CN101678213B - 环肽cxcr4拮抗剂 - Google Patents

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Abstract

本发明提供用于治疗癌、类风湿性关节炎、肺纤维化和HIV感染的内酰胺环化肽CXCR4拮抗剂。

Description

环肽CXCR4拮抗剂
技术领域
本发明涉及新的环肽CXCR4拮抗剂化合物及它们在治疗由CXCR4和SDF-1介导发病的疾病中的用途。
背景技术
G蛋白偶联受体CXCR4与其天然配体基质细胞衍生因子1(SDF-1；CXCL12)是趋化因子受体-配体对。CXCR4在宽范围人癌中组成型表达或过表达。唯一已知的CXCR4配体SDF-1在肿瘤微环境中，以及在骨髓、肺、肝和淋巴结，即最经常涉及肿瘤转移的器官位点中高表达。CXCR4/SDF-1相互作用在肿瘤发生的多个阶段，包括肿瘤生长、侵入、血管发生和转移，以及在类风湿性关节炎、肺纤维化和HIV感染中起重要作用(Tsutsumi等(2006)Peptide Science 88(2)：279-289)。
考虑到CXCR4/SDF-1在这些严重疾病中的参与，CXCR4是有吸引力的治疗靶点。
AMD3100，一种双环拉胺类(bicyclam)CXCR4拮抗剂，目前处于III期临床试验中，用于在患有多发性骨髓瘤和非霍奇金淋巴瘤的患者中移植干细胞时动员干细胞。另一小分子CXCR4拮抗剂AMD070目前处于II期临床试验中用于HIV感染。CTCE9908，一种二价(二聚体)肽CXCR4拮抗剂，目前处于Ib/II期临床试验中用于癌症。FC131，一种环状五肽CXCR4拮抗剂，以4nM的IC50抑制125I-SDF-1结合CXCR4转染子(Fujii等(2003)Angew.Chem.Int.Ed.42：3251-3253；Araki等(2003)PeptideScience.The Japanese Peptide Society(2004)：207-210)。
存在对改善的CXCR4拮抗剂的需要，该拮抗剂应有效并具有选择性，对其它趋化因子受体几乎不或完全不显示活性。本发明的化合物就是这样的有效并具选择性的CXCR4拮抗剂。其高效力允许在治疗方案中使用低剂量，同时其高选择性将非靶标相关的有害副作用降至最低。此外，本文公开的化合物还具有其它高度期望的药理学性质，如当皮下施用时高的生物利用率、良好的体内代谢稳定性和允许方便施用的药物代谢动力学/药效学性质。
发明内容
因此，第一方面，本发明提供式I的内酰胺环化肽：
R1-环[X1-Tyr-X3-DArg-2Nal-Gly-X7]-X8-X9-X10-R2
(I)
(SEQ ID NO：1)
或其药学上可接受的盐
其中：
a)所述内酰胺通过X1的侧链氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成，其中X1和X7是选自(D/L)Agl/Glu、Dab/Glu和Dap/Glu的对，并且R1是Ac或正己酰基；或
b)所述内酰胺通过X1的侧链羧基与X7的侧链氨基之间的酰胺键形成，其中X1和X7是选自Asp/(D/L)Agl、Asp/Dab、Asp/Dap、Glu/(D/L)Agl、Glu/Dab、Glu/Dap、Glu/DDap和Glu/Lys的对，并且R1是Ac或Bz，或者其中X1和X7是选自琥珀酰基/(D/L)Agl、琥珀酰基/Dab、琥珀酰基/Dap、琥珀酰基/Lys和琥珀酰基/Orn的对，并且R1不存在；或
c)所述内酰胺通过X1的α-氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成，其中X1和X7是选自Ala/Glu、Ala/DGlu、DAla/Glu、DAla/DGlu、Dap(Ac)/Glu、Gly/Asp、Gly/Glu、Gly/DGlu、Leu/Glu、Leu/DGlu、Lys/DGlu、Lys(Ac)/Glu、2Nal/Glu、Phe/Glu、Phe/DGlu、DPhe/Glu和DPhe/DGlu的对，并且R1不存在；或
d)所述内酰胺通过X1的非α、非侧链氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成，其中X1和X7是选自β-Ala/Asp、β-Ala/Glu、5-氨基戊酰基/Asp、5-氨基戊酰基/Glu、4-AMB/Glu、4-AMPA/Asp和4-AMPA/Glu的对，并且R1不存在；或
e)所述内酰胺通过X2的α-氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成，其中X2和X7是选自Tyr/Asp、Tyr/Glu和Tyr/DGlu的对，并且R1和X1均不存在；
当X1含有α-氨基并且所述α-氨基不是所述内酰胺的酰胺键的组分时，R1是X1的α-氨基基团上的取代基，选自Ac、Bz和正己酰基，或者不存在，其中X1选自(D/L)Agl、Asp、Dab、Dap和Glu；
X1选自(D/L)Agl、Ala、β-Ala、DAla、5-氨基戊酰基、4-AMB、4-AMPA、Asp、Dab、Dap、Dap(Ac)、Glu、Gly、Leu、Lys、Lys(Ac)、2Nal、Phe、DPhe和琥珀酰基，或不存在；
X3选自Arg、Lys、Lys(iPr)和Lys(Me2)；
X7选自(D/L)Agl、Asp、Dab、Dap、DDap、Glu、DGlu、Lys和Orn；
X8选自β-Ala、Arg、DArg、Gly、Lys、Lys(iPr)和Orn，或不存在；
X9选自Gly、2Nal、D2Nal和DPhe，或不存在；
X10是2Nal，或不存在；
其中当X8不存在时，X9和X10均不存在，当X9不存在时，X10不存在，
R2选自NH2和NHEt。
换一种方式表述，这等同于式I的内酰胺环化肽：
R1-环[X1-Tyr-X3-DArg-2Nal-Gly-X7]-X8-X9-X10-R2
(I)
(SEQ ID NO：1)
或其药学上可接受的盐
其中：
当X1含有α-氨基并且所述α-氨基不是所述内酰胺的酰胺键的组分时，R1是X1的α-氨基基团上的取代基，选自Ac、Bz和正己酰基，或不存在，其中X1选自(D/L)Agl、Asp、Dab、Dap和Glu；
X1选自(D/L)Agl、Ala、β-Ala、DAla、5-氨基戊酰基、4-AMB、4-AMPA、Asp、Dab、Dap、Dap(Ac)、Glu、Gly、Leu、Lys、Lys(Ac)、2Nal、Phe、DPhe和琥珀酰基，或不存在；
X3选自Arg、Lys、Lys(iPr)和Lys(Me2)；
X7选自(D/L)Agl、Asp、Dab、Dap、DDap、Glu、DGlu、Lys和Orn；
X8选自β-Ala、Arg、DArg、Gly、Lys、Lys(iPr)和Orn，或不存在；
X9选自Gly、2Nal、D2Nal和DPhe，或不存在；
X10是2Nal，或不存在；
其中当X8不存在时，X9和X10均不存在，当X9不存在时，X10不存在，
R2选自NH2和NHEt，
其中：
a)当X1和X7是选自(D/L)Agl/Glu、Dab/Glu和Dap/Glu的对，并且R1是Ac或正己酰基时，所述内酰胺通过X1的侧链氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成；或
b)当X1和X7是选自Asp/(D/L)Agl、Asp/Dab、Asp/Dap、Glu/(D/L)Agl、Glu/Dab、Glu/Dap、Glu/DDap和Glu/Lys的对，并且R1是Ac或Bz时，或者当X1和X7是选自琥珀酰基/(D/L)Agl、琥珀酰基/Dab、琥珀酰基/Dap、琥珀酰基/Lys和琥珀酰基/Orn的对，并且R1不存在时，所述内酰胺通过X1的侧链羧基与X7的侧链氨基之间的酰胺键形成；或
c)当X1和X7是选自Ala/Glu、Ala/DGlu、DAla/Glu、DAla/DGlu、Dap(Ac)/Glu、Gly/Asp、Gly/Glu、Gly/DGlu、Leu/Glu、Leu/DGlu、Lys/DGlu、Lys(Ac)/Glu、2Nal/Glu、Phe/Glu、Phe/DGlu、DPhe/Glu和DPhe/DGlu的对，并且R1不存在时，所述内酰胺通过X1的α-氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成；或
d)当X1和X7是选自β-Ala/Asp、β-Ala/Glu、5-氨基戊酰基/Asp、5-氨基戊酰基/Glu、4-AMB/Glu、4-AMPA/Asp和4-AMPA/Glu的对，并且R1不存在时，所述内酰胺通过X1的非α、非侧链氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成；或
e)当X2和X7是选自Tyr/Asp、Tyr/Glu和Tyr/DGlu的对，并且R1和X1均不存在时，所述内酰胺通过X2的α-氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成。
在另一方面，本发明提供式I的内酰胺环化肽：
R1-环[X1-Tyr-X3-DArg-2Nal-Gly-X7]-X8-X9-X10-R2
(I)
(SEQ ID NO：1)
或其药学上可接受的盐，
其中：
X1选自(D/L)Agl、Ala、β-Ala、DAla、5-氨基戊酰基、4-AMB、4-AMPA、Asp、Dab、Dap、Dap(Ac)、Glu、Gly、Leu、Lys、Lys(Ac)、2Nal、Phe、DPhe和琥珀酰基，或不存在；
其中当X1是(D/L)Agl、Dab或Dap并且X1的α-氨基不是内酰胺的酰胺键的组分时，所述α-氨基被选自Ac和正己酰基的R1取代；
其中当X1是Asp或Glu并且X1的α-氨基不是内酰胺的酰胺键的组分时，所述α-氨基被选自Ac和Bz的R1取代；并且
其中当X1是Ala、β-Ala、DAla、5-氨基戊酰基、4-AMB、4-AMPA、Dap(Ac)、Gly、Leu、Lys、Lys(Ac)、2Nal、Phe、DPhe或琥珀酰基时，R1不存在；
X3选自Arg、Lys、Lys(iPr)和Lys(Me2)；
X7选自(D/L)Agl、Asp、Dab、Dap、DDap、Glu、DGlu、Lys和Orn；
X8选自β-Ala、Arg、DArg、Gly、Lys、Lys(iPr)和Orn，或不存在；
X9选自Gly、2Nal、D2Nal和DPhe，或不存在；
X10是2Nal，或不存在；
其中当X8不存在时，X9和X10均不存在，当X9不存在时，X10不存在，
R2选自NH2和NHEt，
并且进一步地其中：
所述内酰胺由X1的侧链氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成，X1和X7是选自(D/L)Agl/Glu、Dab/Glu和Dap/Glu的对，并且R1是Ac或正己酰基；或
所述内酰胺由X1的侧链羧基与X7的侧链氨基之间的酰胺键形成，X1和X7是选自Asp/(D/L)Agl、Asp/Dab、Asp/Dap、Glu/(D/L)Agl、Glu/Dab、Glu/Dap、Glu/DDap和Glu/Lys的对，并且R1是Ac或Bz，或者其中X1和X7是选自琥珀酰基/(D/L)Agl、琥珀酰基/Dab、琥珀酰基/Dap、琥珀酰基/Lys和琥珀酰基/Orn的对，并且R1不存在；或
所述内酰胺由X1的α-氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成，X1和X7是选自Ala/Glu、Ala/DGlu、DAla/Glu、DAla/DGlu、Dap(Ac)/Glu、Gly/Asp、Gly/Glu、Gly/DGlu、Leu/Glu、Leu/DGlu、Lys/DGlu、Lys(Ac)/Glu、2Nal/Glu、Phe/Glu、Phe/DGlu、DPhe/Glu和DPhe/DGlu的对，并且R1不存在；或
所述内酰胺由X1的非α、非侧链氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成，并且X1和X7是选自β-Ala/Asp、β-Ala/Glu、5-氨基戊酰基/Asp、5-氨基戊酰基/Glu、4-AMB/Glu、4-AMPA/Asp和4-AMPA/Glu的对，并且R1不存在；或
所述内酰胺由X2处的Tyr的α-氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成，X7选自Asp、Glu和DGlu，并且R1和X1均不存在。
在式I的所有化合物中重现的序列基序是在位置X2处存在的Tyr、位置X4处存在的DArg、位置X5处存在的2Nal和位置X6处存在的Gly。
在另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自Ac和Bz，或不存在；
X1选自β-Ala、4-AMB、4-AMPA、Asp、Dab、Dap、Dap(Ac)、Glu、2Nal、Phe和琥珀酰基，或不存在；
X3选自Arg、Lys、Lys(iPr)和Lys(Me2)；
X7选自Asp、Dab、Dap、Glu、DGlu、Lys和Orn；
X8选自Arg和Lys，或不存在；
X9不存在；
X10不存在；并且
R2选自NH2和NHEt。
在另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自Ac和Bz，或不存在；
X1选自DAla、5-氨基戊酰基、4-AMPA、Asp、Glu、Leu、Lys(Ac)、Phe、DPhe和琥珀酰基；
X3选自Arg、Lys、Lys(iPr)和Lys(Me2)；
X7选自(D/L)Agl、Asp、Dab、Dap、DDap、Glu和DGlu；
X8选自Arg、DArg和Lys，或不存在；
X9不存在；
X10不存在；并且
R2选自NH2和NHEt。
在另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自Ac、Bz和正己酰基，或不存在；
X1选自(D/L)Agl、Ala、β-Ala、Asp、Dap、Glu、Gly、Lys和Phe；
X3选自Arg、Lys、Lys(iPr)和Lys(Me2)；
X7选自(D/L)Agl、Asp、Dap、Glu和DGlu；
X8选自β-Ala、Arg、Gly、Lys、Lys(iPr)和Orn，或不存在；
X9选自Gly、2Nal、D2Nal和DPhe，或不存在；
X10是2Nal，或不存在；并且
R2选自NH2和NHEt。
在其它方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
R1选自Ac和Bz，或不存在；
X1选自Ala、5-氨基戊酰基、Asp、Glu、Gly、Phe、DPhe和琥珀酰基；
X3选自Arg、Lys(iPr)和Lys(Me2)；
X7选自(D/L)Agl、Asp、Dap、Glu和DGlu；
X8选自β-Ala、Arg、Gly、Lys、Lys(iPr)和Orn，或不存在；
X9选自Gly、D2Nal和DPhe，或不存在；
X10是2Nal，或不存在；并且
R2选自NH2和NHEt。
在另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
X1选自Gly和Phe；
X3是Lys(iPr)；并且
X7是DGlu。
在另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
R1不存在；
X1选自Gly和Phe；
X3是Lys(iPr)；
X7是DGlu；
X8选自Arg和Lys(iPr)，或不存在；
X9不存在；
X10不存在并且
R2选自NH2和NHEt。
在另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
所述内酰胺由X1的侧链氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成；
R1选自Ac和正己酰基；
X1选自(D/L)Agl、Dab和Dap；
X3选自Arg和Lys(iPr)；
X7是Glu；
X8是Arg；
X9不存在；
X10不存在；并且
R2是NH2。
在本发明该方面的优选实施方案中，X1是(D/L)Agl或Dap。
在另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
所述内酰胺由X1的侧链羧基与X7的侧链氨基之间的酰胺键形成；
R1选自Ac和Bz；
X1选自Asp和Glu；
X3选自Arg和Lys(Me2)；
X7选自(D/L)Agl、Dab、Dap、DDap和Lys；
X8是Arg；
X9不存在；
X10不存在；并且
R2是NH2。
在本发明该方面的优选实施方案中，X7是(D/L)Agl、Dab、Dap或DDap。在更优选的实施方案中，X7是(D/L)Agl或Dap。
在另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
所述内酰胺由X1的侧链羧基与X7的侧链氨基之间的酰胺键形成；
R1不存在；
X1是琥珀酰基；
X3是Arg；
X7选自(D/L)Agl、Dab、Dap、Lys和Orn；
X8是Arg；
X9不存在；
X10不存在；并且
R2是NH2。
在本发明该方面的优选实施方案中，X7是(D/L)Agl或Dap。
在另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
所述内酰胺由X1的α-氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成；
R1不存在；
X1选自Ala、DAla、Gly、Dap(Ac)、Leu、Lys、Lys(Ac)、2Nal、Phe和DPhe；
X3选自Arg、Lys、Lys(iPr)和Lys(Me2)；
X7选自Asp、Glu和DGlu；
X8选自β-Ala、Arg、Gly、Lys、Lys(iPr)和Orn，或不存在；
X9选自Gly、2Nal、D2Nal和DPhe，或不存在；
X10是2Nal，或不存在；
其中当X8不存在时，X9和X10均不存在；并且
R2选自NH2和NHEt。
在本发明该方面的优选实施方案中，X1是Ala、DAla、Gly、Leu、Lys、Lys(Ac)、Phe或DPhe。在更优选的实施方案中，X1是Ala、Gly、Lys或Phe。
在本发明该方面的优选实施方案中，X3是Arg、Lys、Lys(iPr)或Lys(Me2)。在更优选的实施方案中，X3是Arg。
在本发明该方面的优选实施方案中，X7是Asp、Glu或DGlu。在更优选的实施方案中，X7是Asp。
在本发明该方面的优选实施方案中，X8是β-Ala、Arg、Gly、Lys、Lys(iPr)、Orn，或不存在。在更优选的实施方案中，X8是β-Ala、Gly、Lys、Lys(iPr)、Orn，或不存在。
在本发明该方面的优选实施方案中，X9是Gly、2Nal、D2Nal、DPhe，或不存在。在更优选的实施方案中，X9是Gly、2Nal、D2Nal或DPhe。
在本发明该方面的优选实施方案中，X10是2Nal，或不存在。在更优选的实施方案中，X10是2Nal。
在本发明该方面的优选实施方案中，R2是NHEt。
在另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
所述内酰胺由X1的非α、非侧链氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成；
R1不存在；
X1选自β-Ala、4-AMB、5-氨基戊酰基和4-AMPA；
X3是Arg；
X7选自Asp和Glu；
X8选自Arg和DArg；
X9不存在；
X10不存在；并且
R2是NH2。
在本发明该方面的优选实施方案中，X1是β-Ala、5-氨基戊酰基或4-AMPA。在更优选实施方案中，X1是β-Ala。
在本发明该方面的优选实施方案中，X7是Asp。
在本发明该方面的优选实施方案中，X8是Arg。
另一方面，本发明提供式I(SEQ ID NO：1)的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
所述内酰胺由X2的α-氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成；
R1不存在；
X1不存在；
X3是Arg；
X7选自Asp、Glu和DGlu；
X8是Arg；
X9不存在；
X10不存在；并且
R2是NH2。
另一方面，本发明提供下式的内酰胺环化肽
Figure G2008800178577D00121
(SEQ ID NO：70)
或其药学上可接受的盐。所述内酰胺由Phe的α-氨基与DGlu的侧链羧基之间的酰胺键形成。所述药学上可接受的盐可以是醋酸盐。
另一方面，本发明提供药物组合物，其包含如前所述的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
另一方面，本发明提供如前所述的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其用于治疗。
另一方面，本发明提供如前所述的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，用于治疗类风湿性关节炎、肺纤维化、HIV感染、或选自乳腺癌、胰腺癌、黑素瘤、前列腺癌、肾癌、成神经细胞瘤、非-霍奇金淋巴瘤、肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤、多形性成胶质细胞瘤和慢性淋巴细胞性白血病的癌。
另一方面，本发明提供如前所述的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐在制备用于治疗类风湿性关节炎、肺纤维化、HIV感染、或选自乳腺癌、胰腺癌、黑素瘤、前列腺癌、肾癌、成神经细胞瘤、非-霍奇金淋巴瘤、肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤、多形性成胶质细胞瘤和慢性淋巴细胞性白血病的癌的药物中的用途。
