CN101669910A - 一种头孢替唑钠前体脂质体制剂 - Google Patents

Abstract

本发明提供一种头孢替唑钠前体脂质体制剂，其包括头孢替唑钠1份，蛋黄卵磷脂2－15份，胆固醇0.5－10份，泊洛沙姆188 0.8－13份，支持剂2－20份。本发明还提供该前体脂质体的制备方法和用途。本发明的前体脂质体具有稳定性高、包封率高、粒径均匀、副作用小等优点。

Description

一种头孢替唑钠前体脂质体制剂

技术领域

本发明涉及一种脂质体制剂，特别地涉及头孢替唑钠前体脂质体制剂及其制法，属于医药技术领域。

背景技术

头孢替唑钠，其化学名称为：(6R，7R)-3-[(1，3，4-噻二唑-2-基)硫代甲基]-8-氧代-7-[2-(1H-四唑-1-基)乙酰氨基]-5-硫杂-1-氮杂双环[4，2，0]辛-2-烯-2甲酸钠，分子式：C₁₃H₁₁N₈O₄S₃Na，分子量：462.45，结构式为：

头孢替唑为半合成的头孢菌素衍生物，其作用机理是通过抑制细菌细胞壁的合成而发挥抗菌活性。本品对革兰阳性菌的作用与头孢唑啉相接近，而对革兰阴性菌，如嗜血杆菌、大肠杆菌、克雷白杆菌、奇异变形杆菌等作用比较优良，对畅杆菌、枸橼酸杆菌、吲哚阳性变形杆菌等也有抗菌作用。临床上应用本品治疗敏感菌所致的感染如肺炎、支气管炎、胆道感染、腹膜炎、尿路感染，以及手术后或外伤引起的感染和败血症。由于头孢替唑钠易受外界环境条件的影响而发生质量的变化，特别是稳定性受温度、湿度、光照和空气的条件影响变化较大，包装、运输和储存过程中不小心易导致色泽变深、质量严重变差，甚至失去药用价值。

为了解决头孢替唑钠的稳定性差等问题，本领域技术人员对头孢替唑钠的制剂进行了大量研究。例如目前上市的头孢替唑钠为无菌粉针剂，稳定性差，对温度和光的不稳定，复溶后出现混浊现象，而且需阴凉处保存。中国专利CN101229129A公开了一种头孢替唑钠粉针剂的制备方法，采用头孢替唑钠和碳酸氢钠共同溶解，再析晶，分装，制得头孢替唑钠粉针剂。该方法并没有从根本上对头孢替唑钠进行特殊保护，在水溶液中会很快水解氧化，不能改变不稳定的缺点，和普通的上市制剂比较没有明显的区别，而且析晶过程中使用了异丙醇和乙醇，制剂中很难完全除净。

本发明人通过长期深入地研究，意想不到的发现当将头孢替唑钠与特定的脂质蛋黄卵磷脂按照一定的配比组合，并联合泊洛沙姆188、胆固醇等制成前体脂质体，可解决头孢替唑钠的水溶液中稳定性差的问题，从而完成了本发明。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种头孢替唑钠前体脂质体制剂，其包括以下重量份数比的组分：

头孢替唑钠                1份

蛋黄卵磷脂                2-15份

胆固醇                    0.5-10份

泊洛沙姆188               0.8-13份

支持剂                    2-20份。

在一个优选的实施方案中，所述前体脂质体制剂包括以下重量份数比的组分：

头孢替唑钠                1份

蛋黄卵磷脂                3-8份

胆固醇                    0.6-3份

泊洛沙姆188               1.2-6份

支持剂                    2.5-11份。

在一个更优选的实施方案中，所述前体脂质体制剂包括以下重量份数比的组分：

头孢替唑钠                1份

蛋黄卵磷脂                5份

胆固醇                    1.2份

泊洛沙姆188               3.8份

支持剂                6.5份。

在本发明中，支持剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、山梨醇、氯化钠、甘氨酸、水解明胶中的一种或多种，优选重量比为4∶1乳糖和海藻糖的组合，重量比为3∶1的海藻糖和葡萄糖的组合，重量比为1∶2的甘露醇和乳糖的组合，最优选重量比为4∶1的乳糖和海藻糖的组合。

本发明还提供一种药物组合物，其包含本发明所述的头孢替唑钠前体脂质体，任选地包含其它活性成分或者本领域已知的赋形剂。本发明的头孢替唑钠前体脂质体制剂或者包含其的药物组合物可以被制备成本领域已知的任何剂型，例如注射剂。

