CN101684144A - 一种冰结构蛋白的制造方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种冰结构蛋白的制造方法，属于食品加工技术领域。本发明以女贞叶为基体，经过冷藏，与Tris－HCl缓冲液及碎冰混合匀浆，再经沸水浴灭酶、冰水浴冷却、冷冻离心取上清液；再将上清液加入预冷丙酮，低温过夜沉淀，再经冷冻离心和冷冻干燥等工艺过程，制造冰结构蛋白冻干粉。本发明工艺过程简单，成本低廉，简单易行。制造出的冰结构蛋白分子量为66Kda，热滞活性为0.678℃，为纯天然产品，不含有任何有毒有害物质，可以广泛应用于农业、食品、医药等行业。
Description
技术领域
本发明涉及一种冰结构蛋白的制造方法，属于食品加工技术领域。
背景技术
冰结构蛋白能以非依数性地降低水溶液的冰点而对熔点影响甚微，导致水溶液的熔点和冰点之间出现差值，即冰结构蛋白具有热滞活性；且冰结构蛋白还能够特异性地与冰晶结合，吸附到冰晶表面的冰结构蛋白，阻止了吸附位置处冰晶的生长，冰晶表面被蚀刻得凹凸不平，导致冰晶新的生长半径较原来小，阻止冷冻食品体系中冰晶长大，即冰结构蛋白具有抑制冰晶重结晶功能。基于此，冰结构蛋白可用于冷冻食品体系，控制冰晶重结晶，减小冰晶对食品体系造成的破坏，具有广阔的应用前景。
女贞叶在全国分布广泛，来源丰富。它能耐受-12℃的低温，在越冬期间保持长青。越冬女贞叶，经受冷应激，会产生冰结构蛋白以抵抗外界的寒冷。且女贞叶中不含毒副成分，由其提取出的天然冰结构蛋白可以广泛应用于农业、食品、医药等领域。
发明内容
本发明的目的在于开发一种女贞叶冰结构蛋白的制造方法，最大限度地降低成本、简化工艺，为冰结构的广泛应用奠定基础。
本发明的技术方案
女贞叶，经冷藏，与Tris-HCl缓冲液及碎冰混合匀浆，再经沸水浴灭酶，冰水浴冷却，冷冻离心，收集上清液；再将上清液加入预冷丙酮(上清液∶丙酮＝1∶4)混合，-20℃过夜，沉淀，再冷冻离心，收集沉淀，冷冻干燥，得到冰结构蛋白冻干粉。工艺为：
(1)冷藏：用清水洗净女贞叶，勿干燥，带水置于4℃冰箱中冷藏4周，诱导产生冰结构蛋白；
(2)匀浆：将冷藏女贞叶投入pH7.4、20mmol/L Tris-HCl缓冲液(Vc 1mg/l)，其中女贞叶质量/缓冲液体积比为2/5，然后加入碎冰，混合匀浆；
(3)灭酶：匀浆后，经八层纱布过滤，将滤液沸水浴15min，使酶失活，再经冰水浴冷却；
(4)冷冻离心：于温度4℃、离心力10,000g条件下，离心15min，收集上清液。
(5)沉淀：上清液按照1∶4(上清液∶丙酮)比例加入预冷丙酮中，混合，-20℃过夜，沉淀；
(6)冷冻离心、干燥：于温度4℃、离心力10,000g条件下，离心30min，收集沉淀，经冷冻干燥得冰结构蛋白冻干粉产品。
本发明制备的冰结构蛋白为纯天然产品，不含有任何有毒有害物质，可以广泛应用于农业、食品、医药等行业。
本发明与已有技术相比具有以下优点：
本发明制造过程简单，成本低廉，简单易行，所得冰结构蛋白冻干粉天然、无毒，为冰结构蛋白的广泛应用奠定了基础。
附图说明
图1为一种冰结构蛋白制造方法工艺流程图。
图2为冰结构蛋白冻干粉的聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)图。
图3为部分熔融重冻结的冰结构蛋白的DSC曲线。
具体实施方式
实施例一：
用清水洗净女贞叶，置于4℃冰箱中冷藏4周。称取女贞叶100g，投入250mL pH7.4、20mmol/L Tris-HCl缓冲液(Vc 1mg/l)，再加入碎冰，混合匀浆；八层纱布过滤，将滤液沸水浴15min，再经冰水浴冷却，于温度4℃、离心力10,000g条件下离心15min，收集上清液；然后，按照1∶4(上清液∶丙酮)比例加入预冷丙酮，混合，-20℃过夜，沉淀，于温度4℃、离心力10,000g条件下，离心30min，收集沉淀，冷冻干燥，得到冰结构蛋白冻干粉。
将上述冰结构蛋白冻干粉经SDS-PAGE分析，如图2，泳道M为低分子量标准蛋白，泳道1为制造出的冰结构蛋白，分子量约为66Kda。经差示扫描量热仪测定其热滞活性，如图3，所得到的冰结构蛋白的热滞活性为0.678℃，较通常植物中冰结构蛋白的热滞活性高。
Claims (3)
1、一种冰结构蛋白的制造方法，其特征是以女贞叶为基体，经过冷藏后，与Tris-HCl缓冲液及碎冰混合匀浆，再经沸水浴灭酶，冰水浴冷却，冷冻离心，收集上清液；再将上清液加入预冷丙酮(上清液∶丙酮＝1∶4)混合，-20℃过夜，沉淀，再冷冻离心，收集沉淀，冷冻干燥，得到冰结构蛋白粉。工艺为：
(1)冷藏：用清水洗净女贞叶，勿干燥，带水置于4℃冰箱中冷藏4周，诱导产生冰结构蛋白；
(2)匀浆：将冷藏女贞叶投入pH7.4、20mmol/L Tris-HCl缓冲液(Vc 1mg/l)，其中女贞叶质量/缓冲液体积比为2/5，然后加入碎冰，混合匀浆；
(3)灭酶：匀浆后，经八层纱布过滤，将滤液沸水浴15min，使酶失活，再经冰水浴冷却；
(4)冷冻离心：于温度4℃、离心力10,000g条件下，离心30min，收集上清液。
(5)沉淀：冷却液按照1∶4(上清液∶丙酮)比例加入预冷丙酮中，混合，-20℃过夜，沉淀；
(6)冷冻离心、干燥：于温度4℃、离心力10,000g条件下，离心30min，收集沉淀，经冷冻干燥得冰结构蛋白冻干粉产品。
2、一种用权利要求1所述制造方法得到的冰结构蛋白，其特征是分子量为66Kda，热滞活性为0.678℃。
3、一种用权利要求1所述制造方法得到的冰结构蛋白，其特征是纯天然、不含有毒有害物质，可以广泛应用于农业、食品、医药等行业。
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| CN101684144A true CN101684144A (zh) | 2010-03-31 |
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| CN (1) | CN101684144A (zh) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104650199A (zh) * | 2015-01-12 | 2015-05-27 | 江南大学 | 一种大麦籽粒中冰结构蛋白的快速特异性纯化方法 |
| CN106084023A (zh) * | 2016-08-25 | 2016-11-09 | 哈尔滨商业大学 | 一种从寒地冬小麦中提取冰结构蛋白的方法 |
Citations (1)
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| CN1231580A (zh) * | 1996-07-26 | 1999-10-13 | 尤尼利弗公司 | 冷冻糖食制品 |
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Patent Citations (1)
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