另一方面，本发明提供治疗类风湿性关节炎、肺纤维化、HIV感染或选自乳腺癌、胰腺癌、黑素瘤、前列腺癌、肾癌、成神经细胞瘤、非-霍奇金淋巴瘤、肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤、多形性成胶质细胞瘤和慢性淋巴细胞性白血病的癌的方法，其包括向需要该治疗的患者施用有效量的如前所述的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐。
在本发明的大环肽化合物(SEQ ID NO：1)中，氨基酸X1到X10在本文中以其常用的三字母代码来表示，从左到右自氨基末端到羧基末端显示。D-和L-(小号的大写字母)指绝对立体化学。如果在一个具体式中不指明，则存在氨基酸的L-形式。X1也可以是二羧酸残基，即琥珀酰基基团。括号“[]”内的氨基酸或羧酸残基处于环状结构内；括号外面的基团在环化环外部。在所有情况下，环化通过X1(或X2，即Tyr)与X7之间的内酰胺(酰胺)键实现，并且取决于X1、X2和X7的结构，可以以几种不同方式形成。
当在X1的侧链氨基与X7的侧链羧基之间形成内酰胺键时(方案1和2；实施例1-5)，X1的α-氨基被Ac或正己酰基封端(capped)。
当在X1的侧链羧基与X7的侧链氨基之间形成内酰胺键时，X1的α-氨基被Ac或Bz封端(方案3和4；实施例6-19)。X1也可以是非α-氨基酸的双官能残基，例如具有两个羧基的残基，即琥珀酰基残基。在这种情况下，一个羧基与Tyr的α-氨基形成酰胺键，而另一个与X7的侧链氨基通过酰胺键形成环状内酰胺结构(方案3和4；实施例20-24)。当X1是琥珀酰基时，R1不存在。
在本文公开的大多数内酰胺环化肽中(方案5-15；实施例25-28、32-66和75-89)，X1的α-氨基通过与X7的侧链羧基的酰胺键形成内酰胺结构，并且R1不存在。包括在此类合成方案中的还有含有X1残基(即，β-Ala、4-AMB、5-氨基戊酰基和4-AMPA)的环肽，其中氨基基团是非侧链，非α-氨基基团(方案5和6；实施例67-74)。在这些情况下R1也不存在。
当R1和X1均不存在时，内酰胺结构由Tyr(X2)的α-氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成(方案5和6；实施例29-31)。
常见氨基酸，例如丙氨酸、甘氨酸等的结构为本领域所熟知。本发明中的非标准的和取代的氨基酸的结构示于下文。
Figure G2008800178577D00141
                   4-氨基甲基         4-氨基甲基
氨基甘氨酸                                                 3-氨基丙酸
                    苯甲酸               苯乙酸
(Agl)                                                       (β-Ala)
                   (4-AMB)              (4-AMPA)
Figure G2008800178577D00142
   Dab          Dap(Ac)        Dap        Lys(Ac)        Lys(iPr)
Figure G2008800178577D00143
  Lys(Me2)         1Nal                2Nal                Orn
本发明的内酰胺环化肽可制备成药学上可接受的盐。这些盐及用于制备它们的常用方法学为本领域所熟知。参阅例如，P.Stahl等(2002)Handbook of Pharmaceutical Salts：Properties，Selection and Use，VCHA/Wiley-VCH；Berge等(1977)“Pharmaceutical Salts，”Journal ofPharmaceutical Sciences 66(1)：1-19。
本发明的化合物是CXCR4/SDF-1相互作用的有效拮抗剂。如通过下文所述的CXCR4/125I-SDF-1α结合测定试验所确定的，本文具体示例的式(I)化合物及其药学上可接受的盐显示约7.5nM或更低的平均Ki值。更优选的式(I)化合物及其药学上可接受的盐在该测定中显示位于约0.2nM至约1nM的范围内的平均Ki值。尤其优选的式(I)化合物及其药学上可接受的盐在该测定中显示低于约0.2nM的平均Ki值。
此外，本发明的化合物及药学上可接受的盐优选对CXCR4受体具有高选择性，其在所检测浓度处对其它趋化因子受体，包括CCR1、CCR2、CXCR2、CXCR3，和其它G蛋白偶联受体显示很少或没有抑制活性，并且对5-羟色胺、多巴胺和阿片样物质受体没有显著活性。它们也优选显示在血液和血浆中良好的稳定性、良好的皮下生物利用率、期望的药物代谢动力学/药效学性质和在肿瘤生长抑制方面强有力的体内效力和宽的安全范围。
鉴于这些药理学性质，本发明的化合物适用于治疗牵涉CXCR4/SDF-1相互作用或CXCR4受体活性的病症，如HIV感染。特别是，本发明化合物可以用于治疗发病机理牵涉CXCR4和SDF-1介导的生血管、生长、存活和转移路径的恶性肿瘤，包括乳腺癌、胰腺癌、黑素瘤、前列腺癌、肾癌、成神经细胞瘤、非霍奇金淋巴瘤、肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤、多形性成胶质细胞瘤和慢性淋巴细胞性白血病，以及类风湿性关节炎、肺纤维化和HIV感染(Tsutsumi等(2006)Peptide Science88(2)：279-289)。
Agl(氨基甘氨酸)是前手性构件。当该残基在本文的肽式中出现时，该α-碳成为手性中心，在此连接的两个α-氨基基团分别键接到不同的部分上。在该情况下，肽终产物含有未拆分的两个非对映体，它们可以以非1∶1的比例存在。肽式中“(D/L)Agl”表示此类非对映体混合物。“(DL)Agl”表示外消旋的Agl衍生物，例如Fmoc-(DL)Agl(Boc)。
使用在下述CXCR4/125I-SDF-1α结合测定试验中测定的IC50值，并使用Enzymes，A Practical Introduction to Structure，Mechanism，and DataAnalysis，Robert A.Copeland，Wiley-VCH，New York，1996，207页的公式7.22，计算“Ki”值。
术语“SDF-1”包括两种同种型，SDF-1α和SDF-1β，目前认为其显示类似的功能。
如此处所用，“治疗”是指对与CXCR4/SDF-1相互作用或CXCR4受体活性相关的病症的治疗性处理。治疗性处理是指涉及减缓、中止、阻止、控制或终止疾病进程的过程，但不必涉及所有疾病相关症状、状况或紊乱的完全消除。
本发明的化合物可以用作药物，用于人类医学或兽医学，通过各种途径施用。最优选地，此类组合物用于肠胃外施用。此类药物组合物可通过本领域众所周知的方法来制备。参阅例如，Remington：The Science andPractice of Pharmacy，第19版(1995)，A.Gennaro等，Mack Publishing Co.，并可以包含一种或多种式(I)化合物或其药学上可接受的盐，和药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
以每日为基础，本组合物的有效量在从约1mg到约300mg的范围内，更优选在约1mg到约200mg的范围内，更优选在约1mg到约100mg的范围内，甚至更优选在约1mg到约50mg的范围内。
可通过固相合成或液相合成或两者的组合，合成本发明的所有内酰胺环化肽，其中可以在固相上进行肽链装配和在树脂上或在溶液中进行环化或其它修饰。这些方法为本领域所熟知。
本文所用的以下缩写具有所指明的含义：
Ac：乙酰基；Agl：氨基甘氨酸；AMB：氨基甲基苯甲酸；AMPA：氨基甲基苯乙酸；Bn：苯甲基；Boc：叔丁氧羰基；BOP：(苯并三唑-1-基氧基)-三(二甲氨基)鏻六氟磷酸盐；2-Br-Z：2-溴苄氧羰基；Bz：苯甲酰基；Bzl：苄基；2-Cl-Z：2-氯苄氧羰基；Dab：2，4-二氨基丁酸；Dap：2，3-二氨基-丙酸；DCC：二环己基碳二亚胺；DCM：二氯甲烷；DIC：二异丙基碳二亚胺；DIEA：二异丙基-乙胺；DMF：N，N-二甲基甲酰胺；DMSO：二甲亚砜；EDT：1，2-乙二硫醇；Et：乙基；Fm：9-芴基甲基；Fmoc：9-芴基甲氧羰基；HATU：N-[(二甲氨基)-1H-1，2，3-三唑并[4，5-b]吡啶-1-基亚甲基]-N-甲基甲铵六氟磷酸盐N-氧化物；HBTU：O-苯并三唑基-N，N，N’，N’-四甲基脲鎓六氟磷酸盐；HCTU：1H-苯并三唑鎓1-[二(二甲氨基)亚甲基]-5-氯-3-氧化物六氟磷酸盐；HF：氟化氢；HOBt：羟基苯并三唑；IBCF：氯甲酸异丁酯；iPr：异丙基；IPA：异丙醇；Me：甲基；2Nal：2-萘基丙氨酸；NMM：N-甲基吗啉；NMP：N-甲基吡咯烷酮；OtBu：叔丁酯；Pbf：2，2，4，6，7-五甲基-二氢苯并呋喃-5-磺酰基；PBS：磷酸盐缓冲盐水；PyBOP：(苯并三唑-1-基氧基)-三(吡咯烷基)-鏻六氟磷酸盐；PyBrOP：溴三(吡咯烷基)鏻六氟磷酸盐；tBu：叔丁基；TFA：三氟乙酸；THF：四氢呋喃；TIS：三异丙基硅烷；Tos：对甲苯磺酰基；Z：苄氧羰基；ZOSu：N-(苄氧羰基-氧基)琥珀酰亚胺。
如下文实施例中所述的本发明化合物的制备意在举例说明而非限制。在这些实施例之每个中，所观察到的分子量报道为去褶合值(de-convolutedvalue)。所述去褶合值得自公式MW(观测值)＝n(m/z)-n，其中m/z代表带电离子(正模式)并且n是该具体种类的电荷数。当质谱中存在多种带电荷的种类时，以平均值报道观测分子量。
在实施例85-87中公开的合成方法和在实施例89中公开的同位素标记方法，用于含有异丙基赖氨酸侧链的环状内酰胺肽，其在适当修改后也同样适用于本文公开的含有赖氨酸烷基侧链的其它肽。排除了对毒性钯催化剂的需要的实施例86-88的合成方法，经适当修改，也同样适用于本文公开的其它肽。
实施例1
Ac-环[Dap-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：2)
如下方案1中所示，利用ABI 431肽合成仪(Applied Biosystems)，通过标准Fmoc化学，装配序列Ac-Dap(Alloc)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-DArg(Pbf)-2Nal-Gly-Glu(O-烯丙基)-Arg(Pbf)(SEQ ID NO：3)。通过使用标准的Applied Biosystems DCC/HOBt化学方案或FastMoc化学HBTU/DIEA方案，按照供应商的指导(PE Applied Biosystems Inc.，FosterCity，CA)进行自动装配。固相支持物是用于C末端酰胺的Rink酰胺树脂(4-(2′，4′-二甲氧基苯基-Fmoc-氨基甲基)-苯氧基树脂)或用于C末端乙基酰胺的吲哚树脂[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂(NovaBiochem，EMD Biosciences，Inc.，San Diego，CA)。分步链装配从线性肽的C末端开始并在9个主要步骤中完成。步骤1，四当量的受保护的氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)用NMP中的DCC/HOBt(或用于FastMoc化学的HBTU/DIEA)活化，使用20％哌啶偶联到去保护的Rink酰胺树脂上。步骤2，将四当量的Fmoc-Glu(O-烯丙基)活化，并偶联到来自步骤1的去保护肽树脂上。进行适当步骤直至步骤8，即，偶联Fmoc-Dap(Alloc)。然后，使用DMF中的20％哌啶去除N末端的Fmoc，并使用干DMF或NMP中的5当量醋酸酐、10当量DIEA在室温进行α-氨基的乙酰化1小时。
在二氯甲烷中24当量的苯基硅烷存在下，用0.1当量的Pd(Ph3P)4去除烯丙基和Alloc侧链保护基团(方案2)。重复该步骤一次，用于完全的侧链去保护。Glu的去保护羧酸部分用PyBOP/DIEA活化并在树脂上环化到Dap的侧链氨基上。使用由TFA/H2O/TIS/EDT(95/2/1/2，v/v/v/v)或TFA/H2O/TIS/苯甲醚(92/2/4/2，v/v/v/v)组成的清除剂(scavenger)混合物，在室温下处理环化肽2小时，将环化肽同时去保护和从树脂上切下。然后在真空下蒸发溶剂，沉淀肽，用冷的乙醚洗涤三次以去除清除剂。计算分子量(MW cal.)：1142.30；观测MW(MW obs.)：1142.50。
Figure G2008800178577D00191
方案1.氨基侧链到羧基侧链的肽装配
使用标准的制备性HPLC技术完成肽的纯化。环化之后，立即用含0.1％(v/v)TFA的水稀释肽溶液，加载到反相C18HPLC柱上，并在214nm监测的同时用水性0.1％三氟乙酸/乙腈(v/v)梯度洗脱。合并合适级分并冻干。使用分析性HPLC和质谱分析通过常规技术进行终产物的进一步表征。对具有碱性侧链的肽而言，最终冻干的产物是TFA盐。
方案2.氨基侧链至羧基侧链的环的环化和切下
实施例2
Ac-环[Dab-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：6)
如实施例1进行制备，除了：步骤8中的Fmoc-Dap(Alloc)被Fmoc-Dab(Alloc)替换。MW cal.：1156.33；MW obs.：1156.10。
实施例3
Ac-环[Dap-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：7)
如实施例1进行制备，除了：步骤6中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(iPr)(Boc)替换。MW cal.：1156.37；MW obs.：1156.78。
实施例4
正己酰基-环[Dap-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：8)
如实施例1进行制备，除了：步骤6中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(iPr)(Boc)替换。此外，步骤9中的醋酸酐用经PyBOP/DIEA活化的己酸替换。MW cal.：1212.47；MW obs.：1212.92。
实施例5
Ac-环[( D/L )Agl-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：9)
如实施例1中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Glu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(OtBu)替换，并且步骤8中的Fmoc-Dap(Alloc)被Fmoc-(DL)Agl(Boc)替换。链装配后，因为不存在烯丙基保护，所以没有Pd(Ph3P)4处理。相反地，在将线性肽从固相支持物上切下并去保护后在溶液中进行环化。切下的粗线性肽(0.25mmol)在真空下干燥并溶解在10mL干DMF中。该肽溶液通过注射器泵在2小时内递送到以下溶液：含1.0mmole PyBOP和4.0mmole DIEA的15mL干二氯甲烷和15mL干DMF。然后允许在室温下进行反应2小时。然后在真空下蒸发溶剂，将残留物加载到制备性反相C18HPLC柱上，并如实施例1中所述分离和表征靶环肽。MW cal.：1128.27；MW obs.：1128.26。
实施例6
Ac-环[Glu-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Dap]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：10)
如在以下方案3中所示，利用ABI 431仪器，通过标准的Fmoc化学，装配序列Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Arg(Pbf)-DArg(Pbf)-2Nal-Gly-Dap(Boc)-Arg(Pbf)(SEQ ID NO：11)。通过使用标准的Applied BiosystemsDCC/HOBt化学方案或FastMoc化学(HBTU/DIEA)方案，按照供应商的指导(PE Applied Biosystems Inc.，Foster City，CA)进行自动装配。固相支持物是用于C末端酰胺的Rink酰胺树脂或用于C末端乙基酰胺的吲哚树脂[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂。分步链装配从线性肽的C末端开始并在9个主要步骤中完成。步骤1，四当量的受保护的氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)被NMP中的DCC/HOBt(或用于FastMoc化学的HBTU/DIEA)活化，并偶联到去保护的Rink酰胺树脂上。步骤2，四当量的Fmoc-Dap(Boc)被活化，并偶联到来自步骤1的去保护树脂上。进行合适步骤直至步骤8，即，偶联Fmoc-Glu(OtBu)。步骤9，使用DMF中的20％哌啶去除N末端的Fmoc，并使用干DMF或NMP中5当量的醋酸酐、10当量的DIEA在室温离线进行α-氨基的乙酰化1小时。使用由TFA/H2O/TIS/EDT(95/2/1/2，v/v/v/v)或TFA/H2O/TIS/苯甲醚(92/2/4/2，v/v/v/v)组成的清除剂混合物，在室温下处理2小时，将完成的肽同时去保护并从树脂上切下。然后在真空下蒸发溶剂，沉淀肽，用冷的乙醚洗涤三次，以去除清除剂。粗产物直接用于环化反应。MW cal.：1142.30；MW obs.：1142.83。
Figure G2008800178577D00231
方案3.酸侧链至氨基侧链的肽装配
将所有侧链去保护的线性肽从固相支持物上切下后在溶液中进行环化(方案4)。切下的粗线性肽(0.25mmol)在真空下干燥并溶解在10mL干DMF中。该肽溶液通过注射器泵在2小时内递送到以下反应混合物：含1.0mmole PyBOP和4.0mmole DIEA的15mL干二氯甲烷和15mL干DMF。然后允许在室温下进行反应2小时。在真空下蒸发溶剂，将残留物加载到制备性反相C18HPLC柱上，并如实施例1中所述分离和表征靶环肽。
方案4.酸侧链至氨基侧链的环的环化
实施例7
Bz-环[Glu-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Dap]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：14)
如实施例6中进行制备，除了：步骤9中的醋酸酐被苯甲酸酐替换。MW cal.：1204.37；MW obs.：1204.87。
实施例8
Ac-环[Glu-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly- D Dap]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：15)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-DDap(Boc)替换。MW cal.：1142.30；MW obs.：1142.73。
实施例9
Ac-环[Glu-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Lys]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：16)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-Lys(Boc)替换。MW cal.：1184.38；MW obs.：1184.23。
实施例10
Ac-环[Glu-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Dab]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：17)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-Dab(Boc)替换。MW cal.：1156.33；MW obs.：1156.07。
实施例11
Ac-环[Glu-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-( D/L )Agl]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：18)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-(DL)Agl(Boc)替换。MW cal.：1128.27；MW obs.：1128.86。
实施例12
Bz-环[Glu-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-( D/L )Agl]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：19)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-(DL)Agl(Boc)替换。此外，步骤9中的醋酸酐被苯甲酸酐替换。MWcal.：1190.34；MW obs.：1190.99。