本发明的另一个目的在于提供了本发明的头孢替唑钠前体脂质体制剂的制备方法，其包括步骤：

(1)将蛋黄卵磷脂、胆固醇、泊洛沙姆188溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；

(2)加入缓冲溶液，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将头孢替唑钠溶于水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温50-60℃搅拌30-60分钟，再加入支持剂，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢替唑钠脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，制得头孢替唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装，或灌装于西林瓶中，冷冻干燥，制得头孢替唑钠前体脂质体制剂。

在本发明的的制备方法中，有机溶剂可以选自氯仿、二氯甲烷、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种，优选体积比为2∶1的乙醇和异丙醇的组合，体积比为2∶3的二氯甲烷和丙酮的组合，体积比为5∶1的二氯甲烷和苯甲醇的组合。有机溶剂的量根据加入的蛋黄卵磷脂、胆固醇、泊洛沙姆188的量进行选择，以完全溶解上述成分为最低量的要求，优选是基于蛋黄卵磷脂、胆固醇、泊洛沙姆188三者总重量计的1∶3-5(g/ml)体积的有机溶剂。

在本发明的制备方法中，缓冲溶液的pH值为6.0-7.0，可以选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种，优选磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲溶液，枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液，醋酸-醋酸钠缓冲溶液。缓冲溶液的量以能够完全水化磷脂膜即可，一般为有机溶剂用量的0.5-0.8倍体积。

在本发明制备方法中，溶解头孢替唑钠水的量为能够使头孢替唑钠完全溶解即可，优选为基于头孢替唑钠重量计1∶5-10(g/ml)体积的水。

在本发明制备方法中，步骤(2)中，搅拌时间为20-40分钟，可使磷脂膜完全水化，搅拌的转速200-600r/min；高速匀质乳化可采用组织捣碎机高速搅拌10-20分钟，转速12000-15000r/min；微孔滤膜可选用的孔径为0.3-0.8μm，优选0.45μm。

作为优选，本发明提供的头孢替唑钠前体脂质体制剂的制备方法，包括如下步骤：

(1)将蛋黄卵磷脂、胆固醇和泊洛沙姆188溶于基于三者总重量计的1∶3-5(g/ml)(重量/体积)的有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；

(2)加入pH值为6.0-7.0的缓冲溶液，振摇，搅拌20-40分钟，转速200-600r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化10-20分钟，转速12000-15000r/min，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将头孢替唑钠溶于基于头孢替唑钠重量计1∶5-10(g/ml)(重量/体积)的水中，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温50-60℃搅拌30-60分钟，再加入支持剂，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢替唑钠脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，制得头孢替唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装；或灌装于西林瓶中，冷冻干燥，制得头孢替唑钠前体脂质体制剂。

在本发明的前体脂质体的制备方法中，所采用的旋转薄膜蒸发器，也称为刮板薄膜蒸发器或机械搅拌薄膜蒸发器，本领域目前已知的这类薄膜蒸发器都可以用于本发明，例如可以采用无锡市雪浪发酵工程设备厂生产的LG2.5型离心式刮板薄膜蒸发器，也可以采用无锡市军嶂制药设备厂生产的LG-4型高效旋转薄膜蒸发器等。

在本文中，应当理解当多种组分含量为重量份时，并非将每种组分的含量限定完全为某一确定重量份，而应当理解为，这种重量份数体现的是各组分之间的重量比例关系，比如在一个优选方案中，本发明的头孢替唑钠前体脂质体包含“头孢替唑钠1份，蛋黄卵磷脂5份，胆固醇1.2份，泊洛沙姆1883.8份，支持剂6.5份”，应当理解为按照重量计，所述头孢替唑钠前体脂质体中所包含的头孢替唑钠∶蛋黄卵磷脂∶胆固醇∶泊洛沙姆188∶支持剂＝1∶5∶1.2∶3.8∶6.5，所有符合该重量比例关系的技术方案都包括在上述技术方案的范围内。

在本文中，如果没有特别地说明，含量或用量都以重量份计；如果没有特别的说明，所采用的装置、仪器、原料、物质、用量、方法、时间、温度及其它条件等都为本领域众所周知的，或者是本领域技术人员根据本申请的描述结合现有技术可以获得的。

