/V)；25分钟至50分钟，流动相A为10％～30％(V/V)，流动相B为90％～70％(V/V)；50.1分钟至60分钟，流动相A为50％～70％(V/V)，流动相B为50％～30％(V/V)，即50.1分钟后为平衡色谱柱。

10、根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所说的方法还包含以下步骤：

a)供试品溶液的配制：取溴甲纳曲酮或含溴甲纳曲酮的制剂适量，加稀释剂溶解样品，并配制成每1ml含溴甲纳曲酮0.1至10mg的样品溶液作为供试品溶液；

b)对照溶液的配制：精密量取供试品溶液适量，加稀释剂制成浓度为供试品溶液浓度0.1％～2.0％的溶液，作为对照溶液，其中，稀释剂为流动相A与流动相B的混合溶液，其比例为50∶50～70∶30，优选：60∶40；

c)设置流动相的流速为0.5～1.5ml/min，优选1.0ml/min，设置检测波长为200nm至250nm或者270至300nm，优选230nm，设置色谱柱的柱温为15℃至60℃，优选40℃，设置进样量为5μl至100μl，优选20μl，分别精密量取等体积供试品溶液与对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，完成供试品溶液有关物质的分离测定。

11.权利要求1所述的杂质为已知结构的杂质和其它未知结构的杂质(包括降解产物)。

12.权利要求11所述的已知结构的杂质至少包括以下四种中的一种：纳曲酮盐酸盐、17-(环丙甲基)-4，5α-环氧-3，14-二羟-6-(1，3-二氧戊环-2-基)吗啡喃、3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-17-(环丙甲基)-4，5α-环氧-14-羟基-6-(1，3-二氧戊环-2-基)吗啡喃、碘化3-[(叔丁基二甲基硅烷基)氧基]-17-(环丙甲基)-4，5α-环氧-14-羟基-6-(1，3-二氧戊环-2-基)-N-甲基吗啡喃。