实施例13
Bz-环[Asp-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Dab]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：20)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-Dab(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)被Fmoc-Asp(OtBu)替换。此外，步骤9中的醋酸酐被苯甲酸酐替换。MW cal.：1204.37；MWobs.：1204.87。
实施例14
Ac-环[Asp-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Dab]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：21)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-Dab(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)被Fmoc-Asp(OtBu)替换。MW cal.：1142.30；MW obs.：1142.81。
实施例15
Ac-环[Asp-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Dap]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：22)
如实施例6中进行制备，除了：步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)被Fmoc-Asp(OtBu)替换。MW cal.：1128.27；MW obs.：1128.78。
实施例16
Bz-环[Asp-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Dap]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：23)
如实施例6中进行制备，除了：步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)被Fmoc-Asp(OtBu)替换。此外，步骤9中的醋酸酐被苯甲酸酐替换。MW cal.：1190.34；MW obs.：1190.69。
实施例17
Ac-环[Asp-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-( D/L )Agl]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：24)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-(DL)Agl(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)被Fmoc-Asp(OtBu)替换。MW cal.：1114.24；MW obs.：1114.85。
实施例18
Ac-环[Asp-Tyr-Lys(Me 2 )- D Arg-2Nal-Gly-Dap]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：25)
如实施例6中进行制备，除了：步骤6中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(Me2)替换，并且步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)被Fmoc-Asp(OtBu)替换。MW cal.：1128.31；MW obs.：1128.92。
实施例19
Bz-环[Asp-Tyr-Lys(Me 2 )- D Arg-2Nal-Gly-Dap]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：26)
如实施例6中进行制备，除了：步骤6中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(Me2)替换，并且步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)被Fmoc-Asp(OtBu)替换。此外，步骤9中的醋酸酐被苯甲酸酐替换。MW cal.：1190.38；MWobs.：1191.14。
实施例20
环[琥珀酰基-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-( D/L )Agl]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：27)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-(DL)Agl(Boc)替换，不使用步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)，并且该步省略。此外，步骤9中的醋酸酐被琥珀酸酐替换。MW cal.：1057.19；MWobs.：1057.87。
实施例21
环[琥珀酰基-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Dap]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：28)
如实施例6中进行制备，除了：不使用步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)，并且该步省略。此外，步骤9中的醋酸酐被琥珀酸酐替换。MW cal.：1071.22；MW obs.：1071.85。
实施例22
环[琥珀酰基-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Dab]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：29)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-Dab(Boc)替换，不使用步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)，并且该步省略。此外，步骤9中的醋酸酐被琥珀酸酐替换。MW cal.：1085.25；MW obs.：1085.87。
实施例23
环[琥珀酰基-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Orn]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：30)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-Orn(Boc)替换，不使用步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)，并且该步省略。此外，步骤9中的醋酸酐被琥珀酸酐替换。MW cal.：1099.27；MW obs.：1100.23。
实施例24
环[琥珀酰基-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Lys]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：31)
如实施例6中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-Dap(Boc)被Fmoc-Lys(Boc)替换，不使用步骤8中的Fmoc-Glu(OtBu)，并且该步省略。此外，步骤9中的醋酸酐被琥珀酸酐替换。MW cal.：1113.30；MW obs.：1114.25。
实施例25
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：32)
如以下方案5所示，利用ABI 431仪，通过标准Fmoc化学，装配序列Gly-Tyr(tBu)-Lys(iPr)(Boc)-DArg(Pbf)-2Nal-Gly-DGlu(O-烯丙基)-Arg(Pbf)(SEQ ID NO：33)。通过使用标准的Applied Biosystems DCC/HOBt化学方案或FastMoc HBTU/DIEA化学方案，按照供应商的指导(PEApplied Biosystems Inc.，Foster City，CA)进行自动装配。固相支持物是用于酰胺的Rink酰胺树脂或用于C末端乙基酰胺的吲哚树脂[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂。分步链装配从线性肽的C末端开始并在8个主要步骤中完成(方案5)。步骤1，四当量的受保护的氨基酸Fmoc-Arg(Pbf)被NMP中的DCC/HOBt(或用于FastMoc化学的HBTU/DIEA)活化，并偶联到去保护的Rink酰胺树脂上。步骤2，四当量的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被活化，并偶联到来自步骤1的去保护肽树脂上。进行合适步骤直至步骤8，即，偶联Fmoc-Gly。
在二氯甲烷中在24当量的苯基硅烷存在下用0.1当量的Pd(Ph3P)4去除烯丙基酯侧链保护基团(方案6)。重复该过程一次，用于完全的侧链去保护。然后使用DMF中20％的哌啶去除N末端的Fmoc。DGlu的去保护羧酸部分用PyBOP/DIEA活化，并在树脂上环化到甘氨酸的α-氨基基团上。使用由TFA/H2O/TIS/EDT(95/2/1/2，v/v/v/v)或TFA/H2O/TIS/苯甲醚(92/2/4/2，v/v/v/v)组成的清除剂混合物，在室温下2小时将环化肽同时去保护和从树脂上切下。然后在真空下蒸发溶剂，沉淀肽，用冷的乙醚洗涤三次，以去除清除剂。MW cal.：1085.29；MW obs.：1085.32。
实施例25a
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Arg-NH 2 ·醋酸盐(SEQ ID NO：34)
通过如下方式将实施例25的肽的TFA盐转化成醋酸盐：将该材料吸附到合适大小的、用2％醋酸/H2O(v/v)平衡的制备性C18柱上。然后用三到五柱体积的2％醋酸(v/v)水溶液洗涤所述柱。使用含2％体积醋酸的1∶1水/乙腈(v/v)洗脱所述肽，并将其冻干。MW cal.：1085.29；MW obs.：1085.32。
Figure G2008800178577D00291
(SEQ ID NO：35)
方案5.α-氨基至羧基侧链的肽装配
使用标准的制备性HPLC技术完成肽的纯化。环化之后，立即用含0.1％(v/v)TFA的水稀释肽溶液，加载到反相C18HPLC柱上，并在214nm监测的同时用水性0.1％三氟乙酸/乙腈(v/v)梯度洗脱。合并合适级分并冻干。使用分析性HPLC和质谱分析，通过常规技术进行终产物的进一步表征。对具有碱性侧链的肽而言，最终冻干的产物是TFA盐。
Figure G2008800178577D00301
方案6.α-氨基至羧基侧链的环的环化和切下
实施例26
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：37)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1。MW cal.：929.10；MWobs.：929.39。
实施例26a
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-NH 2 ·醋酸盐(SEQ ID NO：38)
通过如下方式将实施例26的肽的TFA盐转化成醋酸盐：将材料吸附到合适大小的、用2％醋酸/H2O(v/v)平衡的制备性C18柱上。然后用三到五柱体积的2％醋酸(v/v)水溶液洗涤所述柱。使用含2％体积醋酸的1∶1水/乙腈(v/v)洗脱所述肽，并将其冻干。MW cal.：929.10；MW obs.：929.39。
实施例27
环[Gly-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：39)
如实施例25中进行制备，除了：步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换。MW cal.：1071.22；MW obs.：1071.02。
实施例28
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NH 2 (SEQ ID NO：40)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(iPr)(Boc)替换。MW cal.：1099.35；MW obs.：1099.91。
实施例29
环[Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：41)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，不使用步骤8中的Fmoc-Gly，并且步骤8省略。MW cal.：1014.17；MW obs.：1014.78。
实施例30
环[Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：42)
如实施例25中进行制备，除了：步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，不使用步骤8中的Fmoc-Gly，并且步骤8省略。MWcal.：1014.17；MW obs.：1014.65。
实施例31
环[Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Asp]-Arg-NH 2 (SEQID NO：43)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Asp(allyl)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，不使用步骤8中的Fmoc-Gly，并且步骤8省略。MW cal.：1000.14；MW obs.：1000.63。
实施例32
环[Gly-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Asp]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：44)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Asp(allyl)替换，并且步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换。MW cal.：1057.19；MW obs.：1057.35。
实施例33
环[Gly-Tyr-Lys(Me 2 )- D Arg-2Nal-Gly-Asp]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：45)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Asp(allyl)替换，并且步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Lys(Me2)替换。MW cal.：1057.23；MW obs.：1057.86。
实施例34
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Asp]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：46)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Asp(allyl)替换。MW cal.：1071.26；MW obs.：1071.76。
实施例35
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Asp]-NH 2 (SEQ ID NO：47)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，并且步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Asp(allyl)替换。MW cal.：915.07；MW obs.：915.38。
实施例36
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Asp]-Lys(iPr)-NH 2 (SEQ ID NO：48)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(iPr)(Boc)替换，并且步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Asp(allyl)替换。MW cal.：1085.33；MW obs.：1085.78。
实施例37
环[Gly-Tyr-Lys(Me 2 )- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：49)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Lys(Me2)替换。MW cal.：1071.26；MW obs.：1071.05。
实施例38
环[Gly-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：50)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换。MW cal.：1071.22；MW obs.：1071.50。
实施例39
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：51)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换。MW cal.：1085.29；MW obs.：1085.91。
实施例40
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：52)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，并且步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换。MW cal.：929.10；MW obs.：929.39。
实施例41
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Asp]-NHEt (SEQ ID NO：53)
如实施例25中进行制备，除了：Rink酰胺树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换，步骤1省略，并且步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Asp(allyl)替换。MW cal.：943.13；MW obs.：943.36。
实施例42
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NHEt (SEQ ID NO：54)
如实施例25中进行制备，除了：Rink酰胺树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换，步骤1省略，并且步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换。MW cal.：957.15；MWobs.：957.50。
实施例43
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-NHEt (SEQ ID NO：55)
如实施例25中进行制备，除了：Rink酰胺树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换，并且步骤1省略。MW cal.：957.15；MW obs.：957.46。
实施例44
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Arg-NHEt(SEQ ID NO：56)
如实施例25中进行制备，除了：Rink酰胺树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换。MW cal.：1113.34；MW obs.：1113.81。
实施例44a
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Arg-NHEt·醋酸盐(SEQ ID NO：57)
通过如下方式将实施例44的肽的TFA盐转化成醋酸盐：将材料吸附到合适大小的、用2％醋酸/H2O(v/v)平衡的制备性C18柱上。然后用三到五柱体积的2％醋酸(v/v)水溶液洗涤所述柱。使用含2％体积醋酸的1∶1水/乙腈(v/v)洗脱所述肽，并将其冻干。MW cal.：1113.34；MW obs.：1113.81。