本发明的还提供了一种头孢替唑钠脂质体制剂在制备治疗敏感菌所致的感染如肺炎、支气管炎、胆道感染、腹膜炎、尿路感染，以及手术后或外伤引起的感染和败血症药物中的应用。

与现有技术相比，本发明提供的头孢替唑钠前体脂质体制剂主要具有如下优点：

稳定性高：本发明将头孢替唑钠包裹于脂质体内，该脂质体的配方是经过长期研究筛选得到的，制备得到的前体脂质体与常规组分或方法得到的脂质体或粉针剂相比，极大地提高了头孢替唑钠的稳定性；

包封率高：本发明的前体脂质体制剂的包封率通常为83％-88％，最高可达到90％，显著地高于按照常规方法制备的头孢替唑钠的前体脂质体或其他脂质体制剂，冻干过程中脂质体不会因脱水、融合、冰晶生成等发生破裂，在水化复溶之后，脂质体的包封率未曾降低，保证了产品质量；

粒径均匀：本发明的前体脂质体显球状，粒径均匀；

副作用小：本发明的药物载体脂质体体内降解、无毒性和无免疫原性，而且可以提高药物治疗指数、降低药物毒性和减少药物副作用；

制备成本低：本发明的脂质体制剂的制备方法可采用常规的工艺设备，可工业规模、高效率生产、成本低。

具体实施方式

下面将参照实施例进一步详细阐述本发明，但是本领域技术人员应当理解，但本发明并不限于这些实施例以及使用的制备方法。而且，本领域技术人员根据本发明的描述可以对本发明进行对其进行等同替换、组合、改良或修饰，但这些都将包括在本发明的范围内。

实施例1头孢替唑钠前体脂质体的制备

处方：

组分                  用量

头孢替唑钠            50g

蛋黄卵磷脂            250g

胆固醇                60g

泊洛沙姆188           190g

乳糖                  260g

海藻糖                65g

制备方法

(1)将250g蛋黄卵磷脂、60g胆固醇和190g泊洛沙姆188溶于1500ml乙醇和异丙醇体积比为2∶1的混和溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去乙醇和异丙醇，制得磷脂膜；

(2)加入pH值6.0醋酸盐缓冲溶液750ml，振摇，搅拌20min，转速200r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎器机高速匀质乳化10min，转速12000r/min，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将50g头孢替唑钠溶于250ml水，0.45μm微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温50℃搅拌30分钟，再加入260g乳糖和65g海藻糖，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢替唑钠脂质体溶液；

(4)将上述溶液喷雾干燥，制得头孢替唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装0.05g(头孢替唑计)/瓶，制得头孢替唑钠脂质体制剂。

实施例2头孢替唑钠前体脂质体的制备

处方：

组分                  用量

头孢替唑钠            75g

蛋黄卵磷脂                225g

胆固醇                    45g

泊洛沙姆188               90g

甘露醇                    62.5g

乳糖                      125g

制备方法

(1)将225g蛋黄卵磷脂、45g胆固醇和90g泊洛沙姆188溶于1800ml二氯甲烷和丙酮体积比为2∶3的混和溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去二氯甲烷和丙酮，制得磷脂膜；

(2)加入pH值7.0枸橼酸-枸橼酸钠缓冲溶液1400ml，振摇，搅拌40min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化20min，转速15000r/min，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将75g头孢替唑钠溶于750ml水，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温60℃搅拌40分钟，再加入62.5g甘露醇和125g乳糖，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢替唑钠脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥，制得头孢替唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装0.075g(头孢替唑计)/瓶，制得头孢替唑钠脂质体制剂。

实施例3头孢替唑钠前体脂质体的制备

处方：

组分                      含量

头孢替唑钠                100g

蛋黄卵磷脂                800g

胆固醇                    300g

泊洛沙姆188               600g

乳糖                      880g

海藻糖                    220g

制备方法

(1)将800g蛋黄卵磷脂、300g胆固醇和600g泊洛沙姆188溶于6500ml二氯甲烷和苯甲醇体积比为5∶1的混和溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去二氯甲烷和苯甲醇，制得磷脂膜；

(2)加入pH值6.5磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲溶液4200ml，振摇，搅拌30min，转速400r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化15min，转速13000r/min，再用0.45μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将100g头孢替唑钠溶于800ml水，用0.45μm微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温55℃搅拌60分钟，再加入880g乳糖和220g海藻糖，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢替唑钠脂质体溶液；