实施例45
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NHEt(SEQ ID NO：58)
如实施例25中进行制备，除了：Rink酰胺树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换，并且步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(iPr)(Boc)替换。MW cal.：1127.41；MW obs.：1127.35。
实施例46
环[Lys(Ac)-Tyr-Lys(Me 2 )- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：59)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(OtBu)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Lys(Me2)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被替换为Boc-Lys(Fmoc)。链装配后，用DMF中的20％哌啶去除N-末端Lys的侧链上的Fmoc，然后使用10当量的醋酸酐/DIEA将Lys侧链在室温下乙酰化1小时。去除所有的侧链保护基团并使用TFA/水/TIS/苯甲醚(90/5/2.5/2.5，v/v/v/v)的混合物在室温下2小时从固体支持物上切下线性肽。在溶液中进行粗线性肽的环化。在真空下将切下的粗线性肽(～0.25mmole)干燥并在10mL干DMF中溶解。通过注射器泵在2小时内将肽溶液递送到以下反应混合物中：含1.0mmolePyBOP和4.0mmole DIEA的15mL干二氯甲烷和15mL干DMF。然后允许反应在室温下进行2小时。然后在真空下蒸发溶剂，将残留物加载到反相C18制备性HPLC柱上，并如实施例1中所述分离并表征靶环肽。MW cal.：1184.42；MW obs.：1184.06。
实施例47
环[Dap(Ac)-Tyr-Lys(Me 2 )- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：60)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(OtBu)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Lys(Me2)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被替换为Boc-Dap(Fmoc)。链装配后，使用DMF中的20％哌啶去除N-末端Dap的侧链上的Fmoc，然后使用10当量的醋酸酐/DIEA将Dap侧链在室温下乙酰化1小时。去除所有的侧链保护基团并使用TFA/水/TIS/苯甲醚(90/5/2.5/2.5，v/v/v/v)的混合物在室温下2小时从固体支持物上切下线性肽。在溶液中进行粗线性肽的环化。在真空下将切下的粗线性肽(～0.25mmole)干燥并在10mL干DMF中溶解。通过注射器泵在2小时内将该肽溶液递送到以下反应混合物中：含1.0mmole PyBOP和4.0mmole DIEA的15mL干二氯甲烷和15mL干DMF。允许反应在室温下进行2小时。然后在真空下蒸发溶剂，将残留物加载到制备性HPLC柱上，并如实施例1中所述分离并表征靶环肽。MW cal.：986.15；MW obs.：985.97。
实施例48
环[Ala-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：61)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Ala替换。MW cal.：943.13；MW obs.：942.92。
实施例49
环[ D Ala-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glul-NH 2 (SEQ ID NO：62)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-DAla替换。MW cal.：943.13；MW obs.：943.44。
实施例50
环[ D Ala-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：63)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-DAla替换。MW cal.：943.13；MW obs.：943.42。
实施例51
环[Ala-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：64)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Ala替换。MW cal.：943.13；MW obs.：943.48。
实施例52
环[Leu-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：65)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Leu替换。MW cal.：985.21；MW obs.：985.56。
实施例53
环[Leu-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：66)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Leu替换。MW cal.：985.21；MW obs.：985.49。
实施例54
环[ D Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：67)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-DPhe替换。MW cal.：1019.22；MW obs.：1019.52。
实施例55
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：68)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MW cal.：1019.22；MW obs.：1019.53。
实施例56
环[ D Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：69)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-DPhe替换。MW cal.：1019.22；MW obs.：1019.50。
实施例57
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NH 2 (SEQ ID NO：70)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(iPr)(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MW cal.：1189.48；MW obs.：1189.92。
实施例57a
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NH 2 ·醋酸盐(SEQ ID NO：71)
通过如下方式将实施例57的肽的TFA盐转化成醋酸盐：将材料吸附到合适大小的、用2％醋酸/H2O(v/v)平衡的制备性C18柱上。然后用三到五柱体积的2％醋酸(v/v)水溶液洗涤所述柱。使用含2％体积醋酸的1∶1水/乙腈(v/v)洗脱所述肽，并将其冻干。MW cal.：1189.48；MW obs.：1189.92。
实施例58
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：72)
如实施例25中进行制备，除了：步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MW cal.：1175.41；MW obs.：1175.81。
实施例59
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-NH 2 (SEQ ID NO：73)
如实施例25中进行制备，除了：省略步骤1，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MW cal.：1019.22；MW obs.：1019.56。
实施例60
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NHEt(SEQ ID NO：74)
如实施例25中进行制备，除了：Rink酰胺树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换，步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(iPr)(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MW cal.：1217.53；MW obs.：1217.97。
实施例60a
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NHEt·醋酸盐 (SEQ ID NO：75)
通过如下方式将实施例60的肽的TFA盐转化成醋酸盐：将材料吸附到合适大小的、用2％醋酸/H2O(v/v)平衡的制备性C18柱上。然后用三到五柱体积的2％醋酸(v/v)水溶液洗涤所述柱。使用含2％体积醋酸的1∶1水/乙腈(v/v)洗脱所述肽，并将其冻干。MW cal.：1217.53；MW obs.：1217.97。
实施例61
环[ D Ala-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NHEt (SEQ ID NO：76)
如实施例25中进行制备，除了：Rink酰胺树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换，步骤1省略，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-DAla替换。MW cal.：971.18；MW obs.：971.49。
实施例62
环[2Nal-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NHEt(SEQ ID NO：77)
如实施例25中进行制备，除了：Rink酰胺树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换，步骤1省略，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-2Nal替换。MW cal.：1097.34；MW obs.：1097.53。
实施例63
环[ D Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NHEt(SEQ ID NO：78)
如实施例25中进行制备，除了：Rink酰胺树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换，步骤1省略，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-DPhe替换。MW cal.：1047.28；MW obs.：1047.51。
实施例64
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-NHEt(SEQ ID NO：79)
如实施例25中进行制备，除了：Rink酰胺树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换，步骤1省略，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MW cal.：1047.28；MW obs.：1047.57。
实施例65
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Gly-2Nal-NH 2 (SEQ ID NO：80)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-2Nal替换，并且使用Fmoc-Gly在步骤1和2之间加入一步。MW cal.：1183.39；MW obs.：1183.26。
实施例66
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-β-Ala- D 2Nal-NH 2 (SEQ ID NO：81)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-D2Nal替换，使用Fmoc-β-Ala在步骤1和2之间加入一步，并且步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换。MW cal.：1197.40；MW obs.：1196.70。
实施例67
环[β-Ala-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：82)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-β-Ala替换。MWcal.：1085.25；MW obs.：1085.05。
实施例68
环[β-Ala-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Asp]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：83)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Asp(O-烯丙基)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-β-Ala替换。MWcal.：1071.22；MW obs.：1071.15。
实施例69
环[5-氨基戊酰基-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：84)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-5-氨基戊酸替换。MW cal.：1113.30；MW obs.：1113.40。
实施例70
环[5-氨基戊酰基-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Asp]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：85)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Asp(O-烯丙基)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-5-氨基戊酸替换。MW cal.：1099.27；MW obs.：1100.25。
实施例71
环[(4-AMPA)-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Asp]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：86)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Asp(O-烯丙基)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-4-氨基甲基苯乙酸(4-AMPA)替换。MW cal.：1147.32；MW obs.：1148.20。
实施例72
环[(4-AMPA)-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：87)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-4-氨基甲基苯乙酸(4-AMPA)替换。MW cal.：1161.34；MW obs.：1161.99。
实施例73
环[(4-AMPA)-Tyr-Arg- D Arg-2Nal-Gly-Glu]- D Arg-NH 2 (SEQ ID NO：88)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-DArg(Pbf)替换，步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-4-氨基甲基苯乙酸(4-AMPA)替换。MWcal.：1161.34；MW obs.：1161.83。
实施例74
环[(4-AMB)-Tyr-Arg- D Arg-2Na]-Gly-Glu]-Arg-NH 2 (SEQ ID NO：89)
如实施例25中进行制备，除了：步骤2中的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被Fmoc-Glu(O-烯丙基)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Arg(Pbf)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-4-氨基甲基苯甲酸(4-AMB)替换。MW cal.：1147.32；MW obs.：1147.66。
实施例75
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-Gly-2Nal-NH 2 (SEQ ID NO：90)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1被替换为三个连续残基偶联：首先Fmoc-2Nal、然后Fmoc-Gly和然后Fmoc-Lys(iPr)(Boc)。MW cal.：1353.69；MW obs.：1354.03。
实施例76
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-Gly-2Nal-NH 2 (SEQ ID NO：91)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1被替换为三个连续残基偶联：首先Fmoc-2Nal、然后Fmoc-Gly和然后Fmoc-Lys(iPr)(Boc)。此外，步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MW cal.：1443.82；MW obs.：1444.13。
实施例77
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Gly- D Phe-NH 2 (SEQ ID NO：92)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1被替换为两个连续残基偶联：首先Fmoc-DPhe、然后Fmoc-Gly。MW cal.：1133.36；MW obs.：1133.73。
实施例78
环[Gly-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)- D Phe-NH 2 (SEQ ID NO：93)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1被替换为两个连续残基偶联：首先Fmoc-DPhe、然后Fmoc-Lys(iPr)(Boc)偶联替换。MW cal.：1246.58；MW obs.：1246.88。
实施例79
环[Lys-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NH 2 (SEQ ID NO：94)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(iPr)(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Lys(Boc)替换。MW cal.：1170.50；MW obs.：1169.80。
实施例80
环[Phe-Tyr-Lys- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NH 2 (SEQ ID NO：95)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(iPr)(Boc)替换，步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)被Fmoc-Lys(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MWcal.：1147.40；MW obs.：1146.70。
实施例81
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys-NH 2 (SEQ ID NO：96)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Lys(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MWcal.：1147.40；MW obs.：1146.70。
实施例82
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Orn-NH 2 (SEQ ID NO：97)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)被Fmoc-Orn(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MWcal.：1133.40；MW obs.：1132.70。
实施例83
环[Phe-Tyr-Lys- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys-NH 2 (SEQ ID NO：98)
如实施例25中进行制备，除了：步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)和步骤6中的Fmoc-Lys(iPr)(Boc)各自被Fmoc-Lys(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MW cal.：1105.37；MW obs.：1105.40。
实施例84
环[Phe-Tyr-Lys- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys-NHEt (SEQ ID NO：99)
如实施例25中进行制备，除了：Rink树脂被[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂替换，步骤1中的Fmoc-Arg(Pbf)和步骤6中的Lys(iPr)(Boc)各自被Fmoc-Lys(Boc)替换，并且步骤8中的Fmoc-Gly被Fmoc-Phe替换。MW cal.：1133.36；MW obs.：1133.82。
实施例85
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NH 2 (SEQ ID NO：70)的可选合成方案I
实施例57公开了使用昂贵并难以大量获得的市售构件Fmoc-Lys(iPr)Boc，通过Fmoc固相肽合成化学，合成SEQ ID NO：70。本实施例描述的方法允许使用较廉价的Fmoc-Lys(Boc)合成SEQ ID NO：70，其中进行溶液环化，以及使用氰基硼氢化钠经还原性氨基化对赖氨酸进行烷基化，从而为获得该终产物提供更经济的途径。其它优势是反应介质(醋酸、丙酮和甲醇)相对廉价，反应条件容易控制，溶剂的比例可具有很大变化而不影响烷化反应，并且回收率为90％或更高。
如下文方案7中所示，利用ABI 431肽合成仪，通过标准Fmoc化学，在Rink酰胺树脂上装配序列Phe-Tyr(tBu)-Lys(Boc)-DArg(Pbf)-2Nal-Gly-DGlu(O-烯丙基)-Lys(Boc)(SEQ ID NO：100)。使用标准的AppliedBiosystems DCC/HOBt化学方案或FastMoc化学(HBTU/DIEA)方案，按照供应商的指导(PE Applied Biosystems Inc.，Foster City，CA)进行自动装配。侧链保护基的方案是：Lys(Boc)、DGlu(O-烯丙基)、DArg(Pbf)、Tyr(tBu)。分步链装配从线性肽的C末端开始并在8步内完成。步骤1，四当量的受保护的氨基酸Fmoc-Lys(Boc)被NMP中的DCC/HOBt(或用于FastMoc化学的HBTU/DIEA)活化，并偶联到去保护的Rink酰胺树脂上。步骤2，四当量的Fmoc-DGlu(O-烯丙基)被活化，并偶联到来自步骤1的去保护肽树脂上。合适地重复这些步骤直至步骤8，即，偶联Fmoc-Phe。
在二氯甲烷中在24当量的苯基硅烷存在下，用0.1当量的Pd(Ph3P)4去除烯丙基酯侧链保护基(方案8)。重复该过程一次，用于完全的侧链去保护。然后使用DMF中20％哌啶去除N末端的Fmoc。DGlu的去保护羧酸部分用PyBOP/DIEA活化并在树脂上环化到Phe的α-氨基上。使用TFA/H2O/TIS/EDT(95/2/1/2，v/v/v/v)或TFA/H2O/TIS/苯甲醚(92/2/4/2，v/v/v/v)的清除剂混合物，在室温下2小时将环化肽同时去保护并从树脂上切下。然后在真空下蒸发溶剂，沉淀肽，用冷的乙醚洗涤三次，以去除清除剂。
Figure G2008800178577D00451
方案7.固相支持物上的肽链装配
方案8.环状前体肽的制备
使用标准的制备性HPLC技术完成环状前体肽的纯化。将粗切下产物溶解在最小量的DMSO中，加载到反相C18HPLC柱上，并在214nm监测的同时用水性0.1％三氟乙酸/乙腈(v/v)梯度洗脱。合并合适级分并冻干。使用分析性HPLC和质谱分析，通过常规技术进行中间体前体环肽的进一步表征。
然后在醋酸/丙酮/甲醇(1∶1∶4，v/v/v)中使用氰基硼氢化钠通过还原性氨基化将冻干的前体环肽烷化(方案9)。肽浓度约为10mg/mL，并可显著变化而不影响结果。使用3到5当量的还原剂氰基硼氢化钠，反应通常在室温下2小时内完成。回收率90％或更高。例如，将20mg前体环肽溶解在2mL甲醇中，加入0.5mL醋酸和0.5mL丙酮，混合均匀，然后在搅拌下加入5.6mg氰基硼氢化钠(甲醇中2.5当量)。在室温下搅拌反应混合物30分钟，再加入5.6mg氰基硼氢化钠。通过HPLC和质谱分析，监测反应。反应完成后，脱盐并冻干反应混合物，产生纯度为97.5％的18.9mg终产物(SEQ ID NO：70)。MW cal.：1189.48；MW obs.：1189.6。
Figure G2008800178577D00471
方案9.还原性氨基化将Lys转化成Lys(iPr)
使用[3-({乙基-Fmoc-氨基}-甲基)-吲哚-1-基]-乙酰基AM树脂，也可以以类似方式制备实施例60的化合物(SEQ ID NO：74)，其中基于其组成氨基酸作适当修改。首先，如实施例84中制备前体肽(SEQ ID NO：99)，然后如方案9中所示进行还原性氨基化。这提供了纯度为99.16％的最终环状C末端乙基酰胺肽。MW cal.：1217.53；MW obs.：1217.84。
实施例86
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NH 2 (SEQ ID NO：70)的可选合成方案II
实施例85公开了通过使用相对廉价的Fmoc-Lys(Boc)进行Fmoc固相肽合成化学并在相对廉价的溶剂(醋酸、丙酮和甲醇)中使用氰基硼氢化钠通过还原性氨基化对赖氨酸烷化，以成本有效地合成SEQ ID NO：70。然而，该方法涉及使用重金属催化剂钯去除烯丙基酯侧链保护基。钯是高毒性的，为确保完全去除该元素进行的质量控制既复杂又困难。本实施例描述的在树脂上环化的Boc固相肽合成方法，允许使用相对廉价的Boc-Lys(2-Cl-Z)制备SEQ ID NO：70而无需使用有毒且昂贵的钯催化剂，从而提供了甚至更经济、容易扩大生产规模、毒性更低的终产物生产途径，该途径需要更简单的质量控制过程。
如方案10中所示，使用已经建立的固相肽合成Boc化学(
Figure G2008800178577D00481
等(1992)Int.J.Pept.Protein Res.40：180-193)，在MBHA(4-甲基-二苯甲胺)树脂(Cat.No.D-2095，BaChem California Inc.，Torrance，CA)上，手工装配序列Fmoc-Phe-Tyr(2-Br-Z)-Lys(2-Cl-Z)-DArg(Tos)-2Nal-Gly-Dglu(OFm)-Lys(2-Cl-Z)(SEQ ID NO：102)。使用在该参考文献中描述的原位中和/HBTU/DIEA活化程序进行链装配。侧链保护基的方案是：Lys(2-Cl-Z)、DGlu(OFm)、DArg(Tos)和Tyr(2-Br-Z)。所有氨基酸构件的α-氨基基团均用叔丁氧羰基(Boc)保护，除了N末端残基Phe，其为了合成效率而使用Fmoc进行保护。分步链装配从线性肽的C末端开始并在8步内完成。步骤1，五当量的受保护的氨基酸Boc-Lys(2-Cl-Z)在DMF中用HBTU/DIEA活化，并偶联到MBHA树脂上。步骤2，五当量的Boc-DGlu(OFm)被活化，并使用净TFA偶联到来自步骤1的去保护肽树脂上。合适地重复这些步骤直至步骤8，即，偶联Fmoc-Phe。
使用DMF中20％的哌啶去除DGlu的Fm侧链保护基团，以及N末端的Fmoc。DGlu的去保护羧酸部分用PyBOP/DIEA、HCTU/DIEA或其它合适活化剂活化，并在树脂上环化到Phe的α-氨基基团上。使用具有5％间甲苯酚或对甲苯酚作为清除剂的HF，0℃、1小时将环肽同时去保护并从树脂上切下。然后蒸发溶剂，沉淀粗肽并用冷的乙醚洗涤3次。
Figure G2008800178577D00501
方案10.使用Boc化学在固相上的肽链装配
使用标准的制备性HPLC技术完成环状前体肽(如方案10中所示的SEQ ID NO：98)的纯化。将粗切下产物溶解在最小量的DMSO中，加载到反相C18HPLC柱上，并在214nm监测的同时用水性0.1％三氟乙酸/乙腈(v/v)梯度洗脱。合并合适级分并冻干。使用分析性HPLC和质谱分析，通过常规技术进行中间体前体环肽的进一步表征。对于SEQ ID NO：98，MW cal.：1105.29；MW obs.：1105.4。
如方案9中，然后在醋酸/丙酮/甲醇(1∶1∶4，v/v/v)的溶液中，使用氰基硼氢化钠通过还原性氨基化将冻干的前体环肽(SEQ ID NO：98)烷化。肽浓度约为10mg/mL，并可显著变化而不影响结果。使用5当量的还原剂氰基硼氢化钠，并且反应通常在室温下2小时内完成。回收率90％或更高。例如，将6.6mg前体环肽溶解在0.8mL甲醇中，加入0.2mL醋酸和0.2mL丙酮，混合均匀，然后搅拌下将1.9mg氰基硼氢化钠(甲醇中2.5当量)分两等份加入。在室温下搅拌反应混合物30分钟，再加入1.9mg氰基硼氢化钠。通过HPLC和质谱分析，监测反应。反应完成后，脱盐及冻干反应混合物，产生纯度为96.5％的终产物(SEQ ID NO：70)。MW cal.：1189.45；MW obs.：1189.6。
实施例87
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NH 2 (SEQ ID NO：70)的可选合成方案II
也可如下在不使用钯催化剂的情况下，通过溶液环化制备实施例57的化合物(SEQ ID NO：70)，从而利于扩大规模。
如方案11中所示，使用固相肽合成Boc化学(
Figure G2008800178577D00511
等(1992)Int.J.Pept.Protein Res.40：180-193)，在MBHA树脂上手工装配序列Boc-Phe-Tyr(2-Br-Z)-Lys(Fmoc)-DArg(Tos)-2Nal-Gly-DGlu(OBzl)-Lys(Fmoc)(SEQ ID NO：103)。使用如在
Figure G2008800178577D00512
等中描述的原位中和/HBTU/DIEA活化程序进行链的装配。侧链保护基的方案是：Lys(Fmoc)、DGlu(OBzl)、DArg(Tos)、Tyr(2-Br-Z)。所有氨基酸构件的α-氨基均用叔丁氧羰基(Boc)保护。分步链装配从线性肽的C末端开始并在如方案11中所示的8步内完成。步骤1，五当量的受保护的氨基酸Boc-Lys(2-Cl-Z)被DMF中的HBTU(4eq)/DIEA(10eq)活化，并偶联到MBHA树脂上。步骤2，五当量的Boc-DGlu(OBzl)被活化，并使用净TFA偶联到来自步骤1的去保护肽树脂上。合适地重复这些步骤直至步骤8，即，偶联Boc-Phe。用净TFA去除Boc保护基团，用DIEA中和树脂，用DMF和甲醇洗涤并在HF切割前在空气中干燥。使用具有5％间甲苯酚或对甲苯酚作为清除剂的HF在0℃、1小时将线性肽同时去保护并从树脂上切下。然后蒸发溶剂，沉淀粗肽并用冷的乙醚洗涤3次。
Figure G2008800178577D00521
方案11.使用Boc化学的链装配
使用标准的制备性HPLC技术完成线性前体肽(SEQ ID NO：104)的纯化。将粗的切下产物溶解在最小量的DMSO中，加载到反相C18HPLC柱上，并在214nm监测的同时用水性0.1％三氟乙酸/乙腈(v/v)梯度洗脱。合并合适级分并冻干。使用分析性HPLC和质谱分析，通过常规技术进行中间体前体环肽的进一步表征。对于SEQ ID NO：104，MW cal.：1567.78；MW obs.：1567.6。
在溶液中进行冻干的前体线性肽(SEQ ID NO：104)的环化(方案12)。所述线性肽溶解在少量干DMF(～10mg/mL)中。该肽溶液在磁力搅拌下通过注射器泵缓慢递送到干DMF中PyBOP(2当量，或其它合适活化剂，如HCTU、BOP、HBTU等)和DIEA(10当量)的反应混合物中。然后允许反应在室温下进行2小时。然后向反应混合物中加入净哌啶至25％(v/v)的终浓度。继续在搅拌下保持反应混合物20分钟，以完全去除Fmoc保护。在真空下蒸发溶剂，将残留物加载到制备性反相C18HPLC柱上，并在214nm监测的同时用水性0.1％三氟乙酸/乙腈(v/v)梯度洗脱。合并合适级分并冻干，提供环状前体肽(SEQ ID NO：98)。使用分析性HPLC和质谱分析，通过常规技术进行中间体前体环肽的进一步表征。For SEQ ID NO：98，MW cal.：1105.29；MW obs.：1105.4。
如方案9中，在醋酸/丙酮/甲醇(1∶1∶4，v/v/v)的溶液中，使用氰基硼氢化钠通过还原性氨基化进行环肽SEQ ID NO：98的烷化，产生终产物(SEQID NO：70)。MW cal.：1189.45；MW obs.：1189.6。
Figure G2008800178577D00541
方案12.环化和Fmoc去除
实施例88
环[Phe-Tyr-Lys(iPr)- D Arg-2Nal-Gly- D Glu]-Lys(iPr)-NH 2 (SEQ ID NO：70)的可选合成方案IV
也可在不使用钯催化剂的情况下，通过下文方案13中的合成方法来制备实施例57的化合物(SEQ ID NO：70)。
首先在溶液中制备二肽Fmoc-DGlu-Lys(iPr，Z)-NH2，其具有暴露的D谷氨酸侧链。将二肽连接到超酸不稳定性CTC(2-氯三苯甲基氯PS树脂，1％DVB(100-200筛目))树脂(Senn Chemicals USA Inc.，San Diego，CA；目录号40207)，然后通过如上所述的标准Fmoc合成在该树脂上合成最终的肽产物。从CTC树脂上选择性地除下肽，以允许仅D谷氨酸侧链在溶液中与肽的N末端反应，产生环肽产物。随后，用95％TFA或其它强酸断裂剩余的侧链。
Figure G2008800178577D00551
方案13.从Fmoc-DGlu-Lys(iPr，Z)-NH2开始的整个合成方案
首先如下所示制备二肽Fmoc-DGlu-Lys(iPr，Z)-NH2(方案14)：
Figure G2008800178577D00552
方案14：Fmoc-DGlu-Lys(iPr，Z)-NH2的制备
Boc-Lys(iPr，Z)-OH与NMM和IBCF在THF中反应。加入NH4OH后，通过旋转蒸发去除溶剂，并产物加入醋酸乙酯。用5％NaHCO3然后用0.1N HCl彻底洗涤醋酸乙酯相，并以无水硫酸钠干燥。通过过滤将硫酸钠去除，并在减压下通过蒸发将醋酸乙酯去除。所得的Boc-Lys(iPr，Z)-NH2溶于DCM中，加入TFA。一旦反应已经完成，通过旋转蒸发去除溶剂。然后在DMF中溶解H-Lys(iPr，Z)-NH2。用DIEA将pH调整至8。在单独的容器中，将Fmoc-DGlu(OtBu)-OH、HBTU和HOBt溶解在DMF中；加入DIEA调整pH至8。混合两种溶液，并通过C18反相HPLC监测反应。监测pH并在必要时用DIEA调整。通过旋转蒸发去除溶剂，并在醋酸乙酯中溶解产物。用5％NaHCO3然后用0.1N HCl彻底洗涤醋酸乙酯相，然后用无水硫酸钠干燥。通过过滤将硫酸钠去除，并在减压下通过蒸发将醋酸乙酯去除。继续旋转蒸发直至形成干残留物。所得的Fmoc-DGlu(OtBu)-Lys(iPr，Z)-NH2溶解于DCM中，并加入TFA。一旦反应已经完成，通过旋转蒸发去除溶剂。通过用乙醚研制获得固体产物。用醚洗涤沉淀后，在真空炉中将产物干燥。
如下进行终产物的固相肽合成。在DCM中溶解Fmoc-DGlu(OtBu)-Lys(iPr，Z)-NH2，并在DIEA的存在下于反应容器中与CTC树脂反应。3小时后，用DCM洗涤肽树脂除去试剂并加入Z-OSu。监测pH并在必要时，通过加入DIEA调整pH至pH8-9。8小时后，用DCM洗涤肽树脂除去试剂，转移到聚丙烯容器中，并在真空炉中干燥。
如下使用Fmoc-化学装配受保护的肽树脂。所用的偶联循环是：1)去封闭(de-blocking)：用DMF中25％的哌啶处理；2)使用DMF、IPA和再次DMF的洗涤循环；3)水合茚三酮试验(定性：如果是阳性的，进行到偶联步骤4)；4)在DMF中HOBt/DIC的存在下用2当量的Fmoc-氨基酸进行偶联；5)使用DMF的洗涤循环；6)水合茚三酮试验(定性：如果是阴性的，进行到下一去封闭/偶联循环；如果是阳性的，进行到再偶联步骤7；如果是微弱的阳性，进行到乙酰化步骤10)；7)在DMF中HOBt、HBTU/DIEA的存在下用1当量的Fmoc-氨基酸再偶联(如果需要)；8)使用DMF的洗涤循环；9)水合茚三酮试验(定性：如果是阴性的，进行到下一去封闭/偶联循环；如果是阳性的，进行到乙酰化步骤10)；10)在DMF中使用4％DIEA中的2％醋酸酐乙酰化(如果需要)；11)洗涤循环(使用DMF、IPA和再次DMF)；12)水合茚三酮试验(定性：如果是阳性的，进行到下一去封闭/偶联循环)。最终偶联循环后，用醚洗涤肽树脂(SEQ ID NO：105)并在真空下干燥。
用DCM洗涤受保护的肽树脂。在DCM中用2％TFA从树脂上切下完全受保护的线性肽，然后进行过滤。通过旋转蒸发去除溶剂，并通过用醚研制，沉淀完全受保护的线性肽(SEQ ID NO：106)。将完全受保护的线性肽转移到聚丙烯容器中，并在真空炉中干燥。
在DMF中PyBOP、HOBt和DIEA的存在下将完全受保护的线性肽环化。必要时，通过加入DIEA将pH维持在pH 7-8。反应已经进行完成后，通过旋转蒸发去除溶剂，并产物加入醋酸乙酯中。用5％NaHCO3，然后用0.1N HCl和饱和NaCl溶液彻底洗涤醋酸乙酯相。然后用无水硫酸钠干燥。通过过滤将硫酸钠去除，并在减压下通过旋转蒸发将醋酸乙酯去除。通过用醚研制，沉淀受保护的环肽(SEQ ID NO：107)并在真空炉中干燥。
在TFA:H2O:TIS中进行去保护。当反应完成时，通过旋转蒸发去除溶剂并通过用醚研制而沉淀环肽(SEQ ID NO：70)，并在真空炉中干燥。MW cal.：1189.48；MW obs.：1189.50。
实施例89
同位素标记的掺入：
环[Phe-Tyr-Lys(iPr-d6)-DArg-2Nal-Gly-DGlu]-Lys(iPr-d6)-NH2(SEQID NO：108)的合成
以同位素标记的丙酮，如下文所示的13C-、14C-、氘、或氚标记的丙酮开始，实施例85-87的方法允许位点特异性同位素标记环肽CXCR4拮抗剂，用于多种药理学和成像研究。所述同位素标记的丙酮可通过商业途径从多种来源获得。下文给出了使用丙酮-d6制备含12个氘原子的肽的实例。所得化合物(其相比于未标记对应物在分子量上有12Da的差异)在质谱中容易区分并显示相同的靶受体亲和力。
Figure G2008800178577D00581
丙酮                             丙酮-d6
Figure G2008800178577D00582
丙酮-13C         丙酮-2-13C          丙酮-3-13C
使用实施例85-87中的任何方法，可以制备并纯化环肽前体(SEQ IDNO：98，SEQ ID NO：99，等)。如方案9中，在醋酸/丙酮/甲醇(1∶1∶4，v/v/v)溶液中，使用氰基硼氢化钠通过还原性氨基化进行烷化，除了：标准丙酮被期望的同位素标记丙酮替换。在本实施例中，使用氘丙酮-d6。
将肽(97mg)溶于15mL醋酸/丙酮-d6/甲醇(1∶1∶4，v/v/v)中。肽浓度可显著变化而不影响结果。使用5当量的氰基硼氢化钠，并且反应通常在室温下2小时内完成。通过HPLC和质谱分析监测反应。反应完成后，反应混合物的脱盐和冻干产生90.5mg纯度为99.9％的终产物(SEQ IDNO：108)。MW cal.：1201.48；MW obs.：1201.7。
Figure G2008800178577D00591
方案15.CXCR4拮抗剂的位点特异性氘标记
使用同位素标记的氰基硼氢化钠(如NaBD3CN、NaBT3CN等)允许掺入除该位点特异性标记模式外的其它变化。
可通过使用下文所述测定试验确定本发明化合物的药理学性质。
人CXCR4/125I-SDF-1α结合抑制测定
SDF-1结合CXCR4是活化CXCR4胞内信号途径的第一步。为了确定化合物是否能阻断SDF-1和CXCR4的相互作用，在125I-标记的SDF-1α结合测定试验中使用表达内源CXCR4的人白血病CCRF-CEM细胞(ATCC CCL 119)。在96孔U形底，未处理聚苯乙烯板(CorningIncorporated，Costar，No.3632)中进行测定。用含10mM HEPES、pH7.5和0.2％BSA的RPMI 1640培养基(Gibco，Grand Island，NY)制备结合测定缓冲液。简言之，含300pM SDF配体(60pM125I-SDF-1α(Perkin Elmer)和240pM冷SDF-1α(R&D Systems)、测定缓冲液中不同浓度的试验化合物、100,000个人CCRF-CEM细胞和0.5mg SPA珠(Wheatgerm agglutininbeads；Amersham)的200μL反应混合物在室温下温育2小时。然后以SPA模式在1450Microbeta Liquid Scintillation and Luminescence Counter(Wallac)中对平板进行计数。CXCR4拮抗剂在该测定中以剂量依赖性方式降低结合的放射性。使用GraphPad Prism软件，基于结合放射性的剂量依赖性降低，计算试验化合物的抑制效力(Ki或IC50)。