(4)将上述溶液灌装于西林瓶中，0.1g(头孢替唑计)/瓶，冷冻干燥，制得头孢替唑钠脂质体制剂。

实施例4头孢替唑钠前体脂质体的制备

处方：

组分                      含量

头孢替唑钠                150g

蛋黄卵磷脂                825g

胆固醇                    270g

泊洛沙姆188               540g

乳糖                      800g

海藻糖                    200g

制备方法

(1)将825g蛋黄卵磷脂、270g胆固醇和540g泊洛沙姆188溶于8000ml乙醇和异丙醇体积比为2∶1的混和溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去乙醇和异丙醇，制得磷脂膜；

(2)加入pH值6.0磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲溶液5600ml，振摇，搅拌40min，转速600r/min，使磷脂膜完全水化，采用组织捣碎机高速匀质乳化14000r/min，再用0.3μm微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将150g头孢替唑钠溶于1200ml水，用0.3μm微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，保温50℃搅拌60分钟，再加入800g乳糖和200g海藻糖，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢替唑钠脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥，制得头孢替唑钠前体脂质体，在无菌条件下分装0.15g(头孢替唑计)/瓶，制得头孢替唑钠脂质体制剂。

对比例1头孢替唑钠前体脂质体的制备

处方：

组分                  用量

头孢替唑钠            50g

大豆卵磷脂            250g

吐温80                60g

泊洛沙姆188           190g

乳糖                  260g

海藻糖                65g

按照与实施例1相同的方法制备对比例1。

对比例2头孢替唑钠前体脂质体的制备

处方：

组分                  用量

头孢替唑钠            75g

蛋黄卵磷脂            140g

胆固醇                36g

泊洛沙姆188           50g

甘露醇                100g

乳糖                  40g

按照与实施例2相同的方法制备对比例2

试验例1包封率的测定

取实施例1-4和对比例1-2制备的脂质体制剂，采用高效液相色谱法检测头孢替唑的总含量为M。

取1.5g葡聚糖凝胶G-50，用pH6.8磷酸盐缓冲液浸泡溶胀12h以上，装入层析柱内(200×10mm)，用上述磷酸盐缓冲液冲洗平衡，分别取实施例1-4和对比例1-2得到的头孢替唑钠脂质体制剂加水溶解，制成每1ml含有头孢替唑约22mg的溶液，分别取各溶液1.2ml，加入层析柱顶部，用磷酸盐缓冲液50ml洗脱，流速0.8ml/min，收集的洗脱液加入破膜剂(乙醇∶苯甲醇＝6∶1)50ml，混匀，高效液相色谱法检测头孢替唑的含量为M1。

包封率％＝M1/M×100％.

表1包封率测定结果

由以上结果可知，按照本发明的处方及方法制备得到的前体脂质体包封率显著地高于分别与本发明的组分或用量不同的对比例制得的脂质体包封率，实施例与对比例的包封率存在显著性差异，本发明的产品符合生产要求，而对比例制备的产品不符合。

试验例2粒径的检测

取实施例1-4和对比例1-2制备的脂质体制剂，采用显微图像分析仪测定脂质体的粒径分布，结果如表2：

表2粒径检测结果

由以上结果可知，实施例1-4制得的脂质体显球状，粒径均匀，范围为120-200nm；对比例1-2制得的脂质体形状不定，杂乱无章，大小不一，粒径不均匀，范围为400-800nm。

试验例3稳定性研究

将以上各实施例和对比例制备的样品与上市的头孢替唑钠粉针剂(天津新丰制药有限公司生产，批号20071223，规格1.0g/瓶)在高温60℃、光照4500Lx条件下放置10天进行影响因素试验考察，结果见表3；在高温40℃、相对湿度75％±5％条件下6个月，进行加速试验考察，结果见表4；在高温25℃、相对湿度60％±10％条件下18个月，进行长期试验考察，检测各项质量指标的变化，结果见表5。

表3影响因素结果

表4加速试验结果

表5长期试验结果

由以上结果发现加速3月、6月，长期12月、18月时对比例和上市的头孢替唑钠粉针澄明度不符合规定，pH值下降较大，含量降低明显，有关物质升高；而本发明范围内原辅料配比制备的样品外观性状没有明显变化，复溶良好，澄明度、pH值、含量和有关物质也没有明显的变化。从上述数据可得出，实施例产品的稳定性显著地优于对比例和上市制剂。试验例4安全性试验