上文示例的所有化合物在该测定中显示约7.5nM或更低的平均Ki值。例如，实施例1的化合物在该测定中显示3.45nM的平均Ki。这些化合物中许多显示约0.2nM至约1nM的平均Ki值。例如，实施例50的化合物在该测定中显示0.285nM的平均Ki值。其它化合物显示低于约0.2nM的平均Ki值。例如，实施例75的化合物在该测定中显示0.096nM的平均Ki值。
趋化性测定试验
CXCR4/SDF-1相互作用调节在其表面上携带CXCR4的细胞的迁移(趋化性)。为了测定试验化合物的拮抗剂活性和细胞活性，使用趋化性测定试验，所述测定使用表达内源CXCR4的人组织细胞性淋巴瘤U937细胞(ATCC CRL 1593)。简言之，收获在含10％FBS、1％MEM丙酮酸钠(Gibco)、1％MEM非必需氨基酸(Gibco)和1％GlutaMAX 1(Gibco)的DMEM培养基(Gibco，Grand Island，NY)中生长的U937细胞，并用由含10mM HEPES，pH7.5和0.3％BSA的1x RPMI培养基(Gibco)制备的趋化性测定缓冲液洗一次。洗涤后，在测定缓冲液中以5×106细胞/mL的浓度重悬浮细胞。根据制造商的指导在96孔ChemoTx平板(NeuroProbe)中进行所述测定。通常，在上层室中涂布含有或不含有试验化合物的50μL细胞混合物，并向下层室中加入在1x趋化性缓冲液中制备的30μLSDF-1α(R&D Systems，10ng/mL)。装配后，平板在5％CO2下37℃温育2.5小时。温育后，向下层室中加入5μL CellTiter 96AQ(Promega，Madison，WI)。所述平板然后在37℃温育60分钟，使用Tecan SpectrafluorPlus Microplate Reader(Salzburg，Austria)通过测量492nm处的吸光度检测迁移的细胞。CXCR4拮抗剂抑制细胞迁移，减小吸光度读数。使用GraphPad Prism软件，基于492nm处吸光度的剂量依赖性降低，计算该测定中试验化合物的抑制效力(IC50)。
上文示例的大多数化合物在该测定中显示约60nM或更低的平均IC50值。这些化合物中许多显示约6nM或更低的平均IC50值，例如实施例19的化合物在该测定中显示2.05nM的平均IC50值。这些化合物中许多显示约0.6nM或更低的平均IC50值，例如实施例50的化合物在该测定中显示0.171nM的平均IC50值。
趋化因子受体结合选择性测定试验
本发明化合物对CXCR4受体相比于对其它趋化因子受体，如人CCR1、CCR2、CXCR2或CXCR3，和其它G蛋白偶联受体的结合选择性，可以在转染有编码并表达这些受体的细胞中，或在内源表达这些受体的细胞中评估。可使用全细胞或膜片段，以与上文所述CXCR4/125I-SDF-1α结合抑制测定类似的方式，评估试验化合物与相应配体对这些受体的竞争。
例如，实施例57a的化合物在使用人趋化因子受体CXCR2的配体结合测定试验中显示高于73,000nM的Ki值。
C57BL/6小鼠中化合物诱导的白细胞和中性粒细胞动员
骨髓内的干细胞在一生中活跃地维持全部成熟血细胞谱系的持续产生。骨髓是白细胞(WBC)/中性粒细胞产生并释放到循环中的主要位点。CXCR4/SDF-1轴看起来对骨髓中WBC、中性粒细胞和造血祖细胞的保留和释放至关重要，并且妨碍骨髓中CXCR4/SDF-1的相互作用会导致外周血中这些细胞增加。短期小鼠WBC/中性粒细胞动员模式可用于测定试验化合物的体内靶调节活性。简言之，在测定前笼养无病原体的5-6周龄的雌性C57BL/6小鼠(Taconic)至少一周。允许动物持续获得消毒的啮齿类类食物和酸化水。用盐水中的试验化合物，或盐水对照经皮下注射5只小鼠的组，然后在化合物施用后多个时间点上通过CO2窒息和颈脱位法将其处死。使用EDTA-包被的注射器和管通过心脏穿刺，收集外周血。在Hemavet Mascot血液分析仪(Drew Scientific Group，Dallas，TX)上进行全血细胞分析。记录外周血中的总WBC、中性粒细胞和淋巴细胞。经皮下对小鼠施用的有效CXCR4拮抗剂相比于盐水对照将增加外周血中的中性粒细胞和WBC计数。
在化合物施用后3小时测定，上文示例的化合物有相当多显示平均中性粒细胞比例(处理组中中性粒细胞增加相对于盐水对照组中中性粒细胞增加的比例)在该测定中高于2。例如，实施例39的化合物在该测定中以剂量5mg/kg显示4.6的平均中性粒细胞比例。
SCID/Namalwa异种移植模型中的抗肿瘤活性
SDF-1/CXCR4相互作用看起来在肿瘤发生的多个阶段，包括肿瘤生长、浸润、血管发生和转移中起重要作用。为了评估试验化合物的体内抗肿瘤活性，使用肿瘤异种移植模型，所述模型使用NOD/SCID小鼠(Jackson Laboratories)和人非霍奇金淋巴瘤Namalwa细胞(ATCC CRL1432)。简言之，与Matrigel混和的200,000 Namalwa细胞(1∶1)经皮下移植到动物的后侧腹。移植的肿瘤细胞生长为实体瘤，使用测径器连续监测并测定所述肿瘤的尺寸。为了在该模型中测定试验化合物的体内效力，可从肿瘤细胞移植后48小时开始，用溶于盐水或PBS的不同剂量的试验化合物处理动物(10只/组)。经皮下施用化合物，并且每2或3天测定肿瘤体积和体重。根据肿瘤的生长，研究一般持续3-4周。通过治疗组中肿瘤体积相对于用仅载体(Vehicle)处理的对照组中的肿瘤体积的百分比降低，测定试验化合物的抗肿瘤生长活性。
当以1mg/kg BID施用时，上文示例的几种化合物，例如实施例26的化合物，在该测定中显著抑制肿瘤生长。
可通过药物开发领域所熟知的方法测定药理学性质，如化合物生物利用率、体内代谢稳定性和药物代谢动力学/药效学性质。当皮下施用时，本发明优选的化合物显示高的生物利用率。本文示例的一些化合物在大鼠中显示近100％的生物利用率，例如实施例44的化合物。优选的化合物也显示良好的体内代谢稳定性。例如，在施用实施例57a的化合物后高达24小时在狗和猴血浆和尿中没有观察到可检测的代谢物。优选的化合物也显示良好的药物代谢动力学/药效学性质，其允许便利施用。例如，在小鼠中，实施例58的化合物的半衰期(T1/2)为约3小时。对于药效学性质，优选的化合物在小鼠中诱导长期的中性粒细胞和白细胞动员。例如，在小鼠中以5mg/kg单剂皮下施用后，实施例25的化合物至少持续6小时在外周血中诱导中性粒细胞和白细胞的显著增加。
序列表
<110>伊莱利利公司(Eli Lilly and Company)
<120>环肽CXCR4拮抗剂
<130>X17256_WO
<150>60/940996
<151>2007-05-31
<150>60/940802
<151>2007-05-30
<160>108
<170>PatentIn version 3.4
<210>1
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ac，Bz或正己酰基或不存在
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥，当1位Xaa存在时
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝d或l型异构体Agl，Dab，Dap，Asp，Glu，Ala，d型异构体Ala，
     Gly，Dap(Ac)，Leu，Lys，Lys(Ac)，2Nal，Phe，d型异构体Phe，
     β-Ala或不存在
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)..(7)
<223>内酰胺桥，当1位Xaa不存在时
<220>
<221>MOD_RES
<222>(2)..(2)
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221>MISC_FEATURE
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<223>Xaa＝Glu，d或l型异构体Agl，Dab，Dap，d型异构体Dap，Lys，Orn，d
     型异构体Glu，或Asp
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝β-Ala，Arg，d型异构体Arg，Gly，Lys，Lys(iPr)，Orn或不存在，并且当不存在时，9
     位和10位的Xaa也不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(9)..(9)
<223>Xaa＝Gly，2Nal，d型异构体2Nal，d型异构体Phe，或不存在，并且当不存在时，
     10位Xaa也不存在
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(10)..(10)
<223>Xaa＝2Nal或不存在
<220>
<221>MOD_RES
<222>(10)..(10)
<223>酰胺化为NH2或NHEt
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Xaa Tyr Xaa Arg Xaa Gly Xaa Xaa Xaa Xaa
1               5                   10
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<220>
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Xaa Tyr Arg Arg Xaa Gly Glu Arg
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
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Xaa Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Arg
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<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
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<223>Ac修饰的
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<223>内酰胺桥
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<223>酰胺化
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Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1               5
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<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
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<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝Glu(OtBu)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(tBu)
<220>
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<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Arg(Pbf)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Pbf)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝Dap(Boc)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Arg(Pbf)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>12
Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1               5
<210>13
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ac修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝Dap
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>13
Glu Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>14
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Bz修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝Dap
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>14
Glu Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>15
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ac修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d型异构体Dap
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>15
Glu Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>16
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ac修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>16
Glu Tyr Arg Arg Xaa Gly Lys Arg
1               5
<210>17
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ac修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝Dab
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>17
Glu Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>18
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ac修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d或l型异构体Agl
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>18
Glu Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>19
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Bz修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d或l型异构体Agl
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>19
Glu Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>20
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Bz修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝Dab
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>20
Asp Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>21
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ac修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝Dab
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>21
Asp Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>22
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ac修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝Dap
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>22
Asp Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>23
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Bz修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝Dap
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>23
Asp Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>24
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ac修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d或l型异构体Agl
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>24
Asp Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>25
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Ac修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(Me2)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝Dap
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>25
Asp Tyr Xaa Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>26
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Bz修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(Me2)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝Dap
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>26
Asp Tyr Xaa Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>27
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>琥珀酰基修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(6)..(6)
<223>Xaa＝d或l型异构体Agl
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>27
Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>28
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>琥珀酰基修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(6)..(6)
<223>Xaa＝Dap
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>28
Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>29
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>琥珀酰基修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(6)..(6)
<223>Xaa＝Dab
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>29
Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>30
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>琥珀酰基修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(6)..(6)
<223>Xaa＝Orn
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>30
Tyr Arg Arg Xaa Gly Xaa Arg
1               5
<210>31
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>琥珀酰基修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>31
Tyr Arg Arg Xaa Gly Lys Arg
1               5
<210>32
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>32
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>33
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(tBu)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)(Boc)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Pbf)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d型异构体Glu(O-烯丙基)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Arg(Pbf)
<400>33
Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1               5
<210>34
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>乙酸盐
<400>34
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>35
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Fmoc修饰的
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(tBu)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)(Boc)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Pbf)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d型异构体Glu(O-烯丙基)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Arg(Pbf)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>35
Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1               5
<210>36
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(tBu)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)(Boc)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Pbf)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Arg(Pbf)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>36
Gly Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>37
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>37
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>38
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>乙酸盐
<400>38
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>39
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>39
Gly Tyr Arg Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>40
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>40
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>41
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
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<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>41
Tyr Arg Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>42
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(6)..(6)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>42
Tyr Arg Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>43
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>43
Tyr Arg Arg Xaa Gly Asp Arg
1               5
<210>44
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>44
Gly Tyr Arg Arg Xaa Gly Asp Arg
1               5
<210>45
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(Me2)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>45
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Asp Arg
1               5
<210>46
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>46
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Asp Arg
1               5
<210>47
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>47
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Asp
1               5
<210>48
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>48
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Asp Xaa
1               5
<210>49
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(Me2)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>49
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>50
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>50
Gly Tyr Arg Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>51
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>51
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>52
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>52
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>53
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化为NHEt
<400>53
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Asp
1               5
<210>54
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化为NHEt
<400>54
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>55
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化为NHEt
<400>55
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>56
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化为NHEt
<400>56
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>57
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化为NHEt
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>乙酸盐
<400>57
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>58
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化为NHEt
<400>58
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>59
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝Lys(Ac)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(Me2)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>59
Xaa Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>60
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝Dap(Ac)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(Me2)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>60
Xaa Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>61
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>61
Ala Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>62
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
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1               5
<210>63
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
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<220>
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<220>
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<220>
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<220>
<221>MOD_RES
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<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>63
Ala Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
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<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
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<220>
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<220>
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<222>(5)..(5)
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<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
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Ala Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>65
<211>7
<212>PRT
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<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
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<220>
<221>MISC_FEATURE
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<220>
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<220>
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<220>
<223>合成的构建体
<220>
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<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
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<220>
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<220>
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<222>(5)..(5)
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<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>66
Leu Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>67
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
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<220>
<221>MOD_RES
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<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
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<220>
<221>MOD_RES
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1               5
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<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>68
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
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<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
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<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
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<211>8
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<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
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<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
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<220>
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<220>
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<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
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<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>70
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>71
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>乙酸盐
<400>71
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>72
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>72
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>73