异常毒性检查依据2005年版药典附录XI C异常毒性检查法，将本发明实施例1-4制备的样品用氯化钠溶液稀释成一定浓度的供试品溶液，注入符合试验要求的小鼠体内，结果小鼠在48小时内均没有死亡现象，说明本品异常毒性符合规定。

热源检查依据2005版药典附录XI D热源法进行检查，结果符合规定。

Claims (10)

1、一种头孢替唑钠前体脂质体制剂，其特征在于其包括以下重量份数比的组分：

头孢替唑钠            1份

蛋黄卵磷脂            2-15份

胆固醇                0.5-10份

泊洛沙姆188           0.8-13份

支持剂                2-20份。

2、根据权利要求1所述的前体脂质体制剂，其特征在于其包括以下重量份数比的组分：

头孢替唑钠            1份

蛋黄卵磷脂            3-8份

胆固醇                0.6-3份

泊洛沙姆188           1.2-6份

支持剂                2.5-11份。

3、根据权利要求1或2所述的前体脂质体制剂，其特征在于其包括以下重量份数比的组分：

头孢替唑钠            1份

蛋黄卵磷脂            5份

胆固醇                1.2份

泊洛沙姆188           3.8份

支持剂                6.5份。

4、根据权利要求1-3中任一项所述的前体脂质体制剂，其特征在于所述的支持剂选自甘露醇、乳糖、葡萄糖、海藻糖、蔗糖、右旋糖酐、山梨醇、氯化钠、甘氨酸、水解明胶中的一种或多种，优选重量比为4∶1乳糖和海藻糖的组合，重量比为3∶1的海藻糖和葡萄糖的组合，重量比为1∶2的甘露醇和乳糖的组合，最优选重量比为4∶1的乳糖和海藻糖的组合。

5、一种药物组合物，其包括权利要求1-4中任一项所述的头孢替唑钠前体脂质体制剂。

6、权利要求1-4中任一项所述的头孢替唑钠前体脂质体制剂的制备方法，其包括如下步骤：

(1)将蛋黄卵磷脂、胆固醇、泊洛沙姆188溶于有机溶剂中，混合均匀，于旋转薄膜蒸发器上减压除去有机溶剂，制得磷脂膜；

(2)加入缓冲溶液，振摇，搅拌使磷脂膜完全水化，高速匀质乳化，微孔滤膜过滤，制得空白脂质体混悬液；

(3)将头孢替唑钠溶于水，微孔滤膜过滤，滤液加入空白脂质体混悬液中，在保温下搅拌，之后再加入支持剂，搅拌溶解，冷却到室温，得头孢替唑钠脂质体溶液；

(4)将上述溶液冷冻干燥或喷雾干燥，制得头孢替唑钠前体脂质体，任选地，在无菌条件下分装，或灌装于西林瓶中，冷冻干燥，制得头孢替唑钠前体脂质体制剂。

7、权利要求6所述的的制备方法，其中步骤(1)蛋黄卵磷脂、胆固醇和泊洛沙姆188三者总重量与有机溶剂的比例(重量/体积)为1∶3-5(g/ml)；步骤(2)中，搅拌时间为20-40分钟，转速200-600r/min，采用组织捣碎机高速匀质乳化时间为10-20分钟，转速12000-15000r/min；步骤(3)中，头孢硫脒与水的比例(重量/体积)为1∶5-10(g/ml)；其中微孔滤膜的孔径为0.3-0.8μm，优选0.45μm。

8、根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于所述的有机溶剂选自氯仿、二氯甲烷、乙醇、甲醇、叔丁醇、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醚、苯甲醇、正己烷中的一种或几种，优选体积比为2∶1的乙醇和异丙醇的组合，体积比为2∶3的二氯甲烷和丙酮的组合，体积比为5∶1的二氯甲烷和苯甲醇的组合。

9、根据权利要求6或7所述的制备方法，其特征在于所述缓冲溶液pH值为6.0-7.0，选自磷酸盐缓冲液、枸橼酸盐缓冲液、碳酸盐缓冲液、硼酸盐缓冲液、醋酸盐缓冲液中的一种或几种，优选磷酸二氢钾-磷酸氢二钾缓冲溶液，枸橼酸钠-枸橼酸缓冲溶液，醋酸-醋酸钠缓冲溶液。

10、根据权利要求1-4中任一项所述的脂质体制剂或权利要求5所述的药物组合物在制备治疗敏感菌所致的感染如肺炎、支气管炎、胆道感染、腹膜炎、尿路感染，以及手术后或外伤引起的感染和败血症药物中的应用。