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>73
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>74
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化为NHEt
<400>74
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>75
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化为NHEt
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>乙酸盐
<400>75
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>76
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化为NHEt
<400>76
Ala Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>77
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化为NHEt
<400>77
Xaa Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>78
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化为NHEt
<400>78
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>79
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化为NHEt
<400>79
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu
1               5
<210>80
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(9)..(9)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(9)..(9)
<223>酰胺化
<400>80
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Gly Xaa
1               5
<210>81
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝β-Ala
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(9)..(9)
<223>Xaa＝d型异构体2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(9)..(9)
<223>酰胺化
<400>81
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa Xaa
1               5
<210>82
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝β-Ala
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>82
Xaa Tyr Arg Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>83
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(1)..(1)
<223>Xaa＝β-Ala
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>83
Xaa Tyr Arg Arg Xaa Gly Asp Arg
1               5
<210>84
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>5-氨基戊酰基修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>84
Tyr Arg Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>85
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>5-氨基戊酰基修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>85
Tyr Arg Arg Xaa Gly Asp Arg
1               5
<210>86
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>4-AMPA修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>86
Tyr Arg Arg Xaa Gly Asp Arg
1               5
<210>87
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>4-AMPA修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>87
Tyr Arg Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>88
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>4-AMPA修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>88
Tyr Arg Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>89
<211>7
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>4-AMB修饰的
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(6)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(3)..(3)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>酰胺化
<400>89
Tyr Arg Arg Xaa Gly Glu Arg
1               5
<210>90
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(10)..(10)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(10)..(10)
<223>酰胺化
<400>90
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa Gly Xaa
1               5                   10
<210>91
<211>10
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(10)..(10)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(10)..(10)
<223>酰胺化
<400>91
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa Gly Xaa
1               5                   10
<210>92
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(9)..(9)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(9)..(9)
<223>酰胺化
<400>92
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Gly Phe
1               5
<210>93
<211>9
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(9)..(9)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(9)..(9)
<223>酰胺化
<400>93
Gly Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa Phe
1               5
<210>94
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>94
Lys Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>95
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>95
Phe Tyr Lys Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>96
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>96
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Lys
1               5
<210>97
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Orn
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>97
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>98
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>98
Phe Tyr Lys Arg Xaa Gly Glu Lys
1               5
<210>99
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化为NHEt
<400>99
Phe Tyr Lys Arg Xaa Gly Glu Lys
1               5
<210>100
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>FMOC修饰的
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(tBu)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(Boc)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Pbf)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d型异构体Glu(O-烯丙基)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(Boc)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>100
Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1               5
<210>101
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(tBu)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(Boc)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Pbf)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(Boc)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>101
Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>102
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Fmoc修饰的
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(2-Br-Z)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(2-Cl-Z)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Tos)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d型异构体Glu(OFm)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(2-Cl-Z)
<400>102
Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1               5
<210>103
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(1)
<223>Boc修饰的
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(2-Br-Z)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(Fmoc)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Tos)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d型异构体Glu(OBzl)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(Fmoc)
<400>103
Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1               5
<210>104
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(Fmoc)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(Fmoc)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化的
<400>104
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>105
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(tBu)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr，Boc)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Pbf)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d型异构体Glu(2-CTC resin)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr，Z)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>105
Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1               5
<210>106
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(tBu)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr，Boc)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Pbf)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(7)..(7)
<223>Xaa＝d型异构体Glu(OH)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr，Z)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>106
Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa
1               5
<210>107
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(2)..(2)
<223>Xaa＝Tyr(tBu)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr，Boc)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(4)..(4)
<223>Xaa＝d型异构体Arg(Pbf)
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr，Z)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>107
Phe Xaa Xaa Xaa Xaa Gly Glu Xaa
1               5
<210>108
<211>8
<212>PRT
<213>人工序列
<220>
<223>合成的构建体
<220>
<221>MOD_RES
<222>(1)..(7)
<223>内酰胺桥
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(3)..(3)
<223>Xaa＝Lys(iPr-d6)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(4)..(4)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(5)..(5)
<223>Xaa＝2Nal
<220>
<221>MOD_RES
<222>(7)..(7)
<223>d型异构体
<220>
<221>MISC_FEATURE
<222>(8)..(8)
<223>Xaa＝Lys(iPr-d6)
<220>
<221>MOD_RES
<222>(8)..(8)
<223>酰胺化
<400>108
Phe Tyr Xaa Arg Xaa Gly Glu Xaa
1               5

Claims (7)

1.式I的内酰胺环化肽：
R1-环[X1-Tyr-X3-DArg-2Nal-Gly-X7]-X8-X9-X10-R2
(I)
(SEQ ID NO：1)
或其药学上可接受的盐，
其中：
所述内酰胺由X1的α-氨基与X7的侧链羧基之间的酰胺键形成，
R1不存在；
X1选自Ala、DAla、Gly、Phe、和DPhe；
X3选自Arg、Lys(iPr)和Lys(Me2)；
X7选自Glu和DGlu；
X8选自Arg、和Lys(iPr)；
X9不存在；
X10不存在；并且
R2选自NH2和NHEt。
2.权利要求1的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：
X1选自Gly和Phe；
X3是Lys(iPr)；
X7是DGlu；且
X8是Lys(iPr)。
3.权利要求1或2的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，其中：R2为NH2。
4.权利要求1-3之任一项的内酰胺环化肽，其具有下式：
或其药学上可接受的盐。
5.权利要求1-4之任一项的内酰胺环化肽，其中所述药学上可接受的盐是醋酸盐。
6.药物组合物，其包含权利要求1-5任何一项的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐，及药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
7.权利要求1-5任何一项的内酰胺环化肽或其药学上可接受的盐在制备用于治疗发病机理牵涉CXCR4和SDF-1的选自乳腺癌、胰腺癌、黑素瘤、前列腺癌、肾癌、成神经细胞瘤、非-霍奇金淋巴瘤、肺癌、卵巢癌、结肠直肠癌、多发性骨髓瘤、多形性成胶质细胞瘤和慢性淋巴细胞性白血病的癌的药物中的用途